Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевым действием со сниженными побочными эффектами, содержащая противоопухолевый агент и производное гидроксамовой кислоты

 

Изобретение относится к фармацевтике, к фармацевтической композиции, которая обладает улучшенным противоопухолевым действием или сниженным(и) побочным(и) эффектом(ами), состоящей из активной субстанции, обладающей противоопухолевым действием, или фармацевтически приемлемой ее соли и производного гидроксамовой кислоты по формуле или терапевтически применимой его кислотной аддитивной соли. 3 с. и 7 з.п. ф-лы, 10 табл., 3 ил.

Изобретение относится к фармацевтической композиции, обладающей противоопухолевым действием со сниженными побочными эффектами.

Подавляющее большинство противоопухолевых агентов (цитостатиков) разрушают клетки опухоли, действуя частично через ингибирование синтеза ДНК и РНК, и частично через разрушение синтезированной ДНК. Известные противоопухолевые агенты могут серьезно повреждать гены здоровых клеток, приводя к мутациям или выпадениям как в митохондриальном, так и в ядерном геноме. Помимо своего основного противоопухолевого действия противоопухолевые агенты часто приводят к общему повреждению клетки. Вследствие этого побочные эффекты часто делают продолжение лечения невозможным и даже приводят к смерти пациента. Поэтому наиболее критическим моментом противоопухолевого лечения является чувствительность пациента к серьезным побочным эффектам цитостатиков.

Из-за возникновения проблем, описанных выше, важное значение имеет создание фармацевтической композиции, которая будет обладать противоопухолевой активностью цитостатиков без побочных эффектов или, по крайней мере, со сниженным побочным действием.

Целью изобретения является получение фармацевтической композиции, в которой действие известной активной противоопухолевой субстанции сохранено, но при этом одновременно побочные эффекты известной активной субстанции уменьшены.

Производные гидроксамовой кислоты по формуле I где R¹ и R² совместно со смежным атомом азота образуют пиперидиновую группу, R³ является пиридильной группой, Y является гидроксильной группой, Х является аминогруппой, R и В вместе образуют химическую связь, А является химической связью, известны из уровня техники.

US-P No 4308399 раскрывает соединения, принадлежащие к области производных гидроксамовой кислоты по формуле I, которые применяются для лечения диабетической ангиопатии.

EP-PS No 417210 описывает галогенпроизводные гидроксамовой кислоты, также попадающие в область соединений по формуле I, которые проявляют селективное действие β-блокаторов и применяются для лечения диабетической ангиопатии.

HU-PS, опубликованный под No T/66350, раскрывает ряд других производных гидроксамовой кислоты, находящихся внутри области соединений по формуле I. Эти известные соединения применяются в терапии васкулярных деформаций, особенно при сахарном диабете.

Известно из заявки РСТ, опубликованной под No WO 97/13504, что производные гидроксамовой кислоты по формуле I применяются для предотвращения и лечения заболеваний митохондриального происхождения.

Целью настоящего изобретения является получение фармацевтической композиции, обладающей действием известных цитостатических агентов, но проявляющей их побочные эффекты в меньшей степени.

Было обнаружено, что указанная цель может быть достигнута с помощью фармацевтической композиции по изобретению, которая включает в себя противоопухолевый агент, выбранный из группы, включающей препараты платины, аналоги пиримидина, производные такс-11-ен-9-она, фармацевтически приемлемые соли аналогов пиримидина с щелочными металлами и производное гидроксамовой кислоты по формуле I, где R, R¹, R², R³, А, В, Х и Y такие, как указано выше, или его терапевтически (физиологически) приемлемую кислотную аддитивную соль вместе с одним или более общепринятым наполнителем.

Под терапевтически (физиологически) приемлемыми кислотными аддитивными солями соединений по формуле I подразумевают кислотные аддитивные соли, образованные с терапевтически приемлемыми неорганическими кислотами, например, соляной или серной кислотой и подобными; или с терапевтически приемлемыми органическими кислотами, например, уксусной, фумаровой или молочной кислотой и подобными.

Особенно предпочтительным соединением формулы I является O-(3-пиперидино-2-гидроксил-1-пропил)никотиновой кислоты амидоксим дигидрохлорид (соединение "L").

