Патент ссср 194300

 

l jIj 430 G

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. спиде тельства М

Кл. 39с, 2

Заявлено 06.Х!.1965 (№ 1036923/23-5) с присоединением заявки М.

NIlK C 08

4 ДК 661.183.123.2:678. .673 (088.8) Приоритет

Опубликовано 30.ill.1967. Бюллетень М 8

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Дата опубликования описания 7Х1,1967

Авторы изобрс гения

Е. Д. Каверзнева, В. П. Богданов, Ю и Л. Н. Трофи

Институт органи геской хи

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТИОНИТА

Известен способ синтеза катионита на основе салициловой кислоты, фенола и фор мальдеги. 3, пригодный для сорбции сравнительно tttt t

1 моль салициловой кислоты при рН 9 — 10, при нагревании в течение 6 — 7 час при 99—

100 С и в течение 20 «ас при 120 †1 С.

Однако для ферментной промышленности нужны смолы, которые могли бы сслективно сорбировать с достаточной емкостью высокомолекуляр tt te и крайние лабильные молекулы ферментов без инактивации их.

Предлагается способ получения катионита на основе салициловой кислоты, фенола и формальдегида, который заключается в том, что вторая стадия реакции, проводимая с добавлением фенола, протекает при рН 10,6, при нагревании в течение 24 час при 97 — 99 С и в течение 20 час при 110 †1"С.

Полученный катионит способен селективио сорои1зовать высокомолс!ц лярные молекулы белков (ферментов) без их инактивации из разбавленных культуральиых стрептомициновых растворов. При этом удается получит:. высококонцентрированныс растворы ферментов.

Катионит химически и механически стоек.

5 СОЕ но 0,1 н. раствору ХаОН 4 лгг экв/г.

П р и м ср 1. Получение растворимого линейного полимера.

На 1 лголь салициловой кислоты беру

2 лоль 30 — 35%-ного формалина. 1хеакцион10 ную массу нагревают с ооратным холодильником до растворения и прибавлягог

0,022 ло.гь соляной кислоты, нагревают смесь при 96 — 98 С до помутнения (36 2 лгин) и продолжают нагревать при этой жс темпера15 туре еще 1,5 L, где k — время до помутнения.

Смолу промывают водой и растворяют, добавляя 40%-ный ХаОН до рН 3 — 5.

К, полученному выше раствору дооавляют

0,2 лголь фенола, 0,3 лголь формалина и до20 водят рН до 10,6. Смесь непрерывно нагревают при 97 — 98 C 24 час и затем при 110—

112 С в течение 20 час. Полученная смола имеет набухаемость в Ха+-форме 10j 1 и статическую обменную емкость (СОЕ) 3,8:

25 0,3 лгг экв/г.

Угеличение количества фенола сшг>кает на бухаемость катионита.

C:tHòeçèðoâàèttûå смолы с набухаемостью

10; 5,5 и 3,1 были испытаны на способносп концентрировать и очищать ферменты из

194300

Предмет изобретения

Составители Г. Русских

Редактор Л. К. Ушакова Техрсд Л. Бриккср Корректоры: M. П. Ромашов» и С. М. Бслугииа

3а к аз 1375 i! О Тираж 505 Подписное

Ц!1ИИПИ Комитета по делам изобретений t: открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, нр. Сапунова, 2 культуральной жидкости штамм 32-12 (питательная среда полуобогащенная). Ниже приведен пример такого опыта на смоле, имевшей 10-кратную набухаемость.

Пример 2. Испытание смолы: сорбцпя протеаз из стрептомициновой культуральпой жидкости.

3,4 г смолы в Ха -форме уравновешивают на колонке с /1в М фосфатным буфером рН 6,2 и пропускают 910 мл культуральной стрсптомицпновой жидкости, освобожденной от стрептомпцина, с активностью 21,8 10 протеазных единиц/мл и содержащую

3,18 10 в белковых единиц/мл.

На колонке сорбируется 11,3 протеазных единиц, или 3,32 единицы на 1 г смолы. Элюирование боратным буфером рН 9,2 высокой ионной силы (0,5 моль КС1) позволяет получить концентрированный раствор фермента (82 лл), в котором содержится 9,05 протеазных единиц (80%) и 0,27 белковых единиц. что соответствует примерно 0,5 г сухого белка, пли 168 мг на 1 г смолы в Н+-форме.

Степень очистки по белку равна 5.

Смола с набухаемостью 5,5 сорбирует только 0,8 протеазных единиц/г, а смола с набухаемостью 3,1 всего 0,28 протеазной единицы

Степень очистки при этом также значительно ухудшается.

Способ получения катионита путем взаимодействия салицнловой кислоты и формальдегида в кислой среде с последующим взаимодействием полученного водорастворимого продукта поликонденсации с фенолом в щелочной среде при нагревании, отлачагощийся тем, что, с целью получения катионита, пригодного для выделения и очистки белков, фенол берут в количестве 0,2 моль на 1 моль салициловой кислоты и взаимодействие водорастворимого продукта конденсации салициловой кислоты и формальдегида с фенолом проводят при рН 10,6, при нагревании в течение 24 час при 97 — 99 С и в течение 20 час при 110 †1 С.