Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2425380:

Федеральное государственное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФГУН "ФНЦ МПТ УРЗН" РОСПОТРЕБНАДЗОРА) (RU)

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии. Способ характеризуется тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику. Достигается высокая чувствительность способа, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов. 4 з.п. ф-лы, 6 табл.

 

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) в моче, для оценки риска здоровью человека и разработки мероприятий по обеспечению химической безопасности.

Из уровня техники известен ряд методик определения количества подобных веществ. Так, из источника [1] известен способ определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в воде. Согласно известному способу измерение выполняют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором. Температура испарителя 280°С, температура детектора и колонок 165°С, расход газа-носителя (аргона) 40 см3/мин. Определению не мешают п-ксилол, ацетальдегид, дифенил, дифенилоксид, муравьиная, уксусная, бензойная, п-толуиловая, терефталевая и изофталевая кислоты, а также метиловые эфиры этих кислот при содержании их в воде до 10 ПДК.

Концентрирование из воды проводят методом жидкостной экстракции: в делительную воронку, вместимостью 100 см3 помещают 50 см3 анализируемой воды, вносят 10 г натрия хлорида, подкисляют хлористо-водородной кислотой до рН 3, добавляют внутренний стандарт - 0,1 см3 раствора дипропиладипината в этиловом спирте (0,05 мг) и экстрагент - 2 см3 хлороформа. Экстрагируют в течение 2 мин, и через 15 мин нижний хлороформный слой помещают в бюкс. Экстракт упаривают в токе воздуха в вытяжном шкафу до объема 0,2-0,3 см3 и хроматографируют 1-2 мм3 экстракта. Диапазон измеряемых концентраций составляет 0,15-3 мг/дм3. Недостаток известного способа - низкая чувствительность определения.

Также известен способ определения в моче 16 моноэфиров фталевой кислоты [2] с использованием твердофазной экстракции и высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией. Согласно этому способу, образцы мочи обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут и перемешивают встряхиванием. Затем к 100 мм3 мочи добавляют 25 мм3 ферментативного раствора и проводят реакцию деглюкуронизации при температуре 37°С в течение 90 мин. Затем реакцию деглюкуронизации останавливают, добавляя к пробе 50 мм3 уксусной (ледяной) кислоты и 200 мм3 5%-ного водного раствора ацетонитрила. Анализ проводят на жидкостном хроматографе Agilent серии 1100, соединенном с квадрупольным масс-спектрометром с электроионизационным распылителем. Подвижная фаза - 0,1% уксусная кислота в ацетонитриле, оптимизированная в градиентном режиме, скорость движения элюента 0,35 см3/мин. Погрешность определения составляет 21,0%. Предел обнаружения моноэфиров фталевой кислоты составляет 0,00011-0,0043 мг/дм3. По данной известной методике анализируются лишь моноэфиры о-фталевой кислоты. Диметиловый эфир терефталевой кислоты не определяется описанным выше способом. Кроме того, длительная пробоподготовка и дорогостоящее оборудование не приемлемы для использования известного способа при проведении массового анализа.

Из источника информации [3] известен метод определения диэтилгексилфталата в образцах мочи газовой хроматографией/масс-спектрометрией. Проба мочи в количестве 0,5 см3 подкислялась до рН=2-3 и извлекалась дважды 1,5 см3 этилацетата до и после ферментативного гидролиза с бета-глюкуронидазой. Объединенные экстракты высушивали под струей азота и проводили реакцию дериватизации с диазометаном для перевода исследуемых веществ в соответствующие метиловые эфиры. Количественный анализ диэтилгексилфталата и продуктов его гидролиза выполнен газовой хроматографией/масс-спектрометрией на капиллярной колонке с массовым спектрометром (Германия). Температура детектора 280°С, температура термостата колонки запрограммирована следующим образом: 40°С (1 минута), повышение до 80°С со скоростью 20°С/мин, повышение до 320°С со скоростью 10°С/мин, выдержка (5 минут). Газ-носитель - гелий. Предел определения 0,01 мг/дм3.