Соединения по формуле I могут быть получены с использованием способа, известного из US-PS No 4308399, EP-PS No 417210; так же, как и из опубликованной Заявки на Венгерский Патент No T/66350.

Согласно современным представлениям об активности известный цитостатический агент (субстанция) - это такой активный агент, который посредством прямого или непрямого воздействия ингибирует синтез ДНК, и/или транскрипцию (синтез РНК), и/или трансляцию клетки опухоли; или повреждает синтезированную ДНК.

Известное фармацевтическое соединение с противоопухолевой активностью является соединением, которое посредством прямого или непрямого воздействия ингибирует синтез ДНК, и/или транскрипцию (синтез РНК), и/или трансляцию и повреждает синтезированную ДНК в раковой клетке.

Более детально, известное фармацевтическое соединение с противоопухолевой активностью ингибирует: - аденозиндеаминазу, - биосинтез пуриновых оснований и трансформацию нуклеотидов, - биосинтез пиримидиновых оснований, - восстановление рибонуклеотидов, - синтез тимидина монофосфата, - синтез РНК, - завершение ДНК,
- синтез ДНК,
- повреждение ДНК,
- синтез пуриновых оснований и восстановление дигидрофолата,
- синтез белка и дезаминирование аспарагина,
- функцию размножения.

Согласно современным представлениям о химической структуре известными цитостатиками являются:
- алкилирующие агенты, включающие нитропроизводные горчицы, производные этиленимина и метилмеламина; алкилсульфонаты; нитрозомочевина; азеридины; триазены и подобные соединения;
- антиметаболиты, в их числе аналоги фолиевой кислоты, аналоги пиримидина, аналоги пурина и подобные соединения;
- агенты натурального происхождения, включающие алкалоиды барвинка, подофиллотоксин, антибиотики и подобные соединения;
- гормоны, включающие адренокортикостероиды, эстрогены, андрогены, антиэстрогены и подобные соединения; и
- другие субстанции, такие как комплекс-формирующие агенты.

Предпочтительными известными цитостатическими агентами в данном изобретении являются следующие:
из класса антиметаболитов:
Фторурацил: 5-Фтор-2,4(1Н,3Н)пиримидиндион или его натриевая соль
из агентов натурального происхождения:
Паклитаксель: [2aR, 4S, 4aS, 6R, 9S (альфаR, бетаS), 11S, 12S, 12aR, 12bS]-бета-бензоиламино-альфа-(гидроксифенил)пропионовой кислоты [6,12b-bis(ацетилокси)-12-бензоилокси-2а, 3,4,4а, 5,6,9,10,11,12,12а,12b-додекагидро-4,11-дигидрокси-4а, 8,13,13-тетраметил-5-оксо-7,11-метано-1Н-циклодека[3,4] бенз[1,2-b]оксет-9-ил] эфир
Доцетаксель: [2aR-[2a альфа, 4 бета, 4а бета, 6 бета, 9 альфа (альфаR*, бетаS*), 11 бета, 12 альфа, 12а альфа, 12а альфа, 12б альфа]]-бета-(трет-бутоксикарбониламино)-альфа-(гидроксифенил)пропионовой кислоты [12b-ацетил-окси-12-бензоилокси-1,2,3,4,4а, 6,9,10,11,12,12а, 12b-додекагидро-4,6,11-тригидрокси-4а, 8,13,13-тетраметил-5-оксо-7,11-метано-5Н-циклодека[3,4]бенз[1,2-b]оксет-9-ил]эфир
из цитостатических агентов других классов:
Цисплатин: Цис-диаминдихлорплатина
Карбоплатин: Цис-диамино-[1,1-циклобутан-дикарбоксилат(2)]-платина
Известный цитостатический активный агент может также быть использован в форме его терапевтически приемлемой кислотной аддитивной соли в том случае, если его химическая структура позволяет получить кислотную аддитивную соль. Подобным образом известный цитостатический активный агент может быть использован в виде его терапевтически приемлемой соли, например металлической соли, аммонийной соли или соли, образованной органическими основаниями, если его химическая структура допускает приготовление этих солей.

