Способ получения тетраплоидной ромашки матriсаriuм снамомillа rесuтiтаl.,астеrасеае
Использование: биотехнология, селекция растений, фармацевтическая промышленность . Сущность изобретения: получена новая тетраплоидная и богатая бизабололом ромашка, цветки которой, высушенные при температуре, равной 40°С, содержат по меньшей мере 100 мг% хамазулена и по меньшей мере 200 мг% (-)-а-бизаболола, причем содержание прочих бизаболоидов превышает 50 мг%. Для получений данной ромашки тетраплоид iyio или диплоидную ромашку, в которой бизаболол представляет собой основной компонент эфирного масла, подвергают различным операциям отбора и размножения. J З.П.Ф-ЛЫ, 2 табл.
союз советских
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (5!)5 А 01 Н 1/04
Г СУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ
B дОмство сссР (Г СПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
, .4МУВ- 7И@: ЬИБЛНСФ-;=, К,ПАТЕНТУ l с 1 (2 ) 3991685/13 (2 ) 18.12.85 (4 ) 23.08.93. Бюл. М 31 (3 ) P 3446216.3; Р 3446217.1 (3 ) 19.12.84 (3 )DE (7 ) Аста Медик,АГ(DE) (7 ) Хлодвиг Франц и Отто Исаак (DE) . (5 ) Аналогов в научно-технической и патентной литературе не обнаружено, (5 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕТРАПЛОИДНР Й РОМАШКИ MATRI CAR IUM C)AMOMILLA RECUTITA L„ACTERACEAE Препараты из головок ромашки (C(amomiIIa recutlta ((.) Rauschert, синоним с Patricaria chamomilla L. Asteraceae находя, г вследствие их антифлогистического и спазмолитического действия широкое терапевтическое применение и образует влажную составную часть растительного лекарственного богатства. При этом особое терапевтическое значение имеют биологически активные вещества (+ а-бисаболол и хамазулен. Поэтому.хорошее ромашковое сь1рье должно иметь максимально возможное содержание этих обоих веществ. Встречающиеся в природе диплоидные ромашки являются в отношении содержания в них биологически активных веществ весьма неоднородными. В частности, иэ наиболее важных биологически активных вещфств хамазулена и (-)-а-бисаболола представлен только один, или оба эти веще. Ж 1836004 A3 (57) Использование: биотехнология, селек-. ция растений; фармацевтическая промышленность, Сущность изобретения: получена новая тетраплоидная и богатая бизабололом ромашка, цветки которой, высушенные при температуре, равной 40 С, содержат по меньшей мере 100 мг7 хамазулена и по меньшей мере 200 мг (-)-а-бизаболола, причем содержание прочих бизаболоидов превышает 50 мг7ь. Для получения данной ромашки тетраплоид ую или диплоидную ромашку, в которой бизаболол представляет собой основной комгюнент эфирною масла, подвергают различным операциям отбора и размножения. 3 з.п.ф-лы, 2 табл. ства полностью отсутствуют, или имеются вместе только в очень небольшом количестве, причем в таких случаях основные кампо- а ненты эфирного масла состоят из менее. Q) действенных бисаболоидов (окиси А или Bi () бисаболона, окиси А бисаболола). о. Из немецкого патента 1ч 2402802 изве-) стен сорт ромашки Degumill, который имеет,. одновременно высокое содержание (+ а- бисаболола и хамазулена. Содержание ха-: 4™. мазулена и бисаболола этого сорта ромашки однако лишь тогда является постоянным,; когда предотвращается любое вовлечение в скрещивание или постороннее опыление другими сортами ромашки, содержание бисаболола и хамазулена, в которых является значительно более низким. Эта опасность скрещивания посредством постороннего опыления почти всегда имеет место, потому 1836004 что эти дикие ромашки встречаются практически повсюду, Теперь было обнаружено, что вообще из естественно встречающихся популяций ромашек либо диплоидных, либо тетраплоид- 5 ных селекционных ромашек посредством определенных операций могут быть получены богатые бисабололом тетраплоидные растения ромашки, которые, с одной стороны, не являются более восприимчивыми по отношению к постороннему опылению естественно встречающимися ромашками, а с другой стороны имеют одновременное высокое содержание хамаэулена и (-)) а-биса болола причем содержание (-)-а-бисаболола значительно превосходит содержание хамаэулена и при этом прочие бисаболоиды практически не встречаются иги астречаются лишь весьма в небольшом количестве, При этом, таким образом, существенное значение имеет то, что большое содержание основных биологически активных веществ (+ a-бисаболола и хамазулена в случае соответствующей изобретению ромашки является постоянным, т.