Средство для стимуляции пролиферации клеток, состав для стимуляции пролиферации клеток и способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии

 

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к средствам, способствующим пролиферации клеток, и к применению этих средств в хирургии для лечения ран различного генеза: язв различной этиологии, длительно незаживающих ран, в том числе ран, образовавшихся после ожога. Средство для стимуляции пролиферации клеток содержит в качестве экстракта головного мозга стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития. Состав для стимуляции пролиферации клеток содержит водный раствор стерильного экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом солевом растворе. Способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии включает обработку раневой поверхности составом, содержащим стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом солевом растворе. Технический результат: средство и состав на его основе обеспечивают повышение эффективности стимулирования ангиогенеза и лечения язв различной этиологии, ожогов и длительно незаживающих ран. Средство и состав для стимуляции пролиферации клеток отличает также простая технология их получения. 3 с. и 16 з.п. ф-лы, 1 табл.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к средствам, способствующим пролиферации клеток, и к применению этих средств в хирургии для лечения ран различного генеза: язв различной этиологии; длительно незаживающих ран, в том числе ран, образовавшихся после ожога.

В настоящее время для стимуляции пролиферации клеток используют: ростовые факторы, полученные с применением рекомбинантной ДНК-технологии; а также выделенные из тканей животных или человека путем сложной очистки эмбриональные ткани, их гомогенаты и вытяжки из тканей, которые применяют для лечения различных патологий.

Так, известно средство для стимуляции пролиферации клеток в виде экстракта, полученного из бычьего гипоталамуса, гипофиза или мозга (см. Maciag Т., Cerundolo J., Ilsley S., Kelley P.R., Forand R.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -Vol.76, .11, pp.5674-5678, November 1979).

Серьезным недостатком известного средства является узость области его применения: оно предназначено лишь для стимуляции пролиферации культур клеток in vitro. Использование данного средства для стимуляции пролиферации клеток в организме невозможно вследствие иммунной реакции последнего на препарат.

Известен состав для стимуляции пролиферации клеток, включающий человеческий эндотелиальный ростовой фактор, подходящий носитель и гепарин (см. патент США 5827826, по кл. А 61 К 038/18, опубликован 27.10.1998).

Недостатком известного состава является то обстоятельство, что ростовой фактор получают по дорогостоящей и сложной рекомбинантной ДНК-технологии, состоящей из большого числа прецизионных операций. Данное средство содержит лишь один ростовой фактор, обладающий избирательным действием на эндотелиальные клетки, что сужает область применения этого средства и исключает его комплексное воздействие на раневой процесс. В последнее время было показано, что ряд ростовых факторов, как, например, bFGF, обладает значительно более выраженным воздействием на эндотелиальные клетки, что ставит под сомнение относительную эффективность данного состава. Не исследована эффективность применения данного состава для регенерации тканей и ангиогенеза. Не предусмотрено включение в известный состав противомикробных препаратов, что делает проблематичным использование его в условиях инфицированных ран.

Известен способ лечения ожогов II и III АБ степени, включающий нанесение биотрансплантата, в качестве которого на рану наносят суспензию фетальных тканей плода человека 16-20 недель (см. патент РФ 2122416, по кл. А 61 К 35/48, опубликован 27.11.1998).

Известный способ не предусматривает стерилизацию используемого состава, поэтому требуется строжайшее соблюдение условий стерильности при заборе фетальных тканей, чтобы не допустить дополнительного инфицирования пациента. Применение известного способа в условиях инфицированной раны может приводить к инактивации состава суспензии и усиленному размножению раневой флоры, для которой суспензия может служить хорошей питательной средой. Не решена проблема хранения фетальных тканей без потери активности состава. Кроме того, поскольку не предусмотрена экстракция биологически активных веществ из указанных субстратов, их содержание в суспензии относительное низкое.

Известно средство для стимуляции пролиферации клеток в виде культивированной ткани спинного мозга эмбриона человека 6-7-недельного развития (см. патент РФ 2090143, по кл. А 61 В 17/00, опубликован 20.09.1997).

Известное средство имеет узкую область применения, так как предназначено для лишь лечения спрингомиелии. Процесс культивирования ткани сложен, длителен и трудоемок; он значительно удорожает методику применения и увеличивает вероятность инфицирования материала. Следует также отметить и травматичность методики введения культивированной ткани.

