Способ получения комплекса, обладающего фибринолитической, тромболитической и антикоагуляционной активностью

 

Целью изобретения является получения комплекса, обладающего одновременно фибринолитической, тромболитической и антикоагулянтной активностью. Цель достигается путем экстрагирования водой из растительной ткани. В качестве источника препарата берут корни древовидного пиона Paeonia suffruticosa, которые измельчают и помещают в дистиллированную воду или в физиологический раствор в концентрации 0,85-0,9%, выдерживают в кипящей водяной бане в течение 10-20 мин при помешивании, затем выдерживают в течение 30 мин и центрифугируют при 1800-2000 об/мин в течение 20-30 мин при обычной температуре, супернатант замораживают и лиофильно высушивают. Предлагаемый способ менее трудоемок (отсутствует операция наслоения сахарозы на раствор препарата), более экономичен. так как отсутствуют операции, связанные с ультрацентрифугированием на дорогостоящем оборудовании, ускорен, так как занимает 2-3 ч (в прототипе 24-26 ч), и может быть использован в физиологии, патофизиологии, медицинской и химико-фармацевтической промышленности. 1 табл.

Изобретение относится к способам получения биологически активных препаратов и может быть использовано в физиологии, патофизиологии, фармакологии, медицинской и химико-фармацевтической промышленности.

Известен способ получения антикоагулянта из растения, произрастающего в Южной Африке, Aspilia africana, заключающийся в экстракции биологически активной фракции, дальнейшей ее очистки путем гель-хроматографии на колонке с сефадексом G-50.

Способ имеет следующие недостатки: редкий ареал распространения вида растения неэкономичность способа; имеются побочные эффекты от использования фракции; трудоемкость получения препарата; отсутствие в препарате фибринолитических свойств.

Известен способ получения вещества, обладающего антикоагулянтной активностью, из растения средней полосы европейской части России (таволги вязолистной Filipendula ulmaria), заключающийся в экстракции биологически активной фракции, инкубации в термостате, центрифугировании с последующим ультрацентрифугированием в градиенте плотности сахарозы.

Этот способ целесообразно принять за прототип вследствие наличия общих операций.

Прототип имеет следующие недостатки: трудоемкость способа получения препарата; неэкономичность необходимость операции ультрацентрифугирования; отсутствие в препарате тромболитических свойств; длительность способа.

Целью изобретения является упрощение, ускорение, повышение экономичности способа получения комплекса, обладающего одновременно фибринолитической, тромболитической и антикоагулянтной активностью.

Цель достигается тем, что в качестве источника сырья используют корень древовидного пиона (Paeonia suffruticosa Andrews). Растения выращивают путем стратификации в открытом парнике, корни измельчают до порошкообразного состояния и экстрагируют в дистиллированной воде в концентрации 1-5% (1-5 г порошка в 100-120 мл дистиллированной воды), затем прогревают в течение 10-20 мин на кипящей водяной бане при постоянном помешивании, после чего осадок удаляют центрифугированием при 1800-2000 об/мин в течение 20-30 мин при комнатной температуре. Полученный супернатант подвергают замораживанию при (-10)-(-20)^оС и лиофильно высушивают. Полученный препарат обладает одновременно антикоагулянтной, фибринолитической и тромболитической активностями, представленными в таблице.

Из данных таблицы видно, что антикоагулянтная и фибринолитическая активности неферментативной природы препарата по предложенному способу не менее таковых в прототипе. Расширение спектра действия идет за счет одновременно дополнительной антитромботической и высокой тромболитической активности. Антитромботическая активность в предлагаемом препарате составляет не менее 70% Как видно, полный лизис свежих экспериментально образованных тромбов в присутствии предлагаемого препарата осуществлялся в 90% случаев. Предлагаемый способ менее трудоемок, так как отсутствует операция наслоения сахарозы на раствор препарата и более экономичен, так как отсутствуют операции, связанные с ультрацентрифугированием на дорогостоящем оборудовании, ускорен, так как занимает 2-3 ч (в прототипе 24-26 ч).