В источнике информации [4] описан способ определения концентрации фталевой кислоты и ее изомеров (изофталевой и терефталевой кислот), а также их производных, в том числе диметилтерефталата, в микробиологическом субстрате, используемом для биодеградации, методом высокоэффективной жидкостной хроматографиии (ВЭЖХ) с УФ-детектором. Образцы субстрата центрифугируют 3 минуты со скоростью 10000 об/мин, разбавляют до концентраций, меньше, чем 50 мг/дм3, и анализируют аликвоты объемом 10 мкл. Разделение смеси достигается при использовании колонки (100×3 мм), заполненной фазой Chromospher 5C18. В качестве элюирующей жидкости используется смесь метанола и 1%-ного водного раствора уксусной кислоты в соотношении 40:60, расход подвижной фазы 0,3 мл/мин. Обнаружение отдельных компонентов смеси проводится ультрафиолетовым детектором (Spectroflow 773) при длине волны 230 нм. Недостаток известного метода - низкая чувствительность определения.

Также известен способ количественного определения фталатов (диэтилфталата, дибутилфталата, дигексилфталата и диоктилфталата) в поверхностных и питьевых водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительным проведением процедуры твердофазной экстракции [5]. Согласно известному способу концентрирование проб воды методом твердофазной экстракции проводят путем пропускания 250 см3 анализируемой пробы воды со скоростью 10-20 см3/мин через картридж марки Diapak П, который предварительно конденционируют 12 см3 метанола и промывают 18 см3 дистиллированной воды. После нанесения на сорбент Diapak П исследуемой пробы воды картридж промывают 6 см3 дистиллированной воды и сушат под вакуумом в течение 7 мин. Затем элюируют фталаты 1,5 см3 метанола, упаривают растворитель в токе азота и растворяют остаток в 100 мм3 метанола. Аликвотную часть экстракта анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1100» с диоидно-матричным детектором при длине волны детектирования 220 нм. Нижний предел определения указанных фталатов в воде составляет 0,0005-0,024 мг/дм3. Данной методикой не определяется диметиловый эфир терефталевой кислоты.

Указанный известный способ неприменим для определения диметилтерефталата в моче с нижним пределом определения 0,0005 мг/дм3, т.к. при анализе мочи необходимо проводить 2 параллельных определения одного образца и поэтому потребуется объем пробы мочи в количестве 500 мл, что не всегда выполнимо при неинвазивном отборе пробы. Кроме того, в силу мешающего влияния матрицы, снижающей аналитический сигнал, нижний предел определения диметилтерефталата в моче будет выше указанного нижнего предела определения для воды, как в этом известном способе.

Технический результат, обеспечиваемый предлагаемым изобретением, заключается в обеспечении высокой чувствительности способа определения диметилового эфира терефталевой кислоты (диметилтерефталата) в моче, в том числе в многокомпонентных пробах, при одновременном обеспечении селективности и его доступности для серийных анализов.

Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, согласно которому производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.

Центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.

Скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см3/мин.

Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.

Хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.

Указанный технический результат достигается за счет следующего.

Благодаря тому, что отобранную пробу мочи подвергают центрифугированию, обеспечивается денатурация белка, что исключает его влияние на точность определения.

Экспериментальным путем было установлено, что высокая чувствительность и точность определения диметилтерефталата в пробе мочи достигается лишь при строго определенной последовательности осуществления твердофазной экстракции на сорбенте Oasis HLB с использованием в качестве экстрагента - 100%-ного ацетонитрила. При этом пропускание (конденционирование) сорбента 100%-ным ацетонитрилом и 1 см3 дистиллированной воды обеспечивает очистку сорбента от возможного присутствия посторонних примесей и увлажнение сорбента перед пропусканием пробы мочи (в целом - это подготовка сорбента к анализу), а промывка сорбента после пробы мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила необходима для цели удаления с сорбента слабоудерживаемых компонентов матрицы и повышения селективности извлечения. Использование водного раствора ацетонитрила именно такой концентрации обеспечивает хорошее удаление ненужных компонентов, и в то же время не производится экстракция.

