Композиции, содержащие cpg-олигонуклеотиды и вирусоподобные частицы, для применения в качестве адъювантов
Настоящее изобретение относится к области вакцинологии, иммунологии и медицины. Предложены композиция, вакцина и способы усиления иммунологических реакций против антигенов, смешанных с вирусоподобными частицами (VLP), которые связаны с иммуностимулирующими веществами, представляющими собой неметилированный CpG-содержащий олигонуклеотид. Антигены в смеси с CpG-упакованными частицами VLP могут быть идеальными вакцинами для профилактической или терапевтической вакцинации против аллергий, опухолей, других аутомолекул и хронических вирусных заболеваний. 5 н. и 33 з.п. ф-лы, 18 ил.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Композиция для усиления иммунной реакции у животного, которая включает в себя
(a) вирусоподобную частицу;
(b) иммуностимулирующее вещество;
где указанное иммуностимулирующее вещество (b) связано с указанной вирусоподобной частицей и где указанное иммуностимулирующее вещество является неметилированным CpG-содержащим олигонуклеотидом;
(c) антиген, смешанный с указанной вирусоподобной частицей (а).
2. Композиция по п.1, где указанный неметилированный CpG-содержащий олигонуклеотид содержит последовательность
5'Х1Х2CGX3Х43',
где X1, Х2, Х3 и Х4 означают любой нуклеотид.
3. Композиция по п.1, где указанный неметилированный CpG-содержащий олигонуклеотид содержит или альтернативно состоит в основном из последовательности, выбранной из группы, состоящей из
(a) TCCATGACGTTCCTGAATAAT (SEQ ID NO:116);
(b) TCCATGACGTTCCTGACGTT (SEQ ID NO:118);
(c) GGGGTCAACGTTGAGGGGG (SEQ ID NO:120);
(d) GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID N0:122); и
(e) "dsCyCpG-253" (SEQ ID NO:130).
4. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид содержит или альтернативно состоит из последовательности GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:122).
5. Композиция по п.1, где CpG-мотив указанного неметилированного CpG-содержащего олигонуклеотида является частью палиндромной последовательности.
6. Композиция по п.5, где указанная палиндромная последовательность представляет собой GACGATCGTC (SEQ ID NO:105).
7. Композиция по п.5, где указанная палиндромная последовательность фланкирована у N-конца по меньшей мере 3 и не более чем 9 остатками гуанозина и фланкирована у С-конца по меньшей мере 6 и не более чем 9 остатками гуанозина.
8. Композиция по п.7, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из нижеследующих последовательностей:
(a) GGGGACGATCGTCGGGGGG (SEQ ID NO:106);
(b) GGGGGACGATCGTCGGGGGG (SEQ ID NO:107);
(c) GGGGGGACGATCGTCGGGGGG (SEQ ID NO:108);
(d) GGGGGGGACGATCGTCGGGGGG (SEQ ID NO:109);
(e) GGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGG (SEQ ID NO:110);
(f) GGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGG (SEQ ID NO: 111);
(g) GGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGG (SEQ ID NO:112); и (h) GGGGGGCGACGACGATCGTCGTCGGGGGGG (SEQ ID NO:113).
9. Композиция по п.7, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:111.
10. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид упакован внутри указанной вирусоподобной частицы.
11. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид содержит примерно от 6 и примерно до 300 нуклеотидов, предпочтительно примерно от 6 и примерно до 100 нуклеотидов, более предпочтительно примерно от 6 и примерно до 40 нуклеотидов, а еще более предпочтительно указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид содержит примерно от 10 и примерно до 30 нуклеотидов.
12. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид (b) содержит одну или несколько фосфоротиоатных модификаций фосфатного остова, или где каждая фосфатная часть указанного фосфатного остова указанного олигонуклеотида (b) модифицирована фосфоротиоатом.
13. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид не стабилизирован фосфоротиоатными модификациями фосфодиэфирного остова.
14. Композиция по п.1, где указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид является синтетическим олигонуклеотидом.