Известен состав для стимуляции регенерации тканей при лечении заболеваний центральной нервной системы, содержащий суспензированную эмбриональную ткань мозга вместе с белково-нуклеиновыми экстрактами этой ткани (см. патент РФ 2129427, по кл. А 61 К 35/48, опубликован 27.04.1999).

Известный состав имеет ограниченную область применения, так как предназначен лишь для лечения заболеваний центральной нервной системы. Кроме того, способ введения состава в ликворное пространство мозга травматичен и небезопасен для больного.

Известен способ лечения ожогов глаз путем трансплантации гомотканей в область повреждения. В конъюнктиву вводят суспензию культивированных клеток эпителия роговицы, полученных из эмбрионов человека, в количестве 200000 клеток в 0,2 мл физиологического раствора. Для сохранения биоматериала используют метод низкотемпературного консервирования (см. патент РФ 2140241, по кл. А 61 F 9/007, опубликован 27.10.1999).

Известный способ лечения весьма специфичен и поэтому не может быть применен для регенерации других тканей. Культивирование клеток эпителия роговицы - сложный, трудоемкий процесс, который значительно удорожает способ и увеличивает риск инфицирования материала. Надо отметить также проблематичность низкотемпературного консервирования ввиду сложности метода и относительно низкого процента выхода жизнеспособных клеток после их размораживания.

Известен биологически активный препарат в виде сублимированного гомогенизата из тканей мозга (см. патент РФ 2071335, по кл. А 61 К 35/30, опубликован 10.01.1997).

Известный препарат предназначен для применения в ветеринарии, эффективность и безопасность его применения для лечения человека не исследована. В препарате относительно низкое содержание биологически активных веществ, а наличие значительного количества балластных веществ вызывает нежелательные побочные реакции. Получение известного препарата многостадийно, что усложняет процесс его изготовления.

Известен состав для стимуляции пролиферации клеток, содержащий сосудистый эндотелиальный ростовой фактор с полианионным соединением, включающим гепарин, производный от гепарина олигосахарид или гепарин-подобный олигосахарид (см. патент США 5851989, по кл. А 61 К 038/18, опубликован 22.12.1998).

К недостатку известного состава следует отнести чрезвычайно сложную технологию его изготовления.

Известен способ лечения длительно незаживающих ран, по которому после обработки полости раны и окружающей кожи дезинфицирующими и противомикробными средствами под хлорэтиловым местным обезболиванием в мышечных слоях раны формируют ложе, в которое укладывают криоконсервированную неонатальную или эмбриональную ткань селезенки и тимуса в соотношении 1:1 общей массой 7-8 мг/кг массы тела больного (см. авторское свидетельство СССР 1711896, по кл. А 61 К 35/26, опубликовано 15.02.1992).

В известном способе лечения не предусмотрена стерилизация используемого материала, поэтому высок риск дополнительного инфицирования пациента. Формирование ложа в слоях раны несет значительную опасность распространения инфекционного процесса за пределы раны. Имплантация ткани в известном способе, несмотря на применение хлорэтилового обезболивания, травматична для больного. Ввиду того, что не используется экстракция биологически активных веществ, их содержание в применяемом препарате относительно низкое, последний содержит много балластных соединений, которые могут вызывать побочные реакции у больного.

Наиболее близким по совокупности существенных признаков к заявляемому средству для пролиферации клеток и составу на его основе является принятое за прототип средство для стимуляции репарации роговицы в виде водного раствора экстракта головного мозга с концентрацией 2 мг/мл (см. авторское свидетельство СССР 1773401, по кл. А 61 К 35/30, опубликовано 07.11.1992).

Известный состав имеет узкую область применения, так как предназначен лишь для репарации роговицы. Следует отметить травматичность введения состава, что обусловливает необходимость наложения шва на глазное яблоко. При использовании мозга взрослого человека высока вероятность иммунной реакции на препарат. Из-за того, что не предусмотрена стерилизации средства, необходимо строжайшее соблюдение асептики при заборе мозга и при изготовлении состава, чтобы не допустить инфицирования больного.

Известен принятый за прототип способ лечения трофических язв и длительно незаживающих ран, включающий нанесение на рану и окружающую кожу сплошным слоем ранозаживляющего средства, в качестве которого наносят первородную сыровидную смазку кожи человеческого плода, подогретую до 35-37^oС (см. авторское свидетельство СССР 1718947, по кл. А 61 К 35/36, опубликовано 15.03.1992).

