Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде


 


Владельцы патента RU 2474819:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная медицинская академия имени академика Е.А. Вагнера" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к ранней диагностике развития различных форм клещевого энцефалита. Изобретение предоставляет собой способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде. Прогнозирование осуществляется на основе анализа крови: в тромбоцитах крови больного определяют уровень серотонина и при его значении более 150 нг/мл прогнозируют благоприятное течение клещевого энцефалита с развитием непаралитических форм, менее 150 нг/мл - прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм. Способ обеспечивает повышение точности и специфичности проводимого прогнозирования. 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, неврологии, инфекционным болезням, а именно к ранней диагностике развития различных форм клещевого энцефалита (КЭ) - непаралитических (менингиальная, лихорадочная) и паралитических очаговых форм.

Широкое распространение КЭ, высокий уровень заболеваемости, часто приводящей к инвалидизации, вероятность летальных исходов обусловливают высокую медико-социальную и экономическую значимость КЭ и делают необходимым дальнейший поиск новых ранних методов прогнозирования течения инфекции. Первые 2-4 дня заболевания КЭ еще не определяют его клинической формы и тяжести (А.П.Иерусалимский, 2006). Ведущим в это время часто бывает общеинфекционный синдром, а неврологические проявления могут развиться позднее. Клиническая симптоматика не всегда отражает истинную тяжесть и степень поражения центральной нервной системы (ЦНС). Этим можно объяснить тот факт, что исход заболевания, в том числе и неблагоприятный, становится очевидным далеко не в первые дни от начала болезни.

Актуальным является поиск прогностических маркеров, отражающих выраженность патологических изменений в ЦНС, с целью раннего и адекватного лечения.

Известен способ прогнозирования развития очаговых форм КЭ [Субботин А.В., Чебаненко Н.В., Зинчук С.Ф. Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита. Патент РФ №2003103892/14 от 2004 г.; Субботин А.В., Деконенко Е.П., Чебаненко Н.В., Зинчук С.Ф. О роли различных факторов в прогнозировании развития и формирования очаговой формы клещевого энцефалита // Неврологический журнал. - 2004. - №4. - С.19-25], основанный на оценке совокупности анамнестических, клинических и лабораторных признаков, в том числе анализе крови (определение лейкоцитарного индекса интоксикации, люциферазного индекса, концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, концентрации молекул средней массы, концентрации мочевины и билирубина, активности аланинаминотрансферазы), определении каждому признаку прогностического коэффициента, прогноз проводят путем сравнения суммы коэффициентов пациента со средней известной вероятностью степени риска развития очаговой формы КЭ. Недостатки: способ трудоемок, требует сбора и анализа многочисленных показателей, математической обработки данных.

Техническим результатом изобретения является упрощение и ускорение способа раннего прогнозирования течения КЭ при высокой чувствительности и специфичности.

Поставленная задача решается тем, что у больного в тромбоцитах крови определяют уровень серотонина, пороговая цифра тромбоцитарного серотонина (ТС) составляет 150 нг/мл, выше которой прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм, меньше 150 нг/мл - прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.

Способ осуществляют следующим образом. У больного с КЭ утром натощак забирают 5 мл крови из вены в пластиковую пробирку, содержащую цитрат. Далее для получения плазмы крови, обогащенной тромбоцитами (ПОТ), образцы центрифугируют в течение 10 минут при комнатной температуре при 200×g. Переносят надосадочную жидкость в другую пробирку и проводят подсчет тромбоцитов. Осадок тромбоцитов получают путем добавления 800 мкл физиологического раствора к 200 мкл ПОТ и центрифугирования (4500×g, 10 минут). Надосадочную жидкость удаляют. К осадку тромбоцитов добавляют 200 мкл дистиллированной воды и тщательно перемешивают на вортексе. Полученную суспензию затем можно хранить замороженной при температуре минус 20°C в течение нескольких недель. Замороженный образец после размораживания центрифугируют при 10000×g в течение 2 минут при комнатной температуре. Для реакции ацилирования используют 25 мкл надосадочной жидкости. До проведения ИФА проводят количественное ацилирование серотонина.

