Простой способ экстракции из дрожжей высокополимерной рнк

Авторы патента:

Загребельный Станислав Николаевич (RU)

C12P19/34 - полинуклеотиды, например нуклеиновые кислоты, олигорибонуклеотиды

C12N15/10 - способы выделения, получения или очистки ДНК или РНК (химические способы получения ДНК или РНК C07H 21/00; получение неструктурных полинуклеотидов из микроорганизмов или с помощью ферментов C12P 19/34)

C12N1/18 - хлебопекарные дрожжи; пивные дрожжи

A61K36/06 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

Владельцы патента RU 2522900:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК. Способ получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в водном растворе олеата натрия, кипячение суспензии при периодическом перемешивании, центрифугирование охлажденного до комнатной температуры лизата, доведение объема дрожжевого экстракта до стандарта дистиллированной водой с последующим выделением из него высокополимерной РНК, добавлением его в мазь или разливом в виалы по 2-4 мл с дальнейшим замораживанием и лиофилизацией при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет увеличить выход высокополимерной РНК. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии, медицины и фармацевтической промышленности и может быть использовано для лечения заболеваний вирусной этиологии, в том числе ОРВИ и гриппа.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения экстракта высокополимерной (ВП) РНК из сухих пекарских дрожжей путем суспендирования их в водном 1-2%-ном растворе олеиновой кислоты, оттитрованной щелочью до рН 7-8, выдерживания суспензии при 99-102°С в течение 40-60 мин с последующим центрифугированием лизата при 2500-3500 g в течение 5-15 мин без охлаждения [1].

Данным способом получают экстракт биологически активной ВП РНК. Однако выход целевого продукта в этом процессе относительно невелик, а содержание в экстракте примесной низкополимерной кислоторастворимой фракции (КРФ) значительное.

Цель настоящего изобретения - увеличить выход ВП РНК при ее экстракции из дрожжей, снизив, одновременно, содержание в ней примесной низкополимерной КРФ.

Поставленная цель достигается заменой олеиновой кислоты на ее соль - олеат натрия.

А именно, в заявляемом способе пекарские дрожжи суспендируют порциями в течение 3-5 мин в водном 1-2%-ном растворе олеата натрия, суспензию выдерживают при 98-100°С в течение 40-45 мин, лизат охлаждают до 20-30°С и центрифугируют при 3000 g в течение 10 мин без охлаждения. Супернатант, содержащий в качестве основных компонентов, кроме воды, биологически активную ВП РНК, низкополимерную РНК и олеат натрия используют в лечебных целях. Выпавший же в осадок денатурированный белок может быть добавлен в пищу животным или, в виде коктейлей для наращивания мышечной массы, человеку.

Пример осуществления предлагаемого способа

300 г сухих пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae, Новосибирский дрожжевой завод, ГОСТ 28483-90) суспендировали порциями (первые порции по щепотке, первые 2-3 щепотки за несколько секунд до закипания) в течение 3-5 мин в 5 л высокой кастрюле в 3 л кипящей дистиллированной воды, содержащей 48,4 г олеата натрия. Температура суспензии не опускалась ниже 98°С. Суспензию кипятили 40 мин при 98-100°С, периодически перемешивая. По окончании экстракции суспензию охлаждали до 20-30°С в раковине в 3-х сменах холодной воды в течение 20-30 мин и затем центрифугировали на центрифуге S70D фирмы «Janetzki», Германия (3000 g, 10 мин, без охлаждения). Супернатант (1,7 л) доводили кипяченой дистиллированной водой до 2 л. Далее выделяли из него ВП РНК, добавляли его в мазь или разливали в виалы по 2-4 мл, замораживали и лиофилизовали. Плотный осадок дрожжевого шлама, собирающийся на дне центрифужных стаканов и содержащий до 70% денатурированного белка, собирали и готовили из него коктейль или сушили при 58-62°С обычным способом.

Полученный предлагаемым способом дрожжевой экстракт, содержащий ВП РНК (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2и), обладает такими же биологическими и лечебными свойствами, как и приготовленный по способу-прототипу [1].

Как видно из приведенной ниже таблицы, его спектральные характеристики практически не отличаются от таковых для способа-прототипа, в то время как выход целевого продукта - РНК увеличен по сравнению с прототипом на 16% при одновременном снижении содержания в нем примесной низкополимерной КРФ в 1,6 раза.

Источники информации

1. Патент РФ №2403288.

2. Ямковой В.И., Ямковая Т.В. Практикум по биохимии. - Новосибирск: Изд. НГПУ, 2012. - Ч.2: Аналитическая биохимия. С.16-17.

Таблица
Основные характеристики осветленного центрифугированием экстракта ВП РНК, полученного нами из 300 г сухих пекарских дрожжей с помощью олеата натрия предлагаемым способом и с помощью олеиновой кислоты по способу-прототипу [1]
Экстракт ВП РНК	спектральные отношения	выход РНК, ОЕ₂₆₀	содержание КРФ*, %
D₂₃₀/D₂₆₀	D₂₅₀/D₂₆₀	D₂₈₀/D₂₆₀
Получен с помощью олеиновой кислоты [1]	0,66	0,91	0,53	280000	34,6
Получен с помощью олеата натрия	0,70	0,91	0,52	325000	21,2
* содержание КРФ определяли по методу [2]

Способ получения дрожжевого экстракта, содержащего биологически активную высокополимерную РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, включающий суспендирование дрожжей в течение 3-5 мин в водном растворе олеата натрия, с концентрацией олеата натрия 16,1 г/л, при температуре суспензии не ниже 98°C, кипячение суспензии в течение 40 мин при 98-100°C при периодическом перемешивании, центрифугирование охлажденного до комнатной температуры лизата при 3000 g в течение 10 мин, доведение объема дрожжевого экстракта до стандарта дистиллированной водой с последующим выделением из него высокополимерной РНК, добавлением его в мазь или разливом в виалы по 2-4 мл с дальнейшим замораживанием и лиофилизацией.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

Способ диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя и диагностический набор // 2506316

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и диагностическому набору для диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя коклюша.

