Применение lgg для профилактики или лечения респираторных аллергий

Группа изобретений относится к медицине, а именно к аллергологии, и может быть использована для предотвращения развития респираторных аллергий у субъекта. Для этого в организм беременной матери, и/или постнатально, в организм кормящей матери или непосредственно субъекту, вводят эффективное количество Lactobacillus rhamnosus GG (LGG). Введение LGG позволяет предотвратить раннюю аллергическую сенсибилизацию и последующее развитие респираторных аллергий за счет увеличения продукции сывороточных антител IgA у субъекта, а также предотвращения аллергического воспаления в легких и дыхательных путях. 2 н. и 10 з.п., 9 ил.

 

Уровень техники

Настоящее изобретение в целом относится к использованию LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для профилактики или лечения респираторных аллергий.

Уровень техники

Под аллергией понимается "анормальная гипервосприимчивость к веществу, которое в норме считается безвредным и к которому организм имеет толерантность". Симптомы аллергии могут варьировать от легкого насморка до анафилактического шока. Приблизительно 50 миллионов американцев страдают от различных аллергических заболеваний, при этом распространенность и заболеваемость постоянно повышаются.

Любой аллергический ответ включает в себя две основные фазы. Первый этап включает развитие ранней фазы реакции гиперчувствительности немедленного типа в ответ на аллерген. Когда аллерген впервые встречается с иммунной системой организма, аллергия не возникает. Вместо этого иммунная система начинает готовиться к будущим встречам с аллергеном. Макрофаги, которые представляют собой "клетки-мусорщики", окружают и разрушают внедрившийся в организм аллерген. Затем они представляют фрагменты аллергена на своей поверхности Т-лимфоцитам, которые являются основными участниками иммунной реакции в организме.

Указанный когнитивный сигнал и несколько некогнитивных сигналов (например, цитокины) активируют нативные Т-клетки и направляют дифференцировку Т-клеток в эффекторные субпопуляции. Основными участниками аллергического каскада являются Т-клетки фенотипа Th-2 (ТН-2). Т-клетки ТН-2 фенотипа характеризуются секрецией нескольких цитокинов, включая интерлейкин-4 (IL-4), IL-5 и IL-13. Цитокины IL-4 и IL-13 затем активируют В-лимфоциты, которые продуцируют иммуноглобулины класса Е (IgE). IgE антитела направлены против определенного аллергена. Взаимодействие специфических IgE антител с аллергеном на поверхности эффекторных клеток (тучных клеток и базофилов) запускает раннюю фазу реакции гиперчувствительности немедленного типа.

Описанная активация тучных клеток обычно происходит в течение нескольких секунд после второй встречи с аллергеном. Комплекс IgE на поверхности тучных клеток, созданный во время фазы сенсибилизации, распознает аллерген и связывается с ним. После того, как аллерген связывается с рецептором, происходит высвобождение активных веществ из гранул тучных клеток. Указанные активные вещества, или медиаторы, представляют собой провоспалительные соединения, такие, как гистамин, фактор активации тромбоцитов, простагландины, цитокины и лейкотриены. Именно указанные медиаторы в действительности и запускают аллергический ответ.Гистамин стимулирует продукцию слизи и вызывает покраснение, отек и воспаление. Простагландины вызывают сужение дыхательных путей и расширение кровеносных сосудов.

Вторая фаза аллергического иммунного ответа характеризуется инфильтрацией дыхательных путей воспалительными клетками, такими как эозинофилы, в ответ на воздействие аллергена. Эта очень важная связь между сенсибилизацией и воспалением осуществляется Т-клетками, которые секретируют медиаторы, которые не только вовлечены в синтез IgE, но и отвечают за рекрутинг, активацию и выживаемость эозинофилов. Тучные клетки и соседние клетки продуцируют химические сигнальные молекулы, которые передают сигнал циркулирующим базофилам, эозинофилам и другим клеткам, что вызывает их миграцию в ткани и помогает бороться с чужеродным агентом. Эозинофилы секретируют собственные химически активные соединения, которые поддерживают воспаление, вызывают повреждение тканей и притягивают больше иммунных клеток в очаг. Данная фаза может возникать через несколько часов или даже дней после экспозиции аллергена и продолжается также в течение нескольких часов или дней.

Респираторная аллергия представляет собой особый тип аллергической реакции, при котором повреждаются дыхательные пути. Поскольку структура дыхательных путей одинакова на всем протяжении, от носовых ходов до легких, все отделы дыхательных путей приблизительно одинаково повреждаются при аллергическом процессе. Следовательно, аллерген, который поражает носовые ходы или синусы также может повреждать легкие.

Например, аллергический ринит, также известный как сенная лихорадка, является следствием аллергической реакции слизистой оболочки носа и дыхательных путей на аллерген, присутствующий в воздухе. К симптомам аллергического ринита относятся зуд в носу, глотке и глазах, а также частое чиханье. Эти симптомы также сопровождаются заложенностью носа и насморком.

Поскольку аллергены, воздействующие на один участок респираторного тракта, могут повреждать и другие его отделы, ринит, локализующийся в носовых ходах, может приводить к астме, которая является гораздо более серьезным заболеванием и поражает легкие. Астма характеризуется развитием гиперреактивности дыхательных путей, одышкой, хрипами на выдохе, сухим кашлем и чувством стеснения в грудной клетке. Повторное воздействие аллергена может поддерживать воспалительный иммунный ответ в дыхательных путях, что приводит к их ремоделированию и развитию хронической бронхиальной астмы. Не у каждого пациента, страдающего от аллергического ринита, развиваются симптомы бронхиальной астмы, однако у многих пациентов, в частности с рецидивирующим и нелеченым ринитом, возникают воспалительные изменения легочной ткани. Приблизительно у 40% пациентов с аллергическим ринитом развивается клиническая картина бронхиальной астмы.

В том случае, когда воспаление носовых ходов, сопровождающее аллергический ринит, распространяется на синусы, развивается синусит или риносинусит, патологическое состояние, при котором придаточные пазухи или синусы не могут самостоятельно освобождаться от бактерий. К симптомам синусита относятся заложенность носа, насморк, фарингит, головная боль, слабость и кашель, а также боль в лобных областях, за щеками и даже в зубах и челюстях.

Респираторные аллергии являются наиболее распространенными заболеваниями у детей. Как и у взрослых, респираторные аллергии у детей проявляются чаще всего аллергическим ринитом и бронхиальной астмой.

