Способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека



Способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека
Способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека

 


Владельцы патента RU 2436088:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава" (RU)

Изобретение относится к области медицины и описывает способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека методом газожидкостной хроматографии, включающий получение дистиллятов крови методом прямой перегонки с водяным паром и исследование компонентов крови, отличающийся тем, что одновременно проводят количественное определение этилового спирта, диэтилового эфира, ацетальдегида, ацетона, метилацетата, этилацетата, пропилового спирта, изобутилового спирта, бутилового спирта, изоамилового спирта в ходе одного исследования с использованием капиллярной хроматографической колонки, расчет концентрации определяемых компонентов крови производят по формуле:

где а - результат хроматографического исследования, мг/дм3; V - объем дистиллята, см3; m - масса навески цельной крови, г. Данный способ может быть использован в клинической лабораторной диагностике при изучении метаболических нарушений у человека, вызванных отравлением алкоголем, и в судебной медицинской деятельности для диагностирования степени опьянения живых лиц. 1 табл., 2 ил.

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике при изучении метаболических нарушений у человека, вызванных отравлением алкоголем, и в судебной медицинской деятельности для диагностирования степени опьянения живых лиц.

Общепринятым способом определения этилового спирта в крови человека является метод цветных реакций. Наибольшее распространение в 60-е годы получил так называемый «нитритный» метод и способ Видмарка. «Нитритный» метод очень трудоемок, требует быстрой обработки исследуемого материала двойной перегонкой с водяным паром, большого количества исследуемого материала (около 200-300 г). Кроме того, метод недостаточно специфичен. Способ Видмарка применяется с целью определения степени опьянения живых лиц. Метод также достаточно трудоемок, необходимо исследование 3-4 навесок исследуемого материала и параллельное проведение 3-4 холостых опытов, что указывает на плохую воспроизводимость метода.

Известен способ количественного определения содержания этилового алкоголя в крови и моче человека методом газожидкостной хроматографии [Методическое письмо от 22 апреля 1968 г. №10-95/14-32]. Сущность метода заключается в превращении спиртов в алкилнитриты, которые затем подвергаются хроматографическому разделению. В основе детектирования лежит измерение различий в теплопроводности чистого газа-носителя, поступающего в сравнительную камеру детектора по теплопроводности - катарометра, и смеси анализируемого вещества с газом-носителем, выходящей из хроматографической колонки в измерительную камеру детектора. Для проведения исследования применяется хроматограф лабораторный ХЛ-4.

Концентрацию этилового спирта определяют путем вычисления отношения высот пиков этилнитрита и изопропилнитрита (пропилнитрита) с последующей интерполяцией из калибровочного графика. Калибровочные графики строят, используя стандартные растворы этилового спирта в крови и моче.

Существенным недостатком способа является отсутствие возможности количественного определения этилового спирта при одновременном присутствии в исследуемом материале этилового, пропилового и изопропилового алкоголя. Кроме того, описанный выше способ не позволяет одновременно определять в крови этиловый спирт, диэтиловый эфир, ацетальдегид, ацетон, метилацетат, этилацетат, пропиловый спирт, изобутиловый спирт, бутиловый спирт, изоамиловый спирт и другие метаболиты.

Задачей изобретения является разработка способа одновременного количественного определения в крови человека этилового спирта, диэтилового эфира, ацетальдегида, ацетона, метилацетата, этилацетата, пропилового спирта, изобутилового спирта, бутилового спирта, изоамилового спирта и других метаболитов методом газожидкостной хроматографии.

Поставленная задача решается тем, что в способе определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека методом газожидкостной хроматографии, включающем исследование компонентов крови, одновременно проводят количественное определение этилового спирта, диэтилового эфира, ацетальдегида, ацетона, метилацетата, этилацетата, пропилового спирта, изобутилового спирта, бутилового спирта, изоамилового спирта и других метаболитов в дистиллятах крови с использованием капиллярной хроматографической колонки, рассчитываем концентрацию компонентов крови по формуле:

где а - результат хроматографического исследования, мг/дм3;

V - объем дистиллята, см3;

m - масса навески цельной крови, г.

На фиг.1 представлена хроматограмма дистиллята цельной крови человека, на фиг.2 - хроматограмма модельной смеси.