Набор Serotonin ELISA Fast Track (LDN, Германия) основан на твердофазном конкурентном варианте иммуноферментного анализа. На поверхности лунок планшета (твердой фазе) иммобилизованы молекулы антигена. Молекулы ацилированного серотонина, содержащиеся в стандартах, контролях и исследуемых образцах, и молекулы, иммобилизованные на твердой фазе, конкурируют за ограниченное число центров связывания специфических антител. После того как реакция связывания достигнет равновесия, несвязавшиеся с твердой фазой антигены и комплексы «антиген-антитело» удаляют промывкой. Антитела, связавшиеся с иммобилизованным на твердой фазе антигеном, выявляют с помощью конъюгата - антител к IgG кролика, меченных пероксидазой. В качестве субстрата используют тетраметилбензидин (ТМБ). Интенсивность цветовой реакции измеряют при длине волны 450 нм. Количество серотонина в исследуемых образцах рассчитывают по калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям в стандартах. Содержание серотонина в тромбоцитах выражается отношением к 109 тромбоцитов.

Для прогнозирования течения КЭ в тромбоцитах крови определяют уровень серотонина. Если величина серотонина более 150 нг/мл, то прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм КЭ (лихорадочной и менингиальной). В случае если величина серотонина будет менее 150 нг/мл, прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.

При помощи заявляемого способа повышается точность прогнозирования течения и тяжести поражения ЦНС у больных с КЭ.

Чувствительность метода - 91%.

Специфичность метода - 98%.

ПРИМЕРЫ КОНКРЕТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Пример 1. Б-я П., 35 лет, преподаватель, история болезни №4434. Поступила 17.06.2011 г. на второй день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль, боли при движении глазных яблок, слабость. Эпиданамнез - 7 дней назад отдыхала на природе в лесу, присасывание клеща отрицает, от КЭ не вакцинирована. Заболела остро 16.06.2011 г. - температура 38,0°C, озноб, головная боль, миалгии, тошнота, рвота на высоте головной боли. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура до 38,0°C в течение 2 дней. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 110/70 мм рт.ст. Пульс - 88 в мин. Ригидность затылочных мышц +1,5 см (сомнительная), симптом Кернига отрицательный с обеих сторон, очаговых неврологических симптомов нет. В общем анализе крови от 18.06.2011 г. эр. - 4,0×1012/л, гемоглобин - 122 г/л, тромбоциты - 252×109/л, лейкоциты - 4,1×109/л, э - 1%, п - 2%, с - 53%, л - 37%, м - 6%, СОЭ - 2 мм/час. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 1,1. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 325,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, лихорадочная форма, средней степени тяжести (непаралитическая форма).

Вывод. В первые дни заболевания у данной пациентки не исключалась форма с поражением ЦНС, от люмбальной пункции больная отказалась, была выбрана выжидательная тактика. Определение уровня ТС позволило с высокой вероятностью говорить о том, что поражения ЦНС у этой больной отсутствует и заболевание будет иметь благоприятный исход.

Пример 2. Б-я В., 52 лет, история болезни №4688. Поступила 26.06.2011 г. на второй день болезни с жалобами на температуру, сильную головную боль, слабость. Эпиданамнез - 11.06.2011 г. (за 14 дней до заболевания) посещала лес, было присасывание клеща в живот. Вирусофорность клеща ++++. Введен противоэнцефалитный иммуноглобулин 1:160 - 3,0 мл (через сутки). Заболела остро 25.06.2011 г. - температура 37,3-39°C, озноб, головная боль, слабость, миалгии. Против КЭ не вакцинирована. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура до 39,0°C в течение 7 дней. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 120/70 мм рт.ст. Пульс - 100 ударов в мин. Ригидность затылочных мышц +1,5 см, симптом Кернига сомнительный, очаговых неврологических симптомов нет. В анализе крови от 27.06.2011 г. - эр. - 4,3×1012/л, гемоглобин - 135 г/л, тромбоциты - 340×109/л, лейкоциты - 8,8×109/л, п - 4%, с - 76%, л - 16%, м - 4%, СОЭ - 11 мм/час. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди положительная, плеоцитоз 52 клетки, смешанный, белок 470, сахар - 3,2. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 12,8. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 174,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингеальная форма, средней степени тяжести (непаралитическая форма).