Проведение последующего анализа экстракта методом жидкостной хроматографии с особыми режимами, а именно: используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме (градиентное элюирование), который осуществляют путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, соответствует оптимизации элюирования, а значит, обеспечивает высокую чувствительность способа. Следует пояснить, что изменение объемного соотношения ацетонитрила и воды в подвижной фазе осуществляется за счет работы 4-канального градиентного насоса Agilent 1200, смешивающего до 4 компонентов подвижной фазы.

Скорость потока подвижной фазы 1,0 см3/мин является оптимальной при проведении исследований.

Объемное соотношение пробы мочи и экстрагента 3:1 соответственно выбрано исходя из результатов экспериментальных исследований по изучению полноты экстракции диметилтерефталата с картриджей Oasis HLB 3сс в диапазоне определяемых концентраций 0,001-1,0 мг/дм3 в моче. Для степени извлечения, равной 99,3% от дозы, введенной в пробу мочи, не содержащей диметилтерефталат, достаточно пропустить через картридж 1 см3 100%-ного ацетонитрила, причем сначала пропускают 0,5 см3 100%-ного ацетонитрила в первую виалу, а затем следующие 0,5 см3 ацетонитрила во вторую виалу. Содержимое виал анализируют отдельно, а конечный результат выдают, суммируя обнаруженные количества диметилтерефталата в первой и второй виалах.

Исследование экстракта на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм обусловлено достижением максимального сигнала флуориметрического детектора, что влияет на чувствительность и точность определения.

Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:

- производят отбор пробы мочи в количестве 10 см3;

- переносят указанную пробу в центрифужную пробирку и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин;

- отбирают 6 см3 верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 1 см3 100%-ного ацетонитрила, 1 см3 дистиллированной воды, 3 см3 мочи (пропускают только 3 см3, потому что проводят 2 параллельных определения одного образца, результат представляют как среднеарифметическое двух параллельных определений), 3 см3 дистиллированной воды, 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила со скоростью потока 1 см3/мин. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см3 экстрагента - 100%-ного ацетонитрила;

- аликвотную часть полученного экстракта в количестве 10 мм3 анализируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.% (т.е. 25 об. ч. ацетонитрила и 75 об. ч. воды), затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% (т.е. 90 об. ч. ацетонитрила и 10 об. ч. воды) и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин;

- количественное содержание диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику, который строится посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб мочи и стандартных растворов диметилтерефталата.

Для построения градуировочного графика в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 50,0 мг диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в исходном растворе (раствор №1) составляет 0,5 мг/см3. Затем 0,1 см3 раствора №1 вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят метанолом до метки. Концентрация диметилтерефталата в разбавленном растворе (раствор №2) составляет 0,5 мг/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.

Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм2) от концентрации диметилтерефталата в моче (мг/дм3) и строится по 6 сериям рабочих стандартных растворов. Каждую серию, состоящую из 3 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 25 см3. Для этого в каждую колбу вносят растворы для градуировки №1 и 2 в соответствии с таблицами 1 и 2, доводят объем колбы до метки мочой и перемешивают. По 10 см3 свежеприготовленных стандартных растворов переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 6 см3 верхнего слоя мочи и проводят твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB 3сс как в предлагаемом способе. Полученные экстракты хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором.

Таблица 1
Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,001-0,020 мг/дм3
Номер раствора 1 2 3 4 5 6
Объем раствора №2, см3 0,05 0,10 0,15 0,25 0,50 1,00
Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг 0,025 0,050 0,075 0,125 0,250 0,500
Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм3 0,001 0,002 0,003 0,005 0,010 0,020
Таблица 2
Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении диметилтерефталата в моче в диапазоне концентраций 0,020-1,0 мг/дм3
Номер раствора 1 2 3 4 5 6
Объем раствора №2, см3 1,0 2,5 5,0 - - -
Объем раствора №1, см3 - - - 0,005 0,012 0,025
Количество диметилтерефталата в градуировочном растворе, мкг 0,50 1,25 2,5 5,0 12,0 25,0
Массовая концентрация диметилтерефталата в моче, мг/дм3 0,020 0,05 0,1 0,2 0,48 1,0

Отработка оптимальных жидкостно-хроматографических параметров для определения диметилтерефталата в моче предлагаемым способом осуществлялась с использованием жидкостного хроматографа «Agilent 1200», оснащенного термостатом колонок, градиентным насосом и флуориметрическим детектором.