Известному способу лечения трофических язв и длительно незаживающих ран присущи серьезные недостатки. Сыровидная смазка кожи человеческого плода относительно бедна биологически активными соединениями; кроме того, методикой не предусмотрено их выделение из нативного вещества, поэтому во многих случаях лечения трофических язв, ожогов и длительно незаживающих ран данный способ оказывается недостаточно эффективным. Так как не предусмотрена стерилизация сыровидной смазки, велика опасность дополнительного инфицирования пациента. Из-за отсутствия в составе средства противомикробных препаратов его применение в условиях инфицированной раны может вызвать активизацию раневой флоры, для которой применяемый состав может послужить хорошей питательной средой.

Задачей являлась разработка такого средства для стимуляции пролиферации клеток и состава на его основе, которые могли бы быть получены по простой технологии и одновременно обеспечивали бы повышение эффективности стимулирования ангиогенеза и лечения язв различной этиологии, ожогов и длительно незаживающих ран.

Поставленная задача решается группой изобретений, объединенных единым изобретательским замыслом.

А именно задача решается тем, что в средстве для стимуляции пролиферации клеток, содержащем водный раствор экстракта головного мозга, в качестве экстракта головного мозга средство содержит стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития.

Задача решается также тем, что в составе для стимуляции пролиферации клеток, содержащем водный раствор экстракта головного мозга, в качестве экстракта головного мозга состав содержит стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом солевом растворе при следующем соотношении компонентов, мг/мл: Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,1 - 100 Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное Задача решается также тем, что в способе лечения ран, ожогов и язв различной этиологии, включающем местное использование ранозаживляющего средства, в качестве ранозаживляющего средства используют состав, содержащий стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом солевом растворе, при следующем соотношении компонентов, мг/мл: Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,5 - 20,0 Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное В результате проведенных исследований авторы обнаружили, что экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития эффективно стимулирует пролиферацию клеток эктодермального и мезодермального происхождения, а также гибридом, в том числе при выращивании указанных клеток в культуре. В отличие от экстракта мозга взрослого человека экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития обладает более высокой активностью в отношении стимуляции пролиферации данных клеток при культивировании их in vitro. Кроме того, ткань мозга человека на стадии его внутриутробного развития практически не обладает антигенной активностью, что позволяет вводить эту ткань, даже без ее предварительной обработки, в другой организм, не опасаясь иммунной реакции последнего.

Как установлено экспериментами авторов, диапазон концентраций экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) в составе для стимуляции пролиферации клеток составляет 0,1-100 мг/мл. При концентрации экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития менее 0,1 мг/мл стимулирующего пролиферацию клеток действия состава выявлено не было. Составы с концентрацией экстракта 100 мг/мл применять нецелесообразно из-за опасности раздражения тканей в месте введения (за счет гиперосмотичности состава).

Авторами экспериментально определено, что предпочтительный диапазон концентраций экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития для использования в способе лечения ран, ожогов и язв различной этиологии составляет 0,5-20,0 мг/мл.

Целесообразно использовать экстракт головного мозга плода человека 16-24 недель как наиболее доступный.

В состав для стимуляции пролиферации клеток может быть введен гепарин. Введение в состав гепарина стабилизирует состав и удлиняет стимулирующее действие экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития на пролиферацию клеток. При концентрации гепарина меньше 0,06 мг/мл этот эффект практически не определяется. Составы с концентрациями гепарина более 15 мг/мл использовать нецелесообразно ввиду возможного побочного действия препарата.

Предпочтительный диапазон концентраций гепарина при использовании состава в способе лечения ран, ожогов и язв различной этиологии составляет 0,6-12,0 мг/мл.

В состав для стимуляции пролиферации клеток может быть также введены препараты, обладающие антибактериальной и противогрибковой активностью. Введение в состав этих препаратов обеспечивает подавление соответственно бактериальной и грибковой флоры и предотвращает инактивацию ею экстракта головного мозга. Применять препараты, обладающие антибактериальной и противогрибковой активностью в концентрациях меньше 0,05 мг/мл нецелесообразно из-за отсутствия указанного эффекта. При концентрациях антибактериального препарата более 200 мг/мл и противогрибкового препарата более 2 мг/мл высок риск их побочных эффектов. Предпочтительная концентрация препарата, обладающего антибактериальной активностью, при использовании состава в способе лечения ран, ожогов и язв различной этиологии составляет 0,05-10,0 мг/мл.