Цитостатическая фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит предпочтительно цисплатин в качестве цитостатического (противоопухолевого) активного агента и О-(3-пиперидино-2-гидрокси-1-пропил)никотиновой кислоты амидоксим или его терапевтически приемлемая аддитивная соль в качестве производного гидроксамовой кислоты по формуле I.

Фармацевтическая композиция согласно изобретению обычно содержит активные агенты (ингредиенты) в количествах от 0,1 до 95 весовых %, желательно от 1 до 50 весовых %, предпочтительно от 5 до 30 весовых % вместе с общепринятым(и) наполнителем(ями) фармацевтической композиции.

В фармацевтической композиции согласно изобретению весовое соотношение двух активных ингредиентов (агентов) является предпочтительно (от 1 до 50): (от 50 до 1), особенно предпочтительно (от 1 до 10):(от 10 до 1).

Фармацевтическая композиция по изобретению может быть твердой или жидкой композицией, применяемой для орального, парентерального или ректального назначения или для наружного применения.

Твердые фармацевтические композиции для орального применения могут быть порошками, капсулами, таблетками, таблетками, покрытыми пленками, микрокапсулами и подобными; они могут содержать в качестве наполнителя(ей) связующие, например, желатин, сорбит, поливинилпирролидон и подобные; наполняющие материалы, например, лактозу, глюкозу, крахмал, фосфат кальция и подобные; вспомогательные таблетирующие вещества, такие как стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, диоксид кремния и подобные; так же, как смачивающие агенты, например лаурилсульфат натрия и подобные.

Жидкие фармацевтические композиции для орального применения представляют собой растворы, суспензии или эмульсии, содержащие в качестве наполнителя, например, суспендирующие агенты, такие как желатин, карбоксиметилцеллюлозу и подобные; эмульгирующие агенты, например сорбилмоноолеат; растворители, такие как вода, масла, глицерин, пропиленгликоль, этиловый спирт; так же, как консерванты, такие как метил или пропил-п-гидроксибензоат и подобные.

Фармацевтические композиции для парентерального введения обычно используются в виде стерильных растворов активных агентов.

Дозировочные формы (единицы дозирования), подробно описанные выше, так же, как и другие формы дозирования, известны per se, см., например, руководство под названием: "Remington's Parmaceutical Sciences", Edition 18, Mack Publishing Co., Easton, USA (1990).

В большинстве случаев фармацевтические композиции по изобретению содержат дозировочную единицу. Для взрослых характеристическая ежедневная доза составляет от 0,1 до 1000 мг известного активного цитостатического агента и от 0,1 до 1000 мг соединения по формуле I, которые могут быть назначены на один прием или несколько субдоз. Наиболее подходящая доза зависит от нескольких факторов и определяется лечащим врачом.

Фармацевтическая композиция по изобретению приготовляется смешиванием активных агентов (ингредиентов) с одним или более наполнителей с получением затем смеси, представляющей собой фармацевтическую композицию, способом, известным per se. Приемлемые способы известны из общего развития техники, например, из руководства Remington's Parmaceutical Sciences, упоминаемого выше.

1. Уменьшение побочных эффектов цитостатиков
Действие производных гидроксамовой кислоты по уменьшению побочных эффектов цитостатиков исследовалось на примере производного гидроксамовой кислоты соединения "L" ("L" - "О-(3-пиперидино-2-гидроксил-1-пропил)никотиновой кислоты амидоксим дигидрохлорид"). Эксперименты и их результаты представлены для обсуждения ниже.

Эксперименты in vivo на крысах. Группе из 6 крыс линии Wistar давали цисплатин (ежедневная доза 50 мг/кг массы тела), и соединение "L" (ежедневная доза 40 мг/кг массы тела), соответственно назначаемые по отдельности и в комбинации. Животные были здоровы (за исключением прививки какой-либо опухоли) в начале эксперимента, и доза противоопухолевого соединения была провокационной/необычайно высокой, и, весьма вероятно, могла сама по себе вызвать повреждение тканей. Контрольная группа не получала ни одно из этих активных соединений. Во время эксперимента сердечная деятельность животных исследовалась с помощью ЭКГ, а после двух недель эксперимента определялась активность энзимов крови животных. Значительность повреждений тканей, вызванных цисплатином, определялась на основании большого количества данных по энзиматической активности.