е, остается сохраненным при каждом размножении. Изобретение относится к способу получения новой тетрэплоидной ромашки с предпочтительными и улучшенными свойствами. Новая соответствующая изобретения тетраплоидная. ромашка неожиданно отличается по отношению к до сих.пор известным ромашкам или сортам ромашек рядом новых и предпочтительных свойств. В частности, она более не является восприимчивой по отношению к постороннему опылению естественно встречающимися популяциями ромашек (дикие ромашки), как известный сорт DEGUMiLL. По отношению 40 к остальным известным диплоидным ромашкам и по отношению к сортам тетрап. лоидных ромашек соответствующая предложенному способу ромашка неожиданно отличается более высоким содер- 45 жанием важного биологически активного вещества (-)- а-бисаболола (по меньшей мере 200 Mr%), в то время как содержание остальных бисаболоидов (например, окиси бисаболола) является очень незначи- 50 тельным и меньше чем 50 мг; . Так, например, известные и описанные в литературе сорта ромашек все имеют очень высокое содержание окисей бисаболола, которое как правило составляет приблизительно 50;ь эфирного масла растительного сырья (т.е. пр 1; -ном содержании эфирного масла приблизительно 50 мг на 100 г растительного сырья), Далее, соответствующая изобретению ромашка в противоположность к до сих пор известным сортам тетраплоидных ромашек в отношении ингредиентов является гомогенной, причем свойства ромашек, содержащих хамазулен и (-)- а-бисаболол, являются постоянными (т.е являются гомозиготными). Кроме того, соответствующая изобретению ромашка неожиданно отличается от известных сортов тетраплоидных ромашек, например, одним или несколькими из следующих свойств: улучшенная способность семян к прорастанию, меньшая инвиэия используемой травянистой массы (т,е.большой урожай цветков), меньше содержание воды s цветках (т.е. лучший урожай высушенных цветков и более коротки периоды сушки), лучшая пригодность для механизированной уборки, потому что цветки в значительной степени локализованы в одной плоскости и большинство цветков цветут одновременно (вследствие этого также возможен единый срок сбора урожая), лучшая стойкость растительного сырья (меньшая склонность к распаду и к образованию трухи), особенно ароматный и типичный ромашковый запах, Названные последними преимуществами выступают, например, когда помимо селекции по содержанию биологически активных веществ происходит еще селекция.по одному или нескольким из вышеназванных признаков, из отселекцированных растений получают семенной материал, снова проводят селекцию выращенного иэ этих семян нового поколения и эти мероприятия повторяют 3 — 5 раз. Задачей изобретения является получение новой тетраплоидной ромашки с улучшенными свойствами, с увеличенным содержа н и ем (+ a -6 и с аболол а. Получение новой соответствующей изобретению ромашки происходит посредством того, что а) тетраплоидизируют известные диплоидные ромашки у которых (-)- гт-бисаболол представляет собой основной компонент эфирного масла, проводят селекцию полученных таким образом тетраплоидных растений и снова отбирают иэ этих отобранных тетраплоидных растений растения, цветки которых, высушенные при температуре 40 С, имеют наименьшее содержание хамазулена равное 100 Mr%, наименьшее содержание (-)- а-бисаболола равное 200 мгоь и содержание отдельных бисаболоидов менее, чем 50 мг (сбор цветков происходит в момент времени, когда расцвели 30-70% трубчатых цветков головки) и при необходи1836004 мо ти за этим непосредственно следуют да ьнейшие прочие операции селекциониро ания и размножения (например, селекция по материнской линии для вегетативного размножаемого постороннего пылителя), или !, 6) из известных тетраплоидных ромашек. у которых (+ a -бисаболол представляет собой основной компонент эфирного 1 ма ла, проводят селекцию растений, цветки ко орых, высушенные при температуре равно 40 С,имеют наименьшее содержание ха азулена равное 100 мг, наименьшее .