Сущность метода заключается в получении дистиллятов крови методом прямой перегонки с водяным паром, которые затем подвергаются хроматографическому разделению. Разделенные на хроматографической колонке компоненты смеси поочередно поступают в пламенно-ионизационный детектор, сигналы которого регистрируются в виде ряда хроматографических пиков. В основе детектирования лежит измерение различий электропроводности пламени чистого газа-носителя, поступающего в сравнительную камеру детектора, и смеси анализируемого вещества с газом-носителем, поступающей из хроматографической колонки в измерительную камеру детектора. Для проведения исследования применяют газовый хроматограф фирмы «Хьюлетт Паккард» (США), модель 5890, серия 2, с пламенно-ионизационным детектором и системой электронного регулирования потока газа-носителя, колонку хроматографическую капиллярную «HP-FFAP» (США) 50 м × 0,32 мм × 0,52 мкм, внутренний стандарт - 1,2-пропиленгликоль, газ-носитель - азот, температурная программа термостата колонки: начальная температура - 50 градусов Цельсия, 10 мин в изотерме, далее программирование температуры со скоростью 15 градусов в минуту до 220 градусов Цельсия, 10 мин в изотерме, температура инжектора - 150 градусов Цельсия, температура детектора - 230 градусов Цельсия, деление потока - 1:40.

Количественное определение этилового спирта и других метаболитов проводят следующим образом. Взвешивают от 10 до 50 г цельной крови в перегонную колбу вместимостью 500 см3, затем добавляют 50 см3 дистиллированной воды. Смесь перемешивают. Колбу со смесью присоединяют к дефлегматору с каплеуловителем и холодильником с прямой трубкой. При осторожном нагревании (бурное вспенивание) смесь подвергают прямой дистилляции и собирают точно 25 см3 дистиллята в мерную колбу вместимостью 25 см3. Приемную колбу необходимо дополнительно охлаждать. В 25 см3 полученного дистиллята вносят 2 мм3 внутреннего стандарта. Смесь тщательно перемешивают и подвергают хроматографическому исследованию. Капиллярная хроматографическая колонка позволяет надежно разделить компоненты дистиллята крови и одновременно определить этиловый спирт, диэтиловый эфир, ацетальдегид, ацетон, метилацетат, этилацетат, пропиловый спирт, изобутиловый спирт, бутиловый спирт, изоамиловый спирт и другие метаболиты.

Хроматограф предварительно калибруют по этиловому спирту и другим метаболитам, а также пропиленгликолю, используя не менее трех калибровочных смесей. Значения времени удерживания, калибровочных коэффициентов и концентрации внутреннего стандарта заносят в память компьютера. Расчетная концентрация внутреннего стандарта 83,2 мг/дм3.

Исследования выполнялись на цельной крови человека (девять здоровых мужчин в возрасте от 25 до 39 лет).

Результаты исследований представлены в таблице.

Таблица
Содержание эндогенных этилового спирта и ацетальдегида в крови человека
№ п/п Содержание этилового спирта, 10-3% Содержание ацетальдегида, 10-3%
1 0,11 0,02
2 0,19 0,04
3 0,25 0,05
4 0,16 0,02
5 0,95 0,10
6 0,20 0,05
7 0,32 0,07
8 0,25 0,04
9 107,85 0,17

Полученные данные о содержании эндогенного этилового спирта в крови человека соответствуют литературным, согласно которым в норме, без введения извне, в крови человека может содержаться до 0,004% алкоголя. Кроме того, предлагаемый способ позволяет надежно диагностировать степень опьянения живых лиц (таблица, результат №9). Согласно литературным данным концентрация алкоголя от 0,02 до 0,20% вызывает в зависимости от индивидуальной чувствительности, состояния и типа нервной деятельности опьянение различной степени.

Таким образом, в ходе проведенных исследований установлено, что предлагаемый способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека позволяет получать достоверные и воспроизводимые результаты.

Способ определения содержания этилового спирта и других метаболитов в крови человека методом газожидкостной хроматографии, включающий получение дистиллятов крови методом прямой перегонки с водяным паром и исследование компонентов крови, отличающийся тем, что проводят количественное определение этилового спирта, диэтилового эфира, ацетальдегида, ацетона, метилацетата, этилацетата, пропилового спирта, изобутилового спирта, бутилового спирта, изоамилового спирта в ходе одного исследования с использованием капиллярной хроматографической колонки, расчет концентрации определяемых компонентов крови производят по формуле:

где а - результат хроматографического исследования, мг/дм3;
V - объем дистиллята, см3;
m - масса навески цельной крови, г.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии, экологии, токсикологии и может быть использовано при исследовании патогенетических механизмов токсического действия кобальта на функциональное состояние почек.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и касается способа определения типа течения множественной миеломы. .
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования синдрома задержки развития плода (СЗРП) во втором триместре у ВИЧ-инфицированных.

