Способ получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов
Владельцы патента RU 2310453:
Автономная некоммерческая организация Научно-технический центр "Фармбиопресс" (RU)
Изобретение относится к области фармакологии и медицины. Проводят взаимодействие флавонолигнанов и фосфолипидов в органической среде с последующей сушкой полученной смеси путем лиофилизации или распылительной сушки. Предварительно готовят водную дисперсию фосфолипидов концентрации 0,5-10 вес.%, содержащую фармацевтически приемлемый сахарид в концентрации 2-10 вес.%. Затем осуществляют инжекцию в полученную дисперсию смеси флавонолигнанов и фосфолипида, взятых при соотношении от 10:0,1 до 10:1, в подходящем органическом растворителе. Изобретение позволяет повысить биодоступность продукта. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.
Изобретение относится к области фармакологии и медицины, конкретно к способу получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов, характеризующегося высокой гидрофильностью, улучшенной биодоступностью по сравнению со свободными биофлафоноидами и другими веществами фенольной природы.
В широко распространенное среди лекарственных растений семейство флавоноидов входит обширный собирательный класс полифенолов. Флавоноидные соединения подразделяются на основные группы флавонов, флавонолов, флаванонов, флаванонолов, катехинов и антоцианов. Флавоноиды обладают широким спектром биологической и антиоксидантной активности. В настоящее время хорошо изучены и задокументированы такие фармакологические свойства флавоноидов, как антиоксидантная, периферическая, вазодилаторная активности, вазопротекторная активность (влияние на хрупкость и проницаемость капилляров), противовоспалительное, антиспазмолитическое, антигистаминное и противоопухолевое действия.
Несмотря на многообещающие перспективы клинического применения флавоноидов, их терапевтическая эффективность часто оказывается недостаточной при местном и пероральном применении. При пероральном применении наблюдается слабая абсорбция флавоноидов в кишечнике, обусловленная бактериальной деградацией и формированием не всасывающихся в кишечнике комплексов флавоноидов с другими веществами пищеварительного тракта. Поскольку флавоноиды практически нерастворимы в воде, их парентеральное применение также оказывается затруднительным. Для целей практической медицины несомненную актуальность приобретает поиск новых способов получения гидрофильных (водорастворимых) комплексов флавоноидов с фосфолипидами.
В прошлом делались попытки добиться молекулярного изменения флавонолигнанов путем обработки или взаимодействия их с подходящими химическими агентами и перевести их в производные с улучшенной водорастворимостью и повышенной скоростью высвобождения. К производным, образованным таким образом, относятся, например, аддукты, комплексные соединения, сложные эфиры. Недостатком таких производных является то, что рассматриваемый в отдельном случае флавонолигнан связан с химическим соединением, которое может физиологически действовать как чужеродное вещество и вызывать возможно нежелательные побочные реакции или ухудшать активность флавонолигнана.
Известен способ, заключающийся в получении водоспиртового раствора фармацевтически приемлемых веществ-носителей и смачивателей, суспендируют в этом растворе флавонолигнан и полученную смесь нагревают до температуры кипения для получения прозрачного раствора (пат. РФ 2157225). Затем полученный прозрачный раствор концентрируют для образования сопреципитата, фильтруют и полученный сопреципитат сушат под вакуумом. Недостатком способа является то, что образующийся в результате сопреципитат тем не менее не является водорастворимым препаратом и, соответственно, может применяться только для перорального применения.
Наиболее близким техническим решением является способ получения комплексов флавонолигнанов с фосфолипидами, заключающийся во взаимодействии 0,3-2 молей фосфолипидов и 1 моль флаволигнана, например силибинина или силимарина в апротонных органических растворителях, таких как диоксан или ацетон, из которых комплекс может быть выделен преципитацией, лиофилизацией или распылительной сушкой (пат ЕР 0209037). Комплексы получают с пониженной диэлектрической константой. Комплексы растворимы в хлороформе, этиловом спирте.
Таким образом, авторами приведенных выше работ частично решена задача повышения биодоступности флавоноидов, однако проблема повышения растворимости флаволигнанов в водных растворах с целью создания инъекционных форм остается нерешенной.
Изобретательской задачей является создание способа получения гидрофильного комплексного препарата с повышенной биодоступностью, который может быть использован для парентерального введения и обладает более высокой терапевтической активностью.
Изобретательская задача решается тем, что предлагается способ получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов, заключающийся в их взаимодействии в органической среде с последующей сушкой полученной смеси путем лиофилизации или распылительной сушки. При этом предварительно готовят водную дисперсию фосфолипидов концентрации 0,5-10 вес.%, содержащую фармацевтически приемлемый сахарид в концентрации 2-10 вес.%, затем осуществляют инжекцию в полученную дисперсию смеси флавонолигнанов и фосфолипида, взятых при соотношении от 10:0,1 до 10:1, в подходящем органическом растворителе.
Фосфолипиды выбраны из группы: фосфолипиды из бычьего или свиного мозга, или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин.