В качестве антибактериального препарата может быть использован мирамистин, хлоргексидина биглюконат, диоксидин, гентамицин, цефотаксим (клафоран), цефоперазон и другие известные препараты. В качестве противогрибкового препарата может быть использован амфотерицин В, флуконазол (дифлюкан) и другие препараты.

В качестве растворителя могут быть использованы любые изотонические (изоосмотичные по отношению к плазме крови) солевые растворы, например изотонический раствор хлорида натрия (так называемый "физиологический раствор"), раствор Рингера и его модификации, раствор Хенкса, раствор Dulbecco с фосфатным буфером (Dulbecco's phosphate buffered saline) и другие известные изотонические солевые растворы.

При наличии выраженного болевого синдрома в состав могут вводиться местноанестезирующие препараты в количестве 10,0-50,0 мг/мл. Например, лидокаин в количестве 10-50 мг/мл, тримекаин в количестве 20-50 мг/мл. Концентрации местноанестезирующих препаратов менее 10 мг/мл не дают желаемого эффекта, а при концентрациях более 50 мл/мг высока вероятность развития побочных эффектов.

Экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития получают следующим образом. 35 г свежей мозговой ткани гомогенизируют в 50 мл 0,1 М NaCl микроразмельчителем тканей в течение 4 минут. Полученную суспензию перемешивают в течение 8-12 часов с помощью магнитной мешалки. Затем суспензию центрифугируют 2-2,5 часа при 13000 об/мин, отделяют супернатант, для осаждения растворимых липидов добавляют к нему 5 мг/мл сульфата стрептомицина, перемешивают до полного растворения и, если необходимо, доводят рН до 7, добавляя 1М NaOH. Полученную смесь выдерживают 20-24 часа, затем центрифугируют в течение 2,0-4,5 часов. Полученный супернатант стерилизуют фильтрованием через фильтр с порами 0,45 и 0,22 мкм или с помощью ультрафиолетового облучения и хранят далее при температуре +4^oС до употребления. При необходимости длительного хранения препарата, а также для того, чтобы повысить концентрацию биологически активных веществ в экстракте, последний подвергают лиофилизации. Лиофилизат сохраняется без потери активности в течение одного года при условии хранения его при температуре -30^oС. Выход экстракта составляет 350-600 мг белка при его концентрации 5-10 мг/мл. Концентрацию белка определяют биуретовым методом. Все операции проводят при температуре +(4-6)^oC, для приготовления растворов используют деионизованную воду.

Заявляемое средство и состав на его основе могут быть полезны везде, где для достижения желаемого эффекта требуется стимуляция пролиферации клеток. Например, при выращивании культур клеток in vitro, для стимулирования ангиогенеза при заболеваниях, сопровождающихся ишемией тканей, для стимуляции регенерации тканей при лечении ран, ожогов и язв различной этиологии, также при лечении язв желудочно-кишечного тракта. В последнем случае желательно использовать заявляемый состав в комбинации с антисекреторными и антацидными препаратами. В качестве антисекреторных препаратов можно применять Н2-гистаминоблокаторы и м-холинолитики, а в качестве антацидных - гидроокись алюминия, сукралфат, бикарбонат натрия, фосфалюгель и другие.

При использовании заявляемого состава для стимуляции пролиферации клеток новообразующихся сосудов (ангиогенеза) при заболеваниях, сопровождающихся ишемией тканей, таких как облитерирующий атеросклероз артерий нижних конечностей, диабетическая ангиопатия нижних конечностей, ишемическая болезнь сердца и другие; он может вводиться как местно (интраартериально, подкожно, внутримышечно), так и системно (внутривенно). Общее количество вводимого экстракта мозга может варьироваться от 0,01 мг до 100 мг на 1 кг веса тела в сутки. В состав могут быть добавлены противомикробные препараты из расчета 0,1-1000 мг на 1 кг веса тела в сутки, например цефотаксим (клафоран) в количестве 50 мг/кг веса тела в сутки или ампиокс в количестве 50 мг/кг веса тела в сутки.

