Бис-(моноэтаноламин) 3 -[(2z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4h-пиразол-4-илиден] гидразино]-2 -гидрокси-[1,1 -бифенил]-3-карбоновой кислоты

Изобретение относится к улучшенному миметику тромбопоэтина (ТРО), представляющему собой бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. Кроме того, объектами изобретения являются: фармацевтическая композиция на основе указанной соли соединения, способ лечения тромбоцитопении у млекопитающего, способ усиления продуцирования тромбоцитов у млекопитающего и способы получения указанной фармацевтической композиции и указанной соли соединения. Технический результат - более высокая растворимость заявляемой соли по сравнению со свободной кислотой. Благодаря этому облегчается получение фармацевтической композиции и повышается биологическая доступность при использовании указанной соли в качестве агониста рецептора ТРО для усиления продуцирования тромбоцитов, а также при лечении тромбоцитопении. 6 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл.

 

Данное изобретение относится к улучшенному миметику тромбопоэтина (который далее в описании сокращенно называется ТРО), соли бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты. Данное соединение представлено структурой I:

Соединение по данному изобретению применимо в качестве агониста рецептора ТРО, в частности, для усиления продуцирования тромбоцитов.

Подробное описание изобретения

3'-{N'-[1-(3,4-диметилфенил)-3-метил-5-оксо-1,5-дигидропиразол-4-илиден]гидразино}-2'-гидроксибифенил-3-карбоновая кислота представляет собой соединение, которое наряду с его фармацевтически приемлемыми солями, гидратами, сольватами и сложными эфирами раскрыто и заявлено как применимое в качестве агониста рецептора ТРО, в частности, для усиления продуцирования тромбоцитов, а также для лечения тромбоцитопении в Международной заявке № PCT/US 01/16863 с датой международной подачи заявки 24 мая 2001 года; Международной публикации WO 01/89457 с датой международной публикации 29 ноября 2001 года, которая полностью включена в данное описание в виде ссылки. В Международной заявке № PCT/US 01/16863 не раскрыта особо солевая форма какого-либо из описанных здесь соединений.

Неожиданно было обнаружено, что соль бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты обладает рядом преимуществ по сравнению со свободной кислотой. Свободная кислота плохо растворима в воде (приблизительно 5 миллиграммов на миллилитр). Плохая растворимость негативно влияет на возможность получения из свободной кислоты фармацевтических лекарственных форм и снижает биологическую доступность соединения в условиях in vivo.

В то время как свободная кислота в значительной степени применима в качестве агониста рецептора ТРО, особенно для усиления продуцирования тромбоцитов, а также при лечении тромбоцитопении, соль бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты обладает дополнительными преимуществами повышенной растворимости и биологической доступности.

Соединение данного изобретения, бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (называемое далее активным ингредиентом) применимо в качестве агониста рецептора ТРО, в частности, для продуцирования тромбоцитов и, особенно, для лечения тромбоцитопении. Указанная тромбоцитопения может быть обусловлена угнетением спинного мозга, вызванным химиотерапией или лучевой терапией, трансплантацией органа, трансплантантом костного мозга, стволовых клеток или печени, идиопатической тромбоцитопенической пурпурой (ITP), миелодиспластическими синдромами (MDS), апластической анемией или лейкемией, вирусной, грибковой, микробной или паразитарной инфекцией, дисфункцией печени, хирургическими операциями, а также лечением противовирусными средствами или антибиотиками.

Активный ингредиент может вводиться в обычной дозированной лекарственной форме, полученной смешением активного ингредиента с традиционным фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем в соответствии с хорошо известными для квалифицированных специалистов способами, которые описаны в Международной заявке № PCT/US 01/16863. Термин «парентеральный» в данном описании включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, назальное, ректальное, интравагинальное или интраперитонеальное введение. Обычно пероральное введение является предпочтительным.

Термин «моноэтаноламин» в данном описании означает 2-аминоэтанол.