Профилактика респираторных аллергий у новорожденных и детей является особенно важной задачей, поскольку считается, что ранняя сенсибилизация к аллергенам ассоциирована с более поздним созреванием иммунной системы. Кроме того, считается, что аллергическая сенсибилизация является первым этапом развития атопических заболеваний. Baena-Cagnani, Role of Food Allergy in Asthma in Childhood, Allergy. Clin. Immun. 1(2): 145-149 (2001). Очень часто бронхиальная астма, которая начинается в раннем детстве, ассоциируется с атопиями, равно как и ранняя аллергическая сенсибилизация, по-видимому, играет важную роль в поддержании воспаления при астме. Martinez, F., Development of Wheezing Disorders and Asthma in Preschool Children, Pediatr. 109:362-367 (2002).

Мало того что существует строгая ассоциация между аллергической сенсибилизацией и бронхиальной астмой, указанная ассоциация зависит от возраста. Несмотря на то, что небольшое количество детей становятся аллергически сенсибилизированными в раннем возрасте, у большинства из них в более поздние годы развиваются симптомы, напоминающие астму. Martinez, F., Viruses and Atopic Sensitization in the First Years of Life, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 162:S95-S99 (2000). Таким образом, очень важно найти способы профилактики ранней аллергической сенсибилизации и последующего развития респираторных аллергий.

С каждым днем появляется все больше доказательств того, что многие аспекты здоровья и нездоровья определяются не только в период детства, но и во время беременности. Это особенно верно для аллергических заболеваний, когда иммунные ответы при рождении являются результатом внутриматочного воздействия антигенов и представляют собой первичную сенсибилизацию. Например, антиген-специфические Т-клетки уже присутствуют при рождении, а ранняя сенсибилизация к пищевым аллергенам считается предшественником более поздних респираторных аллергий. Illi, et al., The Natural Course of Atopic Dermatitis from Birth to Age 7 Years and the Association with Asthma, Clin. Exp. Allergy 27:28-35 (1997). Кроме того, формирование легких начинается очень рано после зачатия и продолжается, по крайней мере, еще два-три года после рождения. Таким образом, как пренатальное, так и постнатальное развитие легочной ткани играет важную роль в патогенезе респираторных аллергий у новорожденных и детей более позднего возраста.

Также было показано, что у человеческого плода IgE-продуцирующие В-клетки развиваются на ранних сроках гестации и обладают способностью секретировать IgE в ответ на подходящий аллергический стимул, таким же образом, как это происходит при хорошо изученном IgM-ответе, который наблюдается при многих пренатальных инфекциях. Weil, G., et al., Prenatal Allergic Sensitization to Helminth Antigens in Offspring of Parasite-Infected Mothers, J. Clin. Invest. 71:1124-1129 (1983). Это также иллюстрирует необходимость профилактики как пренатальной, так и постнатальной аллергической сенсибилизации к респираторным аллергенам.

К традиционным лекарственным средствам, которые используются для лечения респираторных аллергий, относятся антигистаминные средства, местные назальные стероиды, противоотечные средства или деконгестанты и растворы кромолина. Альтернативой традиционным способам лечения является использование в качестве лекарственных средств пробиотиков для лечения определенных типов аллергий.

Пробиотические бактерии представляют собой живущие микроогранизмы, которые оказывают благоприятный эффект на здоровье хозяина. Lactobacillus spp.и Bifidobacterium spp., которые являются нормальными обитателями здорового кишечника, являются типичными представителями пробиотических бактерий. К сожалению, в настоящее время имеется очень мало публикаций, касающихся изучения клинических эффектов пробиотической поддержки у детей. Agostoni, С., et al„ Probiotic Bacteria in Dietetic Products for Infants: A Commentary by the ESPGHAN Committee on Nutrition, J. Pediatr. Gastro. Nutr. 38:365-374 (2004).

В заявке на патент США No.20040208863, Versalovic, раскрывается соединение, обладающее антивоспалительной активностью и секретируемое молочнокислыми бактериями. В заявке описывается использование Лактобактерий GG (LGG) для ингибирования продукции провоспалительных цитокинов. Однако данная заявка фокусируется на взрослых моделях и не раскрывает возможность того, что введение LGG может быть полезным для беременных и детей.

В патенте США No.6506380, Isolauri et al., описывается способ подавления реакций гиперчувствительности у пациентов, страдающих от пищевых аллергий, заключающийся во введении пробиотиков. Однако, данный патент не раскрывает возможность использования пробиотиков для лечения респираторных аллергий. Кроме того, несмотря на то что в патенте раскрывается возможность лечения детей пробиотиками, он не концентрируется на необходимости пре- и постнатального лечения.

Было проведено несколько исследований, направленных на изучение возможности профилактики определенных аллергий у детей путем пре- и постнатального введения пробиотиков. Например, результаты одного исследования говорят о том, что пробиотики, вводимые во время беременности и кормления, позволяют предотвратить развитие атопической экземы у ребенка. Rautava, S, et al., Probiotics During Pregnancy and Breast-Feeding Might Confer Immunomodulatory Protection Against Atopic Disease in the Infant, J. Allergy Clin. Immunol. 109:119-121 (2002). Исследование показало, что только у некоторых детей, получавших пробиотики, развилась атопическая экзема, по сравнению с группой детей, получавших плацебо, однако, исследователи делают заключение о том, что пробиотики "не оказывают влияния на традиционно существующую корреляцию между атопией и атопическим заболеванием" (то есть на результаты инъекционной кожной пробы и уровень IgE). Таким образом, поскольку пробиотики не оказали влияния на традиционные маркеры атопии, можно утверждать, что их введение эффективно только для профилактики атопической экземы, а не всех типов аллергий.

Аналогично, результаты исследования 2001 года позволяют сделать заключение о том, что введение пробиотиков может препятствовать развитию атопической экземы, однако при этом "общая концентрация IgE, частота увеличения концентрации антиген-специфичных IgE и результаты внутрикожных проб были практически одинаковы в группе, получавшей пробиотики, и в группе, получавшей плацебо". Kalliomaki, М., Probiotics in Primary Prevention of Atopic Disease: a Randomised Placebo-Controlled Trial, Lancet 357:1076-79 (2001). Следовательно, снова можно сделать вывод о том, что введение пробиотиков может оказаться эффективным для профилактики атопической экземы, но не других типов аллергий.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к новому способу использования LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения развития респираторных аллергий у пациента.

Настоящее изобретение также относится к новому способу использования LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения респираторных аллергий у пациента.