Исследования влияния заявляемого состава на ангиогенез в ишемизированной ткани у млекопитающих проводилось на четырех группах кроликов весом от 3 до 3,5 кг. Каждая группа состояла из экспериментальной и контрольной групп, по 3 животных в каждой подгруппе. Всем этим животным была выполнена перевязка и иссечение бедренной артерии (на участке от наружной подвздошной до подколенной артерий) для создания экспериментальной ишемии задней конечности. Непосредственно после иссечения бедренной артерии (во время операции), а также на 10 и 12 сутки после операции животным экспериментальных подгрупп вводили раствор экстракта головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития, а животным контрольных подгрупп - раствор аналогичного состава, но без экстракта мозга.

I группа.

Экспериментальная подгруппа 1. Внутриартериальное введение раствора следующего состава (из расчета 0,3 мг экстракта - 3 мл раствора - на 1 кг веса), мг/мл: Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,1 Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное Контрольная подгруппа 2. Внутриартериальное введение стерильного изотонического раствора хлорида натрия (из расчета 3 мл раствора на 1 кг веса).

II группа.

Экспериментальная подгруппа 3. Внутриартериальное введение раствора следующего состава (из расчета 0,3 мг экстракта - 3 мл раствора - на 1 кг веса), мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,1
Гепарин (5 единиц) - 0,06
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Контрольная подгруппа 4. Внутриартериальное введение стерильного изотонического раствора хлорида натрия (из расчета 3 мл раствора на 1 кг веса), содержащего гепарин в количестве 0,06 мг (5 единиц) в 1 мл раствора.

III группа.

Экспериментальная подгруппа 5. Внутриартериальное введение раствора следующего состава (из расчета 5,0 мг экстракта - 0,05 мл раствора - на 1 кг веса), мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 100
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Контрольная подгруппа 6. Внутриартериальное введение стерильного изотонического раствора хлорида натрия (из расчета 0,05 мл раствора на 1 кг веса).

IV группа.

Экспериментальная подгруппа 7. Внутриартериальное введение раствора следующего состава (из расчета 5,0 мг экстракта - 0,05 мл раствора - на 1 кг веса), мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 100
Гепарин (1250 единиц) - 15
Цефотаксим - 200
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Контрольная подгруппа 8. Внутриартериальное введение раствора следующего состава (из расчета 0,5 мл раствора на 1 кг веса), мг:
Гепарин (1250 единиц) - 15
Цефотаксим - 200
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Внутриартериальное введение осуществляли во внутреннюю подвздошную артерию.

Всем животным было выполнено ангиографическое исследование непосредственно после иссечения бедренной артерии и на 30 сутки после операции. На основании ангиограмм, сделанных на 4-ой секунде после введения контраста, проводили морфологический анализ развития коллатеральных сосудов по следующей методике: на ангиограмму на область середины бедра накладывали шаблон, состоящий из расположенных рядами с промежутками 5 мм кругов диаметром 2,5 мм. Подсчитывали число контрастированных артерий в кругах и общее число кругов в области середины бедра. Ангиографический индекс определяли как отношение числа артерий во всех кругах к общему количеству кругов в данной области. Этот показатель отражает плотность развития артериальных коллатералий в середине бедра. Выраженность некротических изменений оценивалась макроскопически по следующей трехбальной системе: "0" - без изменений; "1" - изменение цвета; "2" - язва или некроз ограниченного участка; "3" - распространенная язва или некроз. На 30-е сутки эксперимента, после забивания кроликов, из их задних конечностей были изготовлены препараты для гистологического исследования. Результаты исследований приведены в таблице.

Гистологические исследования выявили увеличение плотности капилляров на 1 мм² у животных экспериментальных подгрупп: в I группе - в 2,3 раза; во II группе - в 3,1, в III группе - в 4,8 раза и в IV группе - в 5,9 раза по сравнению с животными контрольных подгрупп каждой группы.

Способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии осуществляют следующим образом. Язвенную (раневую) поверхность очищают от некротических масс с помощью известной антимикробной и ферментной терапии. На очищенную язвенную (раневую) поверхность накладывают стерильную прокладку (например, из марли), смоченную стерильным составом, содержащим экстракт головного мозга человека на стадии внутриутробного развития в стерильном изотоническом солевом растворе, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,5 - 20,0
Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное
В состав может быть добавлен гепарин в количестве 0,6-12 мг/мл; препарат, обладающий антибактериальной активностью, в количестве 0,05-10,0 мг/мл; препарат, обладающий противогрибковой активностью, в количестве 0,05-2,0 мг/мл, а также местноанестезирующий препарат в количестве 10,0-50,0 мг/мл.