Способ получения днк из молок лососевых рыб // 2488634

Изобретение относится к области биохимии. .

Устройство и способ управления температурой реакционной смеси // 2487944

Способ получения и экспрессии кодирующей последовательности изоформы 2 гена реналазы человека // 2482185

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в биотехнологии для получения представляющих практический интерес белков, являющихся продуктами молчащих генов или генов с низким уровнем экспрессии.

Синтетические олигонуклеотидные праймеры и способ выявления lactobacillus acidophilus в заквасочных культурах, используемых при производстве кисломолочных продуктов // 2481402

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к ДНК-технологиям. .

Улавливание и характеристика совместно локализованного хроматина // 2478716

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу анализа частоты взаимодействия нуклеотидной последовательности-мишени с одной или несколькими представляющими интерес нуклеотидными последовательностями.

Олигонуклеотидные праймеры bmvat5-ch2s/bmvat5-ch2as для обнаружения фрагмента дифференциации вмаа0107 штаммов возбудителя сапа // 2474620

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярной биологии. .

Биологически активное соединение, содержащее кодирующий олигонуклеотид (варианты), способ его синтеза, библиотека соединений (варианты), способ ее синтеза и способ поиска соединения, связывающегося с биологической мишенью (варианты) // 2470077

Изобретение относится к области биологической химии и может быть использовано для определения соединений, связывающихся с биологической мишенью. .

Способ гомогенной детекции по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации // 2460804

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу гомогенной детекции со сниженным разбросом данных по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации.

Способ определения уровня транскрипции гена, кодирующего хемокин ccl2 (мср-1) человека и набор для его осуществления // 2522801

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ определения уровня экспрессии гена МСР1 (CCL2) предусматривает оценку количества его мРНК методом полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) с детекцией сигнала в реальном времени в образцах клеток, тканей и биологических жидкостей человека.

Способ идентификации улучшенных вариантов белка // 2520808

Изобретение относится к способу идентификации улучшенных вариантов белка. Способ включает тестирование множества вариантов белка с единичными заменами в первом тесте первого свойства и во втором тесте второго свойства.

Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах // 2518340

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенную полинуклеотидную молекулу с функцией rEVE, рекомбинантный вектор экспрессии, экспрессионный шаттл-вектор, клетку-хозяина, а также способы с использованием вышеуказанной выделенной полинуклеотидной молекулы.

Способ мультиплексной детекции представителей родов aeromonas и flavobacterium // 2514668

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ мультиплексной детекции представителей родов Aeromonas и Flavobacterium предусматривает постановку ПЦР в один этап с использованием двух пар синтезированных праймеров к участкам гена малой субъединицы рибосомальной РНК (16S rRNA) в режиме реального времени к участку гена малой субъединицы рРНК Aeromonas: А1 - 5'-TTCGGGCCTTGCGCGATTGG-3' и А2 - 5'-CGTGCTGGCAACAAAGGACAG-3', обеспечивающие амплификацию фрагмента размером 920 п.н.

Способ стабилизации транскрипции хлоропластных генов рапса в условиях хлоридного засоления // 2514641

Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. В способе растения обрабатывают раствором биологически активного вещества, в качестве которого используют 24-эпибрассинолид.

Способ получения неприродных искусственных олигонуклеотидов, потенциально способных образовывать несовершенные g-квадруплексы // 2509802

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения неприродных искусственных олигонуклеотидов, потенциально способных образовывать стабильные в физиологических и близких к физиологическим условиях неканонические структуры - несовершенные G-квадруплексы (ImGQ), включающие одну нуклеотидную замену в G4 плоскости в G-квадруплексах (GQ).

Профилактическая вакцина против вич, основанная на вич-специфических антителах // 2505604

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложен способ получения вакцины против ВИЧ-1 с использованием метода обратного панинга на фаг-презентированной библиотеке ВИЧ-1-специфических антител scFv, полученной на основе мРНК В-лимфоцитов больных, инфицированных ВИЧ-1, и обогащенной с помощью панинга на пептидах ВИЧ-1, и индуцируемых систем экспрессии рекомбинантных белков с эукариотическим гликозилированием.

Белки, связывающие антиген фактор роста, подобный гепаринсвязывающему эпидермальному фактору роста // 2504551

Изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, которое специфически связывает гепаринсвязывающий EGF-подобный фактор роста (HB-EGF), и его антигенсвязывающий фрагмент.

Способ идентификации агента на основе высокопроизводительного скрининга // 2486247

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа идентификации агента на основе высокопроизводительного скрининга. .

Способ выделения днк // 2485178

Изобретение относится к области биохимии. .

Способ получения глюкан-хитозанового комплекса из дрожжевой биомассы отходов пивоваренного производства // 2499836

Способ получения глюкан-хитозанового комплекса из дрожжевой биомассы отходов пивоваренного производства включает механическую и ультразвуковую обработку дрожжевой биомассы, разрушение белков обработкой полученной суспензии щелочными реагентами с последующим выделением целевого продукта.