Способ комплексно-индивидуализированного воздействия на организм при медленной вирусной инфекции и способ подготовки лабораторного животного для испытания способа такого воздействия

 

Изобретение относится к области прикладной вирусологии и медицинской генетики и может быть использовано для воздействия на организм человека и животных при медленной вирусной инфекции (МВИ). Сущность изобретения состоит в едином биоинформационном подходе к воздействию на организм для избавления его от патогенов, представляющих собой как классические вирусы типа герпес, вирус иммунодефицита человека, вирусы гепатита В и С и т.п., так и неканонические вирусы типа прионов. Воздействие включает два этапа: устранение из организма патогена с индивидуальным учетом особенностей репликации вируса в клетках-мишенях иммуносистемы с последующим экстракорпоральным лечением, восстановление иммуноинформационных связей за счет трансплантации морфологических элементов из плацентарно-пуповинной крови. В изобретении раскрыт также способ подготовки лабораторного животного с целью использования его для испытаний такого способа воздействия на организм при МВИ. Технический результат - более точная индивидуализация подходов к лечению медленных вирусных инфекций таких, как ВИЧ, прионовая. 2 с. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к области прикладной вирусологии и медицинской иммуногенетики в связи с итогами разработки иммуноспецифических воздействий на организм в его борьбе с медленной вирусной инфекцией (МВИ).

В настоящее время весьма серьезной задачей является предотвращение развития иммунодефицитных состояний (ИДС) как фона и в то же время как следствия механизма развития МВИ типа инфекции, возбудителем которой рассматривают вирус иммунного дефицита человека (ВИЧ) и терминальную стадию, которой именуют синдромом приобретенного иммунного дефицита (СПИД), а также инфекции, вызванной так называемыми неканоническими вирусами - прионами, вирусом герпеса и др.

В перечне МВИ особое место занимает ВИЧ-инфекция и СПИД. Это - первая МВИ не с локальными очагами заражения, а с реальной эпидемией, вернее, пандемией, с которой столкнулось человечество. Принадлежность ее возбудителя к лентивирусам из группы ретровирусов, легко внедряющимся в генетический аппарат клеток-мишеней для ВИЧ в иммунной системе человеческого организма-хозяина и способным длительное время в них персистировать без проявления патогенных свойств, делает разработку способов воздействия на ВИЧ весьма трудоемкой и особо сложной задачей [1].

Особенность СПИДа как инфекционного процесса - в клиническом проявлении двух латентных (инкубационных) периодов: первый - перед продромальным периодом, клинически проявляющийся гриппоподобным состоянием с картиной крови, напоминающей таковую при инфекционном мононуклеозе, и обусловленный массивной контаминацией ВИЧ и его репликацией в макрофагах, гибнущих в итоге. Последнее приводит к компенсаторному мононуклеозу. Второй скрытый период при СПИДе обусловлен ломкой иммунобиологической устойчивости организма-хозяина в результате подключения к инфекционному процессу эндогенной, ранее депрессированной, а теперь активирующейся в условиях такой ломки латентной микро- и/или ультрамикрофлоры в организме-хозяине. При этом не исключена возможность присоединения экзогенной как интеркуррентной микро- и/или ультрамикрофлоры или как разных осложнений, наслаивающихся на основной инфекционный процесс, обусловленный ассоциацией ВИЧ и активировавшихся иных вирусов и/или разных микроорганизмов эндогенного происхождения.

Наличие у пациентов индивидуальных особенностей в наборах из легко образующихся мутантов ВИЧ и сопровождающих ВИЧ ассоциантов в виде иных вирусов и/или микроорганизмов типа условно-патогенных бактерий, грибков и пр. составляет характерную особенность ВИЧ-инфекции как МВИ [2]. В своем "поединке" с иммунной системой человеческого организма ВИЧ выручает то обстоятельство, что он способен вести себя и как вирус-оппортунист, репликация которого зависит от активации клетки-мишени, ставшей клеткой-хозяином, внешними "ускоряющими" факторами и/или от дефектности ВИЧ в иммунологическом отношении. Это в любом случае порождает ассоциативно-инфекционные механизмы воздействия по "компрометированию" иммуносистемы человеческого организма, становящегося хозяином для ВИЧ.

Так фактором, ускоряющим развитие ВИЧ-инфекции с наступлением ее острой стадии (с переходом латентной стадии ВИЧ-инфекции в манифестный СПИД с соотвествующими клиническими признаками), рассматривают другие вирусы, к примеру, цитомегаловирус (ЦМВ) или иные герпетические вирусы, которые, проникая в Т₄-лимфоциты (или хелперные Т-лимфоциты), содержащие провирус ВИЧ, активируют геном клетки-хозяина, что в итоге приводит к активации провируса и к репликации ВИЧ. При этом различают коинфекцию разных вирусов в одной и той же клетке-хозяине и инфекцию разных вирусов в разных клетках одного и того же организма-хозяина. Есть указания, что ко-инфекция ВИЧ герпетическими вирусами проявляется либо в виде латентного состояния ВИЧ, либо усилением его продуктивности, в сравнении с моноинфекцией ВИЧ в одноименных клетках [3].

При поражении клеток-мишеней, инфицированных сопутствующим ЦМВ, вирусом простого герпеса (ВПГ) или вирусом герпес зостер (ВГЗ), т.е. вирусом опоясывающего лишая, - все эти сопутствующие вирусы менее контролируются иммуносистемой у ВИЧ-инфицированного организма и проявляют себя в нем гораздо злокачественнее. Аналогичным образом, в соответствии со своей генетической программой бактерии, грибки и простейшие, как возбудители сопутствующих инфекций, поражают гораздо сильнее организм на фоне его иммунодефицитности, индуцированной ВИЧ. Вместе с тем они стимулируют его репликацию выделяемыми мукополисахаридами и другими метаболитами, усиливая тем самым процессы патогенеза ВИЧ-инфекции в организме человека. В таких условиях ассоцианты ВИЧ как в виде разных микроорганизмов, так и в виде иных вирусов способны стать причиной развития оппортунистичеких инфекций, гибельных для ВИЧ-инфицированных лиц. Однако и на первоначальном этапе развития ВИЧ-инфекции ЦМВ как ускоряющий фактор приводит к формированию приобретенной иммунодепрессии, на фоне которой ВИЧ более интенсивно оседает в организме человека [4].

Своевременное принятие мер против подобных ассоциантов ВИЧ предопределяет успешное предотвращение развития на завершающих стадиях СПИДа оппортунистических инфекций как причины гибели ВИЧ-инфицированных лиц. Активация латентного состояния и усиление продуктивности ВИЧ, спровоцированное ассоциантами, могут приводить к амплификации провируса - к появлению довольно многочисленных реплик провируса ВИЧ и к новому обсеменению ВИЧ-инфицированного организма этими репликами в виде, возможно, подвижных внеклеточных ДНК-вектор-подобных нуклеотидных последовательностей, ДНК-ВПНП, генерированных при их отделении из генома клетки-хозяина на участке интегрированного в нем провируса.

Целый ряд исследований, проведенных в нашей стране и зарубежом, показывают, что в борьбе с МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа достигнуты некоторые успехи. В частности, довольно подробно изучена структура вируса ВИЧ и серология ВИЧ-инфекции и СПИДа как основа иммуноспецифической серодиагностики СПИДа, намечен поиск путей лечения СПИДа [5]. Исследована репродукция ВИЧ и установлены возможные при этом мишени для химиотерапевтических препаратов [6]. В литературе описаны также патогенные свойства ВИЧ и возможная зависимость развития ВИЧ-инфекции от особенностей состояния иммунорегуляции у организма-хозяина [7, 8].

Изучение патентной информации последнего времени показало, что проблема лечения от МВИ, в особенности от ВИЧ- и ряда других инфекций занимает важное место среди исследований в области молекулярной биологии и генетики. На территории Российской Федерации действуют ряд патентов, где указаны подходы и средства лечения при ретровирусных заболеваниях и при других МВИ. Например, средство для лечения и профилактики при вирусных инфекциях, в особенности, при ВИЧ-инфекции и гепатитах (RU 2145324, 10.02.2000), средство для лечения от нейро-СПИДа (RU 2157205, 10.10.2000), иммуномодулирующие и противовирусные агенты (RU 2154068, 10.08.2000).

В последние годы в мире обращено внимание на подробное изучение структурной организации генома у ВИЧ, описаны фрагменты нуклеотидной последовательности, выделенные из ВИЧ-1, от которых зависит риск интрафектальной трансмиссии данного вируса (US 5919462, 06.07.1999). Выделены белковопептидные комплексы для профилактики и терапии против внутриклеточных патогенов (US 6048530, 11.04.2000).

Таким образом, за последнее время выделены и открыты целый ряд средств, которые позволяют проводить более эффективно борьбу против ВИЧ, вируса герпеса, нейровирусов и др. возбудителей МВИ.

Однако ранее найденные и вновь открытые противовирусные средства не могут быть использованы с максимальной эффективностью. По нашему мнению, главным в лечении от МВИ является создание условий для возможности комплексно-индивидуализированного подхода с учетом не только биологических и физиологических особенностей инфекционного процесса, вызванного тем или иным вирусом-возбудителем и обусловленного особенностями его репликационного цикла, что позволяет своевременно и эффективно блокировать его репликацию и пресечь тем самым возможность его размножения в новых, еще незанятых им клетках-мишенях иммуносистемы организма-хозяина. Относительно ВИЧ некоторые попытки подобного рода сделаны, судя по международным публикациям WO 94/16737, 04.08.94, и WО 97/27480, 31.07.97. В упоминаемой последней международной публикации, исходящей от фирмы "Вирко" (Бельгия), подробно описан "Способ определения оптимальной химиотерапии ВИЧ-пациентов, серопозитивных по ВИЧ"; разработку способа в этой публикации считаем наиболее близкой по своему замыслу к нашей работе по поставленной проблеме. Однако, если в такой разработке способа был сделан упор на подбор наиболее оптимальных средств воздействия на штамм вируса, которым поражен пациент, то в наших условиях основная задача состоит не в выборе средства, а в определении момента "нанесения удара" в связи с необходимостью блокирования репликации вируса-возбудителя и предотвращения его дальнейшей репликации в новых, еще незаселенных им, клетках-мишенях иммуносистемы организма-хозяина при обязательном сочетании с восстановлением поврежденной системы иммунозащиты организма.

Обоснование изобретения Сущность изобретения состоит в разработке единого подхода к воздействию на организм при разных по этиологии МВИ, основанному на предотвращении вовлечения в инфекционный процесс новых клеток-мишеней в условиях блокирования репликационных циклов в них вируса-возбудителя МВИ и прекращения дальнейшего развития иммунодефицитного состояния у организма хозяина в связи с происходившим развитием инфекционного процесса при данной МВИ. Воздействие на организм, пострадавший от развития МВИ, включает в себя два обязательно последовательных этапа: (1) устранение активности патогенного фактора как комплекса из вирионов возбудителя МВИ, их возможных мутантов и ассоциантов - иных вирусов и/или разных микроорганизмов эндо- и/или экзогенной природы (латентные вирусы и условнопатогенные бактерии, грибки и пр.); (2) восстановление поврежденных функций пострадавшего иммунопотенциала из-за нарушений механизма клеточного иммунитета реплицирующимся вирусом-возбудителем МВИ в клетках-мишенях иммуносистемы организма-хозяина.

Применительно к МВИ в виде ВИЧ-инфекции и СПИДа разработанный и апробированный нами способ воздействия на организм-хозяин исходит из стратегической задачи, решение которой определяется активным противодействием репликационных циклов ВИЧ как узлового механизма в инфекционном процессе с его особенностями при данной МВИ. В числе этих особенностей - это, во-первых, трансформация исходных (инфицирующих) РНК-форм ВИЧ в их ДНК-копию (провирус) перед предстоящей интеграцией (внедрением) в состав ДНК клеточного генома (генетического аппарата в ядре клетки-мишени для ВИЧ). Во-вторых, - это асинхронно происходящая репликация ВИЧ в разных для него клетках-мишенях иммуносистемы инфицированного организма человека (в макрофагах и отчасти в их предшественниках - моноцитах, а также (и главным образом) в хелперных Т-лимфоцитах) в связи с разной затратой времени в связи с поиском свободных клеток-мишеней, еще незанятых другими ВИЧ-вирионами, в связи с проявлением нестерильного антивирусного иммунитета (о чем свидетельствует наличие на мембранной поверхности клеток-мишеней рецептора CD₄ (Т₄) еще свободного от вирусного лигандного (капсидного или оболочечного) белка в результате лигандно-рецепторного взаимодействия по ходу "раздевания" ВИЧ перед вторжением его генома в цитоплазму и затем в ядро клетки-мишени, когда капсидный белок ВИЧ-вириона остается связанным клеточным рецептором CD₄ на мембранной поверхности клетки-мишени). В-третьих, это - недоступность провируса как ДНК-копии генома ВИЧ при его нахождении в цитоплазме, а затем при внутригеномном нахождении в клетке-мишени и образующихся, правда, с существенным запаздыванием по ходу инфекционного процесса, т.е. репликационных циклов ВИЧ с образованием мутантов в ответ на синтез этих Ат; недоступен вирусный геном и для воздействия на него лечебных средств, в частности, поремененного первым в лечебной практике против ВИЧ-инфекции и СПИДа и широко применяемого поныне (несмотря на его токсичность и возможность проявления у ВИЧ привыкания или резистентности к нему) азидотимидина, АЗТ, как ингибитора обратной транскриптазы или РНК-зависимой ДНК-полимеразы, или ревертазы [2.7.7.48], катализирующей трансформацию РНК-формы ВИЧ-вирионов и их ДНК-копию или провирус и интеграцию этой ДНК-копии или провируса в состав клеточного генома.

Поскольку репликационный цикл ВИЧ характеризуется проявлениями известной (и прохронометрированной) фазовостью перехода из РНК-форм исходных ВИЧ-вирионов в их ДНК-копии (провирус) в условиях катализа ревертазой и обратно в РНК-формы при кодировании синтеза и сборки отдельных их компонентов генами вирусного генома, т. е. провируса (наличие пяти фаз при длительности цикла репликации от трех до 72 часов) [2, 9], то эффективное противодействие репликативным процессам ВИЧ с применением ингибиторов и блокаторов репликации ВИЧ возможно только в том случае, если оно приурочено к той фазе репликации ВИЧ, когда синтезированные ВИЧ-вирионы находятся вне клеток - своих хозяев и становятся доступными для воздействия специфических Ат и химиотерапевтических средств типа, например, АЗТ. Такой фазой репликационного цикла ВИЧ является фаза выхода ВИЧ-вирионов в РНК-форме новой генерации их клеток-хозяев.

Однако подобная приуроченность к определенной фазе репликации ВИЧ реальна лишь только в том случае, если наблюдаемая асинхронность репликации ВИЧ в разных клетках-мишенях иммуносистемы окажется приведенной к синхроннности этой репликации хотя бы в большинстве таких клеток. Как мы убедились, подобную синхронизацию оказалось возможным проводить с помощью попеременного, по крайней мере, трехкратного чередования для воздействия активатором и затем (спустя три часа) ингибитором репликации на ВИЧ-вирионы новой генерации при их нахождении вне клеток, в плазме крови (наподобие той синхронизации, к которой прибегают в лабораторной практике для получения гомогенных по свойствам тканевых культур). Этим реализуется возможность успешного применения блокатора репликации (в виде, например, актиномицина Д [10]), ВИЧ с целью предотвращения вторжения ВИЧ-вирионов новой генерации в новые клетки-мишени иммуносистемы ВИЧ-инфицированного организма человека. Этим (в ходе обязательно проводимой предварительно процедуры, названной нами "провокация провируса") достигается постепенное (в условиях повторно и последовательно проводившегося циклами комплекса разработанных и успешно апробированных нами лечебных процедур) очищение организма от элементов патогенного фактора, т.е. ВИЧ-вирионов, их мутантов, их ассоциантов и ВИЧ-инфицированных клеток, содержащих провирус, с их CD₄-рецептором, связавшим на их мембране вирусный лиганд-капсид, путем их устранения с помощью предложенных, успешно апробированных нами приемов, составляющих необходимый в условиях МВИ комплексно-индивидуализированный подход к воздействию на ВИЧ-инфицированный организм человека.

Таким образом, вышеописанная провокация провируса составляет весьма существенную часть нашего изобретения. Активность возможного в ходе синхронизации репликации ВИЧ при провокации провируса распространения в крови продукта амплификации провируса в виде мобильных ДНК-ВПНП после применения активатора репликации ВИЧ (в виде, например, бактериального мукополисахарида, БМПС) пресекается применением препарата дезоксирибонуклеазы (дорназы), разрушающей ДНК-ВПНП как возможный иной канал для распространения инфекционного процесса "с поставкой готового провируса", препарат ДНКазы вводится пациенту каждый раз после введения активатора репликации и перед введением ингибитора репликации (например, АЗТ).

