Штамм бактерий gluconobacter oxydans - продуцент сорбозы

 

Область использование: медицина и пищевая промышленность. Штамм yhjconobacter oxydans ВНИИА-2053 получен из штамма ВНИИА-1672 методом спонтанной мутации, имеет оптимум рН 5,8 - 6,5, температурный оптимум 30 - 33° С. Штамм устойчив к производственным бактериофагам, сохраняет окислительную активности 8,3 г сорбозы/1 г сухой биомассы п.ч 1 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ®

К ПАТЕНТУ

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 5013425/13 (22) 2811.91 (46) 15.10.93 Бктл hh 37-38 (71) Научно-производственное объединение

"Витамины" (72) Красильникова Т.Н.; Акишина P.È„Ñå ðíîâà

Н.С; Королев П.Н. Поморцева НВ„. Ведерников ЕИ„

Петрова Л.Ф„. Тивиков В.И. (73) Научно-производственное объединение

"Витамины" (l)) ÈR!! (Il) 2)(((1929С) (51) 12 N 1 20 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ (GLUCONOBACTER

OXYDA NS) — П РОДУЩНТ СОРБОЗЫ (57) Область использование: медицина и пищевая промышленность. Штамм ybconobacter oxydans

ВНИИА-2053 получен из штамма ВНИИА-1672 методом спонтанной мутации, имеет оптимум рН 5,8 — 65, температурный оптимум 30 — 33 С. Штамм устойчив к производственным бактериофагам, сохраняет окислительную активности 8,3 г сорбозы/1

r сухой биомассы п.ч. 1 табл

ЬЭ

Ю О

2001099

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма — продуцента сорбоэы, полупродукта в синтезе аскорбиновой кислоты (витамина С), которая используется в медицине и пищевой промышленности. р Известны производственные штаммы

Gl ficonobacter oyydans 6 (коллекция ВНИИА

М 1672), К (коллекция ВНИИА hh 1671), Б (коллекция ВНИИА ЬЬ 1901).

Однако недостатком этих штаммов яв° Ф ляется высокая чувствительность к заражению фагом (известны два фага GS-1, GS-2, выделенные при фаговой вспышке на производстве и при фаговой вспышке это приводит к остановке производства и большим экономическим потерям в размере 15 т сорбозы и сутки, Кроме то о, эти штаммы обладают относительно невысокой окислительной активностью (образованием 1 г сорбозы 1 г сухой биомассы (СБ) в 1 л за 1 ч).

Создание отечественного фонда культур-продуцентов сорбозы, обладающих ценными для производства признаками, а именно устойчивостью к производственным фагам. является необходимым условием развития такого производства и представляет coÑoë важную народно-хозяйственную задачу.

В коллекциях промышленных микроорганизмов СССР фагоустойчивых штаммов

6! цсonobacter oxydans нет, Целью изобретения является новый штамм G, oxydans 64 продуцент сорбозы, отличающийся более высокой окислительной активностью, обладающий реэистентностью к производственным фагам GS-1, GS-2 и расширяющий коллекцию производственных штаммов.

Предлагаемый штамм получен иэ производственногo фагочувствительного штамма 1672 методом спонтанной мутации и многократного отбора на агаризованных средах с такими источниками углерода, как сорбит, маннит и глицерин, и дрожжевой водой (или ферментолизатом дрожжей) в качестве источника азота и витаминов. Каждый раэ проводилась проверка и отбор штаммов культур на ферментационной среде и отбор мутантов по продуктивности по сорбозе, окислительной активности и фагорезистентности.

В таблице показана чувствительность штаммов G. oxydans и их окислительная активность.

Оптимальные условия хранения штамма.

Штамм хранится на агариэованной среде в пробирках при 4 С в течение 1 мес, 5

55 затем его пересеивают на свежие питательные среды. Штамм также можно хранить в лиофилиэированном состоянии в течение 3 лет без потери активности, Gluconobacter oxydans штамм 64 ВНИВИ вЂ” продуцент сорбоэы хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков под номером 2053.

Культурально-морфологическая характеристика.