Исследование повреждения тканей
Повреждение тканей оценивалось при измерении внутриклеточного выделения энзимов. Энзиматическая активность определялась методом H. U.Bergmeyer. (Methods in Enzymatic Analysis, 2nd edition. Academic Press (1974). Определялись следующие энзимы:
GOT = глутамат-оксалацетат-трансаминаза,
GPT = глутамат-пируват-трансаминаза,
LDH = лактатдегидрогеназа,
СК = креатинкиназа,
LipDH = липоамиддегидрогеназа,
CS = цитратсинтаза.

Активность энзимов представлена в мЕд/мл сыворотки. Результаты представлены в Табл.1.

Как показано в Табл.1, энзиматическая активность возрастает при лечении цисплатином, выявляя повреждение тканей. Когда цисплатин и соединение "L" назначались в комбинации, энзиматическая активность хорошо коррелировала с энзиматической активностью в контрольной группе. Поэтому совместное с цисплатином назначение соединения "L" значительно предохраняет ткани от повреждения, вызванного цисплатином.

Исследование сердечной деятельности
Сердечная деятельность исследовалась с помощью АТ-6 ЭКГ на всех четырех шкалах. Определялись интервалы QRS, RR, PR и TQ и депрессия в точке J. Результаты суммированы в Табл.2.

Как показано в Табл.2, совместное назначение соединения "L" и цисплатина обеспечивает значительное защитное действие против ухудшения сердечной деятельности, вызванного цисплатином. Следует отметить, что флюктуация QRS показывает значительное ухудшение сердечной деятельности как следствие приема цисплатина, и эта флюктуация исчезает в присутствии соединения "L".

Выживание в течение одного месяца после лечения
Исследовалось, какое количество животных (в процентах) выживет после двух недель эксперимента, изложенного в деталях выше. Результаты суммированы в Табл.3.

Как показано в Табл.3, только 25% животных выживало после одного месяца приема цисплатином по причине чрезвычайной его токсичности, в то время как не получавшие препарат животные выжили. Напротив, 83% животных, которые получали цисплатин в комбинации с соединением "L", выжили, то есть смертность крыс была невелика.

Эксперименты in vivo на мышах. Модуляция системной токсичности известного цитостатического агента цисплатина (Platidiam, 50 La Chema, Brno) с помощью соединения "L" изучалась на нормальных мышах [цитировано из Oncology Report (REP /O.O.I./1988/01)]. Гибрид первого поколения BDF₁ (самка С57В1 х самец DBA/2) взрослые самцы мышей, весящие 22-24 г, свободные от специфических патогенов (SPF), были использованы для экспериментов. Животные помещались в ящики из макролона при температуре 22-24^oС (40-50% влажность), со световым режимом 12/12 часов свет/тень. Животные имели свободный доступ к водопроводной воде и питались по стандартной стерильной диете (Altromin 1324 гранулы, Altromin Ltd, Germany) ad libitum. Для исследования токсичности соединение "L", цисплатин и их смесь растворяли в стерильном физиологическом солевом растворе в концентрации, позволяющей получить дозу для введения в объеме 0,1 мл/10 г массы тела, и вводили внутрибрюшинно (i.p.) или перорально (р.о.).

Острый токсический эффект соединения "L", цисплатина и соединения "L" + цисплатин в комбинации
Процент выживаемости мышей-самцов BDFi, получавших разные дозы соединения "L", цисплатина и соединения "L"+ цисплатин в комбинации, представлен в Табл.4.

Период наблюдения заканчивался через 25 дней. Для соединения "L" доза 750 мг/кг веса тела, i.p. была летальной (см. Табл.4). Другие виды обработки одним соединением "L" не влияли на выживаемость мышей BDF₁ (см. Табл. 4). Наблюдался зависимый от дозы токсический эффект цисплатина. Токсичность цитостатического агента, оцениваемая на основании показателя выживаемости, была особенно значительной при более высоких дозах и повторных введениях. Доза 4 мг/кг, i.p., повторенная 5 раз, была близка к летальной (см. Табл.4). Однако цисплатин (15 мг/кг, i.p.) в комбинации с соединением "L" (500 мг/кг, i.p.) показал значительное уменьшение токсичности.

Когда цисплатин назначался в дозе 10 мг/кг в комбинации с соединением "L", все животные выживали (см. Табл.4).