В качестве флавонолигнанов используют вещества фенольной природы, выбранные из группы: 5,6,7,4'-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.
Предлагаемый способ позволяет получить гидрофильный препарат, который может быть высушен методом лиофилизации или распылительной сушки и при добавлении водных растворов образовывать стабильные дисперсии микровезикул, которые могут быть использованы для получения инъекционных или инфузионных лекарственных форм.
Таким образом, по актуальности и новизне изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».
Пример 1 (сравнительный). Получение комплексного препарата, содержащего силимарин и соевый фосфатидилхолин.
К раствору, содержащему 5 г силимарина в 100 мл ацетона, добавляли 8 г соевого фосфатидилхолина, перемешивали, смесь упаривали под вакуумом до объема 30 мл, затем вливали при перемешивании в 300 мл лигроина. Отстаивали несколько часов. Полученный преципитат отделяли фильтрованием, промывали лигроином и сушили под вакуумом при 40°С. Получали 11,1 г комплекса в виде порошка. Полученный комплекс растворим в хлороформе, этиловом эфире, растворим в воде частично.
Пример 2. Получение гидрофильного комплексного препарата, содержащего силимарин и яичный лецитин.
Сухой яичный лецитин (8 вес.%) суспендировали в интенсивно перемешиваемом водном растворе сахарозы (3 вес.%). Затем в полученный раствор из шприца с тонкой иглой впрыскивали раствор силимарина в ацетоне, содержащий яичный лецитин. Массовое соотношение силимарин/лецитин составило (10:0,3). После охлаждения препарат лиофилизировали и хранили при +4°С.
Полученные экспериментальные данные сведены в таблицу 1
| Таблица 1 | |||||
| №№ | Смесь флавонолигнан/фосфолипид, соотношение | Органический растворитель | Водная дисперсия | Растворимость полученного комплекса, мг/мл | |
| фосфолипид, вес.% | сахарид, вес.% | ||||
| 1 сравнительный | 10:16 | Ацетон | 0 | 0 | 4 |
| 2 | 10:0,3 | Спирт | 8 | 3 | 29 |
| 3 | 10:0,5 | Этиловый спирт | 5 | 5 | 18 |
| 4 | 10:1 | Этиловый эфир | 10 | 2 | 23 |
| 5 | 10:0,2 | Диэтиловый эфир | 9 | 2 | 31 |
| 6 | 10:0,7 | Петролейный эфир | 7 | 4 | 27 |
| 7 | 10:0,4 | Метиловый спирт | 3 | 7 | 26 |
| 8 | 10:0,9 | Ацетон | 0,5 | 10 | 19 |
| 9 | 10:0,5 | Диэтиловый эфир | 6 | 6 | 22 |
В примере 3 использовали в качестве флавонолигнана кверцетин, а в качестве фосфолипида фосфатидилхолин, в примере 4 - лептозидин и фосфолипиды из свиного мозга, в примере 5 - 5,6,7,4'-тетраоксифлавон и фосфолипиды из кожи, в примере 6 - рутин и фосфатидилсерин, в примере 7 - кверцитрин и фосфатидилхолин, в примере 8 - трицин и фосфадилэтаноламин, содержащий одинаковые или различные ацильные группы, пример 9 - виснагин и яичный лецитин.
Кроме того, в эксперименте в качестве флавонолигнанов использовали вещества фенольной природы, выбранные из группы: 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, квинквелозид, келлин, кемпферол, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.
В качестве фармацевтически приемлемого сахарида использовали сахарозу, маннозу, мальтозу, глюкозу, фруктозу, галактозу, манит, сорбит.
Пример 3. Специфическая гепатозащитная активность комплексного препарата, включающего силибинин и фосфатидилхолин, полученного заявленным способом.
Исследование специфической гепатозащитной активности препарата проводили на модели острого токсического гепатита у мышей. В экспериментах были использованы белые беспородные мыши в половозрелом возрасте. Водный раствор препарата вводили внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг по силибинину. В качестве гепатотропного средства использовали парацетамол (модель лекарственного гепатита). Животным вводили препарат впервые за 1 ч до введения парацетамола, а затем еще 5 раз ежедневно. В качестве препарата сравнения использовали простую смесь силибинина и фосфатидилхолина в виде водной суспензии, которую вводили по соответствующей схеме в дозе 100 мг/кг по силибинину. Контрольным животным вводили только парацетамол. Через сутки после последнего введения препаратов животных декапитировали и проводили вскрытие и изучение биохимических показателей крови. Активность аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) определяли по методу Райтмана-Френкеля. Общий белок определяли с помощью биуретового реактива. Относительная масса печени у контрольных животных с гепатитом была увеличена по сравнению со здоровыми интактными животными на 45,6%; у экспериментальных животных этот показатель составлял 23,1% (30,2% при приеме простой смеси). Таким образом, степень выраженности воспалительных процессов у животных, получавших заявленный комплексный препарат, заметно снижалась. Исследование активности трансаминаз в сыворотке крови показало, что у контрольных животных с гепатитом уровни аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) были повышены по сравнению с интактными животными на 432,9% и 211,5%; у мышей, получавших заявляемый комплексный препарат, эти показатели снижались до 208,6% и 52,3% соответственно (267,3% и 76,0% при приеме простой смеси). Уровень общего белка в сыворотке крови больных гепатитом контрольных мышей снижался до 63,2% (100% -у интактных здоровых животных), в то время как применение заявляемого препарата увеличивало этот показатель до 89,7%. При применении простой смеси уровень общего белка составлял лишь 79,1% от такового для здоровых контрольных животных.