Полнота разделения диметилтерефталата в присутствии диметиловых эфиров фталевой и изофталевой кислот, монометиловых эфиров фталевой, изофталевой и терефталевой кислот, а также фталевой, изофталевой и терефталевой кислот достигнута на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C18 при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы вначале смеси ацетонитрила и воды в объемном соотношении 25:75 со скоростью потока 1,0 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). Максимальный сигнал флуориметрического детектора получен при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм. В случае, если не был применен градиентный режим элюирования чувствительность способа резко изменялась.

В процессе исследований по выбору оптимальных условий проведения твердофазной экстракции диметилтерефталата из мочи, включающей конденционирование сорбента Oasis HLB растворителем - 100%-ным ацетонитрилом и дистиллированной водой, промывку картриджа от мешающих компонентов мочи дистиллированной водой и 20%-ным водным раствором ацетонитрила после нанесения анализируемой пробы мочи на указанный сорбент и последующую десорбцию диметилтерефталата 100%-ным ацетонитрилом, в качестве экстрагента были апробированы следующие растворители: метанол, этанол, ацетонитрил и их водные растворы. Данные, полученные в ходе испытаний, приведены в таблице 3.

Таблица 3
Средние значения степени экстракции диметилтерефталата из мочи в зависимости от природы растворителя
№ опыта Растворитель (экстрагент) Степень экстракции, %
1 5%-ный водный раствор метанола 0
2 100%-ный метанол 20,5
3 100%-ный этанол 6,3
4 60%-ный водный раствор ацетонитрила 51,0
5 100%-ный ацетонитрил 99,3

Данные, приведенные в таблице 3, показывают, что максимальная степень экстракции диметилтерефталата из проб мочи была достигнута при использовании в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, который применяли в дальнейших исследованиях.

Экспериментальным путем также были установлены, наряду с необходимостью применения в качестве экстрагента 100%-ного ацетонитрила, и другие характеристики и режимы предлагаемого способа, обеспечивающие эффективное и селективное извлечение диметилтерефталата и повышение чувствительности и точности определения, а именно: центрифугирование пробы мочи при 2000 об/мин, использование при твердофазной экстракции 1 см3 100%-ного ацетонитрила и 1 см3 дистиллированной воды для конденционирования сорбента, промывании картриджа 3 см3 дистиллированной воды и 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила после пропускания анализируемой пробы мочи и экстракции 1,0 см3 100%-ного ацетонитрила.

Пример конкретного выполнения предлагаемого способа.

Анализируют пробы мочи (обследуемая группа детей). Каждую пробу мочи анализируют дважды. Свежеотобранную пробу мочи объемом 10 см3 центрифугируют со скоростью 2000 об/мин в течение 5 мин. Отбирают 3 см верхнего слоя и проводят твердофазную экстракцию, последовательно пропуская под вакуумом через картридж с сорбентом Oasis HLB 3сс 1 см3 100%-ного ацетонитрила, 1 см3 дистиллированной воды, 3 см3 мочи, 3 см3 дистиллированной воды, 2 см3 20%-ного водного раствора ацетонитрила. Затем переносят патрон с сорбентом в накопительный сосуд (бюкс) и пропускают через сорбент 1,0 см3 100%-ного ацетонитрила. Скорость экстракции (скорость потока) 1 см3/мин. Аликвотную часть полученного экстракта отбирают и хроматографируют на жидкостном хроматографе «Agilent серии 1200» с флуориметрическим детектором на колонке 4,6×150 мм с сорбентом Eclipse XDB-C18 при температуре колонки 27°С, при использовании в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрила и воды со скоростью потока 1,0 см3/мин и оптимизации элюирования в градиентном режиме (10 мин подача подвижной фазы 25 об.% ацетонитрила и 75 об.% воды, увеличение ацетонитрила с 25 об.% до 90 об.% в течение 5 мин, 5 мин подача 90%-ного ацетонитрила, затем снижение ацетонитрила до 25 об.% в течение 5 мин и подача 25%-ного ацетонитрила в течение 10 мин до уравновешивания колонки). При этом длина волны возбуждения флуориметрического детектора составляла 246 нм и длина волны эмиссии 330 нм.