Марлевую прокладку сверху можно закрыть непроницаемой для воды пленкой, например из целлофана, для предотвращения испарения раствора и создания на поверхности язвы (раны) влажной среды. В этом случае пленку фиксируют марлевым бинтом. При необходимости создания наружной компрессии в случае лечения трофической язвы применяют лечебный компрессионный трикотаж (гольфы, чулки), эластичные бинты или другие известные приспособления, например сапожок Лебедева, описанный в патенте РФ 2146510, по кл. А 61 Н 9/00, опубликован 20.03.2000. Осуществляют перевязки, включающие обработку язвы (раны) растворами антисептиков и смену прокладки с составом 1-2 раза в сутки до заживления.

Пример 1. Больная В. , 72 года. Диагноз: варикозная болезнь в стадии декомпенсации. Трофическая язва левой голени. Язва (4,5 см²) существует в течение 2-х лет, несмотря на применяемые разнообразные способы лечение (эластическое бинтование, ежедневные перевязки с использованием ируксола, левомеколя, солкосерила и других препаратов). Больную беспокоят сильные боли в области язвы (принимает по 6 таблеток анальгина в день).

Больной был выписан сапожок Лебедева и начато лечение заявляемым способом. Ежедневно после обработки язвенной поверхности раствором хлоргексидина биглюконата 0,05% на язву накладывали марлевую прокладку, смоченную составом, содержащим стерильный экстракт головного мозга человека на стадии внутриутробного развития в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, гепарин, цефотаксим (клафоран), амфотерицин В и лидокаин, при следующем соотношению компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,5
Гепарин - 0,6
Цефотаксим - 10,0
Амфотерицин В - 0,2
Лидокаин - 50,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Через 6 дней отмечен рост грануляций, подъем дна язвы, начало краевой эпителизации, практически исчезли боли в области язвы. Для перевязок начали использовать раствор следующего состава, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 20,0
Гепарин - 12,0
Цефотаксим - 1,0
Амфотерицин В - 0,05
Лидокаин - 10,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Марлевую прокладку, смоченную данным раствором, стали покрывать сверху целлофановой пленкой. Через 30 дней наблюдали полную эпителизацию язвенной поверхности с минимальным рубцеванием.

Пример 2. Больная Т., 45 лет. Диагноз: посттромботическая болезнь. Трофическая язва правой голени. Язва открылась 5 лет тому назад после незначительной травмы. Проводимая терапия (эластическое бинтование, ежедневные перевязки с использованием хлоргексидина биглюконата, левомеколя, ируксола, солкосерила и других препаратов) была неэффективна. На момент первого осмотра площадь язвы составляла 15 см², глубина - до 10 мм, грануляции вялые, края - некротизированные, обильное гнойное отделяемое.

Больной был назначен сапожок Лебедева, начат курс лечения ируксолом. Через 6 дней после значительного очищения язвенной поверхности от некротических масс начато лечение заявляемым способом. На язву ежедневно накладывали марлевую прокладку, смоченную стерильным составом, содержащим экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, гепарин, клафоран и дифлюкан, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,5
Гепарин - 0,6
Клафоран - 10,0
Дифлюкан - 2,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Через 7 дней лечения отмечено полное исчезновение гнойного отделяемого, выраженный рост грануляционной ткани, краевая эпителизация. Далее проводили ежедневные перевязки с раствором следующего состава, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 20,0
Гепарин - 12,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Марлевую прокладку покрывали сверху целлофановой пленкой. Заживление язвы произошло через 47 дней (полная эпителизация поверхности с минимальным рубцеванием).

Пример 3. Больная М., 30 лет. Диагноз: посттромботическая болезнь. Трофическая язва левой голени. Язва возникла после незначительной травмы 1 год назад. Несмотря на разнообразные методы лечения (троксевазин, компламин, лазерная терапия, эластическое бинтование, ежедневные перевязки с использованием пливасепта, ируксола, актовегина), тенденции к заживлению язвы отмечено не было. На момент первого осмотра площадь язвы составляла 6 см², глубина - до 8 мм, края некротизированы, обильное гнойное отделяемое.