Вывод. Определение уровня ТС позволило уже в первые дни заболевания с высокой вероятностью говорить о том, что у данной пациентки поражение вещества головного мозга отсутствует, и с учетом клинических и лабораторных данных диагностировать менингиальную форму заболевания с благоприятным течением.

Пример 3. Б-й П., 44 лет, преподаватель, история болезни №5188. Поступил 14.07.2011 г. на 11 день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль, слабость, рвоту. Эпиданамнез - 10 дней назад был на сплаве на реке, присасывание клеща отрицает, от КЭ не вакцинирован. Заболел остро 03.07.2011 г. - температура 39,0°C, озноб, головная боль, миалгии, принимал жаропонижающие, в последующие 7 дней температура нормальная; 10.07.2011 г. вновь повышение температуры до 39,0°C, тошнота, рвота на высоте головной боли, судороги, слабость. При объективном обследовании в стационаре: состояние тяжелое, температура 39,0°C, больной в сопоре. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 160/120 мм рт.ст. Пульс - 105 ударов в мин. Ригидность затылочных мышц +2,0, симптом Кернига положительный под углом 160° с обеих сторон, легкий расходящийся страбизм. В общем анализе крови эр. - 4,55×1012/л, гемоглобин - 135 г/л, тромбоциты - 230×109/л, лейкоциты - 8,0×109/л, э - 1%, п - 2%, с - 72%, л - 19%, м - 6%, СОЭ - 9 мм/час. Общий анализ мочи и биохимический анализ крови без отклонений от нормы. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди отрицательная, плеоцитоз 21 клетка, смешанный, белок 1380 г/л, сахар - 2,9 ммоль/л. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 7,4. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 147,7 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингоэнцефалическая форма, тяжелое течение (паралитическая форма).

Вывод: Определение уровня ТС позволило уже в первые дни заболевания с высокой вероятностью говорить о том, что у пациента есть поражение ЦНС, и с учетом клинических и лабораторных данных была диагностирована паралитическая очаговая форма заболевания.

Пример 4. Б-я X., 61 года, пенсионерка, история болезни №5133. Поступила 11.07.2011 г. на 3 день болезни с жалобами на высокую температуру, сильную головную боль в затылочной области, слабость, боли в мышцах и суставах. Эпиданамнез - 25.06.2011 г. присасывание клеща в шею, пила сырое коровье молоко, клещ не исследован, от КЭ не вакцинирована. Заболела остро 09.07.2011 г. - температура 38,8°C, озноб, головная боль, артралгии, миалгии, рвота, 11.07.2011 г. вызвала скорую помощь, доставлена в краевую клиническую инфекционную больницу. При объективном обследовании в стационаре: состояние средней тяжести, температура 39,3°C, больная в сознании. Гиперемия лица, инъекция сосудов склер. В зеве разлитая легкая гиперемия. АД 160/100 мм рт.ст. Пульс - 96 в мин. Ригидность затылочных мышц +3,0, симптом Кернига положительный под углом 160° с обеих сторон. В общем анализе крови эр. - 3,5×1012/л, гемоглобин - 106 г/л, тромбоциты - 240×109/л, лейкоциты - 8,0×109/л, п - 3%, с - 86%, л - 7%, м - 4%, СОЭ - 32 мм/час. Общий анализ мочи: протеинурия, лейкоцитурия. Биохимический анализ крови: сахар - 7,5 ммоль/л. Проведена люмбальная пункция, ликвор прозрачный, реакция Панди резко положительная, плеоцитоз 725 клеток, смешанный, белок 1240 г/л, сахар - 1,72 ммоль/л. В ИФА в сыворотке крови обнаружены антитела класса IgM к вирусу КЭ, КП 1,2. ИФА на боррелиоз, анаплазмоз, эрлихиоз - антитела класса IgM не выявлены. Тромбоцитарный серотонин - 59,4 нг/мл. Диагноз: Клещевой энцефалит, менингоэнцефалополиемилитическая форма, тяжелое течение (паралитическая форма).

