Способ исследования десневой жидкости

Изобретение относится к области медицины, а именно к ортопедической, терапевтической и хирургической стоматологии, и может быть использовано для подготовки проб для раннего выявления воспалительных процессов в пародонте. Десневую жидкость отбирают с помощью хлопчатобумажных нитей №12, пропитывая их в течение 5 минут и помещая нить в 200 мл стерильного физиологического раствора. Предлагаемый способ забора десневой жидкости обеспечивает возможность количественного определения в десневой жидкости ее компонентов, в частности интерлейкина-1β. Анализ на содержание интерлейкина-1β следует проводить не позднее двух часов с момента погружения нити в физиологический раствор.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к ортопедической, терапевтической и хирургической стоматологии, и может быть использовано для раннего выявления воспалительных процессов в пародонте.

Широкое применение в практике современной ортопедической стоматологии несъемных протезов (цельнолитых, металлокерамических, металлоакриловых, металлокомпозитных, цельнокерамических), требующих значительного препарирования твердых тканей с погружением края коронки в десневой желобок, влечет за собой серьезные изменения пародонта в виде краевого протезного пародонтита.

На начальных стадиях развития эти изменения не всегда удается обнаружить с помощью традиционных методов обследования (визуальных, инструментальных, рентгенологических и т.д.). Однако по данным М. Bickel и соавт. (Bickel M., Cimasoni G., Andersen E. // Arch. Oral. Biol. - 1985. Vol.30. - P.599-602.), увеличение количества десневой жидкости, выделяемой из десневых желобков, наступает до появления клинически определяемых признаков воспаления. Это, по мнению G. Cimasoni (Cimasoni G. Crevicular Fluid update. - Basel, 1983.), дает основание использовать параметры десневой жидкости для ранней (доклинической) диагностики воспалительных заболеваний пародонта. Кроме того, по данным Булгаковой А.И. (А.И.Булгакова. Влияние состояния местного иммунитета десны и ротовой полости на течение хронического пародонтита. Новое в стоматологии №10, 2001, с.91-93.) при исследовании жидкости пародонтальных карманов было установлено, что хронический пародонтит сопровождается возрастанием в составе клеток жидкости числа лимфоцитов.

По данным Ю.М.Максимовского и соавт. (Ю.М.Максимовский, Т.Д.Чиркова, Т.А.Фролова и соавт. Клинико-иммунологические особенности патогенеза катарального гингивита (Сообщение 1). Стоматология, №3, 2003, с.24-27.) при исследовании десневой жидкости больных с гингивитом было обнаружено снижение содержания иммуноглобулинов A (IgA), увеличение содержания sIgA, IgG, M, D, E.

При воспалительных заболеваниях пародонта под действием микроорганизмов зубного налета изменяется функциональная активность фагоцитирующих и эпителиальных клеток, что отражается на выработке ими цитокинов (IL-1β, ФНО-α и др.) Содержание этих веществ в десневой жидкости зубов покрытых коронками представляет большой интерес, поскольку ранее не изучалось.

Известен способ исследования десневой жидкости по N.Brill и B.Crasse (Барер Г.М., Кочержинский В.В., Халитова Э.С. Десневая жидкость - объективный критерий оценки состояния тканей пародонта // Стоматология. - 1987. - №1. - С.28-29.).

Известный способ осуществляют следующим образом.

Перед исследованием зубы и прилегающую к ним десну тщательно очищают от зубного налета, изолируют от слюны ватными валиками и высушивают. Полоски фильтровальной бумаги размером 15×4 мм с заостренным кончиком погружают в устье десневого желобка острым кончиком, не доводя его до дна, на 3 минуты. Затем пропитанные десневой жидкостью полоски помещают в раствор трис-HCl-буфера 0,05 М рН 7,5 для вымывания десневой жидкости. Способ предназначен для определения объема десневой жидкости.

Известный способ получения десневой жидкости по N. Brill и B.Crasse позволяет получить информацию о количестве выделяемой десневой жидкости, однако не дает возможности изучить качественный ее состав.

Известен способ получения десневой жидкости с целью определения ее коллагенолитической активности, предложенный Т.И.Езикяном, В.К.Леонтьевым и соавт. (Езикян Т.И., Леонтьев В.К., Персиц М.М., Соловьева Н.И., Кирюхина С.А. Коллагенолитическая активность в смешанной слюне, десневой жидкости и тканях десны у больных с воспалением пародонта // Стоматология. - 1991. - №6. - С.15-17.).

