Способ получения l-треонина с использованием бактерии, принадлежащей к роду escherichia
Владельцы патента RU 2338783:
Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU)
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения L-треонина путем ферментации глюкозы с использованием бактерии семейства Escherichia, которая модифицирована таким образом, что в указанной бактерии усилена экспрессия оперона araFGH. Изобретение позволяет получать L-треонин с высокой степенью эффективности. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Бактерия-продуцент L-треонина, принадлежащая к роду Escherichia, модифицированная таким образом, что в указанной бактерии усилена экспрессия оперона araFGH.
2. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что в указанной бактерии экспрессия оперона araFGH усилена путем модификации последовательности, контролирующей экспрессию оперона araFGH, таким образом, что экспрессия гена усилена, или путем увеличения количества копий оперона araFGH.
3. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанный оперон кодирует:
(A) белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или ее вариант;
(Б) белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4, или ее вариант;
(B) белок, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, или ее вариант,
отличающийся тем, что составляя указанный оперон, указанные варианты обладают активностью высокоаффинного переносчика L-арабинозы, когда указанные варианты объединяются вместе.
4. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанный оперон включает:
(А) фрагмент ДНК, включающий последовательность нуклеотидов с номерами нуклеотидов с 1 по 990 в SEQ ID NO: 1, или фрагмент ДНК, способный гибридизоваться в жестких условиях с указанной последовательностью, или зондом, синтезированным на основе указанной последовательности;
(Б) фрагмент ДНК, включающий последовательность нуклеотидов с номерами нуклеотидов с 1 по 1515 в SEQ ID NO: 3, или фрагмент ДНК, способный гибридизоваться в жестких условиях с указанной последовательностью, или зондом, синтезированным на основе указанной последовательности;
(В) фрагмент ДНК, включающий последовательность нуклеотидов с номерами нуклеотидов с 1 по 990 в SEQ ID NO: 5, или фрагмент ДНК, способный гибридизоваться в жестких условиях с указанной последовательностью, или зондом, синтезированным на основе указанной последовательности, и
отличающийся тем, что составляя указанный оперон, указанные фрагменты ДНК, которые гибридизуются с указанными нуклеотидными последовательностями или с указанными зондами, кодируют белки, которые обладают активностью высокоаффинного переносчика L-арабинозы, когда указанные белки объединяются вместе.
5. Бактерия по п.4, отличающаяся тем, что указанными жесткими условиями включаются такие условия, при которых отмывка производится при температуре 60°С при концентрации соли 1×SSC и 0,1% SDS в течение приблизительно 15 мин.
6. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что в ней усилена активность глюкокиназы.
7. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что в ней усилена активность изомеразы ксилозы.
8. Бактерия по п.1, отличающаяся тем, что указанная бактерия дополнительно модифицирована таким образом, что усилена экспрессия гена, выбранного из группы, состоящей из:
мутантного гена thrA, кодирующего аспартокиназа-гомосериндегидрогеназу I, устойчивую к ингибированию треонином по типу обратной связи;
гена thrB, кодирующего гомосеринкиназу;
гена thrC, кодирующего треонинсинтазу;
гена rhtA, предположительно кодирующего трансмембранный белок;
гена asd, кодирующего аспартат-β-семиальдегиддегидрогеназу;
гена aspC, кодирующего аспартатаминотрансферазу (аспартаттрансаминазу) и
комбинации этих генов.
9. Бактерия по п.8, отличающаяся тем, что указанная бактерия модифицирована таким образом, что усилена экспрессия указанного мутантного гена thrA, указанного гена thrB, указанного гена thrC и указанного гена rhtA.
10. Способ получения L-треонина, включающий выращивание бактерии по п.1 в питательной среде, содержащей глюкозу в качестве источника углерода, и выделение L-треонина из культуральной жидкости.
