Способ обезвоживания гистологического материала

 

Использование: в области медицины, в частности в гистологии. Сущность изобретения: животную ткань проводят по спиртам гистологической батареи, содержащей медный купорос, причем обработку проводят в бумажных кассетах, а медный купорос помещают в тканные мешки и размещают вокруг кассет, а спирт используют в объемном соотношении к животной ткани 2:1. Способ позволяет сократить расход реактивов при сохранении качества гистологического препарата.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и касается способов обезвоживания гистологического материала.

Известен способ обезвоживания животных тканей (1) путем выдерживания их в двух порциях 96^o и абсолютного спирта по 24 ч в каждой.

Способ предполагает наличие двух емкостей объемом до 200 мл, на дно которых насыпают медный купорос слоем 1-2 см и закрывают его фильтровальной бумагой. В емкость заливают по 100 мл спирта 96^o, предварительно подготовленного, абсолютного и используют для обезвоживания 15 20 кусочков ткани. Расход спирта при этом составляет около 5 объемов на 1 объем ткани.

Недостатками данного способа является большой расход реактивов, в частности спирта, а также длительность процедуры предварительной подготовки абсолютного спирта.

Задача предлагаемого изобретения экономное расходование реактивов при сохранении качества гистологического препарата.

Определенный в задаче технический результат изобретения достигается за счет реализации следующих приемов способа: обезвоживание ткани осуществляют, поместив ее в бумажную кассету; медный купорос упаковывают в тканные мешочки, укладывают их на дно емкости и вокруг бумажных кассет, при этом расход спирта составляет 2 объема к одному объему ткани.

Сокращение объема спирта при сохранении его обезвоживающего свойства возможно за счет 1. выполнения обработки в бумажных кассетах, когда бумага сорбирует на себя значительную (основную) часть жиров и они не попадают в спирт, т.е. проведение обработки в бумажных кассетах продлевает рабочую способность спиртов; 2. помещения медного купороса в тканные мешки, когда, во-первых, увеличивается площадь контакта спирта с медным купоросом и процесс присоединения воды к купоросу идет активнее; во-вторых, тканные мешки сорбируют часть жиров, которые не осели на бумажной кассете.

3. оптимальное рабочее соотношение объемов спирта и ткани 2:1 установлено экспериментальным путем: наращивание количества одновременно обрабатываемых кусочков ткани проводилось постепенно под контролем качества спиртов, предлагаемая технология обработки позволила сократить соотношение объемов с 5:1 до 2:1 при сохранении качества гистологического препарата.

Дальнейшее наращивание количества одновременно обрабатываемых кусочков приводит к быстрому помутнению спирта и снижению качества гистологического образца, т.е. соотношение 2:1 является оптимальным.

Таким образом, перечисленные признаки изобретения позволяют добиться желаемого технического результата экономного расхода спирта на единицу объема обрабатываемой животной ткани и являются существенным для данного изобретения.

Способ выполняется следующим образом.

Перед проведением этапа гистологической обработки обезвоживания, кусочки ткани, предварительно обработанные фиксирующим составом, помещают в гистологические кассеты любой известной конструкции (2), но выполненные из бумаги. Для одной проводки берут 600 700 кусочков ткани объемом по 1 3 мл. Кассеты помещают в емкости 1,2 1,4 л. Предварительно по дну емкости выкладывают обезвоживающие патроны мешки с медным купоросом из расчета 1 объем купороса на 4 5 объемов спирта.

Затем емкость заливают спиртом 96^o. Расход спирта равен 2 объема спирта к 1 объему ткани. Кусочки выдерживают в течение 24 ч, затем, не вынимая кусочки тканей из кассет, переносят их во вторую емкость со спиртом 96^o и обезвоживающими патронами и выдерживают еще 24 ч, далее процесс гистологической обработки проводят по общепринятой методике: промывают образцы в бензоле и заливают в парафин.

Качество гистологических образцов соответствует требованиям стандартов.

Контролем степени насыщенности рабочих спиртов жирами служит проба с водой. После первой проводки по предлагаемой нами технологии проба с водой практически не дает помутнения.

После замены патронов с медным купоросом на новые спирт еще раз используют для проводки 500 кусков тканей по 1 2 мл каждый. Качество гистологических препаратов после данной проводки соответствует требованиям стандартов.

Приводим примеры конкретного выполнения способа для получения гистологических препаратов из различных животных тканей.

Пример 1. С целью исследования митотической активности эпителия разных органов (языка, пищевода, кишечника) в 1 л емкости гистологической батареи - кассетами концентрируют 500 органов и создают соотношение 2 мл среды на 1 кусочек; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в кассетах с сохранением соотношения (2:1), контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин, в кассетах вычленяют парафиновые кубики; срезы и покраску митозов производят по общеизвестным методикам; качество окрашенных срезов позволяет учитывать фигуры нормальных и патологических митозов согласно существующим критериям цитологической оценки делящихся клеток (И.А.Алов, 1972).

Пример 2. С целью исследования гистологической структуры легкоразрушаемых паренхиматозных органов (например, надпочечники) на всех этапах гистологической обработки в 1 л емкости гистологической батареи кассетами концентрируют 500 органов и создают соотношение 2 мл среды на один кусочек; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в тех же кассетах с сохранением соотношения (2:1); контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин в кассетах вычленяют парафиновые кубики, срезы и покраску производят по общеизвестным методикам; микроскопическим исследованием выявляют (дифференцируют) все признаки послойного строения надпочечников.

Пример 3. С целью исследования внутриклеточных структур тучных клеток языка, пищевода (белых крыс) и кожи человека кусочки органов концентрируют кассетами в емкостях гистологической батареи в соотношении 2 мл рабочей среды на 1 кусочек на всех этапах гистологической обработки; перекладывание по емкостям гистологической батареи осуществляют в тех же кассетах с сохранением соотношения (2: 1), контролируют качество обезвоживающих патронов (их смена в случае посинения медного купороса); после одномоментного заключения всех органов в парафин в кассетах вычленяют парафиновые кубики, микроскопическим исследованием дифференцируют структуру и разные формы тучных клеток, при этом коэффициент дегранулирующих тучных клеток обычный для изучаемого органа.

Технический результат изобретения выражается в следующем.

1. Предлагаемая технология позволяет сократить затраты реактивов, в частности спирта, в 2,5 раза при однократном их использовании и в 5 раз при двукратном после отрицательного контроля на насыщенность спирта жирами.

2. Упаковка медного купороса в тканные мешки помимо прямого эффекта - повышения обезвоживающих свойств создает дополнительное удобство в процессе замены отработанного купороса: мешки вынимаются из емкости, заполненной спиртом в процессе проводки и заменяют на новые.

3. Использование бумажных кассет, помимо прямого эффекта сорбции жира на стенки кассеты позволяет изготовлять их непосредственно в лаборатории и не зависеть от их промышленного выпуска.

4. Применение предлагаемой технологии позволяет получать гистологические препараты нужного качества с сохранением всех гистологических структур.

Формула изобретения

Способ обезвоживания гистологического материала, включающий его проводку по спиртам гистологической батареи, содержащей медный купорос, отличающийся тем, что обработку проводят в бумажных кассетах, а медный купорос помещают в тканые мешки и размещают вокруг кассет, причем спирт используют в объемном соотношении спирт:животная ткань 2:1.