Раствор для осуществления твердофазного иммунохимического анализа вирусных антигенов

 

Использование: биотехнология, диагностика вирусных заболеваний человека и животных. Сущность изобретения: для осуществления иммунохимического анализа вирусных антигенов используют раствор, в качестве поверностно-активного вещества , содержащий проксанол. Чувствительность анализа в среднем повышается в 1,5-2 раза. 4табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦ11 А Л И СТИЧ Е С К ИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Э (21) 4870590/13 (22) 02.07.90 (46) 23.08.93. Бюл. М 31 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ящурный институт (72) В,А.Мищенко, Т.Б.Конюшкина, M.A.Áàзаров, М.Г.Костюченко, В,Ю.Савельев, Н.С.Мамков и А.П.Савицкий (56) Сюрин В.Н. и др. Методы лабораторной диагностики вирусных болезней животных, М.; Агропромиздат, 1986, с. 202-205.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано.для диагностики вирусных заболеваний человека и животных, Использование предложенного раствора иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. На поверхности лунок полистиролового микропланшета адсорбируют кроличьи вирусоспецифические антитела к ящурному антигену А22 из расчета 0,1 мл на лунку (1:4000) в 0,1 M карбонатном буфере, рН 9;4 — 9,6 в течение 1 ч при 37 С.

Затем растворы выливают и трижды промывают лунки (по 2 мин) физиологическим раствором, рН 7,1-7,2, содержащим 0,025 проксанола. В отмытые лунки вносят bio 0,1 мл двукратных разведений антигена на предложенном растворе и инкубируют в течение 1 ч при 37 С. После этого растворы выливают, лунки панелей трижды промывают (по 2 мин) предложенным раствором. После этого в лунки вносят по 0,1 мл рабочего разведения (1:1000) коньюгата кроличьих. Ж 1835514 А1 (я)5 G 01 и 33/53

"1,", ! Г (ф

/ (54) РАСТВОР ДЛЯ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ВИРУСНЫХ АНТИГЕНОВ (57) Использование: биотехнология, диагностика вирусных заболеваний человека и животных. Сущность изобретения: для осуществления иммунохимического анализа вирусных антигенов используют раствор, в качестве поверностно-активного вещества, содержащий проксанол. Чувствительность анализа в среднем повышается в

1,5-2 раза, 4 табл..

° е вирусоспецифических антител к антигену

А22 с пероксидазо% хрена и инкубируют в течение 1 ч при 37 С.

Непрореагироаавшие компоненты удаляют промыванием лунок предложенным Я раствором. Затем в лунки вносят субстрат фермента и инкубируют в течение 10 мин при 37 С. Регистрацию результатов право- а дят визуально по изменению цвета. Qg . Результаты исследований представлены в табл.1.

Пример 2. Иммуноферментный анализ осуществляют как опйсано в примере 1. однако используют ящурный антиген 0 hh

194, специфические антитела в разведении 4Ъь

1:2000 и конъюгат пероксидаэы хрена с глобулином овцы, гипериммунизированной вирусом ящура 0 N. 194. Результаты исследований представлены в табл.2.

Пример 3. Иммуноферментный анализ осуществляют как описано в примере 1, однако используют антиген вирусной везикулярной экэантемы свиней(ВЭС) А-48, специфические антитела в разведении 1:1600 и

1835514

Таблица1

n=3 — 5

* Активность антигенов выражена в величинах, обратных титру

Таблица2 п=З вЂ” 5 конъюгат пероксидазы хрена с кроличьими антителами к вирусу ВЭС А-48 в разведении 1:2000, Результаты исследований представлены в табл.3.

Пример 4. На поверхности круглодонных лунок полистиролового микропланшета адсорбируют антитела к вирусу болезни

Ауески (ВБА) из расчета 0,1 мл на лунку (10 мкг/мл, 1:400) в 0,1 M карбонатном буфере, рН 9,6, в течение 1 ч при 37 C. Затем растворы выливают и промывают лунки 3 раза по 2 мин физиологическим раствором, рН

7,1-7,2, содержащим 0,0125ф, проксанола.

В отмытые лунки вносят по 0 1 мл двукратных разведений антигена на предложенном растворе и инкубируют в течение 1 ч при

37 С. После этого растворы выливают, лунки панелей ApoMblBBloT 3 раза по 2 мин предложенным раствором. Затем в лунки вносят по 0,1 мл рабочего разведения (1:7) конъюгата антител к вирусу болезни Ауески с эритроцитами барана и инкубируют при 37 С.

Учет результатов проводят. по наличию или отсутствию агглютинации. Результаты исследований представлены в табл,4. . Данные, приведенные в табл.1-4, свидетельствуют о том, что использование предложенного раствора позволяет повысить чувствительность иммунохимического анализа. что имает большое значение для выявления вирусных антигенов.

Формула изобретения

Раствор для осуществления твердофаэного иммунохимического анализа вирусных антигенов, содержащий хлористый натрий, поверхностно-активное вещество и дистиллированную воду, о т л и в а ю шийся тем, 15 что, с целью повышения чувствительности анализа, в качестве поверхностно-активного вещества раствор содержит проксанол при следующем соотношении иигредиентов, мас. :

Хлористый натрий 0,8 — 0,9

Проксанол 0.0125-0,05

Дистиллированная вода Остальное

1835514

Продолжение табл. 2

Таблица3 и-3

Тэблица4