На среде с сорбитом и дрожжевой водой колонии двух видов: 1) мелкие, круглые, выпуклые, гладкие, блестящие, серовато-бежеватые; 2) более крупные (2 — 3 мм в диаметре), по краям плоские с выпуклым блестящим центром, матовые по краям, край изрезанный, серовато-бежеватые.

На среде с сорбитом и ферментолизатом и сусло-агаре колонии круглые, гладкие, блестящие, серовато-белые, в старых культурах приобретают бежеватый оттенок, Структура зернистая.

Клетки от элипсоидных до палочковидных, 0,6-0,8 х 1,0 — 2,0 мкм, встречаются поодиночке, парами или короткими цепочками. В старых культурах могут быть инволюционные формы. Эндоспоры не образуются. Грамотрицательные. Строгие аз робы.

Физиолого-биохимические свойства, В качестве источников углерода используют глюкозу, этанол, глицерин, сорбит, маннит.

Не используют уксусную кислоту, глюконат Са, лактат, лактозу, крахмал, В качестве источников азота и витаминов используют дрожжевую воду, дрожжевой экстракт, дрожжевой автолизат. клеточный и бесклеточный ферментолиэаты кормовых дрожжей, кукурузный экстракт.

Из минеральных источников азота может использовать на синтетических средах сернокислый и азотнокислый аммоний. Нуждается в витаминах группы В, Штамм может развиваться при 20-40 С и в пределах рН

3 — 8,0.

Температурный оптимум 30 — 33 С. Оптимум рН 5,8-6,5.

Фагоустойчивость.

Штамм устойчив к производственным бактериофагам GS-1, GS-2. В присутствии большого количества фага (10 част/мл) любого из этих фагов или их смеси штамм нормально развивается и сохраняет окислительную активность 8,3 г сорбозы г

СБ л,ч, снижает титр фага в 20 раэ. а при повторном пассировании на ферментационной среде фаг практически исчезает, 2001099 (56) Татаринова и др, Биосинтез убихинона15 10 и окислительная активность культуры G.

0xydans, Микробиология, т, 56, вып. 3, 1987, с. 436-440.

Отчет о научно-исследовательской работе "Оказание научно-технической помо20 щи в стабилизации действующего производства сорбозы и внедрении УНФ100, УНФ вЂ” 2000, М 0188 004023", 19&8.

Григорьева Т.М, и др. Биотехнология, N1, .1991, .с. .3 — 5.

П р и м е ч а н и е. (+) — негативные колонии образуются. (— ) — негативные колонии не образуются.

Формула изобретения штлмм влктсгий си:со овлсткя охтолчзпРОдуце!и соРБОЗы

Составитель Т.Красильникова

Техред М.Моргентал Корректор Н,Кешеля

Редактор В.Трубченко

Заказ 3111

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Использование штамма для получения сорбоэы. Культуру штамма 64 G. oxydans выращивают при 28 С в течение суток на агарированной среде следующего состава: сорбит 107ь, дрожжевая вода 1;(, (по сухим веществам), агар 27(, рН 5,5. Полученную культуру смывом переносят в колбы емкостью 750 мл с 50 мл ферментационной среды следующего состава: сорбит 10, ферментолизат бесклеточный 0,5, вода водопроводная, рН 6,0. После культивирования в течение 19 ч при 30 С инокулят в количестве 107ь переносят в колбы объемом 750 мл с 50 мл среды, содержащей сорбит 22, ферментолизат дрожжей бесклеточный 0 2, рН 6,0. Ферментацию проводят в течение 43 ч на качалке при 220 об/мин.

Определение сорбоэы проводили поляриметрическим методом, Относительная ошибка определения на уровне значимости

0,95 составляла 2,5%. Степень конверсии (процент трансформации сорбита в сорбозу) составила 97,57(при окислительной активности культуры 8,3 г сорбоэы/г СБ.л.ч.

Таким образом, полученный штамм

Gluconobacter oxydans 64, обладающий

5 большей окислительной активностью и фагоустойчивостью к фагам GS-1, GS-2, расширяет коллекцию производственных штаммов и может обеспечить устойчивое беспрерывное промышленное проиэводст10 во сорбозы, Штамм прошел опытную проверку на опытном производстве синтетических витаминов.

Штамм бактерий Gluconobacter oxydans

ВНИИА-2053 - продуцент сорбозы.