Способ приготовления образца липосом для исследования методом инфракрасной спектроскопии

 

Изобретение относится к биофизической химии. Готовят тонкую коллодиевую пленку (0,1-0,2 мкм). Фиксируют на фторопластовой пластине, имеющей окно. На коллодиевую пленку в зоне окна наносят водную дисперсию липосом, которую высушивают при 30^oС. Фторопластовую пластинку фиксируют в кюветодержателе спектрофотометра, после чего регистрируют инфракрасный спектр липосом. Изобретение позволяет изучать липосомы методом инфракрасной спектроскопии.

Изобретение относится к области биофизической химии, а именно к изучению липосом методом инфракрасной спектроскопии.

В настоящее время липосомы исследуются как самостоятельный объект в коллоидной химии, как средство для направленного транспорта веществ в клетки, ткани и органы, как модель при изучении биологических мембран, широко используются в косметологии. Однако их структура и свойства еще недостаточно изучены.

Известен способ изучения липосом в видимой и ультрафиолетовой областях спектра путем регистрации светорассеяния [Безрукова А.Г., Розенберг О.А. Определение параметров липосом методом спектра мутности// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 1981. - т. 91, N 4. - с. 506-508]. Известен также способ изучения липосом с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса [Lichtenberg D., Freire E., Schmidt C.F., Barenholz Y., Felgner P. L., Thompson Т.Е. Effect of surface curvature on stability, thermodinamic behavior, and osmotic activity of dipalmitoylphosphatidylcholine single lamellar vesicles// Biochemistry. - 1981. - Vol. 20, N 12. - p. 3462-3467].

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является исследование липосом в видимой и ультрафиолетовой областях (длины волн от 340 до 1100 нм) спектра путем регистрации светорассеяния. В данном способе водную дисперсию липосом помещают в кварцевую кювету и затем регистрируется оптическая плотность раствора в зависимости от длины волны. Получаемая информация используется для численной оценки средних размеров липосом.

Для изучения структуры липосом, межмолекулярных взаимодействий и особенностей конфигурации жирнокислотных цепей авторы предлагают применение метода инфракрасной спектроскопии (длины волн от 4200 до 400 см^-1). Однако приготовление образца для инфракрасных измерений традиционными методами в случае липосом является невозможным в силу следующих причин: 1. вода как дисперсионная среда сильно поглощает в инфракрасной области и не позволяет записать спектр молекул, формирующих липосомы; 2. органические растворители, используемые в инфракрасной спектроскопии, разрушают липосомы; 3. прессование липосом в бромистом калии разрушает нативную структуру липосом.

Целью изобретения является приготовление образца для исследования липосом методом инфракрасной спектроскопии.

Указанная цель достигается тем, что первоначально приготавливается тонкая коллодиевая пленка (0,1-0,2 мкм), которая фиксируется на фторопластовой пластине, имеющей окно размером 10•20 мм. На коллодиевую пленку в зоне окна наносится водная дисперсия липосом, которая затем высушивается при 30^oС. Фторопластовая пластинка фиксируется в кюветодержателе спектрофотометра, после чего регистрируется инфракрасный спектр липосом на инфракрасном спектрофотометре. Подложка из коллодиевой пленки вследствие малой толщины не поглощает в инфракрасной области, следовательно, не искажает спектр липосом.

Сопоставительный анализ с прототипом позволяет заключить, что заявляемый способ изучения липосом делает возможным их исследование в инфракрасной области спектра. Таким образом, заявляемый способ соответствует критерию "новизна". Анализ известных способов в исследуемой области позволяет сделать вывод об отсутствии в них признаков, сходных с существенными отличительными признаками в заявляемом способе изучения липосом.

Пример 1. На поверхность воды в чашке Петри наносили 1 каплю 1,5% раствора коллодия в бутилацетате. После формообразования пленку фиксировали на фторопластовой пластине, имеющей окно размером 10•20 мм. После высушивания при 30^oС регистрировали инфракрасный спектр чистой коллодиевой пленки. На поверхность пленки в области окна наносили с помощью пипетки 200 мкл водной дисперсии липосом с концентрацией липида 5 мг/мл (0,5%). После высушивания при 30^o регистрировали инфракрасный спектр липосом.

Формула изобретения

Способ приготовления образца липосом для исследования методом инфракрасной спектроскопии, включающий приготовление липосом и исследование их методом спектроскопии, отличающийся тем, что готовят коллодиевую пленку толщиной 0,1-0,2 мкм, фиксируют ее на окне фторопластовой пластины, в зону окна наносят водную дисперсию липосом, высушивают ее, помещают в спектрофотометр и регистрируют инфракрасный спектр.