Способ получения гидроксилированной аминокислоты (варианты) и микроорганизм, трансформированный днк, кодирующей диоксигеназу
Владельцы патента RU 2460779:
Аджиномото Ко., Инк. (JP)
Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU)
Изобретение относится к области биотехнологии. Способ получения 4'-гидрокси-L-изолейцина или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцина или их солей путем ферментативной конверсии в присутствии диоксигеназы, выделенной из бактерии, принадлежащей к группе, включающей роды Pantoea и Pseudomonas, или путем выращивания первой бактерии-продуцента, обладающей активностью диоксигеназы, выделенной из второй бактерии, принадлежащей к группе, включающей роды Pantoea и Pseudomonas, в питательной среде, содержащей L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин или их соли, и выделения конечного продукта из культуральной жидкости. Изобретение позволяет получить 4'-гидрокси-L-изолейцин или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин или их соли с высокой степенью эффективности. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 24 ил., 5 табл., 11 пр.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Способ получения 4'-гидрокси-L-изолейцина или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцина или их солей методом ферментативной конверсии в присутствии диоксигеназы, выделенной из бактерии, принадлежащей к группе, включающей роды Pantoea и Pseumodomonas, и способной конвертировать L-изолейцин в 4'-гидрокси-L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин в 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что указанная диоксигеназа выбрана из группы, состоящей из диоксигеназ с аминокислотной последовательностью SEQ ID No:2, SEQ ID No:4, SEQ ID No:56, SEQ ID No:58 или их вариантов.
3. Способ получения 4'-гидрокси-L-изолейцина или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцина или их солей в среде в присутствии первой бактерии, обладающей активностью диоксигеназы, выделенной из второй бактерии, принадлежащей к группе, включающей роды Pantoea и Pseumodomonas, и способной конвертировать L-изолейцин в 4'-гидрокси-L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин в 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин, включающий:
- выращивание указанной первой бактерии в питательной среде, содержащей L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин или их соли; и
- выделение 4'-гидрокси-L-изолейцина и/или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцина из культуральной жидкости.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что первая бактерия, обладающая активностью бактериальной диоксигеназы, выбрана из группы бактерий, включающей роды Agrobacterium, Anabaena, Bacillus, Bordetella, Burkholderia, Escherichia, Gloeobacter, Gluconobacter, Mesorhizobium, Methylobacillus, Nostoc, Pantoea, Photorhabdus, Pseudomonas, Psychromonas и Streptomyces.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что первая бактерия, обладающая активностью бактериальной диоксигеназы и выбранная из группы бактерий, включающей роды Pantoea и Pseumodomonas, модифицирована таким образом, что активность бактериальной диоксигеназы повышена.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что активность бактериальной диоксигеназы повышена путем усиления экспрессии гена, кодирующего бактериальную диоксигеназу.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что экспрессия гена, кодирующего бактериальную диоксигеназу, усилена путем трансформации первой бактерии, выбранной из группы, включающей роды Pantoea и Pseumodomonas, молекулой ДНК, кодирующей бактериальную диоксигеназу, способную конвертировать L-изолейцин в 4'-гидрокси-L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин в 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин.
8. Способ по п.4, отличающийся тем, что первая бактерия, обладающая активностью бактериальной диоксигеназы и выбранная из группы бактерий, включающей роды Agrobacterium, Anabaena, Bacillus, Bordetella, Burkholderia, Escherichia, Gloeobacter, Gluconobacter, Mesorhizobium, Methylobacillus, Nostoc, Photorhabdus, Psychromonas и Streptomyces, модифицирована таким образом, что активность бактериальной диоксигеназы сообщена.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что активность бактериальной диоксигеназы сообщена путем трансформации первой бактерии по п.8 молекулой ДНК, кодирующей бактериальную диоксигеназу, способную конвертировать L-изолейцин в 4'-гидрокси-L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин в 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин.
10. Способ по пп.3, 7, 9, отличающийся тем, что указанная бактериальная диоксигеназа выбрана из группы, состоящей из бактериальных диоксигеназ с аминокислотной последовательностью SEQ ID No:2, SEQ ID No:4, SEQ ID No:56, SEQ ID No:58 или их вариантов.
11. Бактерия-продуцент 4'-гидрокси-L-изолейцина или 4,4'-дигидрокси-L-изолейцина или их солей, трансформированная молекулой ДНК, кодирующей диоксигеназу, выделенную из бактерии, принадлежащей к группе, включающей роды Pantoea и Pseudomonas, и способной конвертировать L-изолейцин в 4'-гидрокси-L-изолейцин и/или 4-гидрокси-L-изолейцин в 4,4'-дигидрокси-L-изолейцин.
12. Бактерия-продуцент по п.11, отличающаяся тем, что указанная бактерия принадлежит к группе, включающей роды Agrobacterium, Anabaena, Bacillus, Bordetella, Burkholderia, Escherichia, Gloeobacter, Gluconobacter, Mesorhizobium, Methylobacillus, Nostoc, Pantoea, Photorhabdus, Pseudomonas, Psychromonas и Streptomyces.
13. Бактерия-продуцент по пп.11 и 12, отличающаяся тем, что указанная бактериальная диоксигеназа, кодируемая трансформирующей молекулой ДНК, выбрана из группы, состоящей из бактериальных диоксигеназ с аминокислотной последовательностью SEQ ID No:2, SEQ ID No:4, SEQ ID No:56, SEQ ID No:58 или их вариантов.