Применительно к ВИЧ-инфекции и СПИДу как МВИ, разработанный и апробированный нами способ воздействия исходит из стратегической задачи, определяемой не только активным противодействием закономерностям репликационных циклов вируса как узлового механизма инфекционного процесса. Той же стратегической задачей определяется параллельное восстановление нарушенных иммуноинформационных связей в механизме клеточного иммунитета в связи с превращением макрофагов и, главное, хелперных Т-лимфоцитов в места репликации и депо ВИЧ и, следовательно, в связи с повреждением механизма иммунологического процессинга информации о Аг, поступающей от антиген-представляющей клетки, какой является макрофаг, в хелперный Т-лимфоцит, переводящий информацию об особенностях чужеродного Аг "с языка" макрофага "на язык" В-лимфоцита, трансформирующийся в плазмоцит-продуцент специфических Ат на основе поступившей информации о чужеродном Аг в условиях соответствующих когнатных контактов между названными клетками иммуносистемы организма человека с обменом между ними фрагментами нуклеиновых кислот [11].

Согласно выдвинутой нами концепции обратной информационной связи (ОИС) при биосинтезе макромолекул такая информация отражена в нуклеотидной последовательности либо мессенжерной (матричной или информационной) РНК (мРНК), несущей в макрофаге заключенную в ней информацию о специфике Аг и превращающуюся в так называемую "реверсионную РНК" (реРНК) в условиях обратной трансляции на транслировавшуюся мРНК, в связи с передачей информации с синтезирующейся полипептидной цепи с измененной аминокислотной последовательностью, отражающей специфику Аг как чрезвычайного средового фактора (ЧСФ), для белка-клеточного рецептора. Последний должен был быть гомологом белка-клеточного рецептора, который связал Аг и тем самым подвергся локальному перенапряжению полипептидной цепи в зоне некоторых пептидных связей под действием данного Аг как чрезвычайный средовой фактор, специфика структуры которого еще не находила себе отражение в генетической памяти макрофага. Либо эта информация о специфике Аг оказалась заключенной в нуклеотидной последовательности ДНК хелперного Т-лимфоцита в результате обмена ДНК с заключенной в ней информацией о специфике структуры Аг при когнатном контакте с В-лимфоцитом в геном последнего, трансформирующегося при этом в плазмоцит-продупент специфических Ат на основании полученной им в итоге информации о специфике Аг.

Восстановление иммунопотенциала у ВИЧ-инфицированного лица на любой стадии заболевания посредством компенсаторной интрастернальной трансплантации фракции лейкоцитов с их предшественниками по лейкопоэзу, среди которых преобладают, что важно, юные формы, из "свежей" плацентарно-пуповинной крови и посредством последующего введения аутовакцины, активирующей трансплантат, оказывается в единой связке с активным противодействием закономерностям репликационных циклов ВИЧ как узлового механизма основного инфекционного процесса при МВИ типа ВИЧ-инфицированных клеток иммуносистемы. Таким образом, формируется своего рода биологический заслон, защищающий новые, незаселенные клетки-мишени иммуносистемы от контаминации вирионами ВИЧ и мобильных ДНК-ВПНП как продукта амплификации активированного провируса. Тем самым повышается эффективность последующего (после процедуры провокации провируса) применения приемов и средств устранения ВИЧ-вирионов и их мутантов из плазмы крови и организма ВИЧ-инфицированного лица.

С учетом недостаточной изученности механизмов индивидуальной иммунорегуляции разработаны и апробированы в опытах на лабораторных животных и затем применены для воздействия на ВИЧ-инфицированных пациентов средства и приемы на принципе индивидуализированного подхода к устранению элементов патогенного начала в виде исходных и реплицирующихся ВИЧ-вирионов, их легкообразующихся мутантов, способных к обратной мутации, сопровождающих всех их ассоциантов, представленных иными вирусами и/или разными микроорганизмами, поддерживающими основной инфекционный процесс, вызванный ВИЧ. Последний в подобной ситуации способен повести себя и как типичный оппортунист (в условиях заражения и дальнейшего развития ВИЧ-инфекции при так называемой "компрометации" иммунной системы этими ассоциантами) [2].

Учет фазовости в репликационных циклах ВИЧ с целью контроля активности провируса в ходе ее синхронизации в разных клетках-мишенях иммуносистемы на этапе провокации провируса вместе с проводимым в последующем комплексно-индивидуализированным подходом при иммуновоздействии на ВИЧ-инфицированный организм обеспечивает не продление его выживаемости при практикуемом лечении, а его излечение, согласно результатам лечения по нашему способу, исключающим возможность рецидивов в течение длительных за ним периодов наблюдения.

По нашему мнению, при развитии иммунодефицита (или иммунодепрессии, как менее тяжкого и временного повреждения функции иммуносистемы) разной природы, обусловленного повреждением иммуноинформационных связей при взаимодействии клеток иммуносистемы не ограничивается экспрессией биосинтеза специфических Ат к данному Аг по имевшейся уже генетической программе.

При развитии МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа из-за превращения макрофагов, а затем хелперных Т-лимфоцитов в депо вирионов - возбудителей инфекционного процесса в организме млекопитающего, при массовой репликации вируса, серьезно повреждаются иммуноинформационные связи для сигнализации о чужеродных Аг в виде вирусов, и образуемых ими мутантах и об активирующихся при этом ассоциантах вирусной и/или микробной природы.

В начальном периоде в организме человека оказываются пораженными макрофаги при выполнении ими функции "санитаров" тканей и органов организма. Допускается при этом существование вирусных штаммов по тропизму, т.е. адаптированных к репликации в макрофагах и в их предшественниках - моноцитах. Предполагаем также, что под действием специфических Ат макрофаготропные вирионы способны превращаться в лимфотропные, и тогда хелперные Т-лимфоциты становятся основным резервуаром реплицирующегося вируса. Тем не менее, в любом случае при ВИЧ-инфекции с превращением макрофагов или хелперных Т-лимфоцитов в депо реплицирующегося ВИЧ способность к "иммунологическому процессингу" информации о чужеродных Аг резко снижается на участках в цепи взаимодействия по типу когнатных контактов с обменом фрагментами нуклеиновых кислот, (которые весьма напоминают по своему характеру гибридизацию) между макрофагами и хелперными Т-лимфоцитами или между хелперными Т-лимфоцитами и В-лимфоцитами при передаче генетической информации об Аг.

Положение значительно ухудшается в связи с образованием мутантов ВИЧ: процесс мутации ВИЧ по своей скорости намного опережает процесс трансформации В-лимфоцитов в плазмоциты-продуценты специфических Ат по ходу иммунологического процессинга информации об антигенной структуре мутантов ВИЧ с выработкой новых генетических программ на биосинтез специфических Ат против мутантов ВИЧ. Таким образом, происходит хроническое запаздывание в синтезе специфических Ат по требованию слагающейся ситуации в связи с возникновением мутантов ВИЧ в ВИЧ-инфицированном организме пациента.

Эта информация об антигенной структуре ВИЧ-инфекции и СПИДа отражена в нуклеотидной последовательности либо мессенжерной РНК (мРНК), несущей заключенную в ней информацию с соответствующего генного локуса, но превращающейся в так называемую реверсионную РНК в условиях обратной трансляции при передаче информации с синтезирующейся полипептидной цепи на нуклеотидную последовательность мРНК в макрофаге [11].

По ходу развития МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа иммуносистема у инфицированного организма становится вообще неспособной к синтезу специфических Ат против чужеродных Аг, носителями которых являются не только мутантные формы, образуемые вирусом, но и активирующиеся вирусы или микроорганизмы, рассматриваемые в таком случае как ассоцианты эндогенного и экзогенного происхождения. На пути информационных потоков в цепях "иммунологического процессинга" информации о чужеродных Аг разной природы формируются перекресты и порочные круги в силу повреждения "переводческой функции" хелперных Т-клеток, превратившихся в депо реплицирующегося вируса [11].

Так, инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса и часто протекающая как латентная инфекция при нормально функционирующей иммуносистеме, в условиях паралича иммуносистемы при инфекто-СПИДе принимает характер сепсиса со смертельным исходом.

В связи с изложенным эффективное воздействие при МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа должно с самого начала проводиться комплексно, т.е. должны быть предприняты меры по нейтрализации и устранению патогенного начала, одновременно должны быть предприняты усилия по восстановлению потенциала иммуносистемы с активацией ее функции.

Рассмотрим подробнее механизм действия возбудителя МВИ на примере ВИЧ-инфекции, допускающий разработку рациональной тактики иммуноспецифических воздействий на ВИЧ-инфицированный организм человека, в частности, для практического использования принципа лиганд (капсид) - рецепторного (CD₄) взаимодействия в связи с использованием нами иммуносорбентов в экстракорпоральной проточно-циркуляторной системе для очищения ВИЧ-инфицированной крови.

В структурном отношении частица ВИЧ при электронной микроскопии выглядит маковым зерном, унизанным макромолекулами вирусного белка, обозначаемого как р160. Этот белок легко распадается на два фрагмента: р120 и р41. Вирусный белок р120 обеспечивает прикрепление частицы ВИЧ к клеточному рецептору-белку Т₄, обозначаемому еще и как CD₄, на мембранной поверхности макрофага, являющегося не только "санитаром" тканей и органов, но и антиген-представляющей клеткой в условиях "иммунологического процессинга". Вирусным белком р120 наделен на своей мембранной поверхности и хелперный Т-лимфоцит, помогающий осуществить иммунный ответ на частицу ВИЧ как Аг, представленный макрофагом (12).

При взаимодействии белков Т₄ и р120 конформация у последнего изменяется таким образом, что образуется своего рода карман, в который стремительно входит участок белка Т₄ с выступающим, подобно "штеккеру", фенильным радикалом из остатка такой аминокислоты, как фенилаланин, в положении 43 и образует контакт первого рода, способствующий механическому соединению клеточного и вирусного белков. При этом клеточный белок Т₄ раздвигает внутренний и наружный фрагменты вирусного белка р120; происходящее при этом изменение конформации у вирусного белка р120 определяет тот сдвиг в пространстве его макромолекулы, в результате которого возрастает расстояние между такими важными участками, обозначаемыми как V₁, V₂ и V₃ с образованием вариабельных петель I, II и III, обеспечивающих образование контакта второго рода со сравнительно недавно открытым рецептором хемокинов, присутствующим на поверхности разных клеток, в том числе и хелперных Т-лимфоцитов и обозначенным как CCR5.

Контакты вирусного белка р41 у ВИЧ с клеточным ССR5-белком у хелперного Т-лимфоцита обеспечивают слияние вирусной и клеточной оболочек как исходное условие для пенетрации генома ВИЧ в цитоплазму клетки. Наличие рецепторов хемокинов CCR5 у клеток в ЦНС объясняет парадокс возможности развития деменции (слабоумия) при СПИДе в условиях преодоления ВИЧ гематоэнцефалического барьера в условиях диапедеза ВИЧ-инфицированных макрофагов из кровеносных сосудов в нервную ткань и в СМЖ и развития нейро-психо-ВИЧ-инфекции с параличом иммуносистемы. При этом Т₄-рецептор на поверхности нейронов не обнаруживается, но обнаруживается на поверхности глиальных клеток, обеспечивающих опору для массы нейронов с их синапсами и влияющих таким образом на нормальную функцию нейронов.

Возникновение мутантов ВИЧ можно объяснить тем, что они могут быть индуцированы с клеточной мембраны ВИЧ-инфицированных клеток лигандным капсидным белком ВИЧ с измененной конформацией под действием связавших его специфических Ат: будучи после этого связан клеточным рецептором при "раздевании" ВИЧ и его пенетрации в клетку-мишень, этот белок, в соответствии с выдвинутой концепцией ОИС при биосинтезе макромолекул [11, 13, 14, 15] перестраивает биосинтез капсидного (вирусного) белка данной клеткой, ставшей хозяином, для сборки вирионов новой генерации так, чтобы синтезируемый капсидный белок обладал той конформацией, которая появилась у прежней молекулы белка ВИЧ под действием связавших его специфических Ат.

Таким образом, Ат, обнаруживаемые при обследовании лиц, инфицированных ВИЧ, имеют скорее только диагностическое значение (в стандартных тестах на СПИД), поскольку эти Ат синтезированы на основании информации относительно лишь тех исходных форм вирионов ВИЧ, которые вызвали заражение ВИЧ-инфекцией, но не против возникающих в последующем популяций этих вирионов, в частности, их мутантных форм [11].

При описанном выше повреждении иммуноинформационных связей на уровне "иммунологического процессинга" информации о чужеродных Аг не приходится сомневаться в том, что ВИЧ-инфицированный организм испытывает определенный дефицит в биосинтезе специфических Ат против потенциальных ассоциантов ВИЧ, вносящих свой вклад в дальнейшее развитие инфекционного процесса, обусловливая, в частности, появление упомянутых выше амплифицированных форм провируса типа ДНК-ВПНП как дополнительный канал для возникновения рецидива в условиях предпринятого лечения ВИЧ-инфекции при использовании существующих способов.

В наших условиях с учетом клинической формы заболевания, особенностей ее проявления по деятельности течения и по степени тяжести процесса, присутствие ВИЧ-вирионов, их мутантов и их ассоциантов в, ВИЧ инфицированном организме устраняли постепенно повторными из цикла в цикл процедурами, назначенными для данного пациента в проводимых курсах лечения с помощью одного из трех вариантов разработанного и апробированного вначале на лабораторных животных (кроликах) и затем уже использованных для лечения пациентов-волонтеров. Варианты эти разнились между собой, будучи основанными: А) На внутривенном введении капельным способом поливакцины, индивидуализированной по изготовлению (для каждого пациента персонально на основе его биоматериала в виде высевов вирусов и микробов из крови, объединенных в единую серию вакцинирующего материала и затем подвергнутых УФ-инактивации) и по применению, адресованному только для данного пациента; способ рассчитан на активацию уцелевшего афферентного звена иммуносистемы, т.е. макрофагов как Аг-представляющих клеток с их предшественниками-моноцитами и хелперных Т-лимфоцитов в организме подвергнутого лечению пациента; пределы применения данного варианта способа лечения расширяются возможностями назначения антисептиков и антибиотиков по показаниям.

Б) На применении экстракорпоральной системы циркуляторно-проточного действия (ЭКСЦПД), к которой подсоединяют пациента с помощью введенных симметрично в подключичные вены игл-катетеров и которая рассчитана на УФ-инактивацию с помощью образующегося атомарного кислорода-окислителя патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДе методом УФ-облучения (УФО) кровотока в ЭКСЦПД; способ эффективен при серо-позитивном преСПИДе и ВИЧ-носительстве.

В) На применении ЭКСЦПД иных типов ЭКСЦПД, рассчитанной на иммуноочистку кровотока в ЭКСЦПД методами иммуногемофереза (ИГФ) и иммуногемосорбции (ИГС) попеременно и повторно из цикла в цикл проводимого курсового лечения в условиях аналогичного подсоединения пациента к ЭКСЦПД соответствующего типа; данный вариант способа лечения достаточно универсален благодаря своей эффективности при серо-позитивном преСПИДе и при манифестированном СПИДе, хотя и сравнительно сложен.

Схема цикла (однонедельного при одномесячном курсе лечения) для последовательности лечебных процедур-воздействий, отработанная в опытах с экспериментальной ВИЧ-инфекцией на кроликах и примененная затем к добровольцам ВИЧ инфицированным лицам и больным СПИДом на принципах комплексно-индивидуализированного подхода к лечению при МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа исходя из биоинформатики инфекционного процесса и состоит из следующих процедур: 1. Процедура предварительного "провоцирования" провируса накоплению ВИЧ-вирионов РНК-форме и их мутантов в плазме крови в условиях воздействия блокатора репликации ВИЧ - актиномицина Д и тем самым обеспечивающая устранение основных компонентов патогенного начала - вирионов ВИЧ и их мутантов, но нуждающаяся при этом в пресечении последствий возможной амплификации провируса внутривенным применением дезоксирибонуклеазы (ДНКазы, дорназы).