II. Противоопухолевая активность
Противоопухолевый эффект цитостатиков в комбинации с производным гидроксамовой кислоты по формуле I исследовался на примере производного гидроксамовой кислоты соединения "L". Ниже обсуждаются эксперименты и их результаты.

Эксперименты с клеточной культурой. Клетки Sp-2 (миелома мышей, суспензия) помещались в DMEM (Dubelso modified Eagle medium) в присутствии 10% FCS (сыворотки новорожденных телят). Клетки были помещены на пластину с 96 углублениями, исходное количество клеток составляло 10⁴/250 мкл.

Одна порция клеток содержалась без добавления лекарства, другая порция клеток содержалась в присутствии 0,35 мкг/мл цисплатина, еще одна порция в присутствии 40 мкг/мл соединения "L", еще одна порция в присутствии 0,35 мкг/мл цисплатина + 40 мкг/мл соединения "L" в комбинации. Через 48 часов после добавления вышеописанных компонентов, клетки в углублениях подсчитывались с помощью окрашивания 10 мкл суспензии трипанового голубого. Подсчет проводился в камере Burker.

Влияние на рост опухоли
В Табл. 5 показано количество, в процентах, клеток, выживших после обработки.

Как показано в Табл.5, все необработанные клетки сохраняются. Цисплатин сам по себе существенно уменьшает количество опухолевых клеток, и этот эффект не изменяется, если цисплатин добавляется в комбинации с соединением "L".

Подобный эффект наблюдался, когда вышеописанный эксперимент был повторен с добавлением фторурацила вместо цисплатина. В этом случае одна порция клеток содержалась без добавления лекарства, одна порция клеток содержалась в присутствии 13 микрограмм/мл фторурацила, другая порция клеток - в присутствии 13 микрограмм/мл фторурацила + 40 микрограмм/мл соединения "L". Количество выживших клеток определялось через 40 часов после обработки.

В Табл. 6 показано количество клеток, выдержавших обработку, в процентах.

Как показано в Табл. 6, фторурацил сам по себе значительно уменьшает количество опухолевых клеток, и этот эффект остается неизменным, когда цисплатин добавляется вместе с соединением "L". Эти эксперименты in vitro с противоопухолевыми агентами (цисплатином или фторурацилом) без добавок или в комбинации с соединением "L" показывают, что они вызывают значительное уменьшение количества опухолевых клеток в клеточной культуре. Таким образом, в условиях in vivo сoединение "L" не влияет на противоопухолевую активность исследуемых противоопухолевых агентов.

Наблюдения, приведенные выше, показывают, что фармацевтическая композиция по формуле I уменьшает побочные эффекты противоопухолевых агентов, в то время как их противоопухолевая активность остается неизменной.

Эксперименты in vivo на мышах. Однократная или повторная обработка после трансплантации опухоли Р-388 или S-180 начиналась в 1-й день. Терапевтическая эффективность оценивалась на основании времени выживания и объема опухоли. Эксперименты заканчивались через 45 дней. Длительность выживания мышей не исследовалась после 45 дней, но конечным пунктом считался 46-й день после трансплантации опухоли. Сравнительный противоопухолевый эффект групп, принимающих различные лекарства, по отношению к среднему времени выживания в днях для обработанной группы против контрольной выражался как Т/С.

В случае твердой опухоли S-180 действие, замедляющее рост опухоли, проверялось 3 раза в неделю с использованием цифрового калибра. Объем опухоли рассчитывался с использованием следующей формулы:
V=a²•b²•π/6,
где "а" и "b" являются наименьшим и наибольшим диаметром по отношению к данной опухоли (Tomayko М.М., Reynolds C.P. Determination subcutanious tumor size in athymic (nude) mice. Cancer Chemother. Pharmacol, 24, p.148, 1989).

Были рассчитаны среднее значение (X) и стандартное отклонение (S.D.). Статистически значимое различие (р) определялось по методу Стьюдента, там где это было необходимо.

Влияние соединения "L" in vivo на противоопухолевую активность цитостатического агента цисплатина
Влияние цисплатина без добавок и в комбинации с соединением "L" на выживание BDF₁-мышей, которым привиты клетки IX 106 Р-388, показано в Табл. 7.

