Способ диагностики идиопатической рестриктивной кардиомиопатии

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии. Способ обеспечивает высокую специфичность и прост в исполнении. Проводят исследование миокарда, при этом исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотно-кислым серебром, в препаратах определяют площадь ядер клеток стромы и ядра кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции в виде наличия микроядрышек и кольцевидных ядрышек, и при средней площади ядер клеток стромы более 40 мкм² и доле ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции не менее 30% диагностируют идиопатическую рестриктивную кардиомиопатию. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно кардиологии, кардиохирургии, и может быть использовано при диагностике идиопатической рестриктивной кардиомиопатии (РКМП).

Идиопатическая РКМП по сравнению с другими первичными заболеваниями миокарда встречается крайне редко. Несмотря на наличие семейных форм заболевания (Fatkin D., Graham К., 2001), генетический дефект еще не идентифицирован.

Основным критерием постановки диагноза идиопатической РКМП является исключение известных первичных и вторичных кардиомиопатий, ассоциированных с рестриктивным типом нарушения диастолической функции миокарда (Report of the 1995 WHO/International Society and Federation of Cardiology. Task Force on the Definition and Classification of Cardiomyopathies).

В развернутой стадии заболевания диагностика рестриктивной кардиомиопатии возможна с помощью эхокардиографического исследования. В соответствии с этим способом оценивают тяжесть нарушения диастолической функции по рестриктивному типу, толщину стенок левого желудочка (ЛЖ) и межжелудочковой перегородки (МЖП), размер полости левого желудочка, размер полости левого (ЛП) и правого (ПП) предсердий. В далеко зашедшей стадии заболевания при уменьшении размера полости левого желудочка и увеличении размера левого предсердия более 6,0 см и при отсутствии патологии митрального клапана и других врожденных и приобретенных причин дилатации предсердий диагностируют РКМП. Данный способ принят за прототип (Шиллер Н., Осипов М.А. Клиническая эхокардиография //М.: Мир, 1993, с. 92-99: 347).

Основным недостатком данного способа является его неспецифичность, что практически исключает дифференциальную диагностику между РКМП и множеством заболеваний, вызывающих рестриктивный тип нарушения диастолической функции, и требует осуществления дополнительных дорогостоящих методов: молекулярно-генетических, иммуногистохимических и других. Диагноз идиопатической РКМП чрезвычайно труден и нередко он ставится на основании секционных данных.

Задачей изобретения является создание способа диагностики идиопатической РКМП, обладающего высокой специфичностью и не требующего использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе диагностики идиопатической рестриктивной кардиомиопатии путем исследования миокарда, согласно изобретению исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотно-кислым серебром, в препаратах определяют площадь ядер стромальных клеток и ядра кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции в виде наличия микроядрышек и кольцевидных ядрышек, и при средней площади ядер стромальных клеток более 40 мкм² и доле ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции не менее 30% диагностируют идиопатическую рестриктивную кардиомиопатию.

Авторами были проведены исследования, в которых избирательная импрегнация ядрышек солями серебра изучалась в кардиомиоцитах и стромальных клетках миокарда практически здоровых лиц, больных артериальными гипертензиями различного генеза, ишемической болезнью сердца, идиопатической гипертрофической (ГКМП), дилатационной, рестриктивной кардиомиопатиями. Всего обследовано 82 человека: практически здоровых лиц - 7, больных гипертонической болезнью II стадии - 10, гипертонической болезнью III стадии - 11, артериальными гипертензиями различного генеза - 11, ИБС с постинфарктным ремоделированием (исходно, на высоте аноксии, и в период реперфузии) - 20, гипертрофической кардиомиопатией - 7, дилатационной кардиомиопатией - 13, рестриктивной кардиомиопатией - 3.

При анализе миокарда больных из описанных выше групп у практически здоровых лиц, больных АГ различного генеза, постинфарктным ремоделированием, идиопатической гипертрофической и дилатационной кардиомиопатиями отсутствовали ядра кардиомиоцитов, содержащие микроядрышки, а также кольцевидные ядрышки.

При анализе гистологических препаратов миокарда практически здоровых лиц встречались одиночные малоактивные ядра стромальных клеток, содержащих точечные ядрышки (0,2+/-0,06). При ГБ II-III стадии увеличивается количество стромальных клеток в анализируемых полях зрения (1,2+/-0,7). При ГБ III стадии, осложненной ХПН I стадии, а также у больных ГБ и постинфарктным ремоделированием, осложненных тяжелой хронической сердечной недостаточностью, присутствовали единичные ядра фибробластоподобных клеток, содержащие более 5 и более Ag-гранул и единичные ядра кардиомиоцитов, содержащие ядрышки, в которых отсутствовали Ag-гранулы. Однако во всех случаях размер ядер кардиомиоцитов несоизмеримо больше, чем ядра стромальных клеток.

Результаты исследования гистологических препаратов миокарда группы больных идиопатической рестриктивной кардиомиопатией представлены в таблице.

