Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) при сальмонеллезах животных
Владельцы патента RU 2257581:
Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (RU)
Изобретение относится к ветеринарии. Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации при сальмонеллезах животных, включающий выращивание бактериальной массы сальмонелл, ее осаждение, обработку 12%-ным раствором натрия хлорида, автоклавирование при температуре 121°С в течение 20 минут, добавление детергента, осаждение центрифугированием при 8-9 тыс. об/мин в течение 30-35 минут и использование надосадочной жидкости (липополисахариднопротеиновый комплекс) для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана. Способ является экономичным и доступным и позволяет получить активный и специфичный эритроцитарный диагностикум.
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к приготовлению диагностических препаратов, и может бить использовано для серологической диагностики сальмонеллезов животных.
Известен способ изготовления эритроцитарных диагностикумов для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). (См. ″Способ получения эритроцитарных диагностикумов″, а.с. №648228, авт. И.Я.Мошиашвили, С.И.Елкина и Н.Е.Конделаки).
Недостатками указанного способа являются сложность технологии приготовления диагностикума, заключающаяся в использовании для сенсибилизации эритроцитов специфического белкового сенситина, и его танизация, проведение дополнительной сенсибилизации эритроцитов неспецифическим белком при температуре 4-8°С в течение 18-20 ч и консервации 4%-ным формалином в фосфатно-буферном растворе.
Целью данного изобретения является упрощение технологии приготовления диагностикума путем разработки чувствительного, доступного для серийного производства, стабильного, с длительным сроком хранения, препарата для ускоренной диагностики сальмонеллезов, позволяющего своевременно и наиболее полно выявить больных животных и пригодного для проведения массовых серологических исследований.
Технический результат, который может быть получен при реализации заявленного изобретения, заключается в упрощении технологии приготовления диагностикума.
Предлагаемый нами способ приготовления эритроцитарного диагностикума заключается в следующем: суточную бульонную культуру сальмонелл осаждают путем центрифугирования, доводят ее концентрацию до 25 млрд микробных клеток в 1 мл путем внесения 12%-ного раствора натрия хлорида и подвергают автоклавированию при давлении 1 атм. (121°С) в течение 20 минут.
После автоклавирования бакмассу охлаждают до температуры 40-45°С и добавляют 2% детергента (ПАВ - поверхностно-активное вещество). Полученную взвесь сальмонелл выдерживают в водяной бане при температуре 45-50°С в течение 40-45 минут, периодически встряхивая. Затем ее осаждают центрифугированием при 8-9 тыс. об/мин в течение 30-35 минут. Надосадочную жидкость (липополисахаридопротеиновый комплекс) используют в качестве сенситина для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана. Сенсибилизацию эритроцитов проводят в водяной бане при температуре 45°С в течение 1 часа, периодически встряхивая. После этого антиген (липополисахаридопротеиновый комплекс) трижды отмывают физиологическим раствором центрифугированием в течение 15-20 мин при 1500 об/мин (с целью удаления избытка сенситина). Затем взвесь сенсибилизированных эритроцитов доводят до 5%-ной концентрации физиологическим раствором и консервируют добавлением формалина с таким расчетом, чтобы концентрация формальдегида составила 0,3%.
Готовый диагностикум проверяют на активность и специфичность с использованием сывороток крови от заведомо здоровых животных, от больных сальмонеллезами телят и абортировавших на почве сальмонеллезов овцематок. В качестве контроля используют гипериммунную сальмонеллезную сыворотку.
Для постановки РНГА используют 2,5%-ные формалинизированные и сенсибилизированные эритроциты.
С целью проверки активности и специфичности приготовленного диагностикума нами проведены производственные испытания на 1018 пробах сывороток крови от абортировавших на почве сальмонеллезов и 1019 пробах клинически здоровых овцематок, а также на 45 пробах больных сальмонеллезами и 75 - здоровых телят.
В результате испытания разработанного диагностикума получены положительные реакции на сальмонеллезы в титрах 1:400-1:6400 и выше с оценкой в 3-4 креста, а сыворотки крови от здоровых животных дали отрицательный результат. Исследования сывороток в РНГА сопровождались положительным и отрицательным контролем.
Во всех хозяйствах, где испытывали диагностикум в РНГА, диагноз на сальмонеллезы подтвержден бактериологически.
Таким образом, проведенные исследования показали активность и специфичность эритроцитарного диагностикума для РНГА, изготовленного по вышеописанному способу. Кроме того, последний является экономичным и доступным в производстве диагностическим препаратом как в лабораторных, так и биофабричных условиях.
Способ получения эритроцитарного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации при сальмонеллезах животных, включающий выращивание бактериальной массы сальмонелл, ее осаждение, обработку 12%-ным раствором натрия хлорида, автоклавирование при температуре 121°С в течение 20 мин, добавление детергента, осаждение центрифугированием при 8-9 тыс. об./мин в течение 30-35 мин и использование надосадочной жидкости (липополисахариднопротеиновый комплекс) для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов барана.