2. Процедура устранения патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДе повторно из цикла в цикл (см. выше) (А) методом внутривенного введения капельным способом индивидуализированной по изготовлению и применению для каждого пациента поливакцины для мобилизации эффекторных элементов иммуносистемы против патогенного начала или (Б) методом УФО кровоток в ЭКСЦПД для УФ-инактивации патогенного начала или (В) повтора из цикла в цикл и попеременно методами ИГФ и ИГС для иммуноочистки крови в ЭКСЦПД соответствующего типа (при вариантах Б и В дополнительно в комбинации с обычной гемосорбцией для освобождения жидкой среды организма пациента от вредных метаболитов небелковой природы).

3. Процедура интрастернальной (компенсаторной) трансплантации лейкоцитов и их стволовых предшественников по лейкопоэзу из плацентарно-пуповинной крови для иммунокоррекции с целью восстановления иммуноинформационных связей, восстановления и укрепления нарушенного иммунопотенциала в ВИЧ инфицированном организме.

4. Процедура специфической активации трансплантированных клеток ППК в условиях иммуностимуляции (иммуноактивации) аутовакциной при ее внутримышечном введении против патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДа с целью восстановления и усиления нарушенного иммунопотенциала.

По нашему мнению, сущность изобретения состоит в том, что способ комплексно-индивидуализированного воздействия на организм при МВИ с использованием противовирусных препаратов и экстракорпоральных методов, дополнительно содержит биоинформационный подход к названному воздействию, включающему два основных этапа: а) устранение из организма патогенного начала, составляющего заражение, с привлечением противовирусных препаратов и экстракорпоральных иммуносорбентов на основе аллогенного материала, с индивидуальным учетом для организма особенностей репликации патогенного вируса; б) восстановление нарушенных иммуноинформационных связей в организме путем компенсаторной трансплантации морфоэлементов из ППК гетерогенного происхождения с индивидуальным учетом влияния антигенных детерминант трансплантата на тканевую совместимость.

Способ отличается также тем, что - воздействие при МВИ, вызванной вирусом, содержащим нуклеиновые кислоты (НК) осуществляют за счет освобождения организма от следующих патологических элементов: вирионов, их мутантов, ассоциантов в виде иных вирусов и микроорганизмов, а также контаминированных вирионами клеток и потенциальных ДНК-ВПНП при амплификации провируса; - учет особенностей репликации вируса, содержащего НК, типа ретровируса осуществляют в условиях провокации его провируса или ДНК-копии, интегрированной в геноме клеток-мишеней в иммунной системе и кодирующей биосинтез в клетках вирионов новой генерации в РНК-форме, при этом проводят процедуру провокации провируса попеременными активацией и ингибированием репликации вируса для ее синхронизации в разных клетках по фазе выхода из клеток вирионов.

Предпосылкой разработки и применения эффективного способа комплексно-индивидуализированного воздействия (в зависимости от условия устранения компонентов патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДе) явилась разработка и успешное применение такого способа на экспериментальной модели ВИЧ-инфекции с помощью лабораторных животных.

Разработка экспериментальной модели ВИЧ-инфекции на кроликах для апробации трех вариантов эффективного воздействия при МВИ типа ВИЧ-инфекции Три варианта воздействия на организм при МВИ типа ВИЧ-инфекции это - следующие: 1. Применение индивидуализированной поливакцины. 2. Применение УФ-инактивации. 3. Применение иммуноочистки.

В условиях "пробивания" естественного иммунитета к ВИЧ у кроликов массивными дозами заражающего материала использовали высушенную при распылительной сушке предварительно гемолизированную (стерильной дистиллированной водой) донорскую кровь, выбракованную по позитивным тестам на СПИД, результирующий сухой препарат (получаемый при использовании каждых пяти ампул, содержавших по 500 мл такой крови) ресуспендировали в 100 мл стерильного забуференного (0,1 М дигидрофосфата натрия в смеси с 0,1 М моногидрофосфата калия, рН 7,2) изотонического (0,9%) раствора хлорида натрия по данным электронно-микроскопических определений, 1 мл такой взвеси содержал 1,5•10⁴-1,8•10⁵ частиц ВИЧ, и 1 мл такой взвеси вводили в краевую ушную вену каждому (весом по 4-5 кг) из взятых в опыт кроликов. При этом кролики одной из групп (по пять животных) использовали донорами специфических Ат против чужеродных Аг, которыми могли быть ВИЧ-вирионы в исходной (РНК-) форме, их возможные мутанты и их потенциальные ассоцианты вирусной и/или микробной природы в условиях использования стандартной методики гипериммунизации упомянутой взвесью чужеродных Аг подопытных животных.

ВИЧ-вирионы и их мутанты в упомянутых электронно-микроскопических определениях распознавали используя иммунофлуоресцентный анализ и коммерческий препарат специфических Ат против ВИЧ-1.

Испытание варианта 1 способа воздействия при МВИ типа ВПЧ-инфекции Для апробации варианта 1 способа лечения на кроликах (из второй группы с пятью подопытными животными) было испытано курсовое лечение, основанное на применении индивидуализированной по изготовлению и применению поливакцины для внутривенного введения капельным способом с целью специфической активацией эффекторов клеточного иммунитета организма, способного еще функционировать в продуцировании специфических Ат против чужеродных Аг в виде ВИЧ, его мутантов и его ассоциантов.

Изготовленная и примененная в испытании на животных поливакцина представляла собой двухкомпонентную смесь из предварительно очищенных от балластных примесей и затем УФ-инактивированных вакцин в объемном соотношении 1:3. Первая из них - культура микроорганизмов, выращенная глубинным способом в установке для градиентно-проточного культивирования микробов в режиме турбидистата (при скорости протока в течение 6 часов, оцениваемой разведение 10^-1/час, в условиях чередования с двухчасовым периодическим культивированием при 37^oС и при емкости ферментера 3 л) в течение одних суток на полусинтетической среде из казеина со стимулятором роста микробов после посева на нее гемокультуры, выращенной из крови животного, зараженного массивной дозой ВИЧ-содержащего материала (1,9•10⁴ вирусных частиц/мл) в виде сконцентрированного препарата гемолизированной и выбракованной по СПИДу донорской крови; примененная для выращивания среда гарантировала рост микробов из единичных клеток, а также и тканевых клеток.

Другая вакцина выращивается также глубинным способом в установке для градиентно-проточного культивирования тканевых клеток из подращиваемых в режиме турбидистата лейкоцитов и их стволовых клеток-предшественников по лейкопоэзу из свежевзятой пуповинной крови (от плодов берущихся наугад пяти крольчих в конце срока беременности, подвергаемых в стерильных условиях лапоротомии и гистотомии по эфирным наркозом, затем умерщвленных и сожженных в лабораторной электоропечи). Данное подращивание осуществляли с применением упомянутой полусинтетической среды в присутствии активатора роста и размножения тканевых клеток.

Подращиваемые клетки инокулировали вирусами, выделенными (1) из фракции сахарозного градиента (0,5-6% сахарозы в присутствии 1 М хлористого цезия как "утяжелителя") с наслоенной на нем аллантоисной жидкостью от 24 куриных эмбрионов, полученных в результате предварительной инкубации куриных яиц и затем подвергнутых инокуляции кровью ранее зараженных упомянутой взвесью ВИЧ-содержащего материала по стандартным вирологическим методикам, и (2) из гемокультуры тех же кроликов после посева их крови на упомянутую полусинтетическую среду с подращиваемыми лейкоморфологическими элементами из пуповинной крови кроличьих эмбрионов также по стандартной методике. В обоих случаях к инокуляту добавляли активатор репликации в виде лиофилизированного препарата бактериального мукополисахарида (БМПС, см. выше) в разовой дозе 0,015 мг/кг веса кроличьих эмбрионов-доноров пупочной крови; инокулят в первом случае мог содержать только вирусы-ассоцианты ВИЧ, тогда как во втором случае он мог содержать (и фактически содержал) только ВИЧ и его мутанты.

Испытание данного способа в дальнейшем производили в рамках стандартной схемы эксперимента: процедура "провоцирования" (или провокации) провируса (первые трое суток цикла курсового лечения) - внутривенное вливание приготовленной поливакцины (после объединения вирусных вакцин 1 и 2 (см. выше) и затем УФ-инактивации их смеси перед объединением с первой вакциной из культуры микроорганизмов) индивидуализированного назначения капельным способом в количестве 150 мл, содержавшей по данным электронной микроскопии и иммунофлуоресцентного анализа около 0,5•10⁴ УФ-инактивированных вирусных частиц в 1 мл (на четвертые сутки цикла) - восстановительная иммунокоррекция трансплантацией лейкоморфологических элементов пуповинной крови (получение см. выше; на пятые сутки цикла) - иммуностимуляция (иммуноактивация) аутовакциной (см. описание ниже; на пятые сутки цикла).

Упомянутую трансплантацию производили в костный мозг большой берцовой кости. Аутовакцину изготавливали по схеме получения описанной поливакцины только в малых объемах ее приготовления, с учетом разового введения ее в пределах 1-2 мл внутримышечно.

На третьи-четвертые сутки после массивного заражения ВИЧ-содержащим препаратом донорской крови с добавлением активатора репликации (0,015 мг лиофилизированного препарата БМПС на 1 кг веса подопытного животного) у подопытных кроликов развилась диарея, которую пришлось купировать внутривенным введением актиномицина Д в дозе 0,015 мг/кг. На четверные сутки стали прощупываться передне- и заднешейные, а также подчелюстные лимфоузлы, что явилось признаком развития генерализованной персистирующией лимфаденопатии (ГПЛ, "ожерелье СПИДа"), характерной и для экспериментальной ВИЧ-инфекции у кроликов. Позитивные тесты на СПИД у подопытных кроликов были зарегистрированы на третьи-четвертые сутки после заражения.

Применение внутривенного вливания капельным способом индивидуализированной по изготовлению и назначению поливакцины стало эффективным лишь только после назначения подопытным кроликам (в третьей группе из пяти животных) внутривенной инъекции актиномицина Д в сочетании с введением вовнутрь подопытным кроликам бисептола с помощью зонда (см. ниже Вариант II способа лечения) после предварительной процедуры "провоцирования" провируса для синхронизации репликации ВИЧ по фазе выхода ВИЧ-вирионов в РНК-форме новой генерации путем троекратного и попеременного внутривенного введения активатора репликации ВИЧ в виде, например, БМПС и затем (спустя 3 часа) - ингибитора репликации ВИЧ в виде, например, АЗТ. На третьей неделе лечения и далее стандартные тесты на СПИД у подопытных кроликов (из третьей группы животных) стали устойчиво отрицательными при повторных (через неделю) проверках в течение трех месяцев наблюдения, что указывало на эффективность и безвредность данного варианта способа эффективного лечения при ВИЧ-инфекции и СПИДе.

Испытание варианта П способа воздействия при МВИ типа ВИЧ-инфекции
Для процедуры УФ-инактивации используют ЭКСЦПД, основным блоком в которой является змеевиковый аргонортутный облучатель (ЗАРКО) оригинальной конструкции. Внутри змеевика на боковых стойках из дерева укрепляется в горизонтальном положении сменный сердечник разового пользования в виде трубки с зауженными концами из бесцветного прозрачного пластика объемом 100 мл на выходе из этой трубки-сердечника насаживается сменный патрон разового пользования также из пластика емкостью 10 мл, содержащий фурфуроловый адсорбент сферический (ФАС) для удаления посредством гемосорбции веществ небелковой природы с возможными токсическими свойствами. На выходе из такого патрона к его боковому отводу присоединяется мягкий полистирольный шланг с иглой-катетером (канюлей) на периферическом конце для внутривенного введения подопытному животному (в четверной группе из пяти кроликов) в одну из предварительно отсепарированных подключичных вен с одной стороны его тела (при этом наркотизированное животное фиксировано за лапы к "плахе" из дерева). Симметрично, с другой стороны тела подопытного животного, к боковому отводу на противоположном конце сердечника в ЗАРКО отходит другой (отводящий) полистирольный шланг с внутривенно введенной животному иглой-катетером (канюлей), причем в цепи системы перед ЗАРКО установлен регулируемый с помощью реостата лабораторный пальчиковый (обтурационный) насос, работающий в режиме подсоса крови из сердечника ЗАРКО. Тем самым поддерживается режим кровотока в ЭКСЦПД, присущий животному в обычных условиях, что контролируется по показаниям манометра, включенного в состав ЭКСЦПД.

Процедуру УФ-инактивации проводили при дозе УФО в пределах 800-1000 эрг/мм при длине УФ-лучей в пределах 354-365 нм. Необходимую экспозицию для УФО при инактивации ВИЧ, его мутантов и его ассоциантов поддерживали, контролируя поток облучаемой крови в трубке-сердечнике ЗАРКО. В условиях применения способа, основанного на УФ-инактивации, как и при остальных вариантах способа иммуновоздействия, неукоснительно соблюдались правила асептики-антисептики и правил техники безопасности при работе с особо заразным материалом.

Перед использованием ЭКСЦПД для УФ-инактивации система в несобранном виде подлежит комбинированной стерилизации. Шланги-соединения с иглами-катетерами (канюлями), не бывшие в употреблении, замачивают в 1-2% растворе гипохлорита натрия; тем же раствором тщательно обрабатывают сердечник к ЗАРКО посредством орошения его внутренних стенок. Патрон с сорбентом для гемосорбции обрабатывают УФО при встряхивании на шутель-аппарате оставляя на ночь в собранном виде (после просушки шлангов-соединений с иглами-катетерами (канюлями) и пластиковой трубки-сердечника к ЗАРКО в предварительно обработанном 1-2%-ным раствором гипохлорита натрия термостате при 37^oС) ЭКСЦПД до ее применения за полчаса обрабатывали антикоагулянтом. После использования ЭКСЦПД для УФ-инактивации ее компоненты разового пользования подлежат незамедлительному уничтожению сжиганием в лабораторной электропечи; рабочие поверхности лабораторного пальчикового (обтурационного) насоса, реостата, манометра и ЗАРКО обрабатывали 1-2%-ным раствором гипохлорита натрия.

В данной серии опытов испытанию УФ-инактивации как варианта II способа на пяти кроликах из группы 3, зараженных ВИЧ-содержащим материалом путем его введения в краевую ушную вену, предшествовала процедура "провоцирование" провируса. По завершению УФ-инактивации в течение 1,5-2 часов производили восстановительную иммунокоррекцию трансплантацией лейкоцитов и их предшественников по лейкопоэзу из пуповинной крови от плодов у пяти взятых наугад крольчих в конце срока беременности и подвергнутых под эфирным наркозом лапоротомии и гистотомии. В соответствии со стандартной схемой иммунохирургического лечения, после восстановительной иммунокоррекции производили ориентационную иммуностимуляцию или иммуноактивацию с помощью внутримышечной инъекции аутовакцины пациенту. Упомянутые процедуры по восстановлению иммунопотенциала у кроликов оказались эффективными, если их производили при создании фона предварительным введением актиномицина Д в дозе 0,015 мг/кг внутривенно в сочетании с внутримышечным введением антисептика в виде бисептола в дозе 0,025 г/кг.

На третьи сутки после заражения у подопытных кроликов развилась диарея, которую пришлось купировать инъекциями актиномицина Д. На четверные сутки стали прощупываться передне- и заднешейные, а также подчелюстные лимфоузлы тестоватой консистенции и другими характерными признаками генерализованной персистирующей лимфаденопатии (ГПЛ). Тесты на СПИД становятся позитивными с третьих суток после заражения.

Воздействие по стандартной схеме последовательности необходимых процедур ("провоцирование провируса", в первые трое суток после каждого цикла курсового воздействия, УФ-инактивация, на четверные сутки каждого цикла - восстановительная иммунокоррекция трансплантацией в большую берцовую кость лейкоморфологических элементов ППК, на пятые сутки каждого цикла - иммуностимуляция или иммуноактивация этих элементов введением аутовакцины, на пятые сутки каждого цикла) стало эффективным на третьей неделе после заражения подопытных животных лишь только после назначения на предшествовавшей (второй) неделе после заражения внутривенных инъекций актиномицина Д двукратно в сутки по 0,015 мг/кг в сочетании с двукратным введением внутрь через зонд по 120 мг бисептола. К концу третьей недели после заражения и второй недели поле назначения актиномицина Д и бисептола при продолжающемся курсе УФ-инактивационного лечения тесты на СПИД стали устойчиво негативными проявлениями.