со ержание (-)-а-бисаболола равное 200 мг и содержание прочих бисаболоидов не бо ьше, чем 50 мг% (сбор цветков происходи в момент времени, когда расцвели 3070 трубчатых цветков головки), и желании за этим непосредственно следуют дальнейш е обычные операции селекционирования и азмножения (например, селекция по мате инской родословной для вегетативно ра множаемого постороннего опылителя), ) Проводят селекцию пригодных дипло-. ид ых и тетраплоидных исходных ромашек посредством исследований отдельных рас-. тений. В общем необходимо исследовать из од ой исходной популяции, например, 10 0-10000 растений, чтобы найти отдельные индивидуумы, которые имеют содержан и е (-)- а -бисаболола, соответствующее вышеуказанным критериям, и пригодны в качестве исходных ромашек. Из этих еыбр нных индивидуумов обычным способом по учают семенной материал, его тетраплоид эуруют..После завершенного тетраплоидизирования проводят селекцию те раплоидных растений из прочих диплоид ых оставшихся растений. Из полученных та им образом тетраплоидных растений, пр необходимости после предшествующего, размножения проводят селекцию всех ра тений, цветки которых, высушенные при 40 С, содержат, по меньшей мере 100 Mr% ха азулена, по меньшей мере 200 мг (+ а бисаболола и меньше. чем 50 прочих би аболоидов. Сбор урожай этих цветков пр этом происходит в стадии развития,-когда раскрыты 30-70,(всех трубкатых цветко головки. При необходимости за этим могут непосредственно следовать дополните ьные операции селекционирования и размножения, которые, например, вызывают улучшение в отношении следующих признаков или свойств: одновременный срок цветения, равномерное, основное ветеле= ние и узкая зона цветения (т.е, лучшая пригодность к механизированной уборке), 10 .чих бисалоидов, причем также сбор урожая этих цветков происходит в стадии развития, когда раскрыта 30-70 всех трубчатых цветков головки, также и в этом случае при необходимости могут непосредственно сле25 30 Тетраплоидизироеание может, например, происходить самим по себе известным.мических веществ происходит, например, 35 при температуре между 0 и 35 С, предпоч50 55 сусная кислота. Если применяют спиртовые растворы, то они также могут быть слабс кислотными, Концентрации химикалиев в 20 большие головки, лучшая стойкость растительного сырья, особенно ароматный запах. В случае, если с самого начала происходит из тетраплоидных ромашек, то происходит лишь заранее указанная селекция таких растений, цветки которых, высушенные при 40 С, имеют, по меньшей мере 100 мг% хамаэулена, по меньшей мере 200 мг% (+ а-бисаболола и меньше, чем 50 мг% продовать дальнейшие операции селекционированиюи размножения, иэ которых как указано выше, вытекают дальнейшие улучшения. Особенно предпочтительную ромашку получают, тогда. когда селекции по содержанию хамазулена и (-)- а-бисаболола проводят селекцию таких растений (известных и полученных согласно способу), содержание хамаэулена, в которых равно, по меньшей мере 200 мг%, предпочтитетельно 250 мг,, а содержание (-)-а-бисаболола. в которых равно по меньшей мере 300 мг%, предпочтительно 400 мг (содержание прочих бисаболоидов всегда меньше 50 мг ) способом, Тетраплоидизирование с помощью хитительно между 12 и 30 С, в частности, между 15 и 25ОС, Применение происходит посредством, например, обработки семян, верхушек побегов, корней (в частности, кончиков корней или корней проростков), завязей, плоскостей разреза на листьях и стеблях, клеточных суспенэий из ткани меристем, культур коллуса или также посредством инжекции в прикорневую область стебля или область пазушных почек. Химикалии в общем применяются в виде -растворов в воде, слабо спиртовых (содержание спирта, как праеило, меньше 5%) или слабокислотных растворов. Водо родный показатель слабо кислотных растворов лежим, например, е диапазоне 5.5-6,5, причем подкисление происходит, например, посредством низких органических алифатических кислот, как укэтих растворах могут, например, быть