Эксперимент начинался в 1-й день после i.p. трансплантации опухоли. Эти эксперименты были закончены на 45-й день и количество выживших за этот период показано в Табл. 7. Как продемонстрировано в Табл.7, эффективность цисплатина возрастала в присутствии соединения "L". Хотя соединение "L" также могло значительно увеличить среднее время выживания, если назначалось в комбинации с цисплатином, эта комбинация была особенно эффективна после повторного назначения, особенно это касается длительной выживаемости (то есть до 45 дней). Длительное выживание мышей, пораженных опухолью Р-388 и получавших соединение "L" с цисплатином, составляло 86% по отношению к контрольному значению (0%). Однако длительное выживание мышей, получавших цисплатин без добавок, составляло только 43% к контрольной группе (Табл.7).

Влияние соединения "L" на действие цисплатина по подавлению роста опухоли - саркомы S-180
На основании кривых роста опухоли и среднего объема опухоли показан значительный ингибирующий эффект цисплатина и комбинации цисплатин + соединение "L" после однократного (Фиг.1) и повторного введений (Фиг.2).

На Фиг.3 показан эффект цисплатина по подавлению роста опухоли в сравнении c подобным эффектом смеси соединения "L" + цисплатин на 18-й день после трансплантации опухоли. Присутствие соединения "L" значительно усилило эффект цисплатина по подавлению роста опухоли (Фиг.3).

Фармакологическое соединение по изобретению, как оказалось, является очень надежным (необыкновенно нетоксичным даже для пораженных опухолью животных) и может быть использовано для увеличения эффективности и уменьшения побочных эффектов противоопухолевого лечения раковых больных, на протяжении которого пациент лечится известным противоопухолевым препаратом или его фармацевтически приемлемой кислотной аддитивной солью и дополнительно производным гидроксамовой кислоты по формуле I или его фармацевтически приемлемой кислотной аддитивной солью в соотношении (1-50):(1-50) массовых %.

III. Уменьшение нейротоксического побочного эффекта паклитакселя
В основном паклитаксель используется для лечения рака яичника, груди и легкого с увеличения выживаемости пациентов. Однако нейротоксические симптомы и сильная нейротоксичность для периферической НС ограничивает его использование. Предполагают, что механизм нейротоксичности, индуцированной паклитакселем, вызывает образование аномально больших и стабильных микротубулярных структур в периферических нервных волокнах, что приводит к нарушению аксонального транспорта. В следующих экспериментах путем внутрибрюшинного (в/б) введения паклитакселя в концентрации 5 мг/кг была индуцирована сенсорная нефропатия. Определяли скорость сенсорной нервной проводимости (ССНП) и нефропатию характеризовали наличием измененной ССНП.

Самцов крыс Wistar от Charles River Hungary подвергали анестезии путем внутрибрюшинной инъекции кетамина с использованием дозы 125 мг/кг. Используя квадратно-волновую стимуляцию, возбуждали Н-рефлекторно-подобный сенсорный ответ и двигательную реакцию и рассчитывали скорость сенсорной нервной проводимости.

В первый день эксперимента начали применять несколько режимов дозирования. Контрольные группы получали физиологический раствор. Группам, которые получали только паклитаксель или паклитаксель в сочетании с соединением "L", вводили паклитаксель на каждый второй день, начиная с 1-го дня и заканчивая 10-м днем. Ежедневное введение соединения "L" продолжали в течение 25 дней. Значения ССНП определяли на 27-й день. Полученные данные представлены в Табл. 8.

Из Табл. 8 можно видеть, что нормальная величина ССНП находится около 38 м/с, как было получено в контрольных группах. Введение соединения "А" не оказывало влияния на ССНП. Внутрибрюшинное введение паклитакселя существенно уменьшало величину ССНП, вызывая, таким образом, нефропатию. Одновременное введение паклитакселя и низких доз соединения "А" (12,5 и 25 мг/кг, соответственно) уже улучшало величины ССНП, тогда как полностью эти значения восстанавливались благодаря одновременному введению паклитакселя и 50 или 100 мг/кг доз соединения "А".

Вышеуказанные экспериментальные данные показывают, что комбинированная обработка паклитакселем и соединением формулы I может снять побочный нейротоксический эффект, полученный после обработки только паклитакселем.