Испытание варианта III способа воздействия при МВИ типа ВИЧ-инфекции
В опытах по разработке и апробации процедур иммуноочистки методами иммуногемофереза, ИГФ и иммуногемосорбции, ИГС, в условиях экспериментальной ВИЧ-инфекции на пяти дублируемых (из пятой и шестой групп) кроликах-самцах весом по 4-5 кг производили внутривенное заражение этих животных введением в краевую ушную вену (после предварительной обработки кожи уха ксилолом) массивно дозы (по 1,6•10⁵ вирусных частиц/мл, по данным электронной микроскопии и иммунофлуоресцентного анализа) ВИЧ-содержащего материала в виде предварительно гемолизированной и затем сконцентрированной в сухом виде выбракованной по СПИДу донорской крови. Каждое из наркотизированных (этиловым эфиром) животных фиксировали вязками за лапы к отдельной доске-плахе, как и в опытах при испытании УФ-инактивации, и подвергали вивисекции в освобожденной от шерсти переднешейной области для симметричного введения с обеих сторон тела животного простерилизованных канюль в подключичные вены. К канюле с правой стороны тела животного присоединяют простерилизованный полистирольный шланг-трубку, идущий к аппарату отечественной модели ПФ-0.5, который модифицирован из-за необходимости осуществления с его помощью процедуры ИГФ с применением иммунополистирольной пленки; либо этот шланг-трубка подходит к емкости на 100 мл из прозрачного бесцветного пластика в виде хроматографической колонки, заполненной иммуносорбентом для осуществления процедуры ИГС. В выводному отростку колонки для ИГС или к выводному соску модифицированного аппарата ПФ-0.5 присоединен патрон из того же пластика емкостью 10 мл, заполненный сорбентом для осуществления обычной детоксикационной гемосорбции, обеспечивающей связывание на сорбенте ФАС токсичных веществ разного происхождения. От данного патрона отходит другой простерилизованный полистирольный шланг-трубка, подходящий к канюле, введенной в левую подключичную вену подопытному животному. В целом такую ЭКСЦПД в двух разновидностях (для ИГФ или ИГС) доукомплектовывали установкой в цепи системы лабораторного пальчикового (обтурационного) насоса небольшой мощности, работавшего в режиме подсоса из модифицированного аппарата ПФ-0.5 или из емкости-колонки с иммуносорбентом и регулируемого с помощью реостата; интенсивность работы пальчикового насоса контролировали по устанавливаемому в цепи системы пальчиковому манометру и регулировали с помощью реостата, поддерживая обычную скорость циркуляции крови в ЭКСЦПД по ее циркуляции в венозных сосудах подопытного животного.

Полученные кроличьи специфические Ат против ВИЧ, потенциальных его мутантов и возможных его ассоциантов в виде иных вирусов и/или разных микроорганизмов как компонентов патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДе жестко фиксируются на носителе - на ФАС для ИГС или на активированной полистирольной пленке для ИГФ. Для усиления связывающей активности полученного иммуносорбента для ИГС или иммунополистирольной пленки для ИГФ в отношении к ВИЧ и его мутантам на соответствующем носителе (ФАС или активированная полистирольная пленка) ковалентно фиксируется одновременно с Ат рецепторный СD₄-белок в виде импортного официнального препарата-продукта генной инженерии (вместо первоначально использованного гликопротеида, выделенного нами из плаценты человека).

С целью предотвращения свертывания крови кролика в ЭКСЦПД для иммуноочистки, как и в ЭКСЦПД для УФ-инактивации, всю экспериментальную систему в целом (включая прооперированного подопытного кролика и исключая при этом лабораторный обтурационный насос с реостатом и манометром, не контактирующие с обрабатываемой в ЭКСЦПД кровью, предварительно перед использованием обрабатывали стерильным раствором антикоагулянта (2500 интернациональных единиц (ИЕ) гепарина в 100 мл изотонического раствора хлорида натрия; для прокачки через систему "ЭКСЦПД- подопытный кролик" использовали 300 мл такого раствора), перед тем как перевести эту систему в рабочее положение для осуществления процедуры ИГФ или ИГС. Длительность процедур ИГФ или ИГС определяется в пределах 1-1,5 часов; при этом обеспечивался проток через ЭКСЦПД в пределах 600-700 мл крови. В течение всей процедуры ИГФ или ИГС поддерживали постоянное нахождение каждого из пяти подопытных животных, подвергаемых в одной серии опытов (из пятой группы кроликов) процедуре ИГФ, а в другой (из шестой группы кроликов) - ИГС, в наркотизированном состоянии.

По завершению процедуры ИГФ в одной (пятой) группе подопытных животных и процедуры ИГС в другой (шестой) группе подопытных животных по ЭКСЦПД вводили 100-150 мл стерильного раствора-кровезаменителя (реополиглюкина) каждому из подопытных кроликов и затем отсоединяли всю ЭКСЦПД с приводящим и отводящим полистирольными шлангами от каждого подопытного животного. Не небольшие (2-3 см длиной) оставленные отрезки шлангов, укрепляемые на коже подопытного животного лейкопластырем, налагали винтовые зажимы, снимая временно наложенные на них пинцеты Пеана и оставляя таким образом канюли введенными в подключичные вены животного при ушивании краев вивисекционного разреза на коже подопытного животного хирургической шелковой нитью. Использованные иммунополистирольные пленки для ИГФ и колонка с иммуносорбентом для ИГС вместе с приводящими и отводящими полистирольными шлангами незамедлительно уничтожали сжиганием в лабораторной электропечи; аппараты ПФ-0,5 и поверхности лабораторных пальчиковых насосов, реостатов и манометров обрабатывали 4%-ным раствором гипохлорита натрия и просушивали затем в термостате при 37^oС. После стерилизации УФ-облучением внутренней части аппаратов их использовали при последующей процедуре ИГФ или ИГС.

Каждое животное из пяти подопытных кроликов, после процедуры ИГФ в одной серии опытов (в пятой группе кроликов) или после процедуры ИГС в другой серии опытов (в шестой группе кроликов) продолжающее находиться в состоянии наркотической спячки, помещали в отдельную клетку под наблюдение и подвергали в каждом случае введению в большую берцовую кость фракции лейкоцитов и их стволовых предшественников по лейкопоэзу из состава пуповинной крови кроличьих плодов и затем с целью иммуностимуляции или иммуноактивации этих клеток внутримышечно вводили изготовленную для каждого подопытного кролика аутовакцину.

С началом новой недели цикл лечения повторяли: после процедуры "провоцирования провируса", там, где проводили ИГФ, проводили ИГС и, наоборот, там, где проводили ИГС, проводили ИГФ. Таким образом, при этом осуществляли чередование процедур иммуноочистки крови с последующими упомянутыми процедурами по восстановлению нарушенного иммунопотенциала иммунокоррекционной трансплантацией элементов пуповинной крови и их иммуноактивацией с помощью аутовакцины на протяжении последующих недельных циклов курсового лечения при экспериментальной ВИЧ-инфекции на кроликах. Как и в контрольной (первой) группе животных, не подвергавшихся лечению методами иммуноочистки посредством ИГФ и ИГС (или методом УФО крови по варианту II, т.е. с проведением УФ-инактивации, или методом внутривенного введения капельным способом индивидуализированной по изготовлению и применению поливакцины по варианту I, т. е. с мобилизацией уцелевшего афферентного звена иммуносистемы ВИЧ-инфицированного организма, см. выше), кролики на первых порах проявляли чрезвычайное двигательное беспокойство при малейшем возбуждении. Основные жизненные функции у подопытных и контрольных кроликов после заражения ВИЧ-содержавшим материалом в массивных дозах не были нарушены, но на третьи сутки после проведенных процедур ИГФ и ИГС у подопытных кроликов (у трех из пяти после ИГФ и у четырех из пяти после ИГС) открывалась диарея, отмеченная и в контрольной группе животных на седьмые сутки после заражения, которую приходилось купировать инъекциями актиномицина Д (по 0,005 мг/мг в краевую ушную вену трехкратно в сутки в течение трех суток) и которую приходится связывать не с процедурой ИГФ или ИГС, а, по-видимому, с генерализацией ВИЧ-инфекции (к тому же диарея имела место примерно в те же сроки и при испытании способа лечения и по варианту А и по варианту Б).

Вместе с тем на третьи сутки у подопытных и контрольных кроликов стали прощупываться подчелюстные, передне- и заднешейные лимфоузлы, при своей тестоватой консистенции остававшиеся безболезненными и неспаянными с окружающими тканями. Одновременно стандартное тестирование на СПИД у подопытных и контрольных животных дало положительные результаты. При этом у каждого из пяти подопытных животных обеих экспериментальных серий (пятой и шестой) была взята кровь из ушной вены в отдельности (по 5-6 мл), и после добавления активатора репликации в виде бактериального мукополисахарида (БМПС) из оболочек Bact. pneumoniae Fridlenderi (0,002 мг/мл) были инокулированы в аллантоис (по 1 мл крови) эмбрионы предварительно проинкубированных при 37^oС куриных яиц (по обычно используемой в вирусологической диагностике методике).

Упомянутый препарат бактериального мукополисахарида БМПС, использованный нами для синхронизации репликации ВИЧ в качестве активатора репликации, изготавливали по стандартной методике из трехсуточной агаровой культуры сапрофита Bacterium pneumoniae Fridlenderi в результате смыва и суспендирования выращенной при 37^oС бактериальной массы в физиологическом (0,85%) растворе хлорида натрия, забуференного 0,1 М дигидрофосфата натрия в смеси с 0,1 М моногидрофосфата калия (рН 7,2) в условиях предварительного встряхивания этой бактериальной массы в дефибринаторе со стеклянными бусинами для отделения бактериальных оболочек, содержавших мукополисахарид. Очищенный препарат БМПС лиофилизировали и использовали в виде указанной суспензии, содержавшей после десятикратного разведения забуференным физиологическим раствором 0,015 мг/мл. Взвесь БМПС в дозе 0,015 мг/кг веса вводили подопытному кролику при предварительном испытании препарата БМПС на токсичность и пирогенность и затем - в ходе лечения пациентов в виде внутримышечных инъекций.

После инкубации куриных эмбрионов из их аллантоиса в отдельности отсасывали аллантоисную жидкость, которую наслаивали на сахарозный градиент. Полученные сахарозные градиенты (1-6% сахарозы с 1 М хлористого цезия) подвергали скоростному центрифугированию в препаративной центрифуге "Спинко" при 100000хg в течение 6 часов при +4^oС. По завершению центрифугирования при электронно-микроскопическом контроле отсасывали стерильным шприцем фракцию, содержавшую вирусные частицы - вирионы ВИЧ, потенциальные их мутанты и возможные вирусы-ассоцианты; из придонной фракции градиента в центрифужных пробирках стерильным шприцем отсасывали клетки возможных микроорганизмов-ассоциантов, а также контаминированных вирусами макрофагов и хелперных Т-лимфоцитов кролика, которые разрушали в ультразвуковом дезинтеграторе. Отобранные фракции после электронно-микроскопического изучения, дополняемого иммунофлуоресцентным анализом, объединяли и суспендировали в 2-3 мл забуференного 0,15 М смесью дигидрофосфата натрия и моногидрофосфата калия (рН 7,2) изотонического раствора хлорида натрия и полученную взвесь инактивировали УФ-облучением в течение 15 минут. Приготовленную таким образом аутовакцину использовали для внутримышечного введения в левую заднюю лапу соответствующему кролику-донору крови для изготовления аутовакцины (после произведенной данному кролику компенсаторной трансплантации лейкоцитов и их стволовых предшественников из пуповинной крови кроличьих эмбрионов.

Трансплантацию производили с первых же суток следующей недели после проведения процедуры ИГФ и ИГС: в костный мозг большой берцовой кости левой голени подопытным кроликам вводили смешанную фракцию лейкоцитов и их предшественников по лейкопоэзу из пуповинной крови у пяти взятых наугад крольчих в конце срока беременности.

После произведенной трансплантации всем кроликам из обеих подопытных групп вводили соответствующую им аутовакцину. На следующий день после введения аутовакцины у всех подопытных животных тест на СПИД оставался позитивным; проявления ГПЛ оставались без перемен. Лишь после второго цикла курсового лечения с переменами процедур ИГФ и ИГС у подопытных кроликов стали выпадать негативные тесты на СПИД, и после третьего-четвертого циклов лечения тесты на СПИД стали устойчиво негативными; проявления ГПЛ исчезли уже после третьего цикла курсового лечения. В контрольной (первой) группе животных, зараженных и не подвергнутых лечению, тесты на СПИД оставались постоянно позитивными.

По нашим наблюдениям лечение было несколько более эффективным, если в циклах лечебного курса чередование процедур начинали с ИГФ. Таким образом, результаты опытов по лечению от экспериментальной ВИЧ-инфекции на кроликах в трех вариантах (с применением индивидуализированной поливакцины, УФ-инактивации или иммуноочистки) свидетельствуют об эффективности и безвредности таких подходов к лечению от ВИЧ-инфекции и СПИДа, лечебные процедуры проводят повторными еженедельными циклами курсового лечения подопытных животных в течение одного месяца, а еженедельные циклы представлены последовательностью процедур "провоцирование провируса" при одновременном введении подопытному животному (вместе с активатором репликации ВИЧ) дорназы или ДНКазы в дозе 0,025 мг/кг для разрушения возможных мобильных ДНК-ВПНП.

Далее приведены примеры приготовления препаратов для воздействия на людях по результатам проверки их на подопытных животных.

Пример 1. Для фиксации на сорбенте отечественной марки ФАС (100 г) использовали навеску в 50 мг коммерческого препарата CD₄. Одновременно на том же сорбенте ковалентно фиксировали лиофилизированный препарат гамма-глобулиновой фракции, выделенный из кроличьей гипериммунной антисыворотки высаливанием при добавлении сульфата аммония в изоэлектрической течке по стандартной методике в условиях фракционированного центрифугирования и последующий лиофилизации преципитата.

Изготовленный иммуносорбент использовали на колонке для ИГС при иммуноочистке крови ВИЧ-инфицированных лиц-доноров от ВИЧ, его мутантов и его ассоциантов вирусной и/или микробной природы.

Пример 2. Получение иммунополистирольной пленки для осуществления процедуры ИГФ отличалось тем, что обычная, коммерческая полистирольная пленка подвергалась предварительной активации по стандартной химико-технологической методике, и затем ее использовали, как и сорбент ФАС для ИГС, в качестве носителя жестко фиксированных Ат из гипериммунной анти-ВИЧ-сыворотки кролика, иммунизированного гемокультурой данного пациента, и белка CD₄ в виде коммерческого препарата.

Пример 3. Определение ВИЧ-связывающей активности у препарата CD₄ в условиях его последующего использования для усиления ВИЧ-связывающей активности носителя специфических Ат - иммуносорбента, иммунополистирольной пленки.

Навеску 50 мг препарата CD₄ растворяют в 100 мл изотонического (0,85%) раствора хлорида натрия на фосфатном буфере (0,15 М; рН 7,1-7,2). К пробам, включая одну из контрольных, содержавшую только изотонический раствор хлорида натрия на фосфатном буфере (контроль 1), добавляли 1 мл тщательно перемешанного диагностикума, обычно используемого для стандартного тестирования при диагностике СПИДа (ВИЧ-1) и вновь тщательно перемешивали полученную в пробах смесь. Затем к смеси добавляли по 0,5 мл хлороформа для предотвращения прорастания проб. После тщательного перемешивания проб, содержавших препарат CD₄, диагностикум и хлороформ, вместе с контрольными пробами (контроль 1, содержавший 11 мл изотонического раствора хлорида натрия на фосфатном буфере из-за добавления 1 мл этого раствора вместо диагностикума к 10 мл того же раствора; контроль 2, содержавший препарат CD₄, но не содержавший диагностикум; контроль 3, содержавший диагностикум, но не содержавший препарат СD₄; все контрольные пробы содержали по 0,5 мл хлороформа, так что конечный объем у всех проб, включая основные, был равен 11,5 мл), пробы под ватно-марлевыми пробками инкубировали при 37^oС в течение одних суток, после термостатирования все пробы прогревали на водяной бане при 40^oС вплоть до устранения его запаха в вытяжном шкафу. К охлажденным пробам добавляли навески сернокислого аммония до насыщения на 65% при рН 6,5; в основных пробах и в контрольной пробе 2 выпадал хлопьевидный осадок, отделяемый при центрифугировании (3000•g, 15 минут, +4^oС), одновременно были отцентрифугированы пробы 1 и 3, хотя в них осадок не образовывался от присутствия сульфата аммония.

Полученные после центрифугирования преципитаты и соответствующие им надосадочные жидкости (супернатанты) подвергали диализу против трех смен изотонического раствора хлорида натрия на фосфатном буфере в течение трех суток. Продиализованные преципитаты в каждом случае перерастворяли вновь в 10 мл изотонического раствора хлорида натрия на фосфатном буфере. Все полученные в итоге фракции преципитата и супернатанта подвергали спектрофотометрии против контролей 1, 2, и 3 для количественной оценки несвязанного специфического диагностикума на СПИД по РНК с использованием стандартной методики определения РНК полуспектрофотометрическим способом.