Согласно другому своему аспекту, настоящее изобретение относится к новому способу использования LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения выброса одного или более провоспалительного цитокина у пациента.

Кроме того, настоящее изобретение относится к новому способу использования LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения продукции IgE у пациента.

Настоящее изобретение также относится к новому способу использования LGG для создания лекарственного средства, предназначенного для увеличения продукции сывороточных IgA у пациента.

Способ, заявленный в соответствии с настоящим изобретением, имеет множество преимуществ, включая то, что у пациента подавляется или предотвращается аллергическое воспаление в легких или дыхательных путях, а также уменьшается местное тканевое воспаление в просвете дыхательных путей. Настоящее изобретение также уменьшает продукцию слизи и способствует расширению дыхательных путей. Кроме того, настоящее изобретение уменьшает или предотвращает выброс провоспалительных цитокинов и сывороточных IgE, а также увеличивает продукцию сывороточных IgA. Указанные благоприятные эффекты оказались неожиданными, поскольку аналогичные исследования показали противоположные результаты.

Краткое описание чертежей

Для более полного понимания сущности настоящего изобретения, ниже представлено более детальное его описание с ссылками на сопроводительные рисунки.

На фиг.1 показана схема, используемая в соответствии с настоящим изобретением.

На фиг.2 показано определение LGG в фекалиях мышей, получавших LGG, по сравнению с контролем.

На фиг.3 показано определение различных видов бактерий в фекалиях мышей, получавших 1GG, по сравнению с контролем.

На фиг.4 показано влияние LGG на уровень сывороточных анти-OVA-IgE, анти-OVA-IgGl и анти-OVA-IgG2a.

На Рисуке 5 показано влияние LGG на уровни сывороточных IgA.

На фиг.6 показано влияние LGG на уровень различных провоспалительных цитокинов, IFN-((фиг.6А), МСР-1 (фиг.6В), IL-10 (фиг.6С) и IL-6 (фиг.6D) у OVA-сенсибилизированных детей.

На фиг.7 показано влияние LGG на распределение мононуклеарных клеток в дыхательных путях.

На фиг.8 показано подавление продукции специфических антител коровьего молока.

На фиг.9 показана оценка иммунологической эффекторной функции специфических антител коровьего молока путем пассивного кожного анафилактического теста и исследования выброса протеазы-1 тучных клеток.

Подробное описание предпочтительных вариантов осуществления изобретения

Далее представлено подробное описание наиболее предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения, которые проиллюстрированы одним или несколькими примерами. Каждый из указанных примеров представлен с целью объяснения вариантов осуществления настоящего изобретения и ни в коем случае не ограничивает его сущность. В действительности, любому специалисту в данной области очевидно, что могут быть внесены различные изменения и модификации заявленного изобретения в пределах представленной ниже формулы изобретения. В частности, свойства и особенности одного варианта осуществления настоящего изобретения, могут использоваться для описания или иллюстрации другого варианта осуществления настоящего изобретения.

Следовательно, подразумевается, что настоящее изобретение включает такие свои варианты и модификации, которые попадают под представленную ниже формулу изобретения. Другие объекты, характерные особенности и аспекты настоящего изобретения рассматриваются далее, либо являются очевидными из представленного ниже детального описания. Любому специалисту в данной области очевидно, что настоящее обсуждение представляет собой лишь описание примерных вариантов осуществления настоящего изобретения без ограничения всего объема его сущности.

Определения

Термин "пробиотик" относится к микроорганизму, который оказывает благоприятный эффект на здоровье хозяина.

Термин "пребиотик", используемый здесь, относится к неперевариваемому пищевому ингредиенту, который стимулирует рост и/или активность пробиотиков.

Термин "субъект" относится к любому млекопитающему, предпочтительно, к человеку.

Используемый здесь термин "лечение" обозначает улучшение течения заболевания, патологического состояния или подавление симптома заболевания или патологического состояния.

Используемый здесь термин "профилактика" обозначает прекращение или предотвращение развития заболевания, патологического состояния или симптома заболевания или патологического состояния путем какого-либо действия.

Термин "терапевтически эффективное количество" относится к количеству, при введении которого отмечается улучшение течения заболевания или патологического состояния или выздоровление от заболевания или патологического состояния, или подавление симптомов заболевания или патологического состояния.

Термин "пренатальное введение" обозначает любое введение препарата беременной женщине, т.е. нерожденному плоду.

Термин "постанатальное введение" обозначает введение препарата субъекту сразу после рождения и до 1 года жизни.

Используемый здесь термин "детское питание" (молочная смесь) относится к композиции, которая полностью удовлетворяет питательные потребности ребенка и представляет собой заменитель женского молока. В США состав молочных смесей регламентируется постановлениями федерального агентства 21 C.F.R., Разделы 100, 106 и 107. Указанные постановления регулируют макронутриентный, витаминный, минеральный состав молочной смеси, а также уровни других компонентов для того, чтобы наилучшим образом воспроизвести свойства женского грудного молока.

В соответствии с настоящим изобретением представляется новый способ использования LGG для создания лекарственного средства для лечения или профилактики респираторных аллергий у субъекта.

LGG представляет собой пробиотический бактериальный штамм, выделенный из кишечной микрофлоры здорового человека. Это раскрывается в патенте США No.5032399, Gorbach et al., который включен в настоящее изобретение в качестве ссылки. LGG являются устойчивыми к большинству антибиотиков, стабильными в присутствии кислот и желчи и активно прикрепляются к клеткам слизистой оболочки кишечника человека. Они остаются жизнеспособными в течение 1-3 дней у большинства людей и в течение 7 дней у 30% субъектов. Помимо способности к колонизации, LGG также благоприятно влияет на иммунологическую реактивность слизистой. LGG доступны в Американской коллекции типовых культур под номером АТСС 53103.

Согласно способу, заявленному в соответствии с настоящим изобретением, терапевтически эффективное количество LGG находится в пределах от 1×10⁴ до 1×10¹² КОЕ/л/кг/день. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, заявленный способ включает введение младенцу LGG в количестве приблизительно 1×10⁶ и 1×10⁹ КОЕ/л/кг/день. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения, заявленный способ включает введение младенцу LGG в количестве приблизительно 1×10⁸ КОЕ/л/кг/день.

