Штамм бактерий hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный лт-энтеротоксин

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294. Штамм обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин. 1 табл., 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин.

Техническим результатом изобретения является штамм Hafnia alvei №294, который выделен от больного с кишечной инфекцией в 2011 году в Муниципальном учреждении здравоохранения города Ишимбай республики Башкортостан, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294, обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин.

Штамм Hafnia alvei ГКПМ №294 характеризуется следующими признаками.

По биохимическим свойствам штамм относится к семейству Enterobacteriaceae рода Hafnia alvei, поскольку при тестировании на микробиологическомй тест-системе версии «Vitek 2 Sistems: 04/01» соответствовал биохимическим свойствам этого вида.

Культуральные признаки.

Растет на обычных универсальных плотных питательных средах с образованием характерных изолированных колоний желтоватого оттенка. В мясопептонном бульоне вызывает равномерное помутнение с выпадением осадка.

Изучение факторов вирулентности показало, что штамм является редким, обладающим комплексом факторов патогенности, способным вызывать острую токсическую пневмонию мышей (гибель животных в течение 3 часов), некроз кожи кролика (3,5 см в диаметре), отек лап мышей (с разницей 95 мг), петля тонкого кишечника кролика 1,2(V/L), обладает (альфатиолзависимый, энтерогемолизин), адгезивной (положительная Д-маннозочувствительная и Д-маннозорезистентная реакция с эритроцитами цыпленка), антиинтерфероновой, антилизоцимной активностями, способный в протистоцидном тесте вызывать гибель инфузорий-туфелек в течение 45 секунд.

Данный штамм рекомендуется в качестве суперпродуцента термолабильного ЛТ-энтеротоксина и как штамм, обладающий комплексом факторов патогенности. Штамм можно использовать в производстве анатоксинов и для получения антитоксической сыворотки.

Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина.

Субплантарное введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки более 100 мг. Аксенова Е.В., 1980 г.

Интраназальное введение 0,05 мл 20-часовой бульонной культуры вызывает острую токсическую пневмонию у белых мышей-самцов весом 15-16 г (гибель в течение 4 часов). Войно-Ясенецкая Н.К., 1957 г.

Внутримышечное введение 300 млн микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3 см.

В опыте петля тонкой кишки кролика при введении 80 млн м.т. 20-часовой бульонной культуры дает положительный результат (V/L=l,2).

Гретый при 56°С в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывая некроза кожи кролика. Гретая при 100°С 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L=0,3).

Условия хранения культуры после лиофильной сушки в ампуле или выращенной при 37°С на 0,3%-ном МПА (рН 7,2-7,4), залитым стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4°С.

Среды для размножения - бульон Хоттингера (рН 7,2), мясопептонной агар, содержащий 5% эритроцитов кролика при температуре 37°С в течение 24 часов.

Генетические особенности: HLy+, Ent+, MS+, MR+, LT+, ALA+, AKA+. Устойчив к ампициллину, ампициллину/сульбактам, цефуроксимаксетину, чувствителен к фторхинолону.

Пример 1.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хотингера (5 мл рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 минут. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-18 г. Через 24 часа животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах, при этом центрифугат штамма Hafnia alvei №294 давал разницу между левой и правой лапками не менее 100 мг, остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксин от 65 до 90 мг. Контроли - нативный стерильный бульон Хоттингера (рН 7,2) и гретый при 56°С центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг, соответственно.

Результаты приведены в таблице.

Пример 2.

0,1 мл 1 млрд суспензии суточной агаровой культуры сеют в бульон Хоттингера (рН 7,2), инкубируют в термостате при 37°С в течение 20 ч и 80 млн м.т. суспензию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 часов животных умерщвляют воздушной эмболией и рассчитывают соотношение объема экссудата к длине сегмента (V/L). При этом 20-часовая бульонная культура штамма Hafnia alvei №294 оказалась способной давать накопление жидкости в большом количестве и показатель V/L составил 1,2. У остальных 20 штаммов, способных продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/L колебался в пределах 0,9-1,0. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100°С 20-часовой бульонной культуры отношение объема накопленной жидкости к длине сегмента составило 0,25 и 0,3 соответственно.

Таблица
Сравнительные показатели ЛТ-энтеропродуцирующей активности Hafnia alvei
Номер штамма Вид Отек лапок (мг) Изолированная петля тонкого кишечника (V/L)
6 Hafnia alvei №294 100 1,3
8 -\- 74 0,9
7 -\- 76 0,9
3 -\- 80 1,0
9 -\- 85 1,0
1 -\- 75 0,8
3 -\- 70 0,7
4 -\- 78 0,9
Контроль 30 0,25-0,3
Примечание: в таблице приведены средние данные из пяти отеков.

