Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения l-форм микобактерий


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2473906:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина" (RU)

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения L-форм микобактерий, включающий измельчение патологического материала в ступке ножницами, выдерживание в 2% растворе серной кислоты 15 минут, отмывание физиологическим раствором, растирание с кварцевым песком и фильтрования взвеси через мембраны с диаметром пор 0,2 мкм. Изобретение позволяет повысить процент выделяемости L-форм микобактерий из патологического материала и снизить количество проростов посторонней микрофлоры, а также сокращает время проведения работы. 1 табл.

 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано для выделения L-форм микобактерий из патологического материала от животных. Способ основан на обработке патологического материала и посеве на полужидкую питательную среду.

Известен способ, при котором предпосевную обработку патологического материала проводят с применением 5%, 6%, 10% раствора серной кислоты, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин или измельчают в ступке без центрифугирования, с экспозицией кислоты 20-30 мин, а полученную взвесь высевают на плотную питательные среду [Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16; «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва. 1963 г., с. 279-280].

Недостатком этого способа является пагубное действие кислоты, а также концентрирование путем центрифугирования, потому что при центрифугировании происходит концентрирование не только микобактерий, но и банальной микрофлоры, что усложняет выделение культур.

Известен «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» [UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009]. Предпосевную обработку патологического материала проводят следующим образом: патологический материал измельчают в ступке и обрабатывают 3% раствором серной кислоты, затем материал отмывают физиологическим раствором, а полученную взвесь фильтруют через мембраны с диаметром пор 0,45 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Недостатком этого способа является применение повышенной концентрации кислоты, а также фильтрация через фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, через такой диаметр пор может проходить как L-формы микобактерий, так и другие виды бактерий.

Задача изобретения - повышение эффективности выделения L-форм микобактерий из патологического материала, уменьшение количества проростов посторонней микрофлоры, а также время проведения работы.

Для этого предложен способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала, который заключается в следующем: патологический материал измельчают в ступке ножницами и обрабатывают 2% раствором серной кислоты с последующим двухкратным отмыванием. Затем патологический материал растирают до однородной массы с кварцевым песком и добавляют стерильный физиологический раствор, полученную взвесь фильтруют через стерильные мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой или Дорожковой. Посевы культивируют в термостате при температуре 37°С.

Пример 1. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 2% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 2. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 3% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 3. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 5% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Пример 4. Предпосевная обработка патологического материала: патологический материал измельчают в ступке ножницами, заливают 10% раствором серной кислоты, экспозиция кислоты 15 минут. Затем дважды отмывают физиологическим раствором, полученную взвесь фильтруют через мембранные фильтры с диаметром пор 0,2 мкм, а фильтрат высевают на среду Школьниковой и Дорожковой.

Результаты, полученные при сравнении четырех примеров представлены в таблице 1.

Пример Раствор кислоты Количество проб Выделение культур L-форм микобактерий Количество пророста
количество процент
1 2% 60 35 58,3% 1%
2 3% 60 20 33,3% 4%
3 5% 60 9 15% 2%
4 10% 60 0 - 0%

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 2% раствора серной кислоты (пример 1) выделено 35 (58,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 1% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 3% раствора серной кислоты (пример 2) выделено 20 (33,3%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 4% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 5% раствора серной кислоты (пример 3) выделено 9 (15%) культур L-форм микобактерий, тогда как рост посторонней микрофлоры отмечен только в 2% посевов.

При предпосевной обработке патологического материала предложенным способом с применением 10% раствора серной кислоты (пример 4) культуры в L-форме микобактерий и проростов не выявлены.

Результаты проведенных исследований в сравнении с прототипом: предложенный способ для выделения L-форм микобактерий из патологического материала дает возможность повысить выделение L-форм микобактерий, так как через фильтры с диаметром пор 0,2 мкм не проходят другие виды бактерий, а также снизить процент пророста посевов. Предложенный способ предпосевной обработки для выделения L-форм микобактерий из патологического материала отвечает современным требованиям при работе с заразным материалом, безопасный и эффективный при работе.

Источники информации

1. Наставление по диагностике туберкулеза животных / МСХ РФ департамент ветеринарии. 18.11.2002 г., с.17-16.

2. «Ветеринарная лабораторная практика» / Т.1. Москва 1963 г., с.279-280.

3. «Способ выделения L-форм микобактерий из проб патологического материала» (UA 39178 U, G01N 33/50, 10.02.2009).

Способ предпосевной обработки патологического материала для выделения L-форм микобактерий, включающий измельчение патологического материала в ступке ножницами, выдерживание в 2%-ном растворе серной кислоты 15 мин, отмывание физиологическим раствором, растирание с кварцевым песком и фильтрование взвеси через мембраны с диаметром пор 0,2 мкм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и молекулярной диагностике, и касается способа оценки эффективности терапии циклофосфамидом у больных хроническим гломерулонефритом.
Изобретение относится к области медицины, профессиональной патологии, и может быть использовано для диагностики нарушений микроциркуляции при деформирующем остеоартрозе у женщин, работающих в условиях физического перенапряжения.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и кардиологии, и касается способа прогнозирования риска развития метаболического синдрома у пациента с абдоминальным ожирением в российской популяции.
Изобретение относится к области медицины, а именно к разработке способов ранней диагностики онкологических заболеваний, в частности, для персонала, работающего во вредных для здоровья условиях труда.

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и касается способа лечения хронического риносинусита. .

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования развития рецидива кровотечения из острых гастродуоденальных язв желудка и/или двенадцатиперстной кишки.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом на протяжении всей жизни.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к исследованию рецептору, сопряженному с G-белком, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки негативного воздействия бензола и фенола, поступающих с атмосферным воздухом, на нарушение функций глутатионовой системы детского организма
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и клинической иммуногистохимии, и может быть использовано для диагностики антителоопосредованного отторжения аллотрансплантата сердца
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для диагностики некоронарогенного повреждения миокарда у больных туберкулезом легких на фоне туберкулезной интоксикации и проводимой антибактериальной терапии при отсутствии жалоб кардиального характера и динамики электрокардиографических показателей
Изобретение относится к медицине и касается проблемы нарушений психомоторного развития у детей и может быть использовано для оценки прогноза задержки психомоторного развития у детей с перинатальным поражением центральной нервной системы (ПП ЦНС) гипоксически-ишемического генеза в анамнезе
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии
Изобретение относится к медицине, биологии, гематологии, педиатрии

Изобретение относится к медицине, биологии, гематологии, педиатрии

Изобретение относится к способу обнаружения и подсчета жизнеспособных микроорганизмов вида Legionella pneumophila в образце
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам
Наверх