Способ получения стафилококковой вакцины


 


Владельцы патента RU 2421240:

Государственное научное учреждение Самарская научно-исследовательская ветеринарная станция Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к области микробиологии. Для получения вакцины берут 6-8 штаммов стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus. Культивирование штаммов осуществляют порознь в течение 14-16 дней при температуре 37°С и, затем, при температуре 3-5°С в течение 6-8 суток. После чего полученный материал смешивают и сразу автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 минут. Получают вакцину, обеспечивающую создание напряженного иммунитета против стафилококков, а также обеспечивающую создание неспецифического иммунитета, достаточного для лечения гнойной инфекции, вызванной другими возбудителями. 3 табл.

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения вакцины, предназначенной для профилактики и лечения гнойных инфекций у животных и человека.

Известен способ получения стафилококковой вакцины путем длительного (15-20 дней) выращивания моновалентной культуры стафилококка в бульоне с последующей фильтрацией или стерилизацией при 100°С (А.М.Безредка, "Антивирусотерапия", Л., 1932 г.).

Недостатком известного способа является то, что изготовленная вакцина не учитывает разнообразия серологических вариантов стафилококка, содержит только растворимые в среде антигенные компоненты и вследствие этого недостаточно эффективна.

Известен способ получения анатоксин-вакцины против стафилококкоза птиц, включающий выращивание культуры стафилококков в питательной среде, стерилизацию биомассы с последующей детоксикацией токсина формалином, причем перед выращиванием в среду добавляют 4 об.% глицерина, культуру выращивают в течение 7-10 дней до концентрации 5-7 млрд микробных клеток в 1 мл, стерилизацию проводят при 85-100°С в течение 1-1,5 ч, а детоксикацию осуществляют 0,6-0,8%-ным раствором формалина при экспозиции 45-55°С в течение 7-10 дней (АС СССР №1706631, кл. А61К 39/085 от 17.01.89, опубл. 23.01.92, Бюл. №3).

Недостатком известного способа является то, что за 7-10 дней в выращиваемой биомассе не происходит достаточного накопления продуктов метаболизма стафилококков, и, кроме того, обработка формалином придает вакцине раздражающее действие, что допустимо при аэрозольном распылении препарата, но нежелательно при внутривенном введении вакцины животным.

Наиболее близким к предлагаемому способу получения стафилококковой вакцины является «Способ получения вакцины стафилококковой и стрептококковой поливалентной» - Vaccinum staphylococcicum (streptococcicum)». Взвесь стафилококков или стрептококков (1 млрд микробных тел в 1 мл) убивают формалином (http://www.micro-biology.ru/main-microbiology/medicine/93-vakciny-iz-ubitykh-bakterijj.html). Применяется для повышения защитных сил организма при хроническом фурункулезе, гидрадените, сикозе и других стафилококковых и стрептококковых заболеваниях кожи.

Недостатком указанного способа является то, что получаемая вакцина содержит ограниченное количество антигенов - убитые микробные клетки без биологически активных продуктов жизнедеятельности их не содержат угнетающих размножение стафилококков продуктов обмена (в процессе длительного культивирования в питательной среде накапливаются специфические только для стафилококка антимикробные вещества), а также содержит формалин.

Задачей изобретения является устранение указанных недостатков.

Поставленная задача решается следующим образом.

Для получения вакцины по заявленному способу берут 6-8 штаммов стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus. Затем выделенные штаммы помещают в стандартный мясопептонный питательный бульон - каждый штамм в отдельную емкость и культивируют в течение 14-16 дней, в течение которых вакцина приобретает антистафилококковую активность вследствие накопления продуктов метаболизма и антигенов самого стафилококка, а также его токсинов. Культивирование производят при температуре 37°С.

Далее культуры выдерживают в течение 6-8 дней при температуре 3-5°С для накопления в ней большего количества биогенных стимуляторов, аналогично консервации по методу В.П.Филатова (БМЭ, издание третье, том 3, с.140), что происходит в неблагоприятных для живых клеток условиях.

Затем культуры смешивают, разливают по флаконам и тут же автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 минут.

Антистафилококковая активность полученной вакцины показала следующие результаты (см. табл.1).

Таблица 1
Сравнительная антистафилококковая активность предлагаемой вакцины и аналога в log
Способ культивирования Антимикробная активность
Раздельное выращивание 25,86
Совместное выращивание 21,32

Данные таблицы 1 свидетельствуют о том, что антистафилококковая активность полученной вакцины превышает активность вакцины, полученной при совместном выращивании.

Лечение животных предлагаемой вакциной производят так же, как и лечение стафилококковым анатоксином, но в дозе в полтора раза большей, что было установлено в опытах по иммунизации кроликов. Результаты опытов приведены в таблице 2.