15. Композиция по п.1, где указанная вирусоподобная частица (а) является рекомбинантной вирусоподобной частицей, содержащей рекомбинантные белки, выбранные из группы, состоящей из
(a) рекомбинантных белков вируса гепатита В;
(b) рекомбинантных белков вируса кори;
(c) рекомбинантных белков вируса синдбис;
(d) рекомбинантных белков ротавируса;
(e) рекомбинантных белков вируса ящура;
(f) рекомбинантных белков ретровируса;
(g) рекомбинантных белков вируса Норволка;
(h) рекомбинантных белков альфавируса;
(l) рекомбинантных белков вируса папилломы человека;
(j) рекомбинантных белков вируса полиомы;
(k) рекомбинантных белков бактериофагов;
(i) рекомбинантных белков РНК-содержащих фагов;
(m) рекомбинантных белков Qβ-фага;
(n) рекомбинантных белков GA-фага;
(о) рекомбинантных белков fr-фага;
(р) рекомбинантных белков АР205-фага;
(q) рекомбинантных белков Ту;
(г) фрагментов любых рекомбинантных белков по nn.(a)-(q);
и где указанная вирусоподобная частица предпочтительно является коровым белком вируса гепатита В или белком VP1 вируса ВК.
16. Композиция по п.1, где указанная вирусоподобная частица содержит рекомбинантные белки или их фрагменты РНК-содержащего фага.
17. Композиция по п.16, где указанный РНК-содержащий фаг выбран из группы, состоящей из
a) бактериофага Qβ;
b) бактериофага R17;
c) бактериофага fr;
d) бактериофага GA;
e) бактериофага SP;
f) бактериофага MS2;
g) бактериофага M11;
h) бактериофага МХ1;
i) бактериофага NL95;
j) бактериофага f2;
k) бактериофага РР7;
1) бактериофага АР205.
18. Композиция по п.1, где указанная вирусоподобная частица содержит рекомбинантные белки или их фрагменты РНК-содержащего фага, где указанный РНК-содержащий фаг является фагом Qβ.
19. Композиция по п.1, где указанная вирусоподобная частица содержит рекомбинантные белки или их фрагменты РНК-содержащего фага, где указанный РНК-содержащий фаг является fr или АР205.
20. Композиция по п.1, где указанный антиген (с) выделен из природного источника, и где указанный природный источник предпочтительно выбран из группы, состоящей из
(a) экстракта пыльцы;
(b) экстракта пыли;
(c) экстракта пылевого клеща;
(d) грибного экстракта;
(e) экстракта эпидермиса млекопитающего;
(f) экстракта перьев;
(g) экстракта насекомых;
(h) пищевого экстракта;
(i) экстракта волос;
(j) экстракта слюны; и (k) сывороточного экстракта.
21. Композиция по п.1, где указанный антиген (с) получен из группы,
состоящей из
(a) вирусов;
(b) бактерий;
(c) паразитов;
(d) прионов;
(e) опухолей;
(f) собственных молекул;
(g) молекул непептидного гаптена;
(h) аллергенов; и
(i) гормонов.
22. Композиция по п.1, где указанный антиген является опухолевым антигеном, и где указанный опухолевый антиген предпочтительно выбран из группы, состоящей из
(a) Her2;
(b) GD2;
(c) EGF-R;
(d) CEA;
(e) CD52;
(f) белка gp 100 меланомы человека;
(о) белка melan-A/MART-1 меланомы человека;
(h) тирозиназы;
(i) нуклеотидного белка NA17-А;
0) белка MAGE-3;
(k) белка р53;
(1) белка НРV16 Е7;
(т) аналога любых антигенов по пп.(а)-(1); и
(п) антигенных фрагментов любых опухолевых антигенов по пп.(а)-(m).
23. Композиция по п.1, где указанный антиген является аллергеном.
24. Композиция по п.23, где указанный аллерген получен из группы, состоящей из
(a) экстракта пыльцы;
(b) экстракта пыли;
(c) экстракта пылевого клеща;
(d) грибного экстракта;
(e) экстракта эпидермиса млекопитающего;
(f) экстракта перьев;
(о) экстракта насекомых;
(h) пищевого экстракта;
(i) экстракта волос;
(J) экстракта слюны; и
(k) сывороточного экстракта.