равны 0,01-0,5 . предпочтительно, 0,02-0,2, в 1836004,5 30 50 частности 0,05-0,1 . Газообразные вещества применяются как таковые при необходимости под давлением (например 1-10 бар). Продолжительность обработки равна, например, 1-36 час, предпочтитительно 2— 12 час, в частности 4 — 6 час. Особенно благоприятной является обработка колхицином при температурах 035 С, предпочтительно 12 — 30 С, в частности, 15 — 25 С, Это может, например, произойти посредством того, что семена диплоидных исходных ромашек доводят до набухания в 0,01-0,2 -ном, в частности, 0,02-0,1 -ном, предпочтительно 0,05 ном растворе колхицина или погружают проросшие, в возрасте 5-7 дней, хорошо развитые проростки дисплоидной исходной ромашки (с зародышевыми листками ромашки, направленными вниз) в 0,1 — 0,2%ный, в частности, 0,02 — 0,1%-ный, предпочтительно 0,05%-ный раствор колхицина. В случае последнего способа отражающая атмосфера должна иметь почти 100%-ную относительную влажность воздуха. Продолжительность обработки колхицином равна, например, 3-36 час, в частности 4 — 10 час. При применении проростков в общем является достаточной продолжительность воздействия, достигающая 10 час, При использовании семян продолжительность обработки может при известных условиях увеличиться до 36 час. После обработки химикалиями набухшие семена, проростки или другие части растения несколько раз ополаскивают водой.; Набухшие семена, например, высеивают. Растения с обработанными корнями или другими частями, или обработанные проростки пикируют в ящики для растений. Из обработанных таким образом семян или проростков выращивают растения (например, в таблице 3 температура между 18 и 25ОC днем и 10-16 С ночью) и отбирают растения, пыльцевые зерна которых приблизительно в 1,5 раза больше чем пыльцевые зерна исходного материала, или имеют число хромосом соматических клеток равное 36. Если обработке химикалиями подвергают другие части растений (надземные или подземные части), то более позднему исследованию на прошедшую тетраплоидизацию подвергают исключительно происходящие из обработанных частей по5еги, корни или цветки/семена, Если, например, предпринимается обработка побега или пазухи, то затем исследуют на число хромосом только происходящий из этой пазухи или из этого отростка новый побег и образованные на нем листья или семена. Измерения размеров пыльцевых зерен и подсчет хромосом могут например, быть проведены так, как указано в примере 3. Тетраплоидизирование лучами происходит, например, на семена или кончики корней при температурах между 0 и 35ОС, предпочтительно 10 — 30 С, в частности, 15— 255С. Сумма облучения: 5-50 Крад. Предпочтительными являются гамма-лучи и рентгеновские лучи, В качестве ультрафиолетовых лучей и в расчет, например принимаются такие ультрафиолетовые лучи, длины волн которых лежат в диапазоне 400-30 нм, предпочтительно 350 нм Облученные таким образом растения или части растений затем также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикалиями. Применение высоких и низких температур. В качестве высоких температур в расчет, например, принимаются температуры между ЗЗ и 50 С. предпочтительно 42-45ОС. Действию этих температур, например, подвергаются набухшие семена, проростки, верхушки побегов и меристиматическая ткань, Продолжительность обработки: например, 1 — 48 час, предпочтительно 12 — 24 часа. В качестве низких температур в расчет, например. принимаются: 0 — 5 С, предпочтительно 0,5-4 С, в частности, 2 С. Воздействию этих температур, например, подвергаются набухшие семена, проростки, побеги и меристематическая ткань. Продолжительность обработки, например, 1-100, предпочтительно 20-40 дней. Обработанные таким образом растения или части растений также подвергают дальнейшей обработке, как после обработки химикалиями, Декапитирование проводится на молодых растениях на стебле, предпочтительно на конусе прорастания верхушки, после образования от 4 до 6 листьев или также черенках листьев или на боковых побегах. Возникающие ткани коллуса почки или побеги срезают, доводят до корнеобразования, далее, культивируют в горшках и проводят