В том случае, если вводится терапевтическое количество LGG, то, согласно способу, заявленному в соответствии с настоящим изобретением, способ их введения не является решающим. В случае пренатального введения LGG вводят в организм беременной матери, из кровотока которой активное соединение поступает в организм плода. Пренатальное введение может осуществляться при помощи биологической добавки, которую дают беременной женщине. Например, LGG может входить в состав пилюль, таблеток, капсул, порошков, растворов или геля. Согласно данному варианту осуществления настоящего изобретения, LGG поддержка может вводиться в комбинации с другими пищевыми добавками или витаминами.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, LGG для пренатального введения могут входить в состав сахара, липида или полисахаридной смеси для того, чтобы дополнительно увеличить выживаемость бактерий. Композиции, заявленные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть представлены в форме, подходящей для употребления в пищу, включая напитки, молоко, йогурт, фруктовый сок, фруктовый напиток, жевательную таблетку, печенье, крекер или их различные сочетания.

В том случае, когда во время первого года жизни ребенок находится на грудном вскармливании, постнатальное введение LGG может осуществляться через материнское молоко. Согласно данному варианту осуществления настоящего изобретения, кормящая мать продолжает получать LGG добавку в течение всего периода кормления грудью, что обеспечивает поступление эффективного количества LGG в организм ребенка посредством молока.

В том случае, когда во время первого года жизни ребенок находится на искусственном вскармливании или на комбинированном вскармливании материнским молоком и молочными смесями, LGG могут входить в состав молочной смеси, которой потом кормят ребенка. Это также является вариантом постнатального введения LGG.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения, молочная смесь, используемая в соответствии с настоящим изобретением, является сбалансированной по питательным веществам и содержит подходящие типы жиров, углеводов, белков, витаминов и минералов в нужных количествах. Количество липидов или жиров может варьировать от 3 до 7 г/100 ккал. Количество белков обычно варьирует от 1 до 5 г/100 ккал. Количество углеводов обычно варьирует от 8 до 12 г/100 ккал. Источниками протеинов могут быть любые известные источники, например, обезжиренное молоко, молочная сыворотка, казеин, соевый белок, гидролизированный белок, аминокислоты и т.п. Источниками углеводов могут быть любые известные источники, например, лактоза, глюкоза, кукурузный сироп, мальтодекстрины, сахароза, крахмал, рисовый сироп и т.п. Источниками липидов могут быть любые известные источники, включая овощные масла, такие как пальмовое масло, соевое масло, пальмоелин, кокосовое масло, масло триглицеридов средних цепей, высокоолеиновое подсолнечное масло, высокоолеиновое сафлоровое масло и т.п.

Обычно используются коммерчески доступные детские молочные смеси. Например, Enfamil^®, Enfamil^® Premature Foremula, Enfamil^® с железом, Lactofree^®, Nutramigen^®, Pregestimil^® и ProSobee^® (производимые компанией Mead Johnson & Company, Evansville, IN, U.S.А) могут быть обогащены LGG в подходящем количестве для реализации способа, заявленного в соответствии с настоящим изобретением.

Альтернативно, LGG для постнатального введения может находиться в составе композиции, которая не включена в детское питание. Например, LGG могут быть заключены в пилюли, таблетки, капсулы, порошки, растворы или гели. Согласно данному варианту осуществления настоящего изобретения, LGG добавки могут вводиться в комбинации с другими пищевыми добавками, такими как витамины.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, LGG для пренатального введения могут входить в состав сахара, липида или полисахаридной смеси для того, чтобы дополнительно увеличить выживаемость бактерий. Композиции, заявленные в соответствии с настоящим изобретением, могут быть представлены в форме, подходящей для употребления в пищу, включая напитки, молоко, йогурт, фруктовый сок, фруктовый напиток, жевательную таблетку, печенье, крекер или их различные сочетания.

Согласно другому варианту использования настоящего изобретения, постнатальное введение LGG продолжается, по крайней мере, 3 месяца. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, постнатальное введение LGG продолжается, по крайней мере, 6 месяцев. Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения, постнатальное введение LGG продолжается, по крайней мере, 12 месяцев. Согласно определенному варианту осуществления настоящего изобретения, введение LGG продолжается неограниченное количество времени.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения, LGG для пренатального и/или постнатального введения могут комбинироваться с одним или более пробиотиком. Любой из известных пробиотиков может использоваться в соответствии с данным вариантом осуществления настоящего изобретения. Согласно определенному варианту осуществления настоящего изобретения, пробиотик выбран из группы, включающей Lactobacillus и Bifidobacterium.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, LGG могут вводиться пренатально и/или постнатально в комбинации с одним или более пребиотиком. Любой из известных пробиотиков может использоваться в соответствии с данным вариантом осуществления настоящего изобретения. К пребиотикам, заявленным в соответствии с настоящим изобретением, относятся, например, лактулоза, галакто-олигосахарид, фрукто-олигосахарид, сизомалато-олигосахарид, олигосахариды соевых бобов, лактосукроза, ксило-олигосахарид и гентио-олигосахариды.

Согласно настоящему изобретению, прентальное и/или постнатальное введение LGG способствует профилактике или лечению аллергического ринита, астме или синусита.

Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения, пренатальное и/или постнатальное введение LGG способствует профилактике или лечению аллергического воспаления в легких и дыхательных путях пациента. Специфически, использование настоящего изобретения может способствовать профилактике и лечению тканевого воспаления в дыхательных путях, воспалительных явлений в просвете дыхательных путей; уменьшать продукцию слизи или расширять дыхательные пути.

Согласно еще одному варианту осуществления настоящего изобретения, пренатальное и/или постнатальное введение LGG уменьшает или препятствует выбросу одного или более провоспалительного цитокина. Используемый здесь термин "провоспалительный цитокин" относится к цитокинам, которые активируют воспалительный процесс. Примерами указанных цитокинов, без ограничений указанными, являются INF-γ, MCP-1, IL-6 и IL-10.

Согласно определенному аспекту осуществления настоящего изобретения, пренатальное и/или постнатальное введение LGG препятствует или уменьшает продукцию сывороточных IgE у пациента. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, пренатальное и/или постнатальное введение LGG увеличивает продукцию сывороточных IgA у пациента.

В представленных ниже примерах описаны некоторые варианты осуществления настоящего изобретения. Другие варианты осуществления настоящего изобретения, в пределах представленной ниже формулы изобретения, будут очевидны специалистам в данной области. Подразумевается, что специфические варианты осуществления настоящего изобретения, а также примеры их реализации, представлены исключительно с целью иллюстрации и лучшего понимания настоящего изобретения и находятся в пределах представленной ниже формулы изобретения без ограничения его объема и сущности. Во всех представленных ниже примерах, если дополнительно не оговаривается иное, все данные выражены в процентах от массы.