Изобретение относится к картриджным системам для применения в детектировании одного или более аналитов, в особенности в биологическом образце. .

Изобретение относится к медицине и описывает способ неинвазивного потенциометрического определения оксидант/антиоксидантной активности биологических тканей, включающий введение исследуемого объекта в контакт с электропроводящей средой, содержащей медиаторную систему и оценку оксидант/антиоксидантной активности по изменению разности потенциалов на электродах, введенных в электропроводящую среду, при этом электропроводящая среда представляет собой гель, содержащий в качестве медиаторной системы пару химических соединений, содержащих элемент в разных степенях окисления, при этом электроды через гель контактируют с исследуемым объектом, а оксидант/антиоксидантную активность определяют по формулам.

Изобретение относится к области медицины, а именно к молекулярной генетике. .
Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для определении тактики ведения больной с миомой матки. .
Изобретение относится к области медицины, пульмонологии, терапии, аллергологии и описывает способ прогнозирования риска развития терапевтической резистентности у больных бронхиальной астмой путем исследования крови пациента через 3 месяца после начала лечения, при этом исследуют ДНК, выделенную из лимфоцитов периферической венозной крови пациента, определяют значения уровней экспрессии генов INC2, INC3, GJA8, SV2 с помощью микрочипов Affymetrix и рассчитывают вероятность отнесения индивида к группе с высоким риском развития терапевтической резистентности и низким риском развития терапевтической резистентности, при этом R1 для индивидов с высоким риском развития терапевтической резистентности рассчитывают по формуле: R1=-351,966-48,274*INC2+46,608*INC3+129,530*GLA8+105.438*SV2A, где 48,274; 46,608; 129,530; 105.438 - численные значения являются коэффициентами; (-351,966) константа для индивидов с высоким риском развития БА; INC2, INC3, GJA8, SV2 - генотипы, a R2 для индивидов с низким риском развития терапевтической резистентности рассчитывают по формуле: R2=-403,217-64,874*INC2+55,603*INC3+141,648*GJA8+116,342*SV2A, где 64,874; 55,603; 141,648; 116,342 - численные значения являются коэффициентами; (-403,217) константа для индивидов с высоким риском развития БА и при R1>R2 прогнозируют высокий, а при R1<R2 прогнозируют низкий риск развития терапевтической резистентности у больного бронхиальной астмой.

Изобретение относится к способу ионообменного разделения метионина и глицина и может найти применение в биохимической, фармацевтической и пищевой промышленности.

Изобретение относится к биологии, экологии, а также - к токсикологической и санитарной химии. .
Изобретение относится к области медицины и описывает способ количественного определения циклоспорина А в крови пациентов, включающий осаждение белков крови путем добавления водного раствора сульфата цинка и метанола, перемешивания, центрифугирования и отбора центрифугата; разделение компонентов центрифугата методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии, масс-спектрометрическую детекцию циклоспорина А и определение содержания циклоспорина А с построением калибровочной кривой, причем для осаждения белков крови используют цельную кровь, после осаждения белков крови дополнительно осаждают солевые примеси путем добавления в центрифугат метанола до общего содержания не менее 90% по объему, повторного перемешивания, центрифугирования и отбора центрифугата, после чего проводят разделение его компонентов, детекцию и определение содержания циклоспорина А.

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано для определения содержания серосодержащих соединений в углеводородном сырье и продукции. .

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. .

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и описывает способ количественного определения уксусной, пропионовой, изо-масляной, масляной, валериановой, изо-капроновой и капроновой кислот в крови методом газохроматографического анализа, в котором пробу крови подкисляют 1%-ным раствором серной кислоты до рН 2-3, осуществляют экстракцию определяемых кислот изобутиловым спиртом, объем которого соотносится с объемом пробы крови как 1:1, проводят центрифурирование для отделения белков, добавляют 2-3 капли 0,4%-ного раствора щелочи и экстракт выпаривают досуха, далее к сухому осадку последовательно добавляют 1%-ный раствор серной кислоты и изобутиловый спирт и осуществляют газохроматографическое разделение смеси кислот на капиллярной колонке с пламенно-ионизационным детектором, а количество каждой кислоты устанавливают по калибровочному графику.
Изобретение относится к газохроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и допинговом контроле.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и касается способа определения тетраэтилтиурамдисульфида в крови. .

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологический и санитарной химии, а именно к способам определения тетраметилтиурамдисульфида в биологическом материале.

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть рекомендовано для аналитического контроля содержания химических соединений в очищенных сточных водах производств лекарственных средств и химической промышленности.

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических, ветеринарных и экологических лабораторий
Наверх