селекцию тетраплоидизированных растений таким же образом, как и при обработке химикалиями. От цветущих растений собираются трубчатые. цветки, пыльники которых находятся в стадии первого митоза пыльцы. Пыльники забирают иэ цветковых почек посредством микроманипулятора и переносят в чашки Петри, которые, наполнены, например, питательной средой no hitsch und hltsch (Таблица 1). Затем чашки Петри хранят при 1836004 10 температуре днем равной 28 С и при темпе- ратуре ночью равной 20 С, причем продол, :жительность дня составляет 16 час. После, : приблизительно четырех недель пыльники начинают вскрываться и иэ них вь!растают растения, В случае днплоидной родитель-! ской формы они являются гаплоидными, в ! случае тетраплоидной родительской фор мы — дигаплоидными, после образования 1 корней их сажают, например в горшки с :; садовой землей и о теплице доводят до цве тения. Эти (ди) гаплоидные растения явля-! ются стерильными, однако могут быть ; полиплоидиэированы посредством обра ботки химикалиями, причем возника!от го, моэиготные растения, которые затем могут , далее размножаться через семена, Даль, нейший образ действия см.при обработке химикалиями (например, обработка колхи-,,öèrroì). Водородный показатель среды установ,:лен на 5,5 ! Иэ отселекционированных посредст вом измерения размеров пыльцевых зерен ! и/или подсчета хромосом тетраплоидных растений ромашки, которые могут быть полl учены согласно вышеописанным возможностям, затем отбирают растения, которые имеют наименьшее содержание хамаэулена 1ранное 100 мг Д, и наименьшее содержание бизаболола равное 200 мг", в то время, как содержание прочих бизаболоидов (в частно сти, окисей бизаболола) должно быть меньше 50 мг (в пересчете на высушенные цветки, см.пример 1), Отселекционированные таким образом растения после удаления всех уже распу-стившихся корзинок дают возможность отцвести в теплице при температуре равной 18 — 24 С днем и 12 — 14 С ночью и при про должительности дня равной, по меньшей мере, 14 час, причем за период времени 1 равный 4 неделям с целью получения семеного материала собирают урожай всех голоок, которые отцвели и подошли BflilQTHóþ K аспаду. После сушки при температуре возуха между 20 и 35 С получают, например, емена репродукции соответствующей изоретению ромашки. ! В качестве дополнительных критериев ля этой селекции могут быть еще дополниельно применены следующие: а) приблизительно одновременное цве.(ение; 6) равномерное, основное ветвление и узкая зона цветения равная приблизительно 10 см, в частности, 5 см, с) большйе головки с внешним диаметром равным приблизительно 30 мм (20 — 40 фм), в частности 25-35 мм. 55 (-)-а-бисаболола, равное 50 весовым, причем одновременно содержание прочих бисаболоидов (в частности. окиси (-)-а-бисаболола) является весьма малым (меньше, чем 5 весовых ). Была проведена селекция этих индивидуумов, и они были подвергнуты следу!ощим операциям: Операция 1 Иэ последующего поколения отселекционированных (как описано выше) тетраплоидных растений ромашки были отобраны индивидуумы, которые а) и рибл иэител ь но одновременно цветут, в) имеют равномерное, основное ветвление и узкую зону цветения, равную приблизительно 10 см, предпочтительно 5 см, с) имеют большие головки с внешним диаметром. равным приблизительно 30 мм, предпочтительно 25 — 35 мм, д) достигают или превосходят наименьшее содержание хамаэулена, равное 150 мг и бизаболола, равное 300 мг, а содерПрименение дополнительных критериев а), б) и с) ведет, например, к высоким урожаям цветков и растительного сырья и к лучшей пригодности для механизированной 5 уборки урожая. Если исходят из уже известных тетраплоидных ромашек, то вышеописанная селекция, а также при желании дополнительные операции селекции и раэ10 множения происходит аналогичным образом. Последовательность посев †селекц, согласно вышеуказанному наименьшему содержанию хамаэулена равному 100 мг u 15 (-)- а-; по меньшей мере 200 мг, (другие биэаболоиды меньше 50 мг,), а также при известных условиях со. гласно дополнительным критериям а) — с)— получение семенного материала, может по20 вторяться 3-5 раз. За этим еще раз непосредственно следует последовательность посев — как указано выше селекции (при известных условиях клонирование) — получение семенного мате25 риала. Пример 1(исходная ромашка является тетраплоидной). Посредством индивидуальных испытаний 10000 растений сорта тетраплоидной 30 ромашки на изменчивость, который был описан !. Sarkany (НегЬа Hungar. 