Был проведен курс терапии с использованием левомекодя (ежедневные перевязки вместе с эластическим бинтованием). Через 7 дней на очистившуюся язвенную поверхность стали накладывать повязки с использованием состава, содержащего экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном растворе Dulbecco с фосфатным буфером (Dulbecco's phosphate buffered saline), гепарин, клафоран и амфотерицин В, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 2,0
Гепарин - 3,6
Клафоран - 5,0
Амфотерицин В - 0,1
Стерильный раствор Dulbecco с фосфатным буфером - Остальное
Для наружной компрессии применяли эластические гольфы (лечебный трикотаж фирмы ITA-MED, США). Через 5 дней гнойное отделяемое полностью исчезло, наблюдался активный рост грануляций, краевая эпителизация. Полная эпителизация язвенной поверхности произошла через 53 дня от начала лечения заявляемым способом.

Пример 4. Больная О., 15 лет. Диагноз: ожог кипятком обоих бедер II-IIIA степени-5% поверхности тела. Лечение начато с 1-х суток с момента травмы. На ожоговые поверхности 1 раз в сутки под целлофановую пленку накладывали марлевые прокладки, смоченные раствором, содержащим стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия и тримекаин, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 20,0
Тримекаин - 50,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Перевязки выполняли 2 раза в день. С 5-х суток с момента травмы ввиду значительного уменьшения болей для перевязок стали использовать следующий состав, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 20,0
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Течение раневого процесса гладкое. На 14-е сутки с момента травмы наступила полная эпителизация ожоговых поверхностей без грубых рубцовых изменений.

Пример 5. Больная Ц., 60 лет. Диагноз: декомпенсированный сахарный диабет II типа. Диабетическая ангиопатия нижних конечностей. Состояние после ампутации левой нижней конечности на уровне верхней трети бедра. В послеоперационный период развилось нагноение культи с расхождением швов. Обычная местная терапия (ежедневные перевязки с ируксолом, левомеколем, пливасептом и т. п. ), проводившаяся в течение 2-х недель, оказалась малоэффективной. В связи с этим был применен заявляемый способ лечения: на рану ежедневно накладывали марлевую прокладку, смоченную составом, содержащим стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия, гепарин, лидокаин и мирамистин, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 0,5
Гепарин - 0,6
Лидокаин - 10,0
Мирамистин - 0,05
Стерильный изотонический раствор хлорида натрия - Остальное
Через 3-е суток рана полностью очистилась, заполнена сочными грануляциями, по окружности раны - краевая эпителизация. Значительно уменьшилась болезненность раны. С 4-х суток на рану стали накладывать марлевую прокладку (под целлофановую пленку), смоченную составом, содержащим стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития в стерильном растворе Dulbecco с фосфатным буфером (Dulbecco's phosphate buffered saline), гепарин и мирамистин, при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Стерильный экстракт головного мозга человека на стадии его внутриутробного развития (по белку) - 20,0
Гепарин - 12,0
Мирамистин - 0,05
Стерильный раствор Dulbecco с фосфатным буфером - Остальное
На 8-е сутки наблюдали полное заживление раны.

Как видно из приведенных выше примеров, заявляемые средство и состав обладает сильным и комплексным воздействием на процессы регенерации тканей и ангиогенеза, не проявляет антигенных свойств, что позволяет вводить их в организм больного без побочных эффектов. Заявляемое средство допускает длительное хранение без потери его активности.

Формула изобретения

1. Средство для стимуляции пролиферации клеток, характеризующееся тем, что оно содержит экстракт, полученный гомогенизацией головного мозга плода человека на стадии его внутриутробного развития в изотоническом солевом растворе, перемешиванием полученной суспензии в течение 8-12 ч и последующим центрифугированием упомянутой суспензии в течение 2-2,5 ч при 13000 об/мин, отделением супернатанта, добавлением к нему сульфата стрептомицина для осаждения растворимых липидов, нейтрализацией полученной смеси и выдержки ее в течение 20-24 ч, последующим центрифугированием в течение 2,0-4,5 ч, стерилизацией полученного супернатанта и его лиофилизации.

2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что в качестве головного мозга плода человека на стадии его внутриутробного развития используют головной мозг плода человека 16-24 недель.