Анализ результатов показал следующее. Во всех отделах миокарда обнаружены ядра стромальных клеток, которые, как правило, имели овальную форму, отличались очень большим размером, а некоторые из них были сопоставимы с ядрами кардиомиоцитов. Максимальная площадь ядер стромальных клеток колебалась в различных отделах миокарда от 57,7 мкм² в левом желудочке до 88,4 мкм² в правом предсердии. Средние значения площади ядер стромальных клеток в различных отделах миокарда достоверных различий не имели и варьировали от 37,43 мкм² в миокарде левого желудочка до 44,12 мкм² в миокарде правого предсердия.

Доля ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции, характеризующегося наличием микроядрышек и кольцевидных ядрышек, составляла не менее 30%.

Таким образом, проведенные исследования показывают высокую специфичность предложенного способа диагностики идиопатической РКМП.

Способ осуществляют, например, следующим образом.

В качестве исследуемого материала могут быть использованы интраоперационный материал миокарда, кардиобиоптаты, экспресс-аутопсии миокарда (левый и правый желудочки, сосочковые мышцы, предсердия). Биоптат миокарда помещают в жидкий азот, готовят криостатные срезы толщиной 10 мкм, размещают их на предметных стеклах, высушивают на воздухе, фиксируют смесью метиловый спирт/ледяная уксусная кислота в отношении 3:1 в течение 10 минут и ополаскивают дистиллированной водой. После высушивания на воздухе препараты обрабатывают в 2 N растворе муравьиной кислоты в течение 20 минут. По окончании инкубации стекла повторно ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают 50% раствором нитрата серебра по стандартной методике (Howell W.M., Black D.A. Controlled silver staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer: a one step method. Experientia. 1980; 36:1014-15) в модификации, предложенной авторами (Мамаев Н.Н., Гудкова А.Я., Аминева Х.К., Алмазов В.А. Метод оценки белоксинтезирующей функции кардиомиоцитов человека. Архив анатомии гистологии и эмбриологии 1989; 5:69-72). Для этого на предметное стекло со срезами миокарда наносят 2 капли 2% водного раствора желатина, приготовленного на 1% водном растворе муравьиной кислоты и 4 капли 50% водного раствора нитрата серебра. Препарат накрывают покровным стеклом и оставляют при комнатной температуре на 1 минуту. Затем переносят в камеру с увлажненным и подогретым до 68-70°С воздухом и инкубируют 2-3 минуты. Препараты докрашивают 2% водным раствором краски Гимза, приготовленным на фосфатном буфере (рН 6.8). Количественный анализ проводят под микроскопом при увеличении ×1000 (например, Карл-Цейс, Йена). В каждом случае анализируют не менее 200 ядер кардиомиоцитов и стромальных клеток, определяют площадь ядер стромальных клеток и ядра кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции в виде наличия микроядрышек и кольцевидных ядрышек, и при средней площади ядер стромальных клеток более 40 мкм² и доле ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции не менее 30% диагностируют идиопатическую рестриктивную кардиомиопатию.

Способ иллюстрируется следующим клиническим примером.

Обследована больная С., 29 лет, с семейной формой рестриктивной кардиомиопатии. Период наблюдения составил 12 лет. Ведущим синдромом в клинической картине заболевания у обследованной пациентки с идиопатической РКМП являлась кахексическая стадия застойной, преимущественно правожелудочковой сердечной недостаточности, рефракторная к проводимой терапии. Это проявлялось прогрессирующей слабостью, набуханием вен шеи, отеками лица, асцитом, анасаркой. Семейный анамнез включает смерть отца обследованной пациентки, которая произошла внезапно в возрасте 29 лет, смерть плодов во внутриутробном периоде у двух членов семьи, в том числе у обследованной пациентки, а также смерть младенцев в течение первого года жизни. Окончательный клинический диагноз отцу пациентки был поставлен только на основании анализа секционных данных, которые послужили основным доводом в пользу идиопатической рестриктивной кардиомиопатии у больной С. Было проведено исследование экспресс-аутопсии различных отделов миокарда (левое и правое предсердие, свободная стенка левого и правого желудочка, сосочковая мышца слева и справа и межжелудочковая перегородка). Подготовку препаратов и их окрашивание проводили по описанной выше методике. Результаты представлены в таблице. Средняя площадь ядер стромальных клеток составляла более 40 мкм², а доля ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции не менее 30%.

Использование предложенного способа диагностики идиопатической рестриктивной кардиомиопатии обеспечивает высокую специфичность и точность диагностики без использования сложных и дорогостоящих технических средств.

Формула изобретения

Способ диагностики идиопатической рестриктивной кардиомиопатии путем исследования миокарда, отличающийся тем, что исследуют биоптаты миокарда, которые окрашивают азотно-кислым серебром, в препаратах определяют площадь ядер клеток стромы и ядра кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции в виде наличия микроядрышек и кольцевидных ядрышек и при средней площади ядер клеток стромы более 40 мкм² и доле ядер кардиомиоцитов с признаками нарушения белково-синтетической функции не менее 30% диагностируют идиопатическую рестриктивную кардиомиопатию.