Результаты, полученные для стандартного тестирования на СПИД:
А. Перерастворенная фракция преципитата из проб с CD₄-препаратом содержала 82-86% исходной концентрации РНК из состава добавленного к пробам диагностикума, тогда как соответствующие фракции надосадочной жидкости из тех же проб содержали только 14-18% исходной концентрации РНК из того же диагностикума.

Б. Изменения в содержании добавленного диагностикума в случае перерастворенного преципитата из контроля 3, несодержавшего CD₄-препарат, и соответствующего супернатанта находились в пределах ошибки метода и составляли, соответственно, 2-5% и 95-98% исходной концентрации РНК из добавленного ВИЧ-1-диагностикума.

Прогревание препарата CD₄, связавшего диагностикум, в течение 5 минут при 100^oС указало на достаточно прочное связывание структуры ВИЧ использованным диагностикумом в связи с неизменными спектрофотометрическими показаниями.

В другой серии опытов с использованием определения белка по Лоури для оценки ВИЧ-связывающей активности у препарата гликопротеида из плаценты человека и у препарата CD₄ (в расчете на 1 мг сравниваемых препаратов) в отношении специфического на СПИД диагностикума активность СD₄-белка достоверно превышала таковую у гликопротеида в 1,2-1,3 раза.

Таким образом, освобождение организма от патологических элементов проводят из кровотока в условиях экстракорпоральной системы циркуляторно-проточного действия с использованием иммуносорбентов на основе аллогенного материала, при этом в экстракорпоральной системе проводят иммуноспецифическое связывание патогенных элементов, а для иммуноспецифического связывания применяют ИГФ, ИГС или ИЛС.

Упомянутое иммуноспецифическое связывание осуществляют с помощью активированной полимерной пленки, на которой фиксируют Ат или с помощью активированного сорбента с фиксированными Ат или аутоиммунными антителами.

Для освобождения от патогенного начала используют также УФ-инактивацию кровотока.

УФ-инактивацию осуществляют с помощью аргонортутнокварцевого облучателя, излучающего УФ-лучи определенной длины волны при заданной скорости кровотока.

Для освобождения организма от патогенных элементов используют индивидуализированную по изготовлению и применению УФ-инактивированную поливакцину, приготовленную на основе вирусов и микроорганизмов, выделенных из крови данного пациента.

Восстановление нарушенного иммунопотенциала осуществляют путем внутрикостной трансплантации лейкоцитов и/или их юных форм - стволовых клеток - из гемолизированной плацентарно-пуповинной крови для замещения функционально недействующих макрофагов и хелперных Т-клеток.

Экспериментальные испытания на лабораторных животных (кроликах) при ВИЧ-инфекции
Для испытания нашего способа иммуновоздействия на организм при такой МВИ, как ВИЧ-инфекция, мы подготовили лабораторных животных (кроликов), на которых можно было бы проверить вышеописанные теоретические и практические проработки данного способа во всех его трех вариантах - А, Б и В. Эксперименты по проверке эффективности разработанного и апробированного патогенетического лечения от ВИЧ-инфекции и СПИДа были проведены на кроликах весом 4,5-5,5 кг в условиях их массированного заражения взвесью ВИЧ-содержащего материала (дозы порядка 1,5•10⁴-1,8•10⁵/мл частиц ВИЧ, по данным электронно-микроскопического анализа, дополненного данными иммунофлуоресцентного анализа) внутривенно. Заражающую взвесь ВИЧ-содержащего материала готовили из отбракованной по тестам на СПИД крови для переливания, которую подвергали гемолизу и концентрировали в процессе сушки. Сухой остаток суспендировали в забуференном фосфатами (0,15 М) физиологическом растворе хлористого натрия (рН 7,2) и вводили кроликам в краевую ушную вену по 1 мл с добавлением 0,015 мг активатора репликации ВИЧ в виде бактериального мукополисахарида (БМПС).

У экспериментальных животных через 7-8 суток после заражения в контрольном опыте проявлялись такие клинические признаки ВИЧ-инфекции, как диарея, генерализованная персистирующая лимфаденопатия (ГПЛ) при положительных стандартных тестах на СПИД. Таким образом, моделируемая лишь только с помощью массивных доз инфекта, "пробивающих" природный иммунитет кроликов к ВИЧ-инфекции, позволяет уловить признаки сравнительно позднего этапа развития ВИЧ-инфекции, не позволяя, однако, испытать способы иммунохирургического лечения, которые могут быть адресованы для ранних этапов заболевания СПИДом. Вместе с тем вообще неподходящими для такой цели являются модели ВИЧ-инфекции на обычно используемых мелких лабораторных животных (белые мыши, крысы), не допускающие возможность испытать на них способы иммуновоздействия с применением и без применения ЭКСЦПД, в частности УФ-инактивации поражающего начала в крови при ВИЧ-инфекции методом УФО крови или внутривенное введение капельным способом индивидуализированной по изготовлению и по назначению данному пациенту поливакцины, адресованные именно для применения на ранних этапах развития ВИЧ-инфекции.

Все используемые нами приемы иммуновоздействия на организм при МВИ типа ВИЧ-инфекции и СПИДа были выверены на подготовленных (массированным заражением) кроликах с положительным результатом. Кроме того, экспериментальная модель заражения ВИЧ-инфекцией позволила провести испытания с влиянием такого иммуномодулятора, как амиксин, на результаты патогенетического лечения при ВИЧ-инфекции. Результаты испытания последнего позволяют провести дополнительное клиническое испытание на ВИЧ-инфицированных пациентах с целью рекомендации применения иммуномодуляторов, в частности, амиксина при лечении СПИДа для сокращения сроков излечения.

Результаты использования модели ВИЧ-инфекции на кроликах с применением амиксина (А+) и без применения амиксина (А-) в условиях осуществления всех вариантов иммуновоздействия, основанных на иммуноочистке попеременно методами ИГФ и ИГС или на УФ-инактивировании методом УФО крови при использовании в обоих случаях ЭКСЦПД соответствующих типов или же основанных на внутривенном введении капельным способом индивидуализированной поливакцины (без использования ЭКСЦПД), сведены в таблице 1. Амиксин назначали по одной таблетке (0,125 г) в течение следующей недели, составляющей второй цикл этого лечения, ежедневно; на курс лечения амиксином приходилось 10 таблеток.

В таблице 1 показаны данные при отсчете срока появления признаков экспериментальной ВИЧ-инфекции у кроликов, начиная со дня заражения массивными дозами ВИЧ в сопоставлении с данными относительно контрольной группы животных из пяти кроликов (в таблице не показаны), в которой эти кролики, после заражения массивными дозами ВИЧ, иммунохирургическому лечению по стандартной схеме курсового лечения (как указано выше) не подвергались.

Усредненные данные в таблице 1 (при числе n наблюдений, равном 10, по количеству подопытных кроликов в каждой из шести экспериментальных групп) относительно применения амиксина показаны на основании выписок из протоколов о введении этого препарата внутрь и плацебо. У кроликов, которым вводили амиксин внутрь, экспериментальная инфекция оказывалась купированной этим препаратом, судя по отсутствию основных признаков ее проявления - позитивного теста на СПИД, генерализованной персистирующей лимфаденопатии и диареи.

Согласно результатам иммуновоздействия от экспериментальной ВИЧ-инфекции без применения амиксина (А-), на 20-21-ые сутки после заражения массивными дозами ВИЧ, т.е. к концу третьего цикла иммунохирургического лечения в своем чистом виде, стали выпадать негативные тесты на СПИД вместе с ослаблением проявления генерализованной персистирующей лимфаденопатии и диареи у подопытных кроликов; с 28-ых суток после заражения, т.е. к концу четвертого цикла курсового лечения, тесты на СПИД стали устойчиво отрицательными вместе с исчезновением ГПЛ и диареи у подопытных кроликов.

Таким образом, способ подготовки лабораторного животного для испытания с его помощью нашего способа воздействия, заключается в том, что его проводят путем заражения животного вирусом СПИД, при этом в качестве лабораторного животного используют кролика, которому вводят взвесь, содержащую в 1 мл 1,5•10⁴-1,8•10⁵ вирусных частиц с добавлением осадка, из гемолизированной крови человека, которая была предназначена для переливания и отбракована по тесту на СПИД.

У не леченых кроликов, т.е. в контрольной группе животных, зараженных массивными дозами BИЧ, тесты на СПИД оставались устойчиво положительными.

Испытание способа на контингенте добровольцев
Благодаря экспериментам по лечению от ВИЧ-инфекции, смоделированной на кроликах, стало возможным при испытании способа лечения, основанного на иммуноочистке, подразделить в ходе курсового лечения вмешательство на отдельные циклы с соответствующим, попеременным из цикла в цикл применением ИГФ и ИГС, сдерживая при этом тенденцию ВИЧ формировать мутанты в ходе своей репликации назначением в интервалах между циклами блокатора или ингибитора репликации ВИЧ.

Лечению посредством иммуноочистки крови и организма в целом были подвергнуты пять пациентов-добровольцев, граждан США, на ранних стадиях заболевания, рассматриваемых как преСПИД. Для процедуры ИГФ применяли фракционатор крови отечественной модели "ПФ-0.5", приспособленный нами для иммуноочистки крови в условиях создания в нем гравитационного поля (метод ИГФ) с использованием в нем липкой с нерабочей поверхности активированной полистирольной пленки разового пользования с ковалентно фиксированными на ней кроличьими специфическими Ат индивидуального для каждого пациента изготовления и применения. Эта пленка содержала также ковалентно фиксированный препарат СD₄-белка. Изготовленную иммунополистирольную пленку, укрепляемую липкой стороной на боковой стенке внутренней камеры статора с вращающимся ротором фракционатора, можно было легко извлечь из камеры статора для замены другой с помощью обычного пинцета.

Для процедуры ИГС использовали колонку разового пользования, типа хроматографической, объемом 300 мл из прозрачного бесцветного пластика, которую неплотно загружали иммуносорбентом, носителем в котором служил активированный сорбент отечественной марки ФАС с ковалентно фиксированными на нем иммунными Ат в виде очищенной гамма-глобулиновой фракции из гипериммунной антисыворотки кролика в результате гипериммунизации кровью от данного пациента (по стандартной методике). Как и при изготовлении иммунополистирольной пленки разового пользования для ИГФ, иммуносорбент разового пользования для ИГС содержал жестко фиксированный СD₄-белок.

За полчаса до проведения процедур по иммуноочистке крови для предотвращения свертывания крови в используемой при этом ЭКСЦПД проводят подготовку пациента внутривенным введением 300 интернациональных единиц (НЕ) на 1 кг веса пациента. Одновременно обрабатывают ЭКСЦПД в собранном виде стерильным раствором гепарина (10000 ИЕ в 400 мл физиологического раствора хлорида натрия), и к ней подключают пациента симметричным введением в его вены игл-катетеров с отводящим и приводящим полистирольными шлангами.

В условиях ИГФ или ИГС процедура длится при контролируемой скорости протока крови 1,5-2 часа, когда через ЭКСЦПД успевает пройти 1500-2000 мл крови пациента. Удаляемая в какой-то мере в процессе ИГФ плазма со взвешенными в ней вирусами, включая ВИЧ и его мутанты плюс его ассоцианты в виде разных вирусов и/или микроорганизмов, замещали равным по объему (500-600 мл) количеством плазмозаменителя, например, реополиглюкина. Потери плазмы крови в результате произведенной ИГС были меньше по объему (200-300 мл), но также нуждались в замещении плазмозаменителем.

Перед началом процедуры ИГФ или ИГС в ходе предварительной процедуры провоцирования провируса было найдено обоснованным вводить внутривенно вместе с активатором репликации ВИЧ (5-ФУ, а в дальнейшем - вместе с препаратом БМПС) коммерческий препарат дезоксирибонуклеазы (ДНКазы) - дорназу [3.1.21.1] в дозе 0,025 мг/кг пациенту для предотвращения возможного накопления в крови мобильных ДНК-ВПП как следствия амплификации активирующегося провируса под действием активатора репликации ВИЧ.

Первоначально после каждой процедуры ИГФ или ИГС практиковали парентеральное (внутримышечное введение свежеизготовленной для данного пациента аутовакцины. Однако более обоснованным было найдено вводить эту аутовакцину вслед за восполнением пула макрофагов и, главное, хелперных Т-лимфоцитов, постоянно и необратимо повреждаемых реплицирующимся ВИЧ в условиях ВИЧ-инфекции и СПИДа. Такое восполнение пула осуществляли посредством компенсаторной трансплантации в костный мозг грудины пациента в основном за счет юных форм стволовых предшественников макрофагов и хелперных Т-лимфоцитов по лейкопоэзу, которыми так богата плацентарно-пуповинная кровь (ППК) из отсекаемой пупочной вены рождающихся младенцев (при контролирующем "учете" самим организмом пациента тканевой совместимости по антигенным детерминантам со зрелыми лейкоцитами трансплантата в виде лейкофракции ППК).

Число и периодика внутрикостных трансплантаций ППК больным СПИДом определяется тяжестью инфекционного процесса. Однако необходимость трансплантации ППК не ограничивается только поздними стадиями развития ВИЧ-инфекции (при манифестации клинических признаков СПИДа). Ее надо производить и на более ранних стадиях развития ВИЧ-инфекции - в период преСПИДа.

Применение аутовакцины после восстановительной иммунокоррекции трансплантацией ППК в костный мозг грудины целесообразно в том отношении, что аутовакцина в известной мере в ходе "иммунологического процессинга" способна ориентировать трансплантированные элементы ППК и активировать их против патогенного начала при ВИЧ-инфекции - против ВИЧ-вирионов, их мутантов и их ассоциантов вирусной и/или микробной природы. Длительность курса аутовакцинотерапии (количества необходимых инъекций аутовакцины), как и курса самой иммуноочистки крови с количеством попеременных процедур ИГФ и ИГС), определяется сроками заболевания СПИДом и особенностями клинического проявления заболевания.

Аутовакцину изготавливают из инактивированной УФО смеси полученных гемокультур от данного пациента (больного или вирусоносителя при ВИЧ-инфекции), выращенных на питательной и на культуральной средах, а также при заражении куриных эмбрионов по стандартной вирусологической методике.

Лечение ВИЧ-инфицированных лиц (больных и вирусоносителей) посредством разработанного способа, необходимо сопровождать назначением общеукрепляющей терапии - витаминотерапии, введения следовых неорганических элементов, лейкогемопоэтических средств и пр. , назначаемых пациентам по индивидуальным показаниям [16].

Способ строго индивидуализированного и комбинированного воздействия при медленной вирусной инфекции в приложении к лечению от ВИЧ-инфекции следует проводить в рамках постоянного наблюдения за общим состоянием организма у пациентов, сопровождая его обязательными клиническими анализами крови и мочи при регулярном контроле показаний специфических серологических тестов на содержание Ат против ВИЧ в крови у пациентов и определений показателя иммунорегуляции (Т₄/Т₈).

Изобретение способа эффективного воздействия при ВИЧ-инфекции и СПИДа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 4. Применение усовершенствованного способа лечения от ВИЧ-инфекции на ранних стадиях заболевания (преСПИД).

После предварительно проведенной процедуры провоцирования провируса для иммуноочистки попеременными из цикла в цикл процедурами ИГФ и ИГС в условиях использования ЭКСЦПД соответствующего типа при курсовом лечении применяют, соответственно, иммунополистирольную пленку разового пользования, изготовленную в соответствии с Примером 1, или иммуносорбент разового пользования, изготовленный в соответствии с Примером 2. Иммуноочистку крови пациента проводят в виде курса лечения, состоящего из четырех однонедельных циклов, определяемых чередованием в них процедур: ИГФ-ИГС-ИГФ-ИГС. Длительность каждой из этих процедур 1,5-2 часа один раз в неделю при общем объеме перфузии 1000-1200 мл крови с последующим замещением кровопотерь равным объемом плазмозаменителя (реополиглюкина) после процедур ИГФ. Замещающий объем плазмозаменителя - реополиглюкина после процедур ИГС составляет 200-300 мл сразу же по завершению каждой процедуры ИГФ или ИГС производят введение в костный мозг (например, внутригрудинно) пациенту дробно фракции лейкоцитов и из стволовых предшественников по лейкопоэзу из осадка предварительно гемолизированной стерильной дистиллированной и затем отцентрифугированной (3000•g, 15 минут, +4^oС) свежевзятой плацентарно-пуповинной крови. (ППК).