Титр агглютининов в сыворотке крови иммунизированных животных.

Таблица 2
Вид вакцины Титр агглютининов
Раздельное выращивание 1/320
Совместное выращивание 1/160

Как видно из таблицы 2, предлагаемая вакцина вызывает более высокий титр нарастания антител, а следовательно, обладает более высокими иммуногенными свойствами.

Положительный пример

Полученная по предлагаемому способу вакцина испытывалась в одном из животноводческих хозяйств Приволжского района Самарской области.

Результаты испытаний приведены в таблице 3.

Таблица 3
Результаты лечебного действия вакцины
Инвентарный номер коровы Диагноз Результат лечения
851 катаральный мастит Вылечена
1437 катаральный мастит Вылечена
1292 серозный мастит Вылечена

Вакцина вводилась животным подкожно, троекратно, с интервалом в один день: в первый день - 3,75 мл, во второй день - 7,5 мл, в третий день - 7,5 мл.

Предлагаемое изобретение позволяет создать стафилококковую вакцину, обеспечивающую создание достаточно напряженного иммунитета против стафилококков для лечения гнойной инфекции, с учетом того, что первичным иммунным раздражителем является сам возбудитель. Использование при изготовлении вакцины шести штаммов стафилококков, выделенных от больных животных, позволяет расширить спектр действия вакцины за счет расширения набора антигенных детерминант как самого стафилококка, так и продуктов его жизнедеятельности. Применение для стерилизации вакцины автоклавирования при указанных параметрах позволяет обеспечить, помимо стерилизации, и деструкцию клеток и денатурацию белка, вследствие чего вакцина приобретает также и неспецифические свойства и может применяться для лечения гнойных инфекций, вызванных другими возбудителями. В силу того, что вакцина обладает неспецифическим действием на организм, определение этиотропного возбудителя не является обязательным. Поскольку предлагаемая вакцина не содержит формалина, она может вводиться как внутримышечно, так и подкожно. Раздельное выращивание штаммов стафилококков повышает ее антимикробные, иммуногенные свойства, лечебный эффект и является более экономичным.

Способ получения стафилококковой вакцины для лечения и профилактики гнойных инфекций, включающий выращивание шести-восьми штаммов гноеродных стафилококков в жидкой питательной среде и стерилизацию биомассы, отличающийся тем, что культивирование шести-восьми штаммов гноеродных стафилококков, идентифицированных как Staphylococcus aureus, осуществляют порознь в течение 14-16 дней при температуре 37°С, затем культивируют порознь при температуре 3-5°С в течение 6-8 суток, после чего полученный материал смешивают и сразу автоклавируют при температуре 115-125°С в течение 15-40 мин.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области ветеринарии. .
Изобретение относится к микробиологии, аллергологии и биотехнологии и предназначено для получения безальбумозного нативного аллергена для аллергической диагностики стафилококкоза у животных.
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. .
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии. .
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано для лечения пациентов с бронхиальной астмой. .
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения детей с кишечными коликами
Изобретение относится к получению и применению стафилококковой анатоксин-вакцины для профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии

Группа изобретений относится к эффективным иммуногенным композициям против Staphylococcus aureus, которые включают антигенные компоненты sta006, индуцирующий антитело, которое распознает SEQ ID NO:42; и содержащий аминокислотную последовательность: имеющую 50% или более идентичность SEQ ID NO:42; и/или содержащую фрагмент из, по меньшей мере, «n» последовательных аминокислот SEQ ID NO:42, где «n» составляет 7 или более, и sta011, индуцирующий антитело, которое распознает SEQ ID NO:47; и содержащий аминокислотную последовательность: имеющую 50% или более идентичность SEQ ID NO:47; и/или содержащую фрагмент из, по меньшей мере, «n» последовательных аминокислот SEQ ID NO:47, где «n» составляет 7 или более. Данные антигенные компоненты необязательно могут применяться в комбинации с сахаридами S. aureus. Композиции, включающие заявленные антигены, вызывают защитный иммунный ответ против нескольких патологий, вызванных S. Aureus. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 19 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области иммунологии, молекулярной биологии и генетической инженерии. Предложена иммуногенная композиция, содержащая смесь стафилококковых белков, и включающая стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый транспортный белок, или стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин, или стафилококковый транспортный белок и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин. Также предложены вакцины, способы лечения, применения и способы получения стафилококковой вакцины. Изобретение может быть использовано в медицине для лечения и предупреждения стафилококковой инфекции. 10 н. и 13 з. п. ф-лы, 8 табл., 7 ил., 8 пр.