П р и м е р 1. Берут корень пиона (P. suffruticosa), измельчают до порошкообразного состояния, тщательно растирают 500 мг в фарфоровой ступке в течение 10 мин и по каплям приливают дистиллированную воду до конечного объема 10 мл, затем смесь выдерживают в кипящей водяной бане в течение 10 мин при периодическом помешивании, после чего центрифугируют при 1800 об/мин в течение 20 мин для отделения супернатанта. Полученный супернатант лиофильно высушивают из замороженного состояния и используют в качестве эффективного антитромботического и тромболитического препарата. Выход препарата 5% Полученный препарат обладает антикоагулянтной активностью, так как не наблюдается образования сгустка плазмы крови крысы и быка в течение более 60 мин в присутствии препарата по сравнению с контролем, где время образования сгустка составляет 85 с. Установлена неферментативная фибринолитическая активность плазмы крови при пероральном введении препарата в дозе 1 мг/кг, превышающая контрольный уровень на 63% антикоагулянтная активность, превышающая контрольный уровень на 24% антитромботическая активность, превышающая контрольный уровень на 75% тромболитическая активность, превышающая контрольный уровень на 100% П р и м е р 2. Начальные операции проводят согласно примеру 1. Далее материал растирают в фарфоровой ступке 20 мин и приливают по каплям дистиллированную воду до конечного объема 20 мл, затем смесь выдерживают на кипящей водяной бане в течение 20 мин при периодическом помешивании, после чего центрифугируют при 2000 об/мин в течение 30 мин для отделения супернатанта. Полученный супернатант лиофильно высушивают из замороженного состояния. Выход препарата 4% Полученный препарат обладал антикоагулянтной активностью (не наблюдалось образования сгустка плазмы крови крысы в течение более 60 мин), неферментативной фибринолитической активностью (зоны лизиса 42 кв. мм). При пероральном введении в организм млекопитающих (крысы) установлено, что плазма крови обнаруживает антикоагулянтные и фибринолитические свойства, превышающие контрольный уровень на соответственно 55% и 30% антитромбическую активность, превышающую контрольный уровень на 70% и тромболитические свойства, превышающие контрольный уровень на 95% П р и м е р 3. Начальные операции проводят согласно примеру 1. Далее материал растирают в фарфоровой ступке 15 мин и приливают по каплям дистиллированную воду до конечного объема 15 мл. Затем смесь выдерживают на кипящей водяной бане в течение 15 мин при периодическом помешивании, после чего центрифугируют при 1900 об/мин в течение 25 мин при комнатной температуре для отделения супернатанта. Полученный супернатант лиофильно высушивают из замороженного состояния. Выход препарата 4% Полученный препарат обладал антикоагулянтной активностью (не наблюдалось образование сгустка плазмы крови крысы в течение 60 мин), неферментативной фибринолитической активностью (зона лизиса составляла 36 кв. мм). При пероральном введении в организм млекопитающих (крысы) установлено, что плазма крови обнаруживает антикоагулянтные и фибринолитические свойства, превышающие контрольный уровень на соответственно 60% и 32% антитромболитическую активность, превышающую контрольный уровень на 72% и тромболитические свойства, превышающие контрольный уровень на 90%

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА, ОБЛАДАЮЩЕГО ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОЙ, ТРОМБОЛИТИЧЕСКОЙ И АНТИКОАГУЛЯЦИОННОЙ АКТИВНОСТЬЮ, путем экстрагирования водой растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют корни древовидного пиона (Paeonis Suffruticosa), которые измельчают и экстрагируют дистиллированной водой при соотношении сырье : экстрагент 1 : 5, прогревают на кипящей водяной бане при помешивании в течение 10 - 20 мин, после чего осадок удаляют центрифугированием при 1800 - 2000 об/мин в течение 20 - 30 мин, супернатант замораживают при (-10) - (-20)^oС и лиофильно высушивают.

РИСУНКИ

Рисунок 1