25. Композиция по п.23, где указанный аллерген выбран из группы, состоящей из
(a) деревьев;
(b) травы;
(c) домашней пыли;
(d) домового пылевого клеща;
(e) аспергиллы;
(f) шерсти животных;
(g) перьев птиц;
(h) пчелиного яда;
(i) животных продуктов; и
(j) растительных продуктов.
26. Композиция по п.1, где указанный антиген выбран из группы,
состоящей из
(a) фосфолипазы А2 пчелиного яда;
(b) Amb a 1 пыльцы амброзии;
(c) Bet v 1 пыльцы березы;
(d) 5 Dol m V яда пятнистой осы;
(e) Der p 1 домового пылевого клеща;
(f) Der f 2 домового пылевого клеща;
(g) Der 2 домового пылевого клеща;
(h) Lep d пылевого клеща;
(i) Alt a 1 грибного аллергена;
(j) Asp f 1 грибного аллергена;
(k) Asp f 16 грибного аллергена; и
11) аллергенов арахиса.
27. Композиция по п.1, где (i) указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид содержит или альтернативно состоит из последовательности GGGGGGGGGGGACGATCGTCGGGGGGGGGG (SEQ ID NO:122); и где
(ii) указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид упакован внутри указанной вирусоподобной частицы; и где (iii) указанный CpG-содержащий неметилированный олигонуклеотид не стабилизирован фосфоротиоатными модификациями фосфодиэфирного остова; и где (iv) указанная вирусоподобная частица включает в себя рекомбинантные белки или их фрагменты РНК-содержащего фага, причем указанный РНК-содержащий фаг является фагом Qβ; и где (v) указанным антигеном является аллерген.
28. Композиция по п.26, где указанный аллерген получен из экстракта пыльцы.
29. Композиция по п.26, где указанный аллерген получен из экстракта пыли или экстракта пылевого клеща.
30. Композиция по п.26, где указанный аллерген содержит Der p1, Der f2 или Der 2 или их фрагменты или их антигенную смесь.
31. Способ усиления иммунной реакции у животного, который включает в себя введение указанному животному композиции, содержащей
(a) вирусоподобную частицу; и
(b) иммуностимулирующее вещество;
где указанное иммуностимулирующее вещество (b) связано с указанной вирусоподобной частицей (а), и где указанное иммуностимулирующее вещество является CpG-содержащим неметилированным олигонуклеотидом;
(c) антиген, смешанный с указанной вирусоподобной частицей (а).
32. Способ по п.31, который дополнительно относится к композиции, описанной в любом из пп.2-30.
33. Способ по п.31, где указанная вирусоподобная частица (а) продуцирована в бактериальной экспрессирующей системе, дрожжевой экспрессирующей системе или экспрессирующей системе млекопитающего.
34. Способ по п.31, где указанная иммунная реакция является усиленной В-клеточной реакцией, усиленной Т-клеточной реакцией или реакцией CTL, причем указанная Т-клеточная реакция предпочтительно является Th-клеточной реакцией, а еще предпочтительнее, Th-клеточная реакция является Тh1-клеточной реакцией.
35. Способ по п.31, где указанное животное является млекопитающим, предпочтительно человеком, и где указанную композицию вводят указанному животному подкожно, внутримышечно, внутривенно, интраназально или непосредственно в лимфатический узел.
36. Вакцина, предназначенная для иммунизации, которая содержит иммунологически эффективное количество композиции по п.1 вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем, носителем или наполнителем, причем предпочтительно, если указанная вакцина дополнительно содержит адъювант.
37. Способ иммунизации животного, включающий в себя введение указанному животному иммунологически эффективного количества вакцины по п.36, где указанное животное предпочтительно является млекопитающим, а еще предпочтительнее, человеком.
38. Способ лечения животного, включающий в себя введение указанному животному иммунологически эффективного количества вакцины по п.36, где указанное животное предпочтительно является млекопитающим, а еще предпочтительнее, человеком.