3. Состав для стимуляции пролиферации клеток, характеризующийся тем, что содержит экстракт, полученный гомогенизацией головного мозга плода человека на стадии его внутриутробного развития в изотоническом солевом растворе, перемешиванием полученной суспензии в течение 8-12 ч и последующим центрифугированием упомянутой суспензии в течение 2-2,5 ч при 13 000 об/мин, отделением супернатанта, добавлением к нему сульфата стрептомицина для осаждения растворимых липидов, нейтрализацией полученной смеси и выдержки ее в течение 20-24 ч, последующим центрифугированием в течение 2,0-4,5 ч, стерилизацией полученного супернатанта и его лиофилизации, и стерильный изотонический солевой раствор при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Экстракт (по белку) - 0,1-100
Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное
4. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3, отличающийся тем, что в качестве головного мозга плода человека на стадии его внутриутробного развития используют головной мозг плода человека 16-24 недель.

5. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3, отличающийся тем, что в качестве упомянутого солевого раствора содержит раствор хлорида натрия.

6. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3, отличающийся тем, что дополнительно содержит гепарин при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Экстракт (по белку) - 0,1-100
Гепарин - 0,06-15
Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное
7. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3 или 6, отличающийся тем, что дополнительно содержит препарат, обладающий антибактериальной активностью, в количестве 0,05-200,0 мг/мл.

8. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3, или 6, или 7, отличающийся тем, что дополнительно содержит препарат, обладающий противогрибковой активностью, в количестве 0,05-2,0 мг/мл.

9. Состав для стимуляции пролиферации клеток по п.3, или 6, или 7, или 8, отличающийся тем, что дополнительно содержит местно-анестезирующий препарат в количестве 10,0-50,0 мг/мл.

10. Способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии, характеризующийся тем, что он включает обработку раневой поверхности и окружающей кожи противомикробным и ферментным средствами, наложение на упомянутую поверхность стерильной прокладки, смоченной стерильным составом, содержащим экстракт, полученный гомогенизацией головного мозга плода человека на стадии его внутриутробного развития в изотоническом солевом растворе, перемешиванием полученной суспензии в течение 8-12 ч и последующим центрифугированием упомянутой суспензии в течение 2-2,5 ч при 13 000 об/мин, отделением супернатанта, добавлением к нему сульфата стрептомицина для осаждения растворимых липидов, нейтрализацией полученной смеси и выдержки ее в течение 20-24 ч, последующим центрифугированием в течение 2,0-4,5 ч, стерилизацией полученного супернатанта и его лиофилизации, и стерильный изотонический солевой раствор при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Экстракт (по белку) - 0,5-20,0
Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное
производят смену упомянутой прокладки 1-2 раза в сутки до эпитализации раневой поверхности.

11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что в качестве головного мозга плода человека упомянутый состав содержит экстракт головного мозга плода человека 16-24 недель.

12. Способ по п.10, отличающийся тем, что в качестве стерильного изотонического солевого раствора упомянутый состав содержит раствор хлорида натрия.

13. Способ по п.10, отличающийся тем, что в упомянутый состав дополнительно вводят гепарин при следующем соотношении компонентов, мг/мл:
Экстракт (по белку) - 0,5-20,0
Гепарин - 0,6-12,0
Стерильный изотонический солевой раствор - Остальное
14. Способ по п.10 или 13, отличающийся тем, что в упомянутый состав дополнительно вводят препарат, обладающий антибактериальной активностью, в количестве 0,05-10,0 мг/мл.

15. Способ по п.14, отличающийся тем, что в качестве препарата, обладающего антибактериальной активностью, вводят цефотаксим в количестве 1,0-10,0 мг/мл.

16. Способ по п.10, или 13, или 14, отличающийся тем, что в упомянутый состав дополнительно вводят препарат, обладающий противогрибковой активностью, в количестве 0,05-2,0 мг/мл.

17. Способ по п.16, отличающийся тем, что в качестве препарата, обладающего противогрибковой активностью, вводят амфотерицин B в количестве 0,05-0,2 мг/мл.

18. Способ по п. 10, или 13, или 14, или 16, отличающийся тем, что в упомянутый состав дополнительно вводят местноанестезирующий препарат в количестве 10,0-50,0 мг/мл.

19. Способ лечения ран, ожогов и язв различной этиологии по п.18, отличающийся тем, что в качестве местноанестезирующего препарата вводят лидокаин.

РИСУНКИ

Рисунок 1