Особенность данного случая в том, что пациентка поступает с подозрением на КЭ, люмбальная пункция проводится только на следующий день, когда была заподозрена менингиальная форма, а к вечеру состояние больной ухудшилось, появилась очаговая симптоматика и больная переведена в отделение реанимации, где через 2 недели погибает.

Вывод: исследование уровня ТС в первый день поступления в стационар позволило с высокой степенью вероятности говорить о том, что у данной пациентки имеет место поражение ЦНС, формируется паралитическая очаговая форма, и прогнозировать неблагоприятный исход заболевания.

Таким образом, проведенные исследования позволили выявить критерий, на основании которого можно прогнозировать течение КЭ. Полученные знания позволят инфекционистам и неврологам уже в первые дни заболевания прогнозировать формирование паралитических очаговых форм, назначить адекватную терапию и снизить количество осложнений. Существенным преимуществом заявляемого способа является небольшое количество крови, необходимое для исследования, в сочетании с высокой чувствительностью и специфичностью. Кроме того, способ не травматичен и не имеет противопоказаний. Способ апробирован на клиническом материале и найдет применение в практике инфекционистов, неврологов.

Способ прогнозирования развития очаговых форм клещевого энцефалита в остром периоде с помощью анализа крови, отличающийся тем, что в тромбоцитах крови больного определяют уровень серотонина, при его значении более 150 нг/мл прогнозируют благоприятное течение заболевания с развитием непаралитических форм, менее 150 нг/мл прогнозируют неблагоприятное течение с формированием паралитических очаговых форм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и касается способа идентификации агента для лечения рака и воспалительных заболеваний, заключающегося в определении способности агента взаимодействовать с OG-доменом ММР-9, где упомянутый агент является предполагаемым понижающим регулятором коллагенолитической активности ММР, и определении способности указанного агента понижающе регулировать коллагенолитическую активность ММР-9.
Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии. .
Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии и представляет собой способ получения слабоположительной контрольной сыворотки, содержащей AD и AY субтипы HBsAg, включающий отбор донорских сывороток с помощью ИФА, титрование положительной сыворотки, содержащей AD & AY субтипы HBsAg в разводящем стабилизированном растворе, генотипирование, проведение теста термодеградации для установления сроков годности панели, отличающийся тем, что положительные контрольные сыворотки, содержащие AY и AD субтипы HBsAg, разводят до диапазона концентраций от 0,05 до 0,025 МЕ/мл и вязкости, равной вязкости нормальной сыворотки человека, а в качестве разводящего стабилизированного раствора используют отрицательную дефибринизированную и безлипидную сыворотку, не содержащую маркеры HBV инфекции, для выявления которой предназначена искомая тест-система.

Изобретение относится к области медицины. .
Изобретение относится к технике лабораторных исследований, в частности к способам проведения иммунологического анализа. .

Изобретение относится к области медицины, а более конкретно, к способу и устройству лабораторной экспресс-диагностики опасных инфекционных заболеваний. .
Изобретение относится к области биохимии. .
Изобретение относится к инфекционным болезням и предназначено для быстрой оценки степени активности хронического гепатита у больных хроническим гепатитом С. .

Изобретение относится к области биофармакологии, биотехнологии, медицины и косметологии и может быть использовано в лечебно-профилактических учреждениях косметологического профиля.

Изобретение относится к микробиологии и клинической лабораторной диагностике. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к нейроонкологии, и может быть использовано для определения рецидива злокачественного новообразования головного мозга в послеоперационном периоде.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу выделения минералов соединительной ткани человека методом низкотемпературного озоления ткани. .
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для подтверждения диагностики формы хронического простатита. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, и может быть использовано для оценки функционального состояния микрососудистого эндотелия. .

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и гистологической лабораторной диагностике
Наверх