Пример 1

В данном примере описываются материалы и методы, необходимые для изучения влияния пренатального введения LGG на развитие респираторных аллергий и воспаления в легких и дыхательных путях. Субштамм 6-8-недельных мышей албиносов женского пола (BALB/c) получают из лаборатории Harlaan Hinkelmann (Hannover, Germany). Их выращивают на овальбуминдефицитной диете (OVA-дефицитной диете). Все экспериментальные процедуры одобрены этическим комитетом по правам животных.

Пренатальное воздействие Lactobacillus rhamnosus GG (LGG)

На -10, -8, -6, -4 и -2 день перед случкой мышам женского пола BALB/c 5 раз интрагастрально вводят 10⁸ колониеобразующих единиц (КОЕ) лиофилизированных LGG в объеме 200 мкл (растворенных в фосфатно-буферном солевом растворе (PBS)). После случки и во время беременности и лактации мышам из всех групп каждые два дня вводят интрагастрально 10⁸ КОЕ лиофилизированных LGG в объеме 200 мкл. Контрольные животные такого же возраста получали PBS вместо LGG (контрольная группа).

Неонатальное ОVА-воздействие

На 25 день жизни и, затем повторно, на 39 день жизни мышей сенсибилизируют к OVA путем двух интраперитонеальных инъекций OVA в дозе 10 мкг (шкала VI; Sigma, Deisenhofen, Germany) эмульгированного в 1.5 Аl(ОН)₃ (Pierce, Rockford, USA) до общего объема 200 мкл.

Для того чтобы оценить воспаление дыхательных путей, мышей помещают в камеру из органического стекла и подвергают воздействию OVA в аэрозоле (1% вес./об., растворенном в PBS) в течение 20 минут на 44, 45, 46 и 47 день жизни. Воспаление дыхательных путей оценивают через 24 часа после последнего воздействия аллергена.

Продукцию цитокинов, IgA- и IgE- антительный ответ у OVA-сенсибилизированных мышей оценивают на 53 день.

Определение LGG-ДНК в образцах стула животных

Образцы стула (0.05 г) взвешивают в асептических условиях, помещают в стерильные колбы и гомогенизируют в 1.4 мл лизирующего буфера. Экстракцию геномной ДНК осуществляют согласно инструкциям производителя (набор QIAamp для определения ДНК в фекалиях, Quiagen). ДНК амплифицируют при помощи набора для ПЦР Hot-start (Quiagen) с LGG-специфическими парными праймерами (смысловая последовательность LGG: gagaagaatggtcggcagag, антисмысловая последовательность LGG: catttcaccgctacacatgg).

Потомство: воздействие OVA

На 25 и 39 день жизни потомство сенсибилизируют к OVA путем двух интраперитонеальных инъекций OVA в дозе 10 мкг (шкала VI; Sigma, Deisenhofen, Germany) эмульгированного в 1.5 Аl(ОН)₃ (Pierce, Rockford, USA) до общего объема 200 мкл. Антительный ответ у OVA-сенсибилизированных мышей оценивают на 53 день.

На 44, 45, 46 и 47 день подгруппу мышей помещают в камеру из органического стекла и подвергают воздействию OVA в аэрозоле (1% вес./об., растворенном в PBS) в течение 20 минут для оценки воспаления дыхательных путей.

Измерение уровней ОVА-специфических антител в сыворотке

Уровни OVA-специфических IgGI, IgG2a и титры IgE в сыворотке определяют с помощью ELISA на 53 день. 96-луночные плоскодонные полистироловые планшеты для микротитрования (Greiner) покрывают OVA (20 мкг/мл), растворенным в 0.1 М карбонатном покрывающем буфере, рН 8.2 (для IgG1) или PBS (для IgE и IgG2a). Планшеты инкубируют в течение ночи при 4°С, трижды отмывают промывающим буфером (PBS/0.1% Твин 20) и блокируют в течение 2 часов при комнатной температуре с использованием блокирующего раствора (3% BSA/PBS). После отмывания (трижды) на планшеты добавляют образцы (растворенные в PBS/0.1% Твин 20) и инкубируют при 4°С в течение ночи, после чего инкубируют с биотин-конъюгированными антимышиными IgE, IgG2a или IgG1 моноклональными антителами (2,5 мкг/мл, все антитела получены из лаборатории Pharmingen) в течение 2 часов при комнатной температуре. Реакцию проявляют при помощи стрептавидин-пероксиадазы (разведенной в соотношении 1:1000) в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте и тетраметилбензидином (Roche) в качестве субстрата. Реакцию прекращают путем добавления 2n-серной кислоты, планшеты оценивают при 450/490 нм.

Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) и дифференцировка клеток

Лаважную жидкость собирают через 24 часа после последнего воздействия OVA-аэрозоля. Осуществляют канюляцию трахеи и собирают БАЛ при помощи двух смывов 0.8 мл ледяным PBS. Определяют восстановленный объем БАЛ и общее количество клеток. Цитоспиновый мазок получают для каждого образца при помощи центрифугирования 50 мкл БАЛ-жидкости/150 мкл PBS (100 г в течение 5 минут). После фиксации цитоспиновые мазки окрашивают красителем Diff Quick (Baxter Dade).

Подсчитывают количество клеток различных типов на каждые 100 клеток. Клетки классифицируют как нейтрофилы, эозинофилы, макрофаги или лимфоциты, по стандартным морфологическим критериям.

Пример 2

Данный пример иллюстрирует присутствие LGG в фекалиях мышей. Наличие LGG определяют в образцах фекалий мышей, получавших LGG, и в образцах фекалий мышей, получавших только PBS. После микробиологического культивирования было показано, что LGG присутствует в образцах фекалий мышей, получавших LGG, и не определяется в фекалиях мышей, получавших только PBS (фиг.2А). Для того чтобы подтвердить идентичность вводимых LGG и LGG в фекалиях, из образцов выделяют ДНК и амплифицируют при помощи LGG-ПЦР-специфических праймеров. Как показано на фиг.1В, LGG-специфичные ПЦР продукты могут быть определены в образцах, полученных от животных, получавших LGG, и не определяются в образцах фекалий животных, получавших только PBS (фиг.2В). Полученные результаты говорят о том, что пренатальное и раннее постнатальное введение LGG мышам приводит к колонизации кишечника указанными микроорганизмами, при этом LGG определяется в фекалиях в течение, по крайней мере, трех недель после последнего введения.