4 (l). 125169(1925). было обнаружено, что на приблизительно 100 индивидумов приходится одно растение, которое в эфирном масле имеет 35 высокое содержание хамазулена, равное 20 весовым „a также весовое содержание 1836004 10. 50 55 жание в них прочих бисаболоидов (e частности, окиси бесаболола) является меньше 50 мг7,. Все значения относятся к головкам, которые были высушены при 40 С и сбор которых происходил в стадии, когда раскрыты 30 — 70;ь всех трубчатых цветков головки. Эти растения были клонированы. Для этого растения (клоновые материнские растения) были укорочены прежде всего на приблизительно 15 см длины побега, и при длине дня, равной 8 — 10 час и при температуре, равной 12-14 C были доведены до образования нового побега (короткие боковые побеги). Короткие побеги были обрезаны и посажены в смесь торф-песок. При приблизительно 100 относительной влажности воздуха, температуре воздуха, равной 15 С и продолжительности дня, равной 14 час, корнеобразование черенков продолжалось 7-14 дней. Вместо указанного обычного клонирования (размножение черенками) может также быть использовано размножение в колбе. способных к делению частей ткани растений (так называемое размножение растений методом культуры меристем). Для установления культуры ромашки пригодны различные части растений, предпочтительно верхушки побегов или пазушные почки, После промывки растений с помощью Н О удаляют при асептических условиях в "ламинарном потоке" (высокоэффективный фильтр взвешенного вещества со слабым турбулентным напорным потоком) верхушки побегов пазушных листьев и переносят в пробирках, которые наполнены. питательной средой, Hanp wep, no murashige und SKoog (Physlol.Р!ап Я. 473 — 497, 1962). Пробирки помещают в кондиционируемое помещение при условии продолжительности дня, равной 12-18, предпочтительно 16 час (достигается посредством флюоросцентнолюминесцентных трубок), интенсивности света, равной 500 — 10000 люкс, предпочтительно 1000-3000 люкс и температуре, равной 15 — 30 С, предпочтительно 22 — 27 C. Как только эксплантаты показывают хороший рост, их переносят на вышеназванную питательную среду, однако, с большей концентрацией цитокинина (цитокининами являются фитогормоны, которые требуют клеточное деление) (например, 30 мг/л 6иэопентениладенина) и с небольшим количеством ауксина или вообще без ауксина (0-0,3 мг/л индолилуксуной кислоты. Впоследствии пазухи растягиваются и образуются придаточные органы и в большом количестве пазушные почки). Они могут быть вышеуказанным образом удалены и выращены. Предназначенные для размножения растения в большем количестве эксплантаты (3-ий пересев = 3-ему поколениюразмножения) после/увеличения и формирования листьев на вышеназванной питательной среде переносят на питательную почву, которая содержит 10 мг/л индолилуксусной кислоты или 3 индолилмасляной кислоты или 0,1-0,3 мг/л а -нафтилуксусной кислоты. При этом у растений происходит корнеобразование и после приблизительно 4 недель они могут быть посажены в горшки, наполненные стерилизованной садовой землей (пропаренная в течение 12 ч при температуре, равной 120 С) и далее, культивированы в теплице (при условиях, которые являются обычными для традиционного размножения черенками(табл. 2). 