Способ выделения микровезикул эритроцитов
Владельцы патента RU 2464563:
Федеральное государственное учреждение "Нижегородский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)
Изобретение относится к биологии и медицине. Способ включает забор крови, удаление и промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта. К супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют стоять 60 минут при комнатной температуре. Через 60 минут микровезикулы оседают на дно пробирки. Способ дает возможность упростить процесс получения микровезикул. 1 пр.
Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и может использоваться в опытах in vitro для получения и изучения микровезикул эритроцитов с помощью биохимических и морфологических методов исследования.
В качестве прототипа выбран способ выделения микровезикул эритроцитов из надосадочной жидкости (супернатант), который включает забор крови, промывание эритроцитов, инкубацию отмытых клеток в присутствии кальция и ионофора А 23187, центрифугирование при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта, ультрацентрифугирование супернатанта при 100000 g в течение 60 минут, получение осадка, содержащего микровезикулы (Allan D., Thomas P., Limbrick A.R. Biochem. J. - 1980. - Vol.188. - P.881-887).
Однако этот способ требует ультрацентрифугирования и дорогостоящего специального оборудования.
Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.
Технический результат - упрощение процесса получения микровезикул эритроцитов.
Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют на 60 мин при комнатной температуре и получают осадок, содержащий микровезикулы.
Способ осуществляется следующим образом. Кровь от здоровых людей забирают в вакуумные пробирки, содержащие цитрат натрия. Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и инкубируют в безглюкозной среде. Затем эритроциты центрифугируют при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта. К супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают и оставляют пробирки на 60 минут при комнатной температуре для получения осадка с микровезикулами.
Пример. Отмытые эритроциты инкубировали в безглюкозной среде при 37°С в течение 24 ч. После инкубации эритроциты центрифугировали при 1000 g в течение 10 минут. Затем к супернатанту добавляли хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивали и оставляли на 60 минут при комнатной температуре. Через 60 минут получали осадок с микровезикулами.
Преимуществом предлагаемого способа является простота, доступность, отсутствие необходимости в ультрацентрифугировании и сложном дорогостоящем оборудовании.
Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, отличающийся тем, что к супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют на 60 мин при комнатной температуре и получают осадок, содержащий микровезикулы.