Для того чтобы определить, приводит ли введение LGG матери к продолжительной (>3 недель после прекращения введения LGG) колонизации кишечника новорожденных мышей, выделяют ДНК из образцов фекалий мышей на 53 день их жизни. ПЦР анализ показал, что ни в одной группе, ни у мышей, получавших LGG, ни у мышей, получавших PBS, не наблюдается колонизация LGG (фиг.2С). Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение LGG в организм матери не приводит к продолжительной колонизации кишечника потомства в постнатальном периоде.

Для того чтобы дополнительно оценить, насколько пре- и раннее постнатальное введение LGG влияет на распределение бактериальной колонизации в кишечнике, определяют наличие нескольких бактериальных штаммов (LGG, Enterococcus, E.coli, Staphylococcus aureus, Bacteroides) в образцах фекалий. Как показано на фиг.3, в ходе эксперимента была отмечена тенденция к тому, что LGG-поддержка благоприятно влияет на бактериальную колонизацию. Бактерии рода Enterococcus, E.coli и Bacteroides в большом количестве определялись в образцах фекалий мышей, получавших LGG-поддержку, по сравнению с контрольной группой (фиг.3). Кроме того, было отмечено уменьшение колонизации кишечника бактериями вида Staphylococcus aureus пo сравнению с контрольной группой, получавшей только PBS. Полученные результаты свидетельствуют о том, что LGG-поддержка улучшает колонизацию нормального здорового кишечника и, параллельно, уменьшает пролиферацию патогенных бактерий в кишечнике мышей.

Пример 3

Данный пример иллюстрирует влияние LGG на продукцию сывороточных аллерген-специфических антител у субъектов, страдающих от аллергии. Также изучалось, насколько пренатальное и раннее постнатальное введение LGG препятствует формированию аллергического фенотипа в дальнейшей жизни. Таким образом, продукцию аллерген-специфических антител оценивают у потомства мышей после интраперитонеальной сенсибилизации OVA, которую осуществляют путем воздействия OVA-аллергенного аэрозоля. Как показано на фиг.4А и 4В, LGG-поддержка матери подавляет развитие аллерген-специфического антительного ответа у потомства, о чем свидетельствует значительное уменьшение продукции анти-OVA-IgGl у мышей, получавших LGG в пренатальном и раннем постнатальном периоде, по сравнению с PBS-контролем (фиг.4А, В). Мышиный подкласс IgG1 представляет собой эффекторную молекулу, определяющую проявления аллергии, такие как положительная инъекционная кожная проба и развитие воспаления дыхательных путей. Учитывая указанную эффекторную функцию, можно сказать, что мышиный подкласс IgG1 идентичен подклассу IgE человека. При изучении уровня продукции анти-OVA IgG2a были выявлены существенные различия (фиг.4С). Эти результаты говорят о том, что LGG-поддержка матери уменьшает аллергическую сенсибилизацию к респираторным аллергенам у потомства.

Пример 4

Данный пример иллюстрирует влияние LGG на увеличение уровня IgA в сыворотке пациента. В грудном молоке содержится большое количество секреторных антител класса IgA. Также известно, что антитела этого класса ассоциированы с развитием иммунологической толерантности после экспозиции аллергена. Таким образом, значительное увеличение продукции сывороточных IgA у потомства матерей, получавших LGG-поддержку, по сравнению с потомством контрольных животных (PBS), оказалось неожиданным (фиг.5). Этот результат говорит о том, что LGG-поддержка матерей, не только препятствует развитию аллергического иммунного ответа у потомства, о чем свидетельствует существенное уменьшение продукции IgG1, но и индуцирует продукцию антител (IgA), которая ассоциируется с развитием иммунологической толерантности.

Пример 5

Данный пример иллюстрирует влияние LGG на продукцию провоспалительных цитокинов спленоцитами. Для того чтобы дополнительно установить, насколько благоприятный эффект LGG-поддержки матерей на продукцию антител у потомства, ассоциируется с иммунологическим иммунным ответом, сопутствующим иммунологической толерантности, культивируют мононуклеарные клетки, выделенные из селезенок OVA-сенсибилизированных и несенсибилизированных мышей, в присутствии LGG или аллергена (OVA). Продукцию цитокинов оценивают через 72 часа. У потомства мышей, получавших LGG-поддержку, отмечалось существенное уменьшение продукции INF-гамма, МСР-1, IL-10 и IL-6 (фиг.6 A-D). Эти результаты свидетельствуют о том, что LGG-поддержка матерей приводит к значительному подавлению продукции провоспалительных цитокинов у потомства.

Пример 6

Данный пример иллюстрирует влияние LGG на супрессию аллергического воспаления дыхательных путей у субъектов, страдающих от аллергии. Для того чтобы определить, насколько пренатальное введение LGG влияет на развитие экспериментальной астмы, OVA-сенсибилизированных мышей подвергают воздействию аллергена четыре раза. Воспаление дыхательных путей анализируют, исследуя бронхоальвеолярные смывы (БАЛ). В бронхоальвеолярном смыве OVA-сенсибилизированного потомства матерей, получавших LGG поддержку, содержание лейкоцитов было существенно меньше, чем в смывах OVA-сенсибилизированных мышей из контрольной (PBS) группы (фиг.7). Кроме того, клеточный состав БАЛ характеризовался существенным уменьшением содержания гранулоцитов: эозинофилов, а также макрофагов, при этом также была отмечена тенденция к уменьшению количества лимфоцитов.

Пример 7

В данном примере описываются материалы и методы, необходимые для изучения влияния пренатального и постнатального введения LGG на развитие респираторных аллергий и воспаления в легких и дыхательных путях. Перед случкой и во время беременности мышам женского пола BALB/c интрагастрально вводили LGG. LGG-поддержку продолжают и после появления потомства во время грудного вскармливания до 21 дня после родов. Контрольные животные получали PBS вместо LGG.

На 0, 2, 4, 6, 8, 10 и 12 день BALB/c мышам интрагастрально 5 раз вводили 10⁸ КОЕ лиофилизированных LGG в объеме 200 мкл (растворенных в PBS). Контрольные животные получали только PBS. На 21 и 28 день все животные получали сенсибилизирующие инъекции белков коровьего молока в дозе 100 мкг вместе с 1.5 мг адъюванта Аl(ОН)₃. Для оценки уровня сывороточных антител и иммунологической эффекторной функции (РСА) образцы крови собирали на 0 и 49 день.