20 Операция 2 Полученные после операции 1 растения совместно отцветают при изолированных условиях в теплице. Растения при этом стояли в 11-см-ых горшках, наполненных садо25 вой землей, при температуре, равной 18-24 С днем и 12 — 14 С ночью. Продолжительность дня равнялась приблизительно 14 час и в зимнее время года достигалась посредством дополнительного освещения 30 (200 Вт/м ), Водоснабжение происходило, по потребности. Из совокупности отселекционированных индивидуумов непрерывно собирали за временный промежуток, равный 4 неделями те головки для получения семенного материала, которые отцвели и были незадолго до распада, Сушка происходила в хорошо вентилируемом помещении при температуре воздуха между 20 и 30 С, затем семенной материал был отсеян посредством щелевого сита 5х0,4 мм) и дополнительно очищен посредством вертикального пневмосепаратора. Операция 3 Из полученного после операции 2 семенного материала была взята выборочная проба и из нее выращено приблизительно 2000-ное последующее поколение (экологические условия как в случае операции 2) и отселекционировано по тем же критериям а)-д) операции 1. С отселекционированными, таким образом, индивидуумами затем поступили согласно операции 2. Операция.4 Из семенного материала согласно операции 3 одна часть была осенью посеяна на двух различных участках. Участок l) 450 мм, NN 48,5 N /115 0 сумма годовых осадков равна 750 мм, 13 1836004 14, .:влажно умеренный климат температура в январе от — 10 до О С, температура е июле от +10 до +20ОС, . :Участок П) 200 м, NN, 42 N/I С, : ;сумма годовых осадков равна 400 мм, среднеземноморский климат, температура в январе от 0 до+10ОС, . температура в июле от+20до+30 С. Посев происходил на обоих участках в ко це сентября/начале октября. Полученные, таким образом, насаждени для полевых опытов проверяли и расцен вали (оценивали) в отношении го огенного роста, размера цветков и сбора уб рки урожая, кроме того, были исследованы выборочные пробы цветков на содержани биологически активных веществ. Из по евого насаждения были снова отобраны те ндивидуумы, которые соответствуют пара етрам, названным в операции 1. Иэ них по учают семенной материал согласно oneра ии 2, последнее предложение. 1 — NN-северный нормальный нуль— ур вень моря, 2 — N северная широта (н град) 3 — Π— восточная долгота (н град) Операция 5. С семенным материалом согласно опера ии 4 были повторены операции 3 и 4 в ук занной последовательности и указанны способом, Операция 6 1 Из полученного согласно операции 5 семенного материала были выращены прибл зительно 1500 индивидуумов (эк:логические условия такие же, как и в слу ае операции 2) и отселекционированы по . ому же принципу, как указано в случае on рации 1. Из отселекционированных, таки образом, растений были отобраны 34 ин ивидуума и клонированы согласно операции 1. По 10 растений каждого клона были посажены в случайном распределении на расстоянии 40х30 см на открытом грунте (участок 1. см операцию 4) в изолированном месте. Почвой был лесовидный суглинок, водородный показатель был равен 7,0. посадка роисходила в начале июня, первый уро ай семян в середине июля, после этого рас ения были снова обрезаны, расцвели ещ раэ и дали в середине/конце августа второй урожай семенного материала. ;Получение семян этого материала про-! исходило согласно операции 2. Полученный. согласно операции 6 семенной материал является семенным материалом соответствующей изобретению ромашки. Цветки растений из двух семян репродукции (посев сентябрь) (октябрь, урожаф начало июня следующего года), которые были собраны в момент времени, когда рас 5 . крыты 30 — 70 трубчатых цветков, и которые затем немедленно были высушены в сушильном шкафу при температуре 40 С в течение 72 час, содержат, в пересчете на вес высушенных цветков (сухое вещество), на10 пример, по меньшей мере: 150 мг хамазулена, 300 мгф, (+ а-бизаболола и не более 50 мг прочих бизаболоидов. Другие примерные данные соответствующей изобретению ромашки: 15 1, Рост Стебель: вертикальный, незначительно разветвлен, 2. Листва Лист: 2-3-кратно перистораэдельный 20 Толщина; средняя Перистый лист, цвет среднеэеленый, Перистый лист (середина стебля), перистость: от средне до сильно перистого 3. Соцветие 25 Корзинка (головка) приблизительно 30 мм внешний диаметр, приблизительно 15 мм внутренний диаметр, 30 вес единственной (высушенной) корзинки приблизительно 45 мг, цветоносный побег, длина (мм): приблизительно 700, однако зависит от места возделывания (климат), срока посева, почвы, 35 удобрения, обработки растения, погоды. начало цветения (день с 1-го января) приблизительно 160-ый день (посев в сентябре, участок Фрайзинг, ФРГ, в противном случае в зависимости от вышеуказанных 40 факторов) Цветение: с середины июня (см.