Пример 5. Внутрикостную трансплантацию лейкоцитов и их стволовых предшественников из ППК дополняют парентеральным (внутримышечным) введением аутовакцины. Каждая инъекция аутовакцины (в условиях смыва гемокультур с агаровой среды, объединяемого перед УФ-инактивацией с инокулятом куриных эмбрионов после введения в их аллантоис по 0,4-0,5 мл крови данного пациента, см. выше) определяется внутримышечным введением аутовакцины в объеме 5-6 мл. Длительность лечения в периоде преСПИДа составляет 2-3 месяца (2-3 курса лечения посредством иммуноочистки).

Пример 6. Применение способа при вирусоносительстве в условиях ВИЧ-инфекции. Курс лечения проводят в соответствии с Примерами 4-5; в случае упорного вирусоносительства общий курс лечения следует повторить. Анамнестически подтвержденные случаи серо-негативного вирусоносительства переводят в серо-позитивные пробным применением процедуры провоцирования провируса.

Пример 7. Применение способа при стертых и бессимптомных формах ВИЧ-инфекции, выявляемых на основании анамнестических и эпидемиологических данных. Во избежание развития обострения в течении инфекционного процесса или развития вирусоносительства лечение проводится в соответствии с Примерами 4-5.

Пример 8. Применение способа на поздних стадиях ВИЧ-инфекции, при явных проявлениях клинической картины СПИДа в виде генерализованной персистирующей лимфаденопатии (ГПЛ) или диареи и пр., при осложненном течении СПИДа в связи с развитием оппортунистических инфекций.

Лечение проводится в соответствии с Примерами 4-5 и его повторяют до устойчивых отрицательных серологических тестов на СПИД и до удовлетворительных показателей согласно общему (клиническому) анализу крови и нормального показателя иммунорегуляции (T₄/T₈) в пределах 1,5-1,6.

После проведения общего курса лечения пациенты находятся под наблюдением с периодическими проверками серологии на СПИД и с привлечением иных методов лабораторного анализа (клинический анализ крови, определение показателя T₄/T₈ и др.) и оценки общего состояния из-за опасения возможности рецидива ВИЧ-инфекции по крайней мере в течение двух лет. Апробация способа иммуновоздействия, основанного на применении иммуноочистки с последующей иммунокоррекцией и иммуностимуляцией (иммуноактивацией) иллюстрируется примерами на основании выписок из историй болезни леченых нами от ВИЧ-инфекции пациентов таким способом (вариант III).

Пример 9. Пациент Д. X., мужчина в возрасте 25 лет из штата Нью-Йорк, студент Московского университета. СПИД был диагностирован на основании положительного теста на присутствие в крови специфических Ат к ВИЧ. Увлекался курением марихуаны, потом перешел на инъекции героина. Отмечает нарастание умственной инертности, ощущение физической слабости и тревоги, быструю утомляемость от умственной нагрузки. Согласно исходному анализу клинической картины крови, у Д.X. отмечалась лейкопения при общем числе лейкоцитов 2100, моноцитоз и снижение числа СD₄-клеток (хелперных Т-лимфоцитов) в среднем до 530 в поле микроскопического зрения при изучении окрашенных по стандартной методике мазков крови.

Диагноз: ВИЧ-инфекция, бессимптомная форма, СПИД в клинической стадии IA ВИЧ⁺ (по установкам ВОЗ, 1991) или инаппарантная форма серо-позитивного ВИЧ-носительства?
После двух проведенных курсов лечения, основанного на иммуноочистке крови попеременно из цикла в цикл методами ИГФ и ИГС в комбинации с гемосорбцией при использовании ЭКСЦПД соответствующего типа с дополняющими процедурами восстановительной иммунокоррекции трансплантацией в костный мозг грудины лейкоцитов и их стволовых предшественников из ППК и последующей иммуностимуляции инъекцией аутовакцины результаты стандартного тестирования на СПИД (на присутствие в крови специфических Ат против ВИЧ) у пациента стали устойчиво отрицательными при одновременно наметившейся тенденции к нормализации морфологических показателей крови (общее число лейкоцитов возросло до 3000-4000), число СD₄-клеток достигало 620 в поле зрения, проявления моноцитоза исчезли. Лечение было продолжено из-за опасения возможности рецидива ВИЧ-инфекции, которое длилось в общей сложности в течение двух лет. Всего было проведено 10 курсов лечения, несмотря на устойчивые отрицательные результаты стандартного тестирования на присутствие Ат к ВИЧ при нормализовавшихся морфологических показателях клинической картины крови, оставшихся без изменений даже после отмены лечения и продолжавшегося наблюдения с регулярно проводившимися тестами на СПИД и анализами клинического состояния крови. С завершением курсов воздействия с помощью способа, основанного на иммуноочистке крови попеременно методами ИГФ и ИГС (вариант III) было проведено дополнительно еще пять курсов (в течение еще одного года) только одной аутовакцинотерапии. В итоге общее количество лейкоцитов достигло 6500-7000. Последующие исследования ВИЧ-носительства не выявили.

Пример 10. Пациент Р.У., неженатый мужчина в возрасте 23 года, рабочий одной из зарубежных продовольственных фирм, работал в России. Проверочный тест на СПИД стандартным методом у Р.У. оказался положительным; к тому же при исходном клиническом анализе крови у него было выявлена лейкопения (общее количество лейкоцитов 2200) при умеренно выраженном моноцитозе и при сниженном содержании СD₄-клеток или хелперных Т-лимфоцитов в среднем до 540-550 в микроскопическом поле зрения по стандартной методике окрашенных мазков).

Диагноз: ВИЧ-инфекция, бессимптомная форма СПИДа в клинической стадии IA ВИЧ⁺ или инаппарантная форма ВИЧ-инфекции типа серо-позитивного ВИЧ-носительства?
После трех курсов иммуновоздействия (вариант III) по нашему способу, основанному на применении иммуноочистки крови попеременно из цикла в цикл методами ИГФ и ИГС в условиях использования ЭКСЦПД соответствующего типа с последующей иммунокоррекцией и иммуностимуляцией тесты на СПИД стали устойчиво отрицательными при постепенной нормализации клинической картины крови. Лечение было продолжено, и в целом было проведено 10 курсов лечения. Все последующие результаты стандартного тестирования на СПИД оказались отрицательными.

Пример 11. Пациент У.Дж.К., неженатый мужчина в возрасте 35 лет из штата Делавэр, художник-модельер одной из фирм по пошиву фасонной мужской одежды, был обследован по своей инициативе на возможность заболевания СПИДом. Результаты этих тестов на СПИД оказались положительными. Подвергался лечению ацикловиром. Ощущает душевную и физическую разбитость, беспокоят холодные поты по ночам, испытывает похудение.

Диагноз: ВИЧ-инфекция, бессимптомная форма СПИДа в клинической стадии IA BИЧ⁺ или инаппарантная форма ВИЧ-инфекции типа серо-позитивного ВИЧ-носительства?
После трех курсов проведенного иммуновоздействия по способу, основанному на иммуноочистке крови методами ИГФ и ИГС попеременно с использованием ЭКСЦПД соответствующего типа и с последующими процедурами восстановительной иммунокоррекции и затем иммуностимуляции достигнуты отрицательные тесты на СПИД стандартными методами, что сопровождалось нормализацией морфологических показателей белой крови. При отмене лечения и последующем наблюдении с ежемесячными обследованиями стандартными тестами на СПИД и с одновременными клиническими анализами крови отмечены устойчивые отрицательные тесты на СПИД с клиническими показателями крови, свидетельствовавшими о нормализации клинической картины крови.

Пример 12. Пациент Н. Р. А., неженатый мужчина в возрасте 28 лет из штата Делавэр, коммивояжер одной из крупных торговых фирм. Результат стандартного теста на СПИД оказался положительным с одновременным подтверждением диагноза "гепатит А". Жалобы на угнетенное настроение, тревожное состояние, беспокойный сон, ночные поты, плохой аппетит, ощущение горечи во рту по утрам, похудение. При объективном обследовании прощупывается несколько заостренный край печени в правом подреберье, безболезненный при надавливании. Проверочный стандартный тест на СПИД положительный; при клиническом анализе крови отмечена лейкопения (общее число лейкоцитов 2000-2100), умеренно выраженный моноцитоз и сниженное содержание CD₄-клеток (510-540 клеток в микроскопическом поле зрения).

Диагноз: ВИЧ-инфекция, бессимптомная форма СПИДа в клинической стадии IA ВИЧ⁺ или инаппарантная форма ВИЧ-инфекции типа серо-позитивного ВИЧ-носительства? Остаточные явления перенесенного гепатита А?
После двух курсов амбулаторного лечения по стандартной схеме применения способа, основанного на иммуноочистке крови попеременно из цикла в цикл методами ИГФ и ИГС с использованием ЭКСЦПД (в комбинации с гемосорбцией) и дополненного последующими процедурами восстановительной иммунокоррекции и иммуностимуляции аутовакциной, а также внутривенными введениями 40%-ной глюкозы (по 10 мл перед каждым циклом основного курсового лечения) были получены устойчивые отрицательные результаты стандартного тестирования на СПИД с одновременно наблюдаемой тенденцией к нормализации морфологических показателей белой крови. Однако полная нормализация клинической картины крови была достигнута лишь только после пяти курсов проведенного иммуновоздействия. Все последующие стандартные тесты на СПИД были отрицательными.

Пример 13. Пациент Д. Г.Г., женатый мужчина 37 лет из штата Нью-Йорк, преуспевающий бизнесмен-владелец компании. Проверочный стандартный тест на СПИД оказался положительным. По прибытии в Москву, спустя два месяца после выявления положительного теста на СПИД в США никаких отклонений по состоянию здоровья у себя не замечал. При проверочном тесте на СПИД выявлено присутствие в крови специфических Ат к ВИЧ при отмеченных к тому же отклонениях со стороны морфологии крови по данным клинического анализа крови: наличие лейкопении (общее число лейкоцитов 2330-2850) с явными проявлениями моноцитоза при сниженном содержании CD₄-клеток (до 520 и менее в микроскопическом поле зрения при изучении стандартно окрашенных мазков крови). При общем объективном обследовании обнаружены проявления ГПЛ в виде симметричного увеличения шейных, подмышечных, паховых лимфоузлов, безболезненных при прощупывании, тестоватой консистенции, неспаянных с окружающими тканями.

Диагноз: ВИЧ-инфекция в клинической стадии IБ ВИЧ⁺ с проявлениями ГПЛ. Вирус Т-лейкоза человека-коинфекция?
После пяти проведенных курсов иммуновоздействия, основанного на применении способа иммуноочистки крови попеременно из цикла в цикл методами ИГФ и ИПС при использовании ЭКСЦПД соответствующих типов, с дополнением процедурами восстановительной иммунокоррекции и затем иммуностимуляции (по стандартной схеме лечения) достигнуть ожидаемых результатов не удалось: периодически продолжали выпадать положительные тесты на СПИД, а тенденция к нормализации клинической картины белой крови себя так и не обнаружила; проявления ГПЛ оставались без перемен. В желаемом направлении положение изменило предварительное использованное нами впервые и затем использованное во всех описанных нами случаях применение перед каждым циклом проводимой по стандартной схеме процедуры "провоцирования вируса" с учетом фазовости репликации ВИЧ и необходимости синхронизации репликации ВИЧ в разных клетках-мишенях иммуносистемы по фазе выхода вирионов новой генерации ВИЧ в РНК-форме из этих клеток в плазму крови. Это обеспечило получение стойких отрицательных тестов на СПИД с постепенной нормализацией морфологии белой крови и спадом проявления ГПЛ у Д.Г.Г. вплоть до их исчезновения.

Метод провокации провируса как обязательная предварительная процедура был успешно использован нами при лечении в условиях применения метода УФО кровотока в ЭКСЦПД соответствующего (ЗАРКО) типа (вариант способа II).

Пример 14. Пациент Ю.Х.Х., 39 лет. Проверочный стандартный тест на СПИД у пациента был отрицательным. Утверждая, что он заражен СПИДом, никаких жалоб не предъявлял, при объективном обследовании никаких отклонений от нормы установить не удалось, но пациент настаивал на необходимости подвергнуться лечению. Ю. X. X. был подвергнут процедуре "провоцирование вируса". Повторная процедура "провоцирование провируса" позволила выявить положительный тест на СПИД, который стойко удерживался у пациента вплоть до проведения четвертого курса инактивации методом УФО кровотока в ЭКСЦПД соответствующего (ЗАРКО) типа (вариант способа II: однократная УФ-инактивация за однонедельный цикл с процедурой провоцирования провируса до УФ-инактивации и с последующими после нее процедурами восстановительной иммунокоррекции и специфической иммуностимуляции). На четвертом курсе (месяце) воздействия стандартный тест на СПИД стал устойчиво отрицательным, сохраняясь отрицательным даже после отмены назначенного лечения с помощью УФ-инактивации ВИЧ, его возможных мутантов и его потенциальных ассоциантов. После успешно проведенного трехмесячного лечения по полной стандартной схеме пациент находился под наблюдением в течение четырех с половиной лет. В марте 1997 года пациент покинул Москву и возвратился к себе в США. Согласно информации, поступавшей до самого последнего времени из США от бывшего пациента, самочувствие и общее состояние у него вполне удовлетворительные; неоднократные обследования посредством стандартного тестинга на СПИД дали устойчиво отрицательный результат при нормальной клинической картине крови (общее число лейкоцитов 7500 против 5900 в начале лечения; число СD₄-клеток и моноцитов в пределах нормы). Ю. X.X. женился; неоднократные обследования его супруги с помощью стандартных тестов на СПИД до и после ее половых контактов с мужем являются отрицательными. Народившийся у них ребенок, которому уже два года, является здоровым, с отрицательными тестами на СПИД.

Пример 15. Пациент Р.Дж. Н, неженатый мужчина 26 лет, студент Пенсильванского университета. Жалобы на ощущение апатии, утомляемости от умственных нагрузок, бессонницу и плохой аппетит. Никаких отклонений от нормы при общем объективном обследовании, включая нейрологический статус, не обнаружено; проверочный стандартный тест на наличие специфических Ат к ВИЧ в сыворотке крови положителен. Исходный клинический анализ крови: умеренно выраженная лейкопения (общее число лейкоцитов 5700) при умеренно выраженном моноцитозе и при несколько сниженном содержании СD₄-клеток (в среднем 580 в микроскопическом поле зрения стандартно окрашенных мазков крови), иммунорегуляционный индекс CD₄/CD₈ - 1,5
Диагноз: ВИЧ-инфекция, бессимптомная форма СПИДа в клинической стадии IA ВИЧ⁺ или инаппарантная форма ВИЧ-инфекции типа серо-позитивного ВИЧ-носительства?
В результате трех проведенных по стандартной схеме (см. выше) циклов курсового воздействия, основанного на УФ-инактивации патогенного начала при ВИЧ-инфекции с длительностью каждого сеанса УФО крови по три часа в условиях каждого цикла (после предварительной в каждом цикле процедуры провоцирования провируса и завершающих процедур восстановительной иммунокоррекции внутригрудинной трансплантацией фракции лейкоцитов и их стволовых предшественников из ППК и затем посредством иммуностимуляции с помощью инъекции аутовакцины) тест на СПИД стал отрицательным при отмеченном также сдвиге в сторону нормализации клинической картины крови (общее число лейкоцитов в пределах 6000 - 6500 при нормальном содержании моноцитов и СD₄-клеток). Число циклов иммуновоздействия, основанного на УФ-инактивации иммунокоррекцией и иммуностимуляцией доведено до пяти. Регулярное наблюдение за состоянием здоровья у Р. Дж. Н. длилось в течение последующих четырех лет при ежемесячном стандартном тестировании на СПИД, результаты которого оказались устойчиво отрицательными при окончательно нормализовавшейся картине крови.

Метод провокации провируса как обязательная предварительная процедура был успешно использован нами при лечении в условиях применения индивидуализированной по изготовлению и назначению поливакцины, вводимой пациентам внутривенно капельным способом, что иллюстрируется нижеприведенными примерами на основе кратких выписок из историй болезни трех леченых нами пациентов.

Пример 16. Пациент А., неженатый мужчина в возрасте 25 лет. Беспокоит постоянное ощущение физической слабости при отсутствии аппетита и похудании, постоянная встревоженность, нарушенный сон; находится под наблюдением как больной ВИЧ-инфекцией, по поводу которой проходит лечение с применением АЗТ. Страдает частыми рецидивами герпетической инфекции, когда на слизистой полости рта в разных участках появляются пузырьки, которые лопаются и на месте которых образуются болезненные ограниченные изъязвления, и периодическими заболеваниями острой респираторной инфекцией неясной этиологии. При стандартном тестировании на СПИД: в крови присутствуют специфические Ат к ВИЧ и его белкам gp18, p24, р31, р41, р55, gp160. Исходные результаты клинического анализа крови: Нb 110 г/л, число лейкоцитов 3,3•10⁹/л, CD₄/CD₈ - 1,8; CD₄ - 65%, CD₈ - 3,2%.