IV. Уменьшение гематотоксичности карбоплатина
Использование карбоплатина, часто применяющегося в качестве противоопухолевого лекарственного препарата, ограничено из-за глубокой миелосуппрессии. Очевидно, что любое уменьшение миелосуппрессорного эффекта обеспечило бы дальнейшее распространение карбоплатина вследствие уменьшенной токсичности. Миелосуппрессорный эффект характеризовали по гематотоксичности карбоплатина.

Мышам вводили физиологический раствор (контрольная группа), только соединение "L", только карбоплатин и комбинацию карбоплатина и соединения "L" в течение 13 дней. Содержание белых кровяных клеток и тромбоцитов определяли до начала и после окончания тестирования. Карбоплатин вводили внутрибрюшинно в дозе 15 мг/кг/день, тогда как доза соединения "L" составляла 30 мг/кг/день в/б. Полученные данные представлены в Табл. 9.

Из представленных выше данных очевидно, что только соединение "L" не оказывает влияния ни на количество белых кровяных клеток, ни на количество тромбоцитов. Когда вводили только карбоплатин, то наблюдали значительное уменьшение количества белых кровяных клеток и тромбоцитов. Комбинированное введение карбоплатина и соединения "L" восстанавливало количество белых кровяных клеток до нормального уровня и в значительной степени нормализовало количество тромбоцитов.

Таким образом, гематотоксичность, индуцированную карбоплатином, можно уменьшить с помощью одновременного введения соединения "L".

V. Уменьшение желудочно-кишечной токсичности фторурацила
Фторурацил широко применяют для цитостатического лечения колоректального рака, злокачественных опухолей молочной железы, головы и шеи, однако, ограничение его дозы из-за токсичности для желудочно-кишечного тракта и костного мозга препятствует его использованию в более высоких, возможно, более эффективных дозах для клинического применения. В следующих экспериментах исследовали его токсический эффект на тонкую кишку.

Для исследований использовали 6-недельных самок мышей Balb/c. Животные получали стандартную лабораторную пищу и водопроводную воду по усмотрению исследователей. Фторурацил разбавляли физиологическим раствором и вводили внутрибрюшинно (в/б) либо сам фторурацил, либо фторурацил в сочетании с соединением "L". Контрольную группу животных обрабатывали физиологическим раствором, а соединение "L", растворенное в физиологическом растворе, вводили в/б еще одной группе животных. Каждая тест-группа состояла из 9 мышей. Возможные клинические симптомы и вес тела животных ежедневно контролировали.

Через 48 часов после обработки животных умерщвляли, удаляли тонкую кишку, промывали снаружи и внутри дистиллированной водой, содержащей 154 мМ хлорида натрия и 1 мМ дитиотреитола (ДТТ) в 1 л. Измеряли вес и длину кишок и замораживали их в жидком азоте. Кроме относительного веса кишки, повреждение тонкой кишки характеризовали активностью двух ферментов: тимидинкиназы и сахарозо-α-глюкозидазы. В день измерений ферментативной активности тонкие кишки растирали в порошок в жидком азоте и порошок суспендировали в изотоническом водном калиево-хлоридном растворе, содержащем 0.3% ДТТ. Весь гомогенат использовали для определения сахарозо-α-глюкозидазной активности, и полученный после центрифугирования (100000 g) цитозоль использовали для определения тимидинкиназной активности.

Активность тимидинкиназы характеризует уменьшение биосинтеза дезокситимидинмонофосфата (dTMP), предшественника биосинтеза ДНК. Сахарозо-α-глюкозидазная активность характеризует снижение пищеварительной функции слизистой после цитостатического лечения. Определения проводили, как описано в статье Bagrij с соавт. (Bagrij, Т. "Influence of uridine treatment in mice on the protection of gastrointestinal toxicity caused by 5-fluorouracil", Anticancer Res., 13, 789-94 (1993)). Полученные значения тимидинкиназной активности представлены в нмоль dTMP/час/см кишки, тогда как полученные значения сахарозо-α-глюкозидазной активности представлены как мкмоль глюкозы/час/см кишки. Последние результаты вместе с относительным весом кишки (в г/см кишки) просуммированы в Табл. 10.