Данный способ исследования десневой жидкости базируется на вышеизложенном способе N.Brill и B.Crasse. Однако авторы предложили растворять полоски в растворе трис-HCl-буфера 0,05 М рН 7,5 для вымывания десневой жидкости.

Однако в связи с тем, что у разных больных количество десневой жидкости в единицу времени выделяется неодинаковое, значит и пропитывание полосок будет неодинаковым, следовательно, определить точное количество десневой жидкости, поступившей в раствор буфера из полосок фильтровальной бумаги, не представляется возможным. Кроме того, полного пропитывания полосок размером 15×4 мм не удается достичь из-за малого количества выделяемой десневой жидкости.

За прототип предлагаемого изобретения выбран известный способ исследования десневой жидкости, включающий ее забор с помощью хлопчатобумажных нитей и проведение последующего исследования, разработанный на кафедре терапевтической стоматологии Воронежского медицинского института им. Н.Н.Бурденко (Ерина С.В., Дьячкова С.Я. Цитологическое исследование десневой жидкости при заболеваниях пародонта // Лабораторное дело. - 1989. - №6. - С.14-15.).

Десневую жидкость получают с помощью стерильных нитей (размером 8×1 мм), приготовленных из марли. После предварительного высушивания окружающих тканей стерильными ватными тампонами марлевые нити с помощью зонда с тупым концом помещают на дно десневого желобка либо клинического кармана исследуемых зубов с апроксимальных поверхностей на 5-8 мин. Затем пинцетом извлекают нити и вращательными движениями по предметному стеклу готовят мазки-отпечатки. После высушивания и фиксации мазки окрашивают по Романовскому-Гимзе и подсчитывают количество клеточных элементов на 100 клеток. Способ используется для определения клеточного состава десневой жидкости.

Однако известный способ не позволяет определить количество содержащихся в десневой жидкости компонентов, а только клеточный состав, так как для определения количества IL-1β необходимо минимум 200 мкл исследуемого вещества.

Задачей предлагаемого изобретения является обеспечение возможности определения компонентов десневой жидкости, в частности интерлейкина-1β, повышение точности диагностики заболеваний пародонта.

Поставленная задача решается тем, что в известном способе исследования десневой жидкости, включающем забор жидкости с помощью хлопчатобумажных нитей и проведение последующего исследования, забор жидкости проводят с помощью хлопчатобумажных нитей №12, пропитывают их в течение 5 минут, далее помещают нить в 200 мл стерильного физиологического раствора, иммуноферментный анализ по определению интерлейкина-1β проводят не позднее двух часов с момента погружения нити в физиологический раствор.

Предлагаемый способ отвечает критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень», так как при проведении патентно-информационных исследований не выявлено источников информации, которые бы порочили новизну предлагаемого способа, равно как и технических решений с существенными признаками предлагаемого решения.

Хлопчатобумажная нить №12 берется потому, что натуральная ткань нити будет способствовать более полному пропитыванию в отличие от синтетических нитей, с которых жидкость может стекать и не задерживаться. Толщина нити №12 объясняется тем, что такая нить за счет большей толщины, чем у нити из марли, способна забрать большее количество десневой жидкости, что важно в процессе вымывания жидкости в физиологическом растворе. Пропитка нити в течение 5 минут объясняется тем, что по данным Г.М.Барера и соавт. (Барер Г.М., Кочержинский В.В., Халитова Э.С., Лукиных Л.М. Количественная характеристика десневой жидкости у лиц с интактным пародонтом // Стоматология. - 1986. - №5. - С.12-13.) практически все количество десневой жидкости, имеющейся в десневом желобке, абсорбируется в течение первых 3-5 минут. Такие параметры как объем физиологического раствора 200 мкл, необходимость транспортировки раствора с нитью в течение 2 часов с момента погружения в лабораторию для проведения анализа или заморозка раствора при температуре -18°С продиктованы требованиями иммунологической лаборатории.