Диагноз: ВИЧ-инфекция в стадии I-II, преСПИД, генерализованная персистирующая лимфаденопатия (ГПЛ). Герпетическая коинфекция. Наркомания.

После двух курсов иммуновоздействия, основанного на внутривенном введении капельным способом индивидуализированной по изготовлению и применению поливакцины (вариант способа В), и дополняемого внутримышечными инъекциями актиномицина Д по курсу в обычной терапевтической дозировке достигнуты положительные сдвиги: существенно улучшилось общее состояние в связи с исчезновением лихорадки и ощущений физической слабости, с появлением аппетита и нормализацией стула; сон стал спокойным. Герпетические высыпания на коже рук бесследно исчезли; тесты на СПИД стали устойчиво отрицательными, показатели морфологии белой крови возвратились к нормальным характеристикам, коэффициент CD₄/CD₈ стал определяться в пределах значений 1,6-1,7. Ежемесячные тестирования на СПИД за два года наблюдения остаются устойчиво отрицательными, при нормальной морфологической картине крови.

Пример 17. Пациент К, холостой мужчина в возрасте 20 лет. При объективном обследовании: общее состояние относительно удовлетворительное. Кожа морщиниста; слизистые полости рта, носоглотки и век гиперемированы и гноятся. Больного лихорадит (температура тела 37,4^oС), в легких рассеянные мелкопузырчатые хрипы на фоне жесткого дыхания; подкожные лимфоузлы не прощупываются; область их безболезненна. Функция желудочно-кишечного тракта не нарушена; печень и селезенка не увеличены. Проверочный тест на СПИД - положительный; при клиническом анализе крови: лейкоциты 2,58•10⁹/л, CD₄ - 0,05•10⁹/л, СОЭ - 12 мм/час. Посев крови на стерильность дал рост золотистого стафилококка; при исследовании мокроты обнаружены пневмоцисты, выявленные также в фекалиях; анализ мочи без патологии.

Диагноз: ВИЧ-инфекция, инфекто-СПИД в клинической стадии II- III. Пневмоцистоз.

В результате трех проведенных курсов иммуновоздействия, основанного на внутривенном (с добавлением антикоагулянта) введении капельным способом индивидуализированной по изготовлению и применению поливакцины в соответствии с разработанной стандартной схемой проводимых циклов такого лечения, дополненного внутривенными введениями такого антисептика, как тримерексат (30 мг/м² кожной поверхности в течение каждых из 20 суток) в комбинации с пероральным приемом такого антибиотика, как лейковорин (20 мг/м² четыре раза в сутки в течение 20 суток), и с внутримышечными инъекциями такого антибиотика, как актиномицин Д (по курсу в обычной терапевтической дозировке), общее состояние пациента заметно улучшилось. Исчезли кашель и одышка, хотя в легких прослушивалось еще жесткое дыхание, но без отделения мокроты. Температура тела находилась в пределах 36,2-36,6^oС. Слизистые полости рта, носоглотки и век приобрели нормальную окраску и перестали гноиться. Живот без аномальных отклонений. Кровь при высевах стерильна. В мазках со слизистой верхних дыхательных путей и в суспензии фекалий пневмоцисты не обнаруживаются. За последующие два года наблюдения отмечена полная нормализация морфологических показателей крови по данным ее клинических анализов; стандартные тесты на СПИД устойчиво отрицательны; коэффициент CD₄/CD₈ равен 1,7.

Пример 18. Пациент Л., женатый мужчина в возрасте 30 лет; У Л. был выявлен положительный стандартный тест на СПИД, и он дал согласие на лечение. При обследовании со стороны клинической картины крови было отмечено снижение числа эритроцитов при Нb 27 г/л, снижение числа лейкоцитов до 3,5•10⁹/л; содержание тромбоцитов 338•10⁸/л, лимфоцитов - 15%, CD₄ - 26/мм³. В подчелюстной области кожи справа прощупывается инфильтрат, флюктуирующий при пальпации, безболезненный при прощупывании, холодный на ощупь; кожа над инфильтратом синюшна; при высеве пунктата на бактериологические среды выделены кислотоустойчивые микобактерии, идентифицированные на среде Левенштейна-Иенсена как Mycobacterium avium complex. Иных отклонений от нормы при общем обследовании пациента не обнаружено, температура тела нормальная.

Диагноз: ВИЧ-инфекция, преСПИД в клинической стадии I-II. Микобактериоз в атипической форме проявления.

После двух курсов иммуновоздействия, основанного на внутривенном введении (с добавлением антикоагулянта) капельным способом индивидуализированной по изготовлению и применению поливакцины в соответствии с нашей схемой, дополненной назначением рифампицина внутрь (по 600 мг на сутки) и этамбутала (по 25 мг на сутки), существенных сдвигов в желаемом направлении не принесло: периодически выпадали положительные тесты на СПИД, и тенденция к нормализации морфологии крови, по данным клинических анализов, не проявлялась. Однако повторно взятый пунктат из инфильтрата в подчелюстной области кожи шеи рост микобактериальных колоний не дал. Температура тела у пациента оставалась нормальной. После хирургического иссечения инфильтрата и третьего курса иммуновоздействия при ВИЧ-инфекции согласно схеме способа, основанного на внутривенном введении индивидуализированной поливакцины капельным способом, были достигнуты устойчивые отрицательные результаты тестирования на СПИД стандартными методами: показатели морфологической картины крови обнаружили явную тенденцию к нормализации; на месте хирургического иссечения инфильтрата сформировался рубец, повергнувшийся эпителизации; после отмены иммуновоздействия отмечена устойчивость отрицательных стандартных тестов на СПИД при нормальных значениях коэффициента иммунорегуляции CD₄/CD₈ (в пределах 1,6-1,7), что регистрировали и при последующем двухлетнем наблюдении за состоянием здоровья у пациента Л.

Экспериментальные испытания на лабораторных животных при прионовой инфекции.

К группе медленных вирусных инфекций (МВИ), наряду с инфекцией, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), относят инфекцию, вызванную неканоническим вирусом - прионом, необычность которого состоит в том, что он не содержит нуклеиновых кислот, столь характерных для обычных вирусов, будучи целиком организован из белка - сиалопротеида. Тем не менее обе указанные МВИ роднит, как оказалось, возможность медико-технической и технологической разработки принципов патогенетического лечения обеих инфекций.

Прионовый белок, обозначаемый как PrPsc, по аминокислотной последовательности, т. е. по первичной структуре, идентичен прионоподобному белку (РrРс), лишенному патогенных, инфекционных свойств, определяющему, как полагают, нормальное функционирование клеток Пуркинье в мозжечке у млекопитающих [15]. Оба белка, биосинтез которых кодирует один и тот же ген, обладают конформапионными различиями в организации вторичной структуры: при переходах РrРс-->PrPsc in vitro и in vivo снижается содержание β-спиралей, образуемых полипептидной цепью в субъединице РrРс, и нарастает количество α-спиралей, сообщающих гидрофобные свойства возникающей субъединице PrPsc [16].

Прионы обнаружены и в дрожжевых клетках, и, по крайней мере, с дрожжевыми прионами связывают функцию носителей "белковой наследственности" у дрожжей. С нашей точки зрения, обнаружение прионов у млекопитающих и человека, возможно, является в эволюционном отношении проявлением своего рода "молекулярно-биологического атавизма", ставшим патогенным фактором и являющимся, таким образом, рельефной иллюстрацией к механизму функционирования обратной информационной связи (ОИС) при биосинтезе макромолекул (генного вещества и кодируемых им белковых фенокопий - эффекторов генетической программы) в приложении к эволюционной биоинформатике нормальных и патологических процессов в человеческом организме [11, 13, 14, 15]. Запуская свой собственный синтез, прионы выступают как репрессоры клеточной генетической информации.

Отправным пунктом в разработке способа лечения от неминуемо летальных прионовых инфекций, характеризующихся избирательным поражением центральной нервной системы (ЦНС) по типу подострых спонгиозных (губчатых) энцефалопатий (ПСЭ) у человека и животных послужили сведения о теоретическом, экспериментальном и клиническом обосновании представления о патогенезе таких инфекций. Среди людей известно заболевание "куру" ("трясучка" на языке одного из племен Папуа на острове Новая Гвинея, как результат ритуального каннибализма среди представителей данного племени) и болезнь Якобса-Крейцфельдта (кортикоспинальная дегенерация или спастический псевдосклероз или пресинильная деменция) с ее многочисленными клиническими вариантами (синдром Герстмана-Штрауслера, трансиссибельная вирусная деменция и др.), а среди животных - скрейпи ("почесуха", по-английски "scrapies") у овец и коз, инфекционная энцефалопатия у домашних норок и хроническое истощение у одомашненных оленей и лосей, а также "коровье бешенство" у крупного рогатого скота с вовлечением в это заболевание и мелкого скота при возможной передаче инфекта уже человеку в связи с употреблением в пищу, как полагают, головного и спинного мозга животных по типу антропозооноза. Известна внутривидовая специфика прионов в связи с существованием среди них линейных (штаммовых) различий. Передача прионового инфекта возможна при трансплантации гетерогенных органов и тканей (так называемый "неоканнибализм").

Прионы характеризуются сравнительно медленными темпами репликации: время удвоения занимает 5,2 суток в мозгу зараженного хомячка или мыши. Отсюда период инкубации и период манифестации прионовой инфекции могут растягиваться на месяцы и годы. Что явилось основанием отнести прионовую инфекцию к МВИ. Однако эти сроки способны резко сократиться при перемене прионами организма-хозяина в связи со сменой организма-хозяина адаптацией их к новым условиям паразитирования, что, возможно, имело место при сравнительно недавно произошедшей эпизоотии "коровьего бешенства" с вовлечением в нее людей, зараженных прионами через полуфабрикатную продукцию скота. В некоторой мере прионовая инфекция напоминает по патогенезу и клиническим проявлениям ВИЧ-инфекцию в манифестируемой клинической форме нейро/психо-ВИЧ-инфскции с поражениями астроглии головного мозга при иммунопараличе в том отношении, что перед преодолением гематоэнцефалического барьера для репликации уже в астроглиальных элементах мозга прионы после алиментарного пути заражения из желудочно-кишечного тракта контаминируют клетки иммуносистемы, где (в лимфоцитах "низкой плотности) они проходят предварительные циклы репликации, перед тем как им предстоит поразить астроциты (глиальные элементы) головного мозга, располагающие теми же клеточными рецепторами, которые характерны для хелперных Т-лимфоцитов и которые взаимодействуют с калсидными белками ВИЧ-вирионов при ВИЧ-инфекции. Таким образом, есть основания предположить, что механизм преодоления гематоэнцефалического барьера по крайней мере в данном случае состоит, очевидно, в попадании прионов, как и ВИЧ-вирионов, в вещество головного мозга благодаря диапедезной (проникающей) способности контаминированных ими иммунологических клеток-мишеней сквозь стенки кровеносных сосудов.

Прионы, как известно, чрезвычайно устойчивы при воздействии на них обычных дезинфицирующих и вироцидных средств и препаратов, но весьма чувствительны к действию 0,1 н. раствора гидроокиси натрия или же 5%-ного раствора гипохлорита натрия. Будучи лишены иммуногенных свойств, прионы являются достаточно активными антигенами в условиях реакции аутоиммунного ответа на так называемые (10 нм)-нейрофиламенты или нейрофибриллы. Последние выделяют из лизосом при фракционировании ткани мозга; их выделяли от больных "куру" или же больных болезнью Якобса-Крейцфельдта, а также от животных, зараженных такими фракциями лизосом или зараженных "скрейпи". Эти антигенные свойства в реакции аутоиммунного ответа не проявлялись при использовании (10 нм)-нейрофибрилл, выделенных при прочих равных условиях фракционирования ткани мозга не болевших ПСЭ людей и животных в составе аналогичных препаратов низкомолекулярного белка без инфекционных свойств и неассоциированного, например, с заболеванием "скрейпи". Поскольку аутоиммунные антитела (АиАт) к нормальным аксонным (10 нм)-нейрофибриллам, появляющимся у большинства больных "куру" и при болезни Якобса-Крейцфельдта, а также у многих животных, зараженных в эксперименте "скрейпи", "куру" или болезнью Якобса-Крейцфельдта, реагировали как с нормальными аксонными (10 нм)-нейрофибриллами, мак и с нейрофибриллярными сплетениями (НФС), полагают, что (10 нм)-нейрофибриллы и нейрофибриллы, ассоциированные со "скрейпи", сходны. Оба типа нейрофибрилл подвергаются дегенерации с образованием парных спиральных филаментов (ПСФ) и НФС, а в конечном счете образуют амилоид и амилоидные бляшки, обнаруженные в мозгу большинства больных "куру" и некоторых больных болезнью Якобса-Крейцфельдта, а также в мозгу некоторых животных, зараженных "скрейпи".

Допускают возможность структурной по (10 нм)-нейрофибриллам гомологии между ПФС в составе НФС и нейрофибрилл при "скрейпи", с одной стороны, а с другой - амилоидными фибриллами, накапливающимися в мозгу при ПСЭ. Вместе с тем в связи с выявлением гомологии между амилоидом иммуноглобулинами допускается возможность, что амилоид-иммуноглобулиноподобные молекулы как возможные компоненты нейрофибрилл способны вызывать биосинтез сходных молекул, несколько отличных по конформации от нормальных.

Выявление более, чем у 60% больных "куру" и болезнью Якоба-Крейцфельдта весьма специфичных аутоиммунных (АиАт) строго против нейрофибрилл на поздней стадии этих заболеваний послужило указанием на проявление иммунных процессов при ПСЭ. Эти АиАт обнаруживали и при иных заболеваниях с поражением серого мозгового вещества неприоновой этиологии, в том числе и при болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона, хотя с меньшей частотой выявления Аи Ат, в сравнении с их выявляемостью при болезни Якобса-Крейцфельдта. Однако те же АиАт отсутствовали у больных другими аутоиммунными болезнями, такими как красная волчанка или хронический ревматоидный артрит. Правда, отмечали сходство у АиАт с иными АиАт (к примеру, с АиАт к ревматоидному фактору, с АиАт с анти-ДНК-активностью при красной волчанке или же с противоглобулиновыми АиАт при тиреоидите Хашимото) в том отношении, что подобные АиАт находят и у здоровых лиц, зачастую у близких родственников больного.

В экспериментальных исследованиях на мышах была установлена в период инкубации персистентная виремия и преимущественная репликация вируса в лимфоцитах низкой плотности. Очевидно, при этом имеются в виду хелперные Т-лимфоциты, согласно современной номенклатуре морфологических элементов белой крови. В результате заражения отмечали развитие в итоге очаговой микровакуолизации в аксонах и дендритах нейронов, приводящей к заполнению перикариона, разбуханию нейрона и его аксона и к спонгиозной (губчатой) дегенерации серого мозгового вещества на фоне интенсивно происходящей пролиферации и гипертрофии астроглии).

Вместе с тем полагают, что аутоиммунный ответ при заболевании "куру", при болезни Якобса-Крейцфельдта или при "скрейпи" направлен специфично против 200 кД-компонентов как одного из трех белков в составе триады, характерной для (10 нм)-нейрофибрилл, и в меньшей мере против 145- или 70 кД-компонентов той же триады, против которых, однако, были более активны некоторые сыворотки. Сыворотки овец, больных "скрейпи", лучше реагировали против 62 кД-компонентов, ассоциированных с нейрофибриллами.

Отмечали реагирование АиАт при заболевании "куру", при болезни Якоба-Крейцфельдта и при "скрейпи", а также при отложении нейрофиламентов в мозгу у крыс в ответ на введение β-иминодипропионнитрила или в мозгу людей, страдавших болезнью Альцгеймера.

Исходя из упомянутых выше некоторых из аналогий в патогенезе прионовой инфекции и ВИЧ-инфекции как МВИ, нами предпринята экспериментальная разработка в опытах на лабораторных животных (морские свинки, белые мыши) иммунохирургического подхода к лечению от прионовой инфекции на принципе иммуноочистки зараженного организма от прионов методами ИГС и ИЛС с применением аутоиммунных антител (АиАт), образуемых плазмопитами в крови зараженного прионами организма при аутоиммунном ответе на прионовый белок 200 кД в составе глобулиноподобных структур в кровотоке и (10 нм)-нейрофибрилл в СМЖ.