По градуировочному графику определяют содержание диметилтерефталата в пробах 1-5. Полученные результаты приведены в таблице 4.

Таблица 4
Результаты исследования образцов мочи на содержание диметилтерефталата
№ образца Результаты параллельных определений, мкг/см3 Результат измерения, мкг/см3 Относительная погрешность, %
1 0,0035 0,00325±0,0008 24,6
0,0030
2 0,0052 0,0050±0,0012 24,0
0,0048
3 0,0062 0,0061±0,0015 24,6
0,0060
4 0,0100 0,0105±0,0026 24,7
0,0110
5 0,0074 0,0071±0,0018 25,7
0,0068

Чувствительность определения диметилтерефталата в анализируемом объеме пробы мочи (10 мм3) составила 0,01 нг (или 0,001 мг/дм3). Погрешность определения не превышает 26%.

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений, приведенных в таблицах 5 и 6.

Таблица 5
Диапазон измерений, значения показателей точности, повторяемости, воспроизводимости предлагаемого способа
Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 (мкг/см3) Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости),σr, % Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости) σR, % Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности Р=0,95), ±δ, %
Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. 10,3 11,0 25,0
Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. 6,3 9,7 29,4
Таблица 6
Значения пределов повторяемости и воспроизводимости предлагаемого способа при доверительной вероятности Р=0,95
Наименование определяемого компонента и диапазон измерений, мг/дм3 Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных определений), rn, % Предел внутрилабораторной воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории, но в разных условиях), %
Диметилтерефталат, от 0,001 до 0,02 вкл. 29,0 31,0
Диметилтерефталат, от 0,02 до 1,0 вкл. 17,3 27,0

Применение предлагаемого способа позволяет повысить чувствительность определения диметилтерефталата (диметилового эфира терефталевой кислоты) как минимум в 3 раза, например, по сравнению со способом, описанным в источнике информации [4].

Способ прост и может быть рекомендован для серийных анализов.

Источники информации

1. МУК 4.1.745-99. Газохроматографическое определение диметилового эфира терефталевой кислоты в воде. Сб. методических указаний Определение концентраций химических веществ в воде централизованных систем питьевого водоснабжения. Вып.2. М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 1999.

2. Kato К., Silva M.J., Needham L.L., Calafat A.M. Determination of 16 Phthalate Metabolites in Urine Using Automated Sample Preparation and Online Preconcentration/High-Performance Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry // J. Analytical Chemistry, Vol.77, No.9, May 1, 2005 2985-2991.

3. Mettang Т., Alscher D., Pauli-Magnus С. Dunst R., Kuhlmann U., Rettenmeier A. Phthalic Acid Is the Main Metabolite of the Plasticizer Di(2-ethylhexyl) Phthalate in Peritoneal Dialysis Patients // Adv. Perit. Dial. 1999. - 15. - p.229-33.

4. Kleerebezem R., Hulshoff P., Lettinga G. Anaerobic biodegradability of phthalic acid isomers and related compounds // J. Biodegradation. - 10. - 1999. - 63-73.

5. Турнаев В.А., Третьяков Н.Ю., Турнаева Е.А. Хроматографические методы определения фталатов в поверхностных и питьевых водах // Вестник Тюменского государственного университета. - 2007. - №3. - с.139-146.