Предлагаемый способ позволяет получить следующий полезный эффект. Предлагаемый способ обеспечивает возможность количественного определения в десневой жидкости ее компонентов, в частности интерлейкина-1β, что наиболее важно для установления наличия воспалительного процесса в тканях пародонта и выявления степени тяжести воспаления. Данный способ исследования дает информацию о наличии воспаления в тканях пародонта до клинических проявлений, что особенно ценно в ранней диагностике заболеваний пародонта.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Перед исследованием хлопчатобумажную нить №12 нарезают на равные отрезки длиной 8 мм. Отрезки стерилизуют. Исследуемую область очищают от зубного налета специальной щеточкой для профессиональной гигиены с пастой. Пациент полощет рот раствором антисептика. Зубы исследуемой области изолируют от слюны при помощи ватных валиков и просушивают из водно-воздушного пистолета. Стерильный отрезок нити погружают в десневой желобок или пародонтальный карман на 5 мин до полного пропитывания нити. Пипеточным дозатором в пробирку, установленную на штативе, отмеряют 200 мкл физиологического раствора NaCl. Нить, по истечении намеченного времени, извлекают из десневого желобка и погружают в пробирку с физиологическим раствором для вымывания компонентов десневой жидкости. Далее пробирку передают в иммунологическую лабораторию не позднее 2 часов с момента погружения нити в физиологический раствор для проведения иммуноферментного анализа с целью определения интерлейкина-1β. Если иммунологическое исследование в лаборатории будет проводиться позднее, чем через 2 часа, то пробирку с раствором необходимо заморозить при температуре -18°С.

Примеры конкретного использования даны в виде выписки из Историй болезни.

1) Пациент П., 44 года. Диагноз: хронический генерализованный пародонтит тяжелой степени тяжести. Диагноз был поставлен на основании данных клинических методов обследования (осмотр, зондирование пародонтальных карманов, определение подвижности зубов, определение кровоточивости десен при зондировании, определении глубины пародонтальных карманов при помощи градуированного зонда) и рентгенологических (прицельная рентгенография, ортопантомография).

Зубная формула	1	2	6
	321	123

Исследование проводилось в области зуба 22. Десневую жидкость получали по вышеизложенному способу.

Результат: в десневой жидкости обследуемого обнаружено 100 пг/мл интерлейкина-1β.

2). Пациент С., 51 год. Диагноз: хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести. Диагноз был поставлен на основании данных клинических методов обследования (осмотр, зондирование пародонтальных карманов, определение подвижности зубов, определение кровоточивости десен при зондировании и определении глубины пародонтальных карманов при помощи градуированного зонда) и рентгенологических (прицельная рентгенография, ортопантомография).

Зубная формула	6	5	4	3	2	1	1	2	6
		5		3	2	1	1	2	3	4	5

Имеется металлокерамический мостовидный протез с опорой на 16, 15, 14, 13, 12, 11, 21, 22, 26 зубы.

Исследование проводилось в области зуба 21. Десневую жидкость получали по вышеизложенному способу.

Результат: в десневой жидкости обследуемого обнаружено 80 пг/мл интерлейкина-1β.

3). Пациентка Б., 35 лет. Диагноз: частичная потеря зубов верхней челюсти. Локализованный пародонтит в области 15 и 17 зубов. Диагноз был поставлен на основании данных клинических методов обследования (осмотр, зондирование пародонтальных карманов, определение подвижности зубов, определение кровоточивости десен при зондировании и определении глубины пародонтальных карманов при помощи градуированного зонда) и рентгенологических (прицельная рентгенография, ортопантомография).

Зубная формула	7		5	4	3	2	1		1	2	3	4	5	6	7
	7	6	5	4	3	2	1		1	2	3	4	5	6	7

Имеется металлокерамический мостовидный протез с опорой на 15 и 17 зубы. Исследование проводилось в области зуба 15. Десневую жидкость получали по вышеизложенному способу.

Результат: в десневой жидкости обследуемой обнаружено 80 пг/мл интерлейкина-1β.

В норме интерлейкин-1β не обнаруживается.

Способ забора десневой жидкости, отличающийся тем, что для проведения иммуноферментного анализа по определению интерлейкина-1β, забор жидкости проводят с помощью хлопчатобумажных нитей №12, пропитывают их в течение 5 мин, далее помещают нить в 200 мл стерильного физиологического раствора, анализ проводят не позднее двух часов с момента погружения нити в физиологический раствор.