В наших экспериментах, проведенных на морских свинках (МС) и белых мышах (БМ), был использован предоставленный нам любезно в Университетской клинике нейрологии и невропатологии при Университете Сан-Франциско препарат прионового белка, адаптированного к паразитированию у морских свинок. При специфичном по виду кругу организмов-хозяев у каждого из известных штаммов прионов адаптация к новому хозяину сопровождается сокращением инкубационного периода прионовой инфекции, который для данного препарата, адаптированного к паразитированию у МС, составлял 2-3 месяца независимо от пути заражения лабораторного животного (МС).

МС весом по 150-200 граммов были подразделены на четыре группы, разнившихся по способу (пути) заражения препаратом прионового белка, содержавшим 10⁸ ИД₅₀/мл и по дальнейшему использованию животных в эксперименте. Каждая группа состояла из 10 МС; животные во всех группах подвергались заражению препаратом прионового белка: в первых двух группах животных заражали интракардиальным введением 0,5 мл данного препарата; в остальных двух группах животных заражали интрацеребральным введением того же препарата и в той же дозе. Донорами сыворотки для выделения из крови АиАт к (10 нм)-нейрофибриллоподобным (иммуноглобулиновым) структурам и донорами СМЖ для выделения из нее АиАт к (10 нм)-нейрофибриллам, соответственно, служили МС в инкубационном периоде прионовой инфекции из состава одной из первых двух групп, т.е. в среднем в течение 2,5 месяцев после из заражения и до появления у них первых признаков заболевания в виде поражения ЦНС, и в продромальном периоде в связи с появлением таких признаков у животных в составе одной из двух последних групп.

По предварительно полученным данным в тестах по иммунопреципитации в агаровом геле обнаружить присутствие АиАт в СМЖ практически не удалось. Поэтому в дальнейших опытах нами были использованы АиАт, выделенные только из сыворотки крови МС по стандартной методике получения моноклоновых Ат после заражения животных прионовым белком. В те же сроки, которые были указаны выше относительно инкубационного периода и относительно продромального периода, м. свинок другой группы из числа первых двух групп, а также МС другой группы из числа первых двух групп, а также МС другой группы из числа двух остальных групп подвергали экстракорпоральному связыванию приона в условиях иммуногемосорбции (ИГС) и в условиях иммуноликворсорбции (ИЛС) жестко фиксированными на ФАСе АиАт, выделенными, как отмечено выше, из сыворотки крови МС, зараженных прионом.

В условиях проведения ИГС из указанных первой и второй групп по 5 оставшихся животных, зараженных, соответственно, интракардиальным или интрацеребрального введения приона, подключали каждое из них в наркотизированном состоянии к соответствующей экстракорпоральной системе циркуляторно-проточного действия (ЭКСЦПД) с помощью игл-катетеров (канюлей), введенных симметрично в правую и левую подключичные вены. Остальные 10 животных (по 5 МС в каждой из упомянутых выше двух групп, разнившихся по путям введения приона для заражения) подключали также в наркотизированном состоянии к ЭКСЦПД, но с помощью игл-катетеров (канюлей), введенных каждому животному в субарахноидальное пространство спинного мозга между четверным и пятым поясничными позвонками, т.е. интралюмбально, и интрацеребрально в точку на проекции фронтального участка переднего рога левого бокового желудочка на височной кости (после предварительной трепанации черепа в указанной точке). Таким образом, все животные в эксперименте были распределены по восьми подгруппам, разнившихся не только по целевому использованию их в эксперименте, но и по особенностям введения им заражающего материала и подключения к ЭКСЦПД подопытных животных в расчете на обработку крови или СМЖ в ходе лечения плюс подгруппы контрольных животных, которых заражали разными путями введения приона и не подвергали лечению с использованием процедур ИГС или ИЛС.

Используемая для ИГС ЭКСЦПД в принципе была аналогична примененной нами для иммуносвязывания патогенного начала при ВИЧ-инфекции и СПИДе методом ИГС. Отличия состояли лишь в емкостных соотношениях у компонентов сравниваемых систем и, следовательно, в режимах их применения. В описываемом ниже эксперименте на иглы-катетеры (канюли) были насажаны (1) отводящая кровь от наркотизированной и фиксированной за конечности на плашке подопытной МС и (2) приводящая к ней обработанную кровь силиконовые трубки диаметром по 1,5 мм. Отводящая от подопытного животного силиконовая трубка насаживается на нижний сосок-отросток устанавливаемой вертикально пластиковой колонки емкостью всего 1,5 мл как главного компонента используемой для ИГС ЭКСЦПД. Колонка заполнена иммуносорбентом, при изготовлении которого носителем был использован фурфуроловый адсорбент сферический отечественной марки ФАС, на котором были ковалентно фиксированы по стандартной химико-технологической методике АиАт от м. свинок-доноров, зараженных использованным штаммом прионового белка (см. выше). К верхнему соску-отростку колонки с данным иммуносорбентом была присоединена одно-типовая силиконовая трубка, подводящая обработанную из колонки кровь к подопытному животному; на ней размещались пальчиковый (обтурационный) лабораторный насос небольшой мощности, работавший в режиме подсоса крови из колонки и регулируемый реостатом по показаниям неконтактного манометра о давлении в системе.

В условиях применения ЭКСЦПД описанного типа для обработки венозной крови из левой подключичной вены МС ИГС проводили сеансами по 30 минут через сутки с расчетом обработки всего объема циркулирующей у МС крови за каждый проведенный сеанс.

При обработке СМЖ использовали в процедуре ИЛС по существу вышеописанную ЭКСЦПД при скорости перфузии ликвора (СМЖ) 0,1-0,3 мл/мин при длительности сеанса 30 минут, контролируя скорость перфузии по специально приспособленной капельнице и секундомеру; сеанс повторяли через сутки с расчетом обработки всего количества СМЖ в ЦНС за каждый сеанс.

Вслед за процедурой иммуноочистки методом ИГС или ИЛС подопытным МС производили трансплантацию лейкоцитов и их стволовых предшественников по лейкопоэзу из свежевзятой стерильным шприцем и предварительно гемолизированной дистиллированной водой пуповинной крови у плодов МС на последних сроках беременности. Трансплантацию (без последующей специфической иммуностимуляции) отцентрифугированных лейкоцитов и их стволовых предшественников, суспендированных в 1 мл изотонического (0,85%) раствора хлористого натрия на фосфатном буферном (0,15 М) растворе (рН 7,2), производили в костный мозг бедра задней конечности животного, продолжающего находиться в наркотизированном состоянии.

При обработке крови или СМЖ проводили 3 сеанса ИГС или, соответственно. ИЛС. Результаты ИГС и ИЛС контролировали заражением белых (беспородных) мышей (БМ) весом 10-15 граммов препаратом (10 нм)-нейрофибрилл из лизосомной фракции ткани мозга забитых зараженных леченых не леченых посредством ИГС или ИЛС м. свинок (донорных и подопытных, см. выше, в каждом случае) по стандартной методике, что сопровождали электронно-микроскопическим изучением полученных для заражения препаратов (10 нм)-нейрофибрилл, и регистрировали развитие поражений ЦНС у зараженных БМ (см. табл.2).

Согласно запротоколированным результатам проведенного эксперимента, у донорных и подопытных МС, не подвергавшихся лечению методом СГС или ИЛС, и у контрольных БМ, соответственно, через 2-3 месяца и через один месяц после заражения были зарегистрированы проявления поражения ЦНС. Они проявлялись в неустойчивости позы тела животных, при проявлении сперва ограниченного тремора в виде дрожания задних конечностей, а затем - развитием ригидности передних и задних конечностей с обширным клонусом. В некоторых случаях наблюдали ударообразные подергивания отдельных мышц и груатетоидные и хреоидные движения конечностей при неожиданных изменениях положениях тела. Затем развивались экстрапирамидные нарушения позы и движений, наступало недержание мочи и кала, проявлялась дисфагия, которая приводила к постоянной жажде и истощению. С появлением признаков бульбарных поражений животные погибали.

Проявления поражения ЦНС отсутствовали у подопытных незамедлительно леченых посредством ИГС или ИЛС после заражения и донорных МС, а также у контрольных для них БМ. В остальных случаях проведенное спустя первую - вторую неделю после заражения лечение методом ИГС или ИЛС отдаляло и смягчало проявление признаков поражения ЦНС у донорных и подопытных м. свинок, хотя у соответствующих им тест-мышей, зараженных материалом из тканей мозга этих животных, поражения ЦНС напоминали таковые у тест-мышей, зараженных материалом из ткани мозга не леченых донорных и подопытных МС. Таким образом, есть основания полагать, что в подобных случаях лечение методом ИГС или методом ИЛС все-таки спасает животных от неминуемой гибели, хотя произошедшие поражения ЦНС могут носить необратимый характер. Подобный прогноз, по-видимому, не лишен основания, поскольку известно о репликации прионов (после их попадания в организм хозяина) в клетках иммуносистемы (в лимфоцитах "низкой плотности"), перед тем как пройти, как полагают, по спинальным ганглиям в спинной мозг, а оттуда - по току СМЖ в головной мозг и там продолжать свою репликацию уже в клетках нейроглии и затем в нейронах, хотя и при малых величинах своего удвоения.

Технические результаты эксперимента на лабораторных животных, зараженных прионовой инфекцией показали возможность, во-первых, лечения различных клинических форм болезни Якобса-Крейцфельдта у людей, особенно на ранних этапах ее развития. Во-вторых, вместо практикуемого массового забоя животных, как это произошло с крупным рогатым скотом в связи с признаками заболевания "бешенство коров", появляется возможность лечить больных животных в условиях раннего выявления такого заболевания, что более разумно, исходя не только из чисто гуманных соображений, но также из прямой выгоды лечения вместо нанесения крупного ущерба скотоводству в условиях массового забоя скота, пораженного прионовой инфекцией. В третьих, что касается ВИЧ-инфекции и ее клинической форме проявления в виде нейро/психо-ВИЧ-инфекции с параличом иммуносистемы, то разработка метода ИЛС, возможно, открывает перспективы успешной борьбы с данным заболеванием у людей.

Успешно апробированное нами в эксперименте воздействие в виде ИЛС и предложенный нами способ воздействия в клинических условиях от прионовой инфекции является не только паллиативным. Он в то же время является радикальным, будучи направленным на устранение прионового белка как фактора, изменяющего не структуру гена (в том нет необходимости: она, очевидно, патологически не изменена), а функциональную организацию кодирования этим геном биосинтеза нормального прионоподобного белка под влиянием прионового белка извне на аппарат биосинтеза нормального гомолога, т.е. прионоподобного белка, опосредованным воздействием прионового белка на клеточные рецепторы [13]. Здесь аналогия с ВИЧ-инфекцией в том отношении, что взаимодействие ВИЧ с клеткой-мишенью иммуносистемы тоже опосредовано участием определенных клеточных рецепторов [14].

Таким образом, при прионовой инфекции наше изобретение осуществляют следующим образом.

Воздействие при медленной вирусной инфекции, вызванной прионом, как неканоническим вирусом, несодержащим НК, осуществляют путем освобождения организма от патогенного начала, подверженного репликации в клетках-мишенях иммуносистемы, или (при условии преодоления прионом гематоэнцефалического барьера), в астроцитах глиальной ткани головного мозга.

В условиях прионового поражения проводят иммуногемосорбцию из кровотока, а также иммуноликворосорбцию при этом в составе иммуносорбента используют ковалентно-фиксированные аутоиммунные антитела к белку, имеющему молекулярную массу 200 кД, полученному из 10 нм-нейрофибриллоподобных структур ткани головного мозга или крови зараженного организма.

Представленный в настоящем изобретении комплексно-индивидуализированный способ воздействия на организм при медленной вирусной инфекции позволит более точно и целенаправленно использовать имеющийся в настоящее время арсенал средств и методов для борьбы с такими трудноизлечимыми заболеваниями, как СПИД с клиническими проявлениями нейро-психо-ВИЧ-инфекции с иммунопараличом, открывает возможность для преодоления новых видов инфекций, таких как заражение прионовыми белками.

Формула изобретения

1. Способ комплексно-индивидуализированного воздействия на организм при медленной вирусной инфекции с использованием противовирусных препаратов и экстракорпоральных методов, отличающийся тем, что дополнительно применяют биоинформационный подход к названному воздействию, включающему два основных этапа: а) устранение из организма патогенного начала, составляющего заражение, с привлечением противовирусных препаратов и экстракорпоральных иммуносорбентов на основе аллогенного материала, с индивидуальным учетом для организма особенностей репликации патогенного вируса, б) восстановление нарушенных иммуноинформационных связей в организме путем компенсаторной трансплантации морфоэлементов из плацентарно-пуповинной крови гетерогенного происхождения с индивидуальным учетом влияния антигенных детерминант трансплантата на тканевую совместимость.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что воздействие при медленной вирусной инфекции вирусом, содержащим нуклеиновые кислоты (НК), осуществляют за счет освобождения организма от следующих патологических элементов: вирионов, их мутантов, ассоциантов в виде иных вирусов и микроорганизмов, а также контаминированных вирионами клеток.

3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что учет особенностей репликации вируса, содержащего НК, осуществляют в условиях провокации его провируса или ДНК-копии, интегрированной в геноме клеток-мишений в иммунной системе и кодирующей биосинтез в клетках вирионов новой генерации в РНК-форме, при этом проводят процедуру иммобилизации провируса попеременными активацией и ингибированием репликации вируса для ее синхронизации в разных клетках по фазе выхода из клеток вирионов.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что воздействие при медленной вирусной инфекции, вызванной прионом, как неканоническим вируса, несодержащим НК, осуществляют путем освобождения организма от патогенного начала, подверженного репликации в клетках-мишенях иммуносистемы, или (при условии преодоления прионом гематоэнцефалического барьера), в астроцитах глиальной ткани головного мозга.

5. Способ по пп. 1-4, отличающийся тем, что освобождение организма от патологических элементов проводят из кровотока и/или из тока спинно-мозговой жидкости в условиях экстракорпоральной системы циркуляторно-проточного действия с использованием иммуносорбентов на основе аллогенного материала.

6. Способ по пп.1-5, отличающийся тем, что в экстракорпоральной системе проводят иммуноспецифическое связывание патогенных элементов, при этом для иммуноспецифического связывания применяют иммуногемоферез, иммуногемосорбцию или иммуноликворосорбцию.

7. Способ по п.6, отличающийся тем, что иммуноспецифическое связывание осуществляют с помощью активированной полимерной пленки, на которой фиксируют антитела или с помощью активированного сорбента с фиксированными антителами или аутоиммунными антителами.

8. Способ по пп.1, 2, 3, 5, отличающийся тем, что для освобождения от патогенного начала используют УФ-инактивацию кровотока.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что УФ-инактивацию осуществляют с помощью аргонортутнокварцевого облучателя, излучающего УФ-лучи определенной длины волны при заданной скорости кровотока.

10. Способ по пп.1-3, отличающийся тем, что для освобождения организма от патогенных элементов используют индивидуализированную по изготовлению и применению УФ-инактивированную поливакцину, приготовленную на основе вирусов и микроорганизмов, выделенных из крови данного пациента.

11. Способ по пп.1-10, отличающийся тем, что восстановление нарушенного иммунопотенциала осуществляют путем внутрикостной трансплантации лейкоцитов и/или их юных форм - стволовых клеток - из гемолизированной плацентарно-пуповинной крови для замещения функционально недействующих макрофагов и хелперных Т-клеток.

12. Способ по пп.1, 4, отличающийся тем, что в условиях прионового поражения проводят иммуногемособцию из кровотока, а также иммуноликворосорбцию, при этом в составе иммуносорбента используют ковалентно-фиксированные аутоиммунные антитела к белку, имеющему молекулярную массу 200 кД, полученному из 10 нм-нейрофибриллоподобных структур ткани головного мозга или крови зараженного организма.

13. Способ по п.1, отличающийся тем, что воздействие может быть применено при ВИЧ-инфекции, СПИДе, герпесной инфекции, гепатите С, спонгиозной энцефалопатии, вызванной поражением прионами, болезни Якобса-Крейцфельдта и других медленных вирусных инфекциях.

14. Способ подготовки лабораторного животного для испытания с его помощью способа, охарактеризованного в п. 1 путем заражения животного вирусом СПИД, отличающийся тем, что в качестве лабораторного животного используют кролика, которому вводят взвесь, содержащую в 1 мл 1,5•10⁴-1,8•10⁵ вирусных частиц с добавлением осадка, из гемолизированной крови человека, которая была предназначена для переливания и отбракована по тесту на СПИД.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4