Дозы активного ингредиента данного изобретения в лекарственных формах стандартной дозы, как описано выше, будут составлять эффективное нетоксичное количество, предпочтительно выбранное в интервале от 0,001 до 100 мг/кг общей массы тела, предпочтительно от 0,001 до 50 мг/кг. При лечении пациента-человека, нуждающегося в миметике ТРО, выбранная доза вводится предпочтительно от 1 до 6 раз в день перорально или парентерально. Предпочтительные формы парентерального введения включают местное, ректальное, чрескожное введение, введение посредством инъекции или непрерывное введение вливанием. Стандартные лекарственные дозы для перорального введения человеку предпочтительно составляют от 0,05 до 3500 мг активного ингредиента, наиболее предпочтительно от 0,5 до 1000 мг активного ингредиента. Пероральное введение, при котором используются более низкие дозировки, является предпочтительным. Однако может применяться и парентеральное введение с высокими дозировками, когда оно является безопасным и удобным для пациента. Приведенные выше дозы относятся к предпочтительному количеству активного ингредиента из расчета на свободную кислоту.

Для квалифицированного специалиста очевидно, что оптимальное количество и интервал дозировки активного ингредиента будет определяться природой и тяжестью состояния, подлежащего лечению, формой, способом и областью введения, особенностью пациента, подлежащего лечению, и могут определяться стандартными методами. Для квалифицированного специалиста также понятно, что оптимальный курс лечения, то есть количество доз активного ингредиента, принимаемое в день в течение определенного количества дней, может устанавливаться квалифицированным специалистом данной области с использованием стандартной практики назначения лечения.

Вообще говоря, соединение данного изобретения получено растворением свободной кислоты, 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты в подходящем органическом растворителе, предпочтительно в тетрагидрофуране (ТГФ) или в смеси этанол/IMS (технический денатурированный спирт), фильтрованием полученной смеси для удаления примесей и затем добавлением полученного раствора к раствору двух или нескольких эквивалентов этаноламина в органическом растворителе, предпочтительно смешиваемом с водой, который может содержать определенное количество воды, предпочтительно до 5 объемов воды относительно свободной кислоты. Далее соединение данного изобретения отфильтровано и высушено, например, в вакууме при повышенной температуре.

Этаноламин (99%) получен от Aldrich Chemical Company, Milwaukee, Wisconsin.

Тетрагидрофуран (ТГФ) и денатурат 74 О.Р. получены из BDH Laboratory Supplies, Poole (Великобритания).

Приведенные далее примеры дополнительно иллюстрируют данное изобретение. Однако данные примеры не предназначены для ограничения области данного изобретения, которая определена выше, и в прилагаемой формуле изобретения.

ПРИМЕР 1

Получение бис-(моноэтаноламина) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты

Раствор 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты (1 г неочищенного твердого вещества оранжевого цвета) в 16,75 мл ТГФ перемешивают при температуре примерно 30°С. К раствору медленно добавляют воду (2,0 мл), поддерживая температуру выше 28°С. После завершения добавления температуру повышают до 30°С и раствор фильтруют через слой стекловолокна (2 фильтра Whatman GFC) для удаления частиц твердых веществ. Фильтр промывают ТГФ (2,0 мл) и промывной раствор добавляют к фильтрату. Фильтрату дают возможность охладиться до комнатной температуры. Этаноламин (0,324 г, 2,35 моль. экв.) растворяют в IMS (26 мл) и перемешивают в атмосфере азота при комнатной температуре. Фильтрат, содержащий свободную кислоту, добавляют к этаноламинному раствору в течение 20-30 минут. Полученную суспензию темно-красного цвета перемешивают в течение 3 часов, затем твердый продукт собирают фильтрованием и сушат при 50°С в вакуумной печи в течение ночи, получая 1,22 г (96%) указанного в заголовке соединения.

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6+20 мкл ТФУК, относительно ДМСО-d5 δ 2,5): δ 2,21 (с, 3Н), 2,26 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 2,85 (м, 4Н), 3,57 (т, 4Н), 7,07 (м), 7,14 (с), 7,18 (д, перекрытый 3Н), 7,61 (т), 7,63 (дд, перекрытый 2Н), ˜7,7 (м, перекрытый 2Н), 7,79 (д), ˜7,8 (уш. с, перекрытый 2Н), 7,96 (д, 2Н), 8,13 (с, 1Н), 13,8 (уш. с, не может быть измерен, усилен резонансом ТФУК), сигналы для ТГФ 1,76 (м) и 3,60 (перекрытый сигналом этаноламина), интегрирующие на 1,05% (мас./мас.), и для этанола 1,06 (т) и 3,44 (кв.), интегрирующие на 1,3% (мас./мас.).