Крысам линии Wistar сбривают шерсть на спине и боках и внутрикожно вводят 0.1 мл тестируемой сыворотки в разведении, полученной от мышей на 49 день, затем через 24 часа внутривенно вводят 1 мл смеси раствора белков коровьего молока (Mead Johnson Nutritionals, Evansville, IN, USA) и раствора голубого Эванса (2% в стерильном солевом растворе) в соотношении 1:1. Через 20-30 минут у животных определяют наличие положительного ответа. Измеряют диаметр окрашенного пятна в месте введения сыворотки.

Уровни специфических IgG1, IgG2a и титры IgE коровьего молока определяют на 49 день при помощи ELISA. 96-луночные плоскодонные полистироловые планшеты для микротитрования (NUNC, Germany) покрывают белком коровьего молока (5 мкг/мл), растворенным в 0.1 М карбонатном покрывающем буфере, рН 9.6, и блокируют в течение 1 часа при температуре 37°С с использованием блокирующего раствора PBS/1% BSA/0.02 Твин 20. На каждом планшете с помощью кривой сравнения, полученной с положительной пулированной сывороткой (контрольный день 49), определяют (начальное разведение 1:10 для IgE, 1:100 для IgG2 и 1:6400 для IGg1) набор 1000 условных единиц/мл (AU/мл) для уровней комплекса "специфический Ag-специфическое Аb". Для определения IgE, IgG1 и IgG2a добавляют РО-конъюгированные антитела (в течение 1 часа при 37°С). Затем для окрашивания реакционной смеси используют 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМВ; Sigma, Germany, 100 мкл на лунку; 6 мг/мл DMSO), после чего реакцию останавливают путем добавления 2N раствора H₂SO₄ в дозе 100 мкл на лунку, поглощение измеряют при 450 нм. Титры специфических антител коровьего молока выражают в условных единицах (AU) по отношению к контрольной сыворотке.

Образцы крови забирают перед пероральной сенсибилизацией животных (100 мг белка коровьего молока, на 56 день) и через час после нее; уровни mmcp-1 в сыворотке определяют при помощи набора для ELISA (Moredun, Scotland). ELISA осуществляют согласно инструкциям производителя. Данные анализируют при помощи программы GraphPad Prism, версия 3.02. Различия в группах определяют при помощи теста Манна-Уитни-U. Величины р<0.05 считаются статистически значимыми.

Пример 8

Данный пример иллюстрирует наличие LGG в фекалиях мышей, получавших LGG пре- и постнатально. Наличие LGG определяют в образцах фекалий мышей, получавших LGG, и сравнивают с образцами фекалий животных, получавших только PBS. После микробактериального культивирования было показано, что LGG присутствует в фекалиях животных, получавших LGG, и не определяется в фекалиях мышей, получавших только PBS. Для того чтобы подтвердить идентичность вводимых LGG и LGG в фекалиях, из образцов выделяют ДНК и амплифицируют при помощи LGG-ПЦР-специфических праймеров. Как показано на фиг.1В, LGG-специфичные ПЦР продукты могут быть определены в образцах, полученных от животных, получавших LGG, и не определяются в образцах фекалий животных, получавших только PBS. Полученные результаты говорят о том, что пренатальное и раннее постнатальное введение LGG мышам приводит к колонизации кишечника указанными микроорганизмами, при этом LGG определяется в фекалиях в течение, по крайней мере, трех недель после последнего введения.

Для того чтобы установить, приводит ли LGG-поддержка матери к колонизации кишечника потомства в неонатальном периоде указанными микроорганизмами, выделяют ДНК из образцов фекалий новорожденных на 53 день их жизни. ПЦР анализ показал, что ни у мышей, получавших LGG, ни у мышей, получавших PBS, не отмечается колонизации кишечника LGG. Полученный результат говорит о том, что LGG, вводимые в организм матери, не проникают в организм потомства в пренатальном и постнатальном периоде.

Для того чтобы дополнительно оценить, насколько пре- и раннее постнатальное введение LGG влияет на распределение бактериальной колонизации в кишечнике, определяют наличие нескольких бактериальных штаммов (LGG, Enterococcus, E.coli, Staphylococcus aureus, Bacteroides) в образцах фекалий. Существует тенденция к тому, что LGG-поддержка благоприятно влияет на бактериальную колонизацию. Бактерии рода Enterococcus, E.coli и Bacteroides в большом количестве определялись в образцах фекалий мышей, получавших LGG-поддержку, по сравнению с контрольной группой. Кроме того, было отмечено уменьшение колонизации кишечника бактериями вида Staphylococcus aureus, по сравнению с контрольной группой, получавшей только PBS. Полученные результаты свидетельствуют о том, что LGG-поддержка улучшает колонизацию нормального здорового кишечника и, параллельно, уменьшает пролиферацию патогенных бактерий в кишечнике мышей.

Пример 9

Данный пример иллюстрирует влияние пре- и раннего постнатального введения LGG на продукцию сывороточных аллерген-специфических антител у мышей в неонатальном периоде по сравнению с контролем. Продукцию аллерген-специфических антител оценивают у мышей в неонатальном периоде после интраперитонеальной сенсибилизации OVA с последующей сенсибилизацией OVA-аллергеном в аэрозоле. LGG-поддержка матерей препятствует развитию аллерген-специфического антительного ответа, о чем свидетельствует значительное уменьшение продукции анти-OVA IgGI в пре- и раннем постнатальном периоде у потомства животных, получавших LGG, по сравнению с PBS контролем. Мышиный подкласс IgG1 представляет собой эффекторную молекулу, определяющую проявления аллергии, такие, как положительная инъекционная кожная проба и развитие воспаления дыхательных путей. Мышиный подкласс IgG1 идентичен подклассу IgE человека. Уровень продукции анти-OVA IgG2a существенно различался у животных, получавших LGG, и у животных, получавших PBS. Эти результаты говорят о том, что LGG-поддержка матери уменьшает аллергическую сенсибилизацию к респираторным аллергенам у потомства.

