Патент ссср 219752

 

2I9752

Союз Советских

Социалистических

Республик

Всеоо юе.:ая атентно-тохнк еское библиотека УЬА

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 25Х111.1966 (№ 1099337!31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 14Х1.1968, Бюллетень № 19

Дата опубликования описания ЗО.VIII.1968

Ii,÷. 30II, 2, 04

3i lip А 6 I k

Комитет по делам изобретений и открытий прн Совете Министров

СССР

УДК 547.995,15;611.013. .8 (088.8) Авторы изооретения

С. М. Бычков и M. Ф. Колесникова

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЪ|

Известны способы получения гиалуроновой кислоты из пупочных канатиков человека путем экстракции водой и обработки экстракта в заморо>кенном при — 10 — 14 С состоянии этанолом.

В предлагаемом способе в отличии от известных экстракт из пупочных канатиков последовательно обрабатывают двойным объемом предварительно охлажденного этанола в присутствии ацетата калия, удаляют примеси сульфатированных мукополисахаридов гексамминкобальтхлоридом, примеси нейтральных гликопротеидов — катионитом, очищенный раствор замораживают и обрабатывают трехкратным объемом этанола в присутствии ацетата натрия.

Это позволяет упростить способ получения гиалуроновой кислоты, увеличить степень се очистки и исключить деполимеризацию.

П р и м ер. Пуповины человека очи1 ают от кровеносных сосудов, отмывают от крови, измельчают в охлажденной мясорубке и обезвоживают трехкратной обработкой охлажденным до 2 — 4 С ацетоном, используя его каждый раз в пятикратном количестве (по объему). После удаления ацетона фильтрованием и высушивания на воздухе ткань измельчают в шаровой мельнице до пылевидного состояния. 10 г полученного порошка при энергичном растирании заливают 100 лтл дистиллированной воды, насыщенной хлороформом, и оставляют на ночь в закрытом сосуде при 2—

4 С. Набухшую ткань прп этой же температуре измельчают в стеклянном гомогснпзаторс, прибавляя воду так, чтобы объем смеси составил 200 лл, оставляют на 2 суток при 2—

4 С, отделяют экстракт центрпфугпрованпем (3000 об)мин) и сливают. Оставшуюся тка»евую массу повторно экстрагируют 300 лял воды при тех же условиях, Экстракты объединяют, центрифугируют 1 ч. при 5000 об)лшн и 2—

4- С. K надосадочной жидкости прибавляют ацетат калия в таком количестве, чтобы 0I о концентрация после прибавления двух обьемов этанола составила 10 /р. Экстракт, содср>кащнй ацетат калия, и спирт охлаждают до — 10 — 14 C и смешивают с этанолoм, нс допуская повышения температуры более 2 — 4 С.

Смесь оставляют на 2 суток прп 2 — 4-С и отделяют осадок при 3000 об/мин, промывая его один раз 80% ным этанолом, три раза 96р, рным этанолом, охлажденным до — 10 — 14 С и в заключении — три раза эфиром. Промытый осадок сушат над хлористым кальцием и стружками парафина в вакууме.

Полученный неочищенный препарат растворяют в 180 — 200 лтл воды и прибавляют к нему раствор гексамминокобальтхлорида так, чтобы его концентрация в 2 раза превышала кон30 центрацию гиалуроновой кислоты. Смесь за219752

Предмет изобретения

Составитель В. А. Таратута

Редактор Н. Я. Кузнецова Техред Л. К. Малова Корректор Л. В. Юшина

Заказ 2355/20 Тираж 530 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова 2 мораживают с последующим медленным оттаиванием при 2 — 4 С. Образующийся осадок удаляют центрифугированием при 5000об(иин.

К надосадочной жидкости добавляют 10 г катионита Амберлит ИР-120 в натриевой форме для удаления избытка гексамминокобальтхлорида. К прозрачному раствору добавляют 10 г катионита в Н-форме, оставляют на 4 — 5 час при 2 — 4 С и отделяют смолу центрифугированием. К раствору добавляют ацетат натрия так, чтобы его концентрация после осаждения гиалуроновой кислоты тремя объемами этанола составила 1в/в. Перед осаждением раствор замораживают и приливают к нему спирт, охлажденный до — 10 — 14 С. Выпадающий нитевидный осадок гиалуроновой кислоты оставляют под маточным раствором на ночь при

2 — 4 С, после чего отделяют на центрифуге при 3000 оО)иин, промывают спиртом, эфиром и сушат, как указано выше. Окончательное высушивание производят в вакууме над фосфорным ангидридом. Выход 3,0 — 3,5 /ä от су хого веса исходной ткани.

Способ получения гиалуроновой кислоты из пупочных канатиков человека путем экстракции водой и обработки экстракта в замороженном при — 10 — 14 С состоянии этанолом, отличаюцийся тем, что, с целью упрощения технологии, улучшения очистки и исключения деполимеризации, экстракт из пупочных канатиков последовательно обрабатывают двойным объемом предварительно охлажденного этанола в присутствии ацетата калия, удаляют примеси сульфатированных мукополисахаридов гексамминкобальтхлоридом, примеси нейтральных гликопротеидов — катионитом, полученный раствор замораживают и обраба20 тывают трехкратным объемом этанола в присутствии ацетата натрия.