Данные ИК-спектра (Nujol mull): 1636, 1506, 1466, 1378, 1348, 1294, 1273, 1255, 1228, 1194, 1127, 1118, 1066, 1015, 767, 747 см^-1.

ПРИМЕР 2

Получение бис(моноэтаноламина) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты

3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновую кислоту (8 г неочищенного твердого вещества оранжевого цвета) растворяют при комнатной температуре в ТГФ (240 мл) в трехгорлой круглодонной колбе объемом 500 мл в атмосфере азота. К раствору в течение 5 минут шприцем добавляют этаноламин (2,2 мл, 2 мольных эквивалента). Полученную суспензию темно-красного цвета перемешивают при комнатной температуре в течение 1,5 часа, твердое вещество собирают фильтрованием, промывают ТГФ (16 мл × 2) и сушат при 50°С в вакуумной печи в течение ночи, получая 10,37 г указанного в заголовке соединения (выход превосходит количественный выход вследствие остаточного количества растворителя - приблизительно 2,4% мас./мас. ТГФ, что подтверждают данные ЯМР, которые во всем остальном аналогичны данным ЯМР примера 1).

ПРИМЕР 3

Получение бис-(моноэтаноламина) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты

3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновую кислоту (8 г неочищенного твердого вещества оранжевого цвета) суспендируют при комнатной температуре в этаноле (800 мл) в атмосфере азота. В течение 5 минут с помощью шприца добавляют этаноламин (2,2 мл, ˜2 мольных эквивалента). Полученную суспензию темно-красного цвета перемешивают при комнатной температуре в течение 45 часов, твердое вещество собирают фильтрованием, промывают этанолом (10 мл × 2) и сушат при 50°С в вакуумной печи в течение ночи, получая 9,83 г (выход 96%) указанного в заголовке соединения. Данные ЯМР аналогичны представленным в примере 1, содержание этанола 1,3% (мас./мас.), но ТГФ не обнаружен.

ПРИМЕР 4

Получение бис-(моноэтаноламина) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты

3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновую кислоту (259,0 г) перемешивают в ТГФ (4660 мл) при комнатной температуре до полного растворения. Раствор фильтруют и реактор промывают дополнительным количеством ТГФ (520 мл), которое также фильтруют (объединенный фильтрат = раствор 1).

В это время запускают другой реактор для перегонки при атмосферном давлении с воздушным перемешиванием. Реактор последовательно загружают IMS 74 О.Р. (7770 мл) и этаноламином (354 мл). Раствор энергично перемешивают и нагревают до тех пор, пока содержимое не начнет отгоняться (т.кип. 76-77°С).

Раствор 1 переносят в капельную воронку, которой снабжен данный реактор. Когда содержимое реактора начинает отгоняться с постоянной скоростью (когда объем собранного дистиллята составляет ˜50 мл), раствор 1 добавляют из капельной воронки со скоростью, примерно равной или немного меньшей, чем скорость отгонки. По окончании добавления капельную воронку обмывают IMS (260 мл × 2) для гарантии того, что вся свободная кислота перенесена в реакционную смесь. Реакционный аппарат приспосабливают для кипячения с обратным холодильником и полученную суспензию темно-красного цвета кипятят с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 30 минут. Раствору дают возможность медленно охладиться (в течение ночи) до комнатной температуры (˜20°С) при перемешивании в атмосфере азота.

Суспензию фильтруют и твердое вещество темно-красного цвета промывают на фильтре IMS (520 мл × 2). Осадок сушат в вакууме при комнатной температуре, затем сушат при 50°С в вакуумной печи в течение ночи. Выход продукта составляет 323,9 г (98%). Остаточное содержание растворителей (ГХС): ТГФ≤0,05%, этанол = 0,12%.

Данные ЯМР и ИК-спектров указанного в заголовке соединения по существу идентичны спектрам, представленным в примере 1, но показывают наличие следовых количеств растворителя.

ПРИМЕР 5

Относительные растворимости

Растворимость 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты в виде свободной кислоты (соединение А) и в виде соли бис-(моноэтаноламина) (соединение В) определяют в трех различные системах: вода, 0,1% HCl и метанол. Результаты представлены в таблице 1 ниже.