Пример 10

Данный пример иллюстрирует влияние пре- и раннего постнатального введения LGG на продукцию сывороточных IgA у мышей в неонатальном периоде по сравнению с контролем. В грудном молоке содержится большое количество секреторных антител класса IgA. Также известно, что антитела этого класса, ассоциированы с развитием иммунологической толерантности после экспозиции аллергена. Таким образом, значительное увеличение продукции сывороточных IgA у потомства матерей, получавших LGG-поддержку, по сравнению с потомством контрольных животных (PBS), оказалось неожиданным. Этот результат говорит о том, что LGG-поддержка матерей, не только препятствует развитию аллергического иммунного ответа у потомства, о чем свидетельствует существенное уменьшение продукции IgG1, но и индуцирует продукцию антител (IgA), которая ассоциируется с развитием иммунологической толерантности.

Пример 11

Данный пример иллюстрирует влияние пре- и раннего постнатального введения LGG на продукцию провоспалительных цитокинов у мышей в неонатальном периоде по сравнению с контролем. Мононуклеарные клетки, выделенные из селезенки OVA-сенсибилизированных и несенсибилизированных мышей в неонатальном периоде, культивируют в присутствии LGG или аллергена (OVA). Продукцию цитокинов оценивают через 72 часа. У потомства метерей, получавших LGG-поддержку, отмечалось существенное уменьшение продукции INF-гамма, МСР-1, IL-10 и IL-6. Эти результаты свидетельствуют о том, что LGG-поддержка приводит к значительному подавлению продукции провоспалительных цитокинов у потомства.

Пример 12

Данный пример иллюстрирует влияние пре- и раннего постнатального введения LGG на подавление воспаления дыхательных путей у мышей в неонатальном периоде по сравнению с контролем. OVA-сенсибилизированных мышей подвергают воздействию аллергена четыре раза. Воспаление дыхательных путей анализируют, исследуя бронхоальвеолярные смывы (БАЛ). В бронхоальвеолярном смыве OVA-сенсибилизированного потомства матерей, получавших LGG поддержку, содержание лейкоцитов было существенно меньше, чем в смывах OVA-сенсибилизированных мышей, получавших PBS в пренатальном периоде (р<0.05). Кроме того, клеточный состав БАЛ характеризовался существенным уменьшением содержания гранулоцитов: эозинофилов, а также макрофагов, при этом также была отмечена тенденция к уменьшению количества лимфоцитов.

Пример 13

Данный пример иллюстрирует влияние постнатального введения LGG на развитие аллергического фенотипа в более поздние годы жизни. Для того, чтобы изучить, насколько постнатальное воздействие LGG влияет на развитие аллергического фенотипа в дальнейшем, мышам женского пола линии BALB/c в течение двух недель вводили LGG или PBS в солевом растворе. На 21 и 28 день мыши получали две сенсибилизирующие инъекции белков коровьего молока. На 49 и 59 день оценивали продукцию специфических антител к белкам коровьего молока (фиг.8) и иммунологическую эффекторную функцию, при помощи пассивного кожного анафилактического теста (фиг.9А) и выброса протеазы-1 тучных клеток в сыворотку после оральной сенсибилизации (фиг.9В).

Как показано на фиг.8, постнатальное введение LGG препятствует развитию аллерген-специфического антительного ответа, о чем свидетельствует значительное уменьшение продукции специфических IgE к белкам коровьего молока. Уменьшение продукции аллерген-специфических IgE ассоциировалось со скудными проявлениями воспаления и небольшой папулой после введения аллергена (фиг.9А). Уменьшение продукции аллерген-специфических IgE также ассоциировалось с уменьшением выброса протеазы-1 тучных клеток после воздействия аллергена (фиг.9В). Эти результаты свидетельствуют о том, что введение LGG препятствует развитию аллерген-специфического иммунного ответа и приводит к подавлению симптомов аллергии после введения аллергена. Следовательно, воздействие LGG перед аллергической сенсибилизацией препятствует развитию аллергического фенотипа в дальнейшей жизни.

Все ссылки, приведенные в данном описании, в том числе на публикации, патенты, патентные заявки, отчеты, обзоры, рукописи, тезисы, брошюры, книги, сайты Интернета, журнальные статьи, периодические издания и т.д., включены в описание исключительно в качестве цитируемого материала. Обсуждение ссылок имеет целью просуммировать утверждения авторов указанных публикаций и здесь не делается каких-либо допущений по поводу их вхождения в уровень техники. Заявитель оставляет за собой право оспорить точность и достоверность цитируемых источников информации. Раскрытые в описании и другие модификации и варианты настоящего изобретения могут быть осуществлены специалистом в данной области знаний без выхода за объем изобретения, который отражен в формуле. Кроме того, должно быть понятно, что различные аспекты и воплощения изобретения могут быть частично или полностью изменены без изменения его сущности. Специалисту в данной области также ясно, что приведенное в данной заявке описание изобретения служит исключительно иллюстративным целям и ни в коей мере не ограничивает объема изобретения, сущность которого выражена в формуле. Таким образом, содержание и широта притязаний формулы изобретения не ограничивается описанием, которое характеризует предпочтительные воплощения изобретения.

1. Способ предотвращения развития респираторных аллергий у субъекта, включающий введение в организм беременной матери, и/или постнатальное введение в организм кормящей матери, или субъекту терапевтически эффективного количества Lactobacillus rhamnosus GG (LGG).

2. Способ по п.1, при котором респираторные аллергии выбраны из группы, включающей аллергический ринит, астму и синусит.

3. Способ по п.1, при котором постнатальное введение LGG субъекту включает введение LGG в молочную смесь и употребление смеси субъектом.

4. Способ по п.1, при котором постнатальное введение LGG субъекту продолжается, по крайней мере, 3 месяца.

5. Способ по п.1, при котором постнатальное введение LGG субъекту продолжается, по крайней мере, 6 месяцев.

6. Способ по п.1, при котором постнатальное введение LGG субъекту продолжается, по крайней мере, 1 год.

7. Способ по п.1, при котором терапевтически эффективное количество LGG составляет от 1×10⁴ до 1×10¹⁰ КОЕ/л/кг в день.

8. Способ по п.1, при котором терапевтически эффективное количество LGG составляет от 1×10⁶ до 1×10⁹ КОЕ/л/кг в день.

9. Способ по п.1, при котором терапевтически эффективное количество LGG составляет 1×10⁸ КОЕ/л/кг в день.

10. Способ по п.1, при котором дополнительно вводится по меньшей мере еще один пробиотик.

11. Способ по п.1, при котором дополнительно вводится по меньшей мере один пребиотик.

12. Способ увеличения продукции сывороточных антител IgA у субъекта, включающий введение в организм беременной матери, и/или постнатальное введение в организм кормящей матери, или субъекту терапевтически эффективного количества LGG.