Таким образом, применение предлагаемого препарата положительно влияло на дезинтоксикационные функции печени животных с острым лекарственным гепатитом. При этом эффект от комплексного препарата превышал эффект от препарата сравнения (простой смеси силибинина и фосфатидилхолина).
Пример 4. Противоопухолевая активность комплексного препарата, включающего силибинин и фосфатидилсерин, полученного заявленным способом.
Исследование противоопухолевой активности препарата проводили на модели меланомы линии В 16 у мышей С57В 1/6. Для индукции солидных опухолей мышам вводили подкожно клеточную суспензию (2·105 клеток в 0,1 мл физиологического раствора). Экспериментальным животным внутривенно вводили заявляемый комплексный препарат в физиологическом растворе. В качестве препарата сравнения использовали водную суспензию простой смеси, содержащей силибинин и фосфатидилсерин в тех же количествах, вводимую внутрижелудочно через зонд. Препараты вводили один раз в неделю, всего три приема, начиная с 3 дня после прививки опухоли. Каждая экспериментальная группа состояла из шести животных, контрольная - из десяти. Размер солидных опухолей измеряли один раз в 2-3 дня. Объем опухоли вычисляли по формуле где а - короткий, b - длинный диаметр опухоли. Относительный размер опухолей (ОРО) определяли по формуле: 
где Роп - средний размер опухолей в опытной группе, Рк - средний размер опухолей у контрольных животных. Увеличение продолжительности жизни леченых животных по сравнению с контролем определяли по формуле: 
где Т - СПЖ леченых животных, дни, С - СПЖ контрольных животных, дни.
Результаты исследования приведены в таблице 2. Как видно из таблицы, противоопухолевый эффект от применения простой смеси был слабовыраженным. В то же время применение заявляемого комплексного препарата оказывало значительный ингибирующий эффект в отношении роста опухолей, а также приводило к существенному увеличению продолжительности жизни животных по сравнению с контролем.
| Таблица 2 | ||
| Препарат | ОРО, % | УСПЖ, % |
| Физ. раствор (контроль) | 100 | - |
| Смесь [силибинин/ фосфатидилсерин], водная суспензия внутрижелудчно | 76,2 | 20,3 |
| Комплексный препарат, те же компоненты, водный раствор внутривенно | 51,9 | 52,0 |
Таким образом, применение комплекса, полученного заявляемым способом, значительно увеличивает их противоопухолевый эффект за счет повышенной биодоступности и применения в виде инъекционной формы.
1. Способ получения гидрофильного комплекса на основе флавонолигнанов и фосфолипидов, заключающийся в их взаимодействии в органической среде с последующей сушкой полученной смеси путем лиофилизации или распылительной сушки, отличающийся тем, что предварительно готовят водную дисперсию фосфолипидов концентрации 0,5-10 вес.%, содержащую фармацевтически приемлемый сахарид в концентрации 2-10 вес.%, затем осуществляют инжекцию в дисперсию смеси флавонолигнанов и фосфолипида, взятых при соотношении от 10:0,1 до 10:1, в подходящем органическом растворителе.
2. Способ получения гидрофильного комплекса по п.1, отличающийся тем, что фосфолипиды выбраны из группы фосфолипиды из бычьего или свиного мозга или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин, содержащие одинаковые или различные ацильные группы, яичный лецитин.
3. Способ получения гидрофильного комплекса по п.1, отличающийся тем, что в качестве флавонолигнанов используют вещества фенольной природы, выбранные из группы 5,6,7,4'-тетраоксифлавон, 5,6,7-триоксифлавон, g-схизандрин, апигенин, астрагалин, ауреузидин, виснагин, виснадин, гесперидин, гиперозид, дезоксисхизандрин, дигидросамидин, дигидросилибин, изоликвиритигенин, изорамнитин, инокостерон, кверцетин, кверцитрин, квинквелозид, келлин, кемпферол, лептозидин, ликвиритигенин, лютеолин, мирицетин, нарингенин, пиранокумарин, розавин, рутин, салидрозид, силидианин, силибинин, силикристин, скополетин, сульфуретин, схизандрин, схизандрол, тилирозид, трицин, умбеллиферон, 6-метокси-7,8-диоксикумарин, фурокумарин, экдистерон, энтеграстероны, 6,7-диоксикумарин и их производные.
