Способ анализа концентрации фосфолипидов в головном мозге и печени животных в эксперименте

 

Изобретение относится к биохимии, а именно к способам анализа концентрации фосфолипидов. Для этого проводится экстракция липидов из биологического материала (гомогенат ткани, суспензия субклеточных органелл и др.) и их анализ, а тканевый осадок, остающийся после экстракции липидов, подвергается солюбилизации путем инкубации в 1%-ном растворе додецилсульфата натрия в течение 12 ч при 37^oС, а затем еще в течение 30 мин после добавления 6%-ного NaOH. После растворения осадка определяется содержание белка одним из известных методов. Концентрация фосфолипидов выражается отношением массы фосфолипидов к массе белка тканевого осадка. Способ обеспечивает точность способа за счет определения фосфолипидов и белка в одном образце.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к способам анализа концентрации фосфолипидов.

Известен способ анализа концентрации фосфолипидов в тканях животных, в котором навеску исследуемой ткани гомогенизируют, а затем проводят экстракцию липидов. Экстракт липидов анализируют на содержание общих фосфолипидов и их фракций, концентрацию фосфолипидов выражают отношением массы липидного фосфора к массе тканевой навески [1]. Известен также способ анализа концентрации фосфолипидов, в котором навеску исследуемой ткани гомогенизируют, часть гомогената используют для определения концентрации белка, из другой части экстрагируют липиды. Экстракт подвергают анализу на содержание общих фосфолипидов и их фракций, концентрацию фосфолипидов выражают отношением массы липидного фосфора к массе белка [2].

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ анализа концентрации фосфолипидов, в котором используется расчет отношения массы фосфолипидов к массе белка в исследуемом образце.

Недостатками прототипа является то, что требуется достаточное количество материала для определения фосфолипидов и белка, кроме того, при определении белка присутствие липидов оказывает мешающее действие.

Целью изобретения является повышение качества биохимических исследований за счет определения фосфолипидов и белка в одном образце.

Указанная цель достигается тем, что в известном способе проводится экстракция липидов из биологического материала (гомогенат ткани, суспензия субклеточных органелл и др. ) и их анализ, а тканевый осадок, остающийся после экстракции липидов, подвергается солюбилизации путем инкубации в 1%-ном растворе додецилсульфата натрия в течение 12 часов при 37^oC, а затем еще в течение 30 мин после добавления 6%-ного NaOH. После растворения осадка определяется содержание белка одним из известных методов. Концентрация фосфолипидов выражается отношением массы фосфолипидов к массе белка тканевого осадка. Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый способ анализа концентрации фосфолипидов требует меньшее количество исследуемого материала, а определение содержания белка проводится в отсутствие липидов, что повышает точность определения. Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию "новизна". Анализ известных способов в исследуемой области позволяет сделать вывод об отсутствии в них признаков, сходных с существенными отличительными признаками в заявляемом способе анализа концентрации фосфолипидов в головном мозге и печени мышей.

Пример 1. Навеску головного мозга мыши массой 39 мг гомогенизировали, затем проводили экстракцию липидов по методу Фолча. Экстракт липидов анализировали на содержание общих фосфолипидов и их фракций. Осадок ткани, оставшейся после экстракции липидов, заливали 1%-ным раствором додецилсульфата натрия, оставляли стоять в термостате при 37^oC в течение 12 часов, затем добавляли равный объем 6%-ного NaOH и инкубировали еще в течение 30 мин. После солюбилизации осадка проводили определение концентрации белка микробиуретовым методом. В результате были получены данные: содержание липидного фосфора в экстракте - 2226,7 нМ, содержание белка - 2,1 мг. Отношение липидный фосфор/белок = 1060,3 нМ липидного фосфора/мг белка.

Пример 2. Навеску печени мыши массой 59 мг гомогенизировали, затем проводили экстракцию липидов по методу Фолча. Экстракт липидов анализировали на содержание общих фосфолипидов и их фракций. Осадок ткани, оставшийся после экстракции липидов, заливали 1%-ным раствором додецилсульфата натрия оставляли стоять в термостате при 37^oC в течение 12 часов, затем добавляли равный объем 6%-ного NaOH и инкубировали еще в течение 30 мин. После солюбилизации осадка проводили определение концентрации белка микробиуретовым методом. В результате были получены данные: содержание липидного фосфора в экстракте 2259,7 нМ, содержание белка - 6,0 мг. Отношение липидный фосфор/белок = 376,6 нМ липидного фосфора/мг белка.

Источники информации 1. "Методы биохимических исследований (липидный и энергетический обмен)". Под ред. Прохоровой М.И. Издательство Ленинградского университета, 1982, 272 с.

2. Саутин Ю.Ю. Влияние пролактина на фосфолипидный состав и содержание холестерина в микросомах печени карпа в процессе акклимации к различным температурам. // Украинский биохимический журнал, т. 59, N 4, 1987, с. 69 - 75.

Формула изобретения

Способ анализа концентрации фосфолипидов в головном мозге и печени животных в эксперименте, включающий гомогенизацию пробы, экстракцию липидов, определение уровня фосфолипидов и белка, расчет концентрации фосфолипидов путем деления первого показателя на второй, отличающийся тем, что белок определяют в осадке, полученном после экстракции липидов той же пробы, а осадок растворяют в 1 %-ном растворе додецилсульфата натрия при 37^oC в течение 12 ч, а затем в 6 %-ном растворе NаОН в течение 30 мин.