Штамм бактерий Hafnia alvei, обладающий способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп патогенности ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения жидкой формы микробиологических препаратов для бобовых культур на основе клубеньковых бактерий.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к защите сельскохозяйственных, лекарственных и лесных культур. Штамм Bacillus thuringiensis var.
Изобретение относится к микробиологии, в частности к средствам защиты растений. Штамм Bacillus thuringiensis var.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов. Выращивают штамм бактерий Bacillus atrophaeus ВКПМ В-10592 и готовят из него суспензию, которую вносят в мерзлотную почву и водную среду.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения андроста-4,9(11)-диен-3,17-диона из фитостерина.

Изобретение относится к биотехнологии, к микробиологии, и касается выделения и идентификации возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза (У. Pseudotuberculosis и Y.

Изобретение относится к области биохимии и клинической микробиологии. Проводят выращивание золотистого стафилококка Staphylococcus aureus на питательной среде, содержащей желточно-солевой агар.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение питательной среды, создающей оптимальные условия для выращивания легионелл, содержащей: ферментативный гидролизат легкого свиньи, ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, калий фосфорнокислый 1-замещенный, калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный, L-цистеина гидрохлорид, уголь активный, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном соотношении ингредиентов.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба. Представленное изобретение предусматривает изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, при этом приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин-1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, а лиофилизацию проводят соблюдая определенный режим.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при изучении микрофлоры животных, а также бактериологической диагностике дисбактериоза кишечника.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения препарата на основе вакцинного штамма чумного микроба. Представленное изобретение предусматривает изготовление посевной нативной культуры чумного микроба, концентрирование микробной суспензии, приготовление вакцинной взвеси и получение сухой формы препарата, при этом приготовление посевной культуры включает культивирование микробов в жидкой питательной среде в бутылях в течение 48 ч при температуре 26…28˚С и непрерывной аэрации не менее 10 л·мин-1 пассированной стабилизированной стартовой культурой, полученной в результате трех последовательных пассажей через организм морских свинок и смешанной в соотношении 2:1 со стабилизирующей глицерино-лактозо-полиглюкиновой жидкостью, при приготовлении вакцинной взвеси используют оптимизированную по компонентному составу защитную среду высушивания, а лиофилизацию проводят соблюдая определенный режим.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается технологии получения иммуногенных сибиреязвенных антигенов - протективного антигена и белка ЕА1. .

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, иммунологии, биотехнологии, а именно к технологии получения антигена для диагностики бруцеллеза. .

Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии и иммунологии, и касается способа повышения иммуногенности антигенов возбудителя мелиоидоза - Burkholderia pseudomallei.

Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии, а именно к способу получения липополисахарида (ЛПС) возбудителя чумы. .

Изобретение относится к областям микробиологии и иммунологии. .
Изобретение относится к медицине и касается универсальной вакцины для лечения и профилактики болезни Лайма для применения в ветеринарии, на основе цельноклеточной бактериальной вакцины или бактериальных лизатов или очищенных препаратов, включающая три наиболее патогенных геновида Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia afzelii и Borrelia garinii, каждый из которых содержит одновременно оба иммуногенных протективных белка наружной мембраны OspA и OspC.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота. Способ профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота включает вакцинацию вакциной ассоциированной против инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота на основе антигенов бактерий Moraxella bovis и герпесвируса типа I, при этом за 29-31 день до вакцинации животным вводят подкожно в область верхней трети шеи в дозе 0,045-0,055 мл/кг живой массы иммуностимулирующий препарат «Кероконвитин», полученный на основе цитотоксической сыворотки из крови лошадей-доноров путем гипериммунизации их антигеном, приготовленным из тканей глаз - конъюнктивы и роговицы крупного рогатого скота, переболевшего инфекционным конъюнктиво-кератитом. Ткани глаз крупного рогатого скота получают при забое животных. Изобретение позволяет на 40% по сравнению с использованием одной вакцины повысить эффективность профилактики инфекционного конъюнктиво-кератита крупного рогатого скота, обеспечивает более высокий иммунный статус организма животных. 3 табл., 1 пр., 2 ил.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина и анатоксина Hafnia alvei при производстве вакцин. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития России под номером 294. Штамм обладает высокой способностью продуцировать термолабильный ЛТ-энтеротоксин. 1 табл., 2 пр.

Наверх