После цитостатической обработки величина относительного веса кишки характеризует основные повреждения и прогрессирующее разрушение эпителия тонкой кишки. Из представленной Табл. 10 следует, что увеличивающиеся дозы фторурацила от 84 до 150 мг/кг вызвали зависимое уменьшение относительного веса кишки при монотерапии с помощью фторурацила. Введение только соединения "L" дало похожий результат в качестве контрольной группы. Однако комбинированная терапия с увеличивающимися дозами фторурацила и 200 мг/кг соединения "L" существенно восстанавливала относительный вес кишки до величины в контрольной группе.

Аналогичное дозозависимое уменьшение сахарозо-α-глюкозидазной и тимидинкиназной активности может наблюдаться во время монотерапии с фторурацилом. Хотя одновременное введение соединения "L" не может восстановить активности этих ферментов до первоначальных значений, тем не менее, можно наблюдать значительное восстановление в исследованном ряду доз. Таким образом, можно сделать вывод о том, что комбинированная терапия с использованием фторурацила и соединения "L" может эффективно уменьшать токсичность фторурацила для желудочно-кишечного тракта даже тогда, когда фторурацил вводится в дозе выше 150 мг/кг.

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевым действием со сниженными побочными эффектами, включающая в себя противоопухолевый агент, выбранный из группы, включающей препараты платины, аналоги пиримидина, производные такс-11-ен-9-она, фармацевтически приемлемые соли аналогов пиримидина с щелочными металлами и производное гидроксамовой кислоты формулы I

где R¹ и R² совместно со смежным атомом азота образуют пиперидиновую группу;
R³ является пиридильной группой;
Y является гидроксильной группой;
Х является аминогруппой;
R и В вместе образуют химическую связь;
А является химической связью,
или его физиологически приемлемую кислотную аддитивную соль в смеси с одним или более общепринятым(ыми) наполнителем(ями), где весовое соотношение двух активных агентов составляет (1 - 50) : (50 - 1).

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая в качестве производного гидроксамовой кислоты формулы I 0-(3-пиперидино-2-гидрокси-1-пропил)никотинамидоксим или его физиологически приемлемую кислотную аддитивную соль.

3. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая цисплатин в качестве противоопухолевого агента.

4. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая карбоплатин в качестве противоопухолевого агента.

5. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая фторурацил или его фармацевтически приемлемую соль с щелочным металлом в качестве противоопухолевого агента.

6. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая паклитаксель в качестве противоопухолевого агента.

7. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая доцетаксель в качестве противоопухолевого агента.

8. Способ снижения побочного(ых) эффекта(ов) при лечении опухолевых заболеваний противоопухолевым агентом, в соответствии с которым пациенту, страдающему от этого заболевания, в дополнение к противоопухолевому агенту, выбранному из группы, включающей препараты платины, аналоги пиримидина, производные такс-11-ен-9-она, фармацевтически приемлемые соли аналогов пиримидина с щелочными металлами, назначают эффективное количество производного гидроксамовой кислоты формулы I

где R¹, R², R³, R, X, Y, А и В такие, как указано в п.1,
или его физиологически приемлемой кислотной аддитивной соли.

9. Применение производного гидроксамовой кислоты формулы I

где R¹, R², R³, R, X, Y, А и В такие, как указано в п.1,
или его физиологически приемлемой кислотной аддитивной соли для приготовления фармацевтической композиции, обладающей противоопухолевым действием со сниженным(и) побочным(и) эффектом(ами), содержащей противоопухолевый агент, выбранный из группы, включающей препараты платины, аналоги пиримидина, производные такс-11-ен-9-она, фармацевтически приемлемые соли аналогов пиримидина с щелочными металлами.

10. Применение производного гидроксамовой кислоты формулы I

где R¹, R², R³, R, X, Y, А и В такие, как указано в п.1,
или его физиологически приемлемой кислотной аддитивной соли для снижения побочного(ых) эффекта(ов), имеющих место при лечении опухолевых заболеваний с помощью противоопухолевого агента, выбранного из группы, включающей препараты платины, аналоги пиримидина, производные такс-11-ен-9-она, фармацевтически приемлемые соли аналогов пиримидина с щелочными металлами.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13