1. Способ количественного определения диметилтерефталата в моче методом жидкостной хроматографии, характеризующийся тем, что производят отбор пробы мочи, подвергают ее центрифугированию, осуществляют твердофазную экстракцию на сорбенте Oasis HLB с использованием для извлечения диметилтерефталата экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, при этом указанную твердофазную экстракцию проводят путем последовательного пропускания через сорбент 100%-ного ацетонитрила, дистиллированной воды, пробы мочи после центрифугирования, дистиллированной воды, 20%-ного водного раствора ацетонитрила и экстрагента - 100%-ного ацетонитрила, затем полученный экстракт анализируют методом жидкостной хроматографии, используя в качестве подвижной фазы смесь ацетонитрила и воды при их изменяющемся соотношении от 25:75 об.% до 90:10 об.% соответственно в градиентном режиме, который осуществляют при хроматографии путем подачи вначале в течение 10 мин подвижной фазы, состоящей из смеси ацетонитрила и воды в соотношении 25:75 об.%, затем путем увеличения в течение 5 мин в подвижной фазе ацетонитрила до 90 об.% и пропускания такой подвижной фазы в течение еще 5 мин, с последующим снижением объемного количества ацетонитрила за 5 мин до 25 об.% и пропусканием такой подвижной фазы через колонку в течение 10 мин, а количество диметилтерефталата устанавливают по градуировочному графику.

2. Способ по п.1, характеризующийся тем, что центрифугирование проводят в течение 5 мин со скоростью 2000 об/мин.

3. Способ по п.1, характеризующийся тем, что скорость потока подвижной фазы составляет 1,0 см3/мин.

4. Способ по п.1, характеризующийся тем, что объемное соотношение пробы мочи и экстрагента составляет 3:1 соответственно.

5. Способ по п.1, характеризующийся тем, что хроматографию проводят на жидкостном хроматографе «Agilent 1200» с флуориметрическим детектором при длине волны возбуждения 246 нм и длине волны эмиссии 330 нм.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и перинатологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии. .

Изобретение относится к медицине и касается способа диагностики ишемически-реперфузионного синдрома в эксперименте. .

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. .

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и описывает способ количественного определения уксусной, пропионовой, изо-масляной, масляной, валериановой, изо-капроновой и капроновой кислот в крови методом газохроматографического анализа, в котором пробу крови подкисляют 1%-ным раствором серной кислоты до рН 2-3, осуществляют экстракцию определяемых кислот изобутиловым спиртом, объем которого соотносится с объемом пробы крови как 1:1, проводят центрифурирование для отделения белков, добавляют 2-3 капли 0,4%-ного раствора щелочи и экстракт выпаривают досуха, далее к сухому осадку последовательно добавляют 1%-ный раствор серной кислоты и изобутиловый спирт и осуществляют газохроматографическое разделение смеси кислот на капиллярной колонке с пламенно-ионизационным детектором, а количество каждой кислоты устанавливают по калибровочному графику.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и неонатологии. .

Изобретение относится к области медицины и касается способа ранней диагностики нарушений адаптации у детей в условиях воздействия вредных химических факторов среды обитания.
Изобретение относится к области медицины и фармакологии и может быть использовано для оценки антиоксидантных свойств природных материальных объектов. .
Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии. .

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и описывает способ количественного определения уксусной, пропионовой, изо-масляной, масляной, валериановой, изо-капроновой и капроновой кислот в крови методом газохроматографического анализа, в котором пробу крови подкисляют 1%-ным раствором серной кислоты до рН 2-3, осуществляют экстракцию определяемых кислот изобутиловым спиртом, объем которого соотносится с объемом пробы крови как 1:1, проводят центрифурирование для отделения белков, добавляют 2-3 капли 0,4%-ного раствора щелочи и экстракт выпаривают досуха, далее к сухому осадку последовательно добавляют 1%-ный раствор серной кислоты и изобутиловый спирт и осуществляют газохроматографическое разделение смеси кислот на капиллярной колонке с пламенно-ионизационным детектором, а количество каждой кислоты устанавливают по калибровочному графику.
Изобретение относится к газохроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и допинговом контроле.

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии и касается способа определения тетраэтилтиурамдисульфида в крови. .

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологический и санитарной химии, а именно к способам определения тетраметилтиурамдисульфида в биологическом материале.

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть рекомендовано для аналитического контроля содержания химических соединений в очищенных сточных водах производств лекарственных средств и химической промышленности.

Изобретение относится к анализу количества примесей в углекислом газе в процессе производства и/или очистки. .

Изобретение относится к аналитической химии. .

Изобретение относится к приборам, используемым в нефтегазовой отрасли. .

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано для определения содержания серосодержащих соединений в углеводородном сырье и продукции
Наверх