Настоящая группа изобретений относится к области иммунологии и касается конъюгата полисахарид-белок, композиции, содержащей такой конъюгат, способа индуцирования иммунного ответа против Staphylococcus aureus у субъекта, способов получения такого конъюгата и способа редуцирования или предотвращения инфекции Staphylococcus aureus. Охарактеризованный конъюгат содержит капсулярный полисахарид Staphylococcus aureus, конъюгированный с белком носителем. Указанный полисахарид представляет собой полисахарид серотипа 5 или серотипа 8, имеет молекулярную массу между 70 кДа и 800 кДа и степень О-ацетилирования между 75 и 100%. Способы получения охарактеризованного конъюгата включают ковалентное конъюгирование капсулярных полисахаридов с белком носителем химическим способом с использованием либо 1,1-карбонил-ди-1,2,4-триазола (CDT), либо 3-(2-пиридилтио)пропионилгидразида (PDPH). Представленные решения позволяют получать вакцинные препараты против инфекций, вызванных Staphylococcus aureus повышенной иммуногенности. 6 н. и 23 з.п. ф-лы, 11 ил., 25 табл., 20 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения протективных антигенов на основе секретируемых белоксодержащих соединений Staphylococcus aureus. Способ предусматривает культивирование на жидкой питательной среде вирулентного штамма бактерий Staphylococcus aureus №6 с последующим отделением культуральной среды от бактерий путем фильтрования через фильтр PLASMAFILTER PLASMAFLUX PSu 2S с получением фильтрата. К полученному фильтрату добавляют сульфат аммония до 80% насыщения с получением осадка. Полученный осадок отделяют центрифугированием при 10000 g в течение 30 минут и растворяют в фосфатном буфере с pH 7.4 с последующей микрофильтрацией белоксодержащей фракции через мембрану 0,22 мкм и обессоливанием на колонке PD-10, очисткой и концентрированием путем проведения ион-обменной хроматографии на колонке Q-сефарозы, элюции 0,15 М NaCl и ультрафильтрацией на двух фильтрах 100 и 30 кДа до получения белоксодержащей фракции с молекулярной массой 30-90 кДа и содержанием белка 0,5-1,0 мг/мл. Изобретение позволяет получить препараты на основе протективного секретируемого белоксодержащего соединения. 1 ил., 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой композицию для индуцирования иммунного ответа против Staphylococcus aureus (варианты), способ индуцирования иммунного ответа против Staphylococcus aureus и способ придания пассивного иммунитета против Staphylococcus aureus субъекту. Композиция включает эффективное количество выделенного капсульного полисахарида типа 5 S. aureus, конъюгированного с белком-носителем CRM197, эффективное количество выделенного капсульного полисахарида типа 8 S. aureus, конъюгированного с белком-носителем CRM197, и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, состоящей из эффективного количества выделенного полипептида фактора слипания A S. aureus (ClfA), эффективного количества выделенного полипептида фактора слипания В S. aureus (ClfB) и эффективного количества выделенного белка MntC S. aureus. Капсульный полисахарид типа 5 представляет собой капсульный полисахарид с высокой молекулярной массой от 70 до 300 кДа. Капсульный полисахарид типа 8 представляет собой капсульный полисахарид с высокой молекулярной массой от 70 до 300 кДа, где от 5 до 23 лизинов в CRM197 являются конъюгированными. Конъюгаты СР5 и СР8 имеют молекулярную массу от примерно 200 кДа до примерно 5000 кДа. Предложенное изобретение позволяет получить улучшенный иммунный ответ против Staphylococcus aureus. 5 н. и 20 з.п. ф-лы, 29 ил., 26 табл., 32 пр.
Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается способа изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Представленный способ включает: отбор патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, проведение посева на дифференциально-диагностические среды, выделение клеток чистых культур возбудителей эшерихиоза Escherichia coli, стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и стафилококкоза Staphylococcus aureus, раздельное их выращивание, инактивирование клеток формалином, смешивание в равных соотношениях и внесение в смесь адъюванта - гидроокись алюминия. Представленное изобретение может быть использовано в научно-исследовательских и производственных учреждениях, занимающихся конструированием биопрепаратов, и позволяет получать специфическую, безвредную, высокоиммуногенную ассоциированную вакцину для защиты от трех опасных инфекций болезней крупного рогатого скота. 1 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованная вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей эшерихиоза Е. coli, стрептококкоза Streptococcus pneumoniae и стафилококкоза Staphylococcus aureus в равных соотношениях, полученных путем отбора патологического материала от больного и павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, а также формалин и гидроокись алюминия. Представленное изобретение обладает высокой иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет и не вызывает поствакцинальных осложнений. 1 табл., 5 пр.
Наверх