Таблица 1
Растворитель	Соединение А, мг/мл	Соединение В, мг/мл
Растворимость при 25°
Вода	<0,001	14,2
0,1% HCl	<0,001	<0,001
Метанол	1,9	6,4

Данное изобретение относится также к фармацевтическим композициям, включающим бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты в качестве активного ингредиента в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем. Соединение данного изобретения может вводиться пероральным или парентеральным способами и может использоваться для приготовления лекарственных форм, подходящих для каждого способа введения, включая капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение смешано, по меньшей мере, с одним инертным наполнителем. Обычно лекарственные формы для перорального введения могут также включать добавки, отличные от инертных наполнителей, например смазывающие агенты, добавки для скольжения и антиоксиданты. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы могут также включать буферные агенты. Таблетки и пилюли могут дополнительно приготавливаться для регулируемого высвобождения действующего вещества.

Препараты согласно данному изобретению для парентерального введения включают стерильные водные растворы, хотя могут применяться и неводные суспензии эмульсий. Такие лекарственные формы могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, смачивающие агенты, добавки для регулирования осмотического давления, буферные агенты, эмульгаторы и дисперсанты. Они также могут стерилизоваться, например, фильтрованием через бактериальный фильтр, введением в композиции стерилизаторов, облучением композиций инфракрасным светом или нагреванием композиций.

Приведенные далее примеры дополнительно иллюстрируют фармацевтические композиции, которые являются отличительным признаком данного изобретения.

ПРИМЕР 6

Композиция таблеток

Лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, натрий крахмал гликолят, стеарат магния и бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты смешивают в соотношениях, представленных в таблице 2 ниже. Смесь прессуют в таблетки.

ПРИМЕР 7

Композиции для парентеральных инъекций

Форму для инъекции бис-(моноэтаноламина) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты получают смешением 5,0 мг соединения с 1,0 мл нормального физиологического раствора.

Хотя предпочтительные воплощения данного изобретения представлены выше, следует представлять, что изобретение не ограничивается точными методиками, описанными в данном изобретении, и что право на все модификации, относящиеся к области представленной далее формулы изобретения, сохранено.

1. Соединение бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты.

2. Фармацевтическая композиция, содержащая бис-(моноэтаноламин) 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты в качестве агониста тромбопоэтина и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

3. Способ лечения тромбоцитопении у млекопитающего, в том числе у человека, нуждающегося в таком лечении, предусматривающий введение данному млекопитающему терапевтически эффективного количество соединения по п.1.

4. Способ по п.3, где млекопитающим является человек.

5. Способ по п.3, где соединение вводится перорально.

6. Способ по п.3, где соединение вводится парентерально.

7. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена угнетением спинного мозга, вызванным химиотерапией или лучевой терапией.

8. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена трансплантацией органа.

9. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена трансплантантом костного мозга, стволовых клеток или печени.

10. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена идиопатической тромбоцитопенической пурпурой (ITP).

11. Способ по п.3, где указанная тробмоцитопения обусловлена миелодиспластическими синдромами (MDS), апластической анемией или лейкемией.

12. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена вирусной, грибковой, микробной или паразитарной инфекцией.

13. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена дисфункцией печени.

14. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена хирургическими операциями.

15. Способ по п.3, где указанная тромбоцитопения обусловлена лечением противовирусными средствами или антибиотиками.

16. Способ усиления продуцирования тромбоцитов у млекопитающего, в том числе у человека, нуждающегося в таком усилении, предусматривающий введение данному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по п.1.

17. Способ по п.20, где млекопитающим является человек.

18. Способ получения фармацевтической композиции, содержащей фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель и эффективное количество соединения по п.1 в качестве агониста тромбопоэтина, предусматривающий введение соединения по п.1 в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем.

19. Способ получения соединения по п.1, предусматривающий

i) растворение 3'-[(2Z)-[1-(3,4-диметилфенил)-1,5-дигидро-3-метил-5-оксо-4Н-пиразол-4-илиден]гидразино]-2'-гидрокси-[1,1'-бифенил]-3-карбоновой кислоты в подходящем органическом растворителе для получения раствора;

ii) добавление в раствор двух или более эквивалентов этаноламина;

iii) выделение полученного соединения.