выше), соцветие без стебля. содержание эфирного масла (% от сухого вещества), приблизительно 1,0, содержание азулена в 45 эфирном масле: по меньшей мере 15)(, распад высушенного соцветия, цветкоsoe сырье: незначительный, если урожай был собран перед раскрытием последнего трубчатого цветка, 50 диаметр в пыльцевых зерен 30 Мм, длина. семян, приблизительно 1,25 мм число хромосом соматических клеток: 4h=36, 4. Плод 55 тысячеэерновая масса (TKM) семян, 0,06-0,13 г, 5. Способность к прорастанию (КР) приблизительно 75 6. Чистота: 94-95 1836004 Таблица 1 Питательная среда по hitsch used hitsch/Scienceigsg/ 7. Другие признаки: соотношение усушки свежий; сухой (цветок) = От 5,5 до 6. характерный ароматичный запах растительного сырья, тонкий ароматичный, типичный вкус чайного настоя Кроме того могут иметь место следующие свойства: единая высота растений (уравненность) с узкой зоной цветения, поэтому особенно пригодны для механизированного сбора урожая, большие головки, средневысокий .урожай, основательно (3.— 5 кратно) разветвленная форма. Формула изобретения 1. Способ получения тетраплоидной ромашки Matrlcarium chamomilla recutita 1., Acteraceae, заключающийся в том, что у 1000-10000 растений диплоидной или тетраплоидной ромашки определяют в эфирном масле содержание (+ a-бисаболола, затем отбирают ромашки, у которых (+aбисаболол. представляет собой основной компонент эфирного масла и.цветы кото= рых, высушенные при температуре 40 С, содержат 100 — 250 мг% хамазулина, 50-400 мг% (+ a-бисаболола и менее 50 мг % прочих бисаолоидов, эти ромашки размножают отдельно от исходной популяции, из этих растений отбирают по меньшей мере 10 индивидуумов, которые имеют одновременный срок цветения, величину головки цветка от 20 до 40 мм и 100-200 мг% хамаэулина, 50-400 Mr% (+а-бисаболола и менее 50 мг% прочих бисаболаидов.в расчете на сухую субстанцию, в случае необходимости отобранные дисплоидные или тетраплоидные растения клонируют путем размножения штеклингOs, при котором растения обрезают, доводят при температуре 1214ОС до новой выгонки и полученные таким образом короткие побеги высаживают при относительно высокой влажности воздуха и температуре 15 С в трофическую сйесь или путем размножения меристем, при котором Б вершины побегов или пазушные почки помещают на питательную среду и культивируют при температуре 15-30 С, а затем культивируют при относительно высокой влажности воздуха и температура около 10 15ОС, полученным таким образом растениям дают отцвести в изолированных условиях в течение. нескольких недель, снимают головки, которые находятся в стадии вегетации и 30-70% трубчатых цветов головок со15 цветий раскрыты, из полученного посевного . материала потомство выращивают в изолированных условиях при температуре 1824ОС, ночной температуре 12-14 С, в случае необходимости при дополнительном осве20 щении, далее из полученных растений отбирают те растения, которые цветут в одно и то же время, имеют равномерное основное жилкование, величину головок соцветий от 20 — 40 мм, а также содержание 100-250 мг% 25 хамазулина,.50-400мг% (+a-бисаболола и менее 50 мг% прочих бисаболоидов, из отобранных растений вновь получают посевной материал, в случае необходимости из этого посевного материала выращивают рас30 тения в различных местностях и производят, дополнительную селекцию по тем же критериям, повторяя укаэанные приемы 4-6 раз. 2. Способ но п.l, отл и ч а ю щи йс я тем, что исходную тетраплоидную ромашку 35 получают путем обработки. диплоидную.ромашки химическим мутагенами при температуре 0-35 С, или гамма, или рентгеновским, или ультразвуковым излучением при температуре 0-35 С 35-55 С, или 40 0-5ОС. 1836004 Питательная среда по Murashige Skoog, мг/и. Продолжение табл. 1 Таблица 2 1836004 Продолжение табл. 2 Составитель Н, Кузенкова Техред М.Моргентал Корректор, О. Густи Редактор Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 Заказ 2987 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5
