Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов


 


Владельцы патента RU 2528740:

Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологии. Питательная среда содержит дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, цеолит и дистиллированную воду в заданном соотношении. Изобретение позволяет повысить скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов без изменения скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов. 1 табл., 12 пр.

 

Изобретение относится к области создания биопрепаратов на основе индивидуальных микроорганизмов и их сочетаний (консорциумов) и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция, сахарозу и воду [1]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста на ней азотфиксирующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, что делает ее малопригодной для выращивания их консорциума.

Известна питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая глюкозу, аспарагин, сульфат калия, кукурузный экстракт, хлорид кальция, фосфат натрия и воду [2]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста азотфиксирующих микроорганизмов, что делает ее также малопригодной для выращивания их консорциума.

Наиболее близким к заявляемому нами объекту по совокупности признаков и достигаемому техническому эффекту является питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду [3]. Недостатком данной питательной среды, которая в связи с только что отмеченным обстоятельством выбрана нами в качестве объекта-прототипа, также является сравнительно низкая скорость роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов и, значит, и их консорциума в целом.

Целью данного изобретения является увеличение скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов при сохранении скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов при выращивании консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов.

Поставленная цель достигается тем, что питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II) и воду, дополнительно содержит цеолит при следующем соотношении компонентов, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.15-0.25
Хлорид натрия 0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Цеолит 1.0-2.0
Вода дистиллированная до 1 л

В результате использования данной питательной смеси скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов остается практически неизменной, тогда как скорость роста фосфатмобилизующих возрастает в 4-5 раз по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3].

На данный момент времени в литературе не описана питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая вышеуказанную совокупность компонентов вообще и цеолит в частности. Это обстоятельство позволяет нам сделать вывод, что заявляемый нами объект подпадает под первый критериальный признак изобретения, установленный патентным законодательством РФ, а именно новизна. Сопоставление известных признаков питательной среды-прототипа [3] и отличительных признаков, характеризующих заявляемый нами объект (а именно - введение в питательную среду цеолита), не позволяет предсказать априори появления у него новых по сравнению с прототипом свойств, а именно указанного выше резкого увеличения скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, входящих в состав вышеуказанного консорциума, при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов. Данный факт позволяет утверждать, что заявляемый нами объект явным образом не следует из известного в данной отрасли техники уровня и соответствует второму установленному законодательством РФ критериальному признаку изобретения - изобретательский уровень. Заявляемая нами на предмет изобретения питательная среда достаточно легко может быть получена в промышленном масштабе, не вызывает сколько-нибудь существенных затруднений и ее применение для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, а значит, вышеуказанный объект подпадает и под третий критериальный признак изобретения РФ - промышленная применимость.

Заявляемый нами объект иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

Готовят питательную среду для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60
Гидрофосфат калия 0.12
Сульфат магния гептагидрат 0.15
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат 0.02
Молибдат натрия 0.0005
Сульфат железа(II) 0.002
Сахароза 18.0
Цеолит 1.0
Вода дистиллированная до 1 л

Составляют консорциум азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов на основе коллекционных (депонированных) штаммов поименованных микроорганизмов {Pseudomonas brassicacearum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10388) и (Sphingobacterium multivorum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10385), соответственно с соотношением 1:1, по количеству КОЕ (колониеобразующих единиц), для чего предварительно выращивают азотфиксирующие микроорганизмы на агаризованной среде Эшби, а фосфатмобилизующие - на агаризованной среде Муромцева. После этого обе эти культуры микроорганизмов высеваются на питательную среду указанного выше состава. Выращивание ведут в течение того периода времени, в котором имеет место прирост их численности (6,0 сут), по его достижении этот процесс прекращают. Для определения численности микроорганизмов сразу же проводят посев образовавшегося консорциума на агаризованные питательные среды (среда Эшби в случае азотфиксирующих и среда Муромцева в случае фосфатмобилизирующих микроорганизмов) и определяют среднюю скорость их роста в (млн·г-1·сут-1) как частное от деления числа микроорганизмов (в миллионах единиц) на массу питательной среды (в г) и время выращивания (в сут). Итоговые результаты по определению средней скорости роста азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов для вышеуказанной питательной среды даны в Таблице 1.

Пример 2

Выполняют по общей технологической схеме Примера 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат 0.05
Молибдат натрия 0.0006
Сульфат железа(II) 0.003
Сахароза 20.0
Цеолит 1.5
Вода дистиллированная до 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая приведены в Таблице 1.

Пример 3

Осуществляют как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.70
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.25
Хлорид натрия 0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.06
Молибдат натрия 0.0007
Сульфат железа(II) 0.004
Сахароза 22.0
Цеолит 2.0
Вода дистиллированная до 1 л

Данные по определению скорости роста вышеуказанных микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.

Пример 4 (сравнительный)

Выполняют таким же образом, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов приготавливают питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат 0.05
Молибдат натрия 0.0005
Сульфат железа(II) 0.003
Сахароза 20.0
Цеолит 0.7
Вода дистиллированная до 1 л

Результаты по определению скорости роста поименованных выше микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.

Пример 5 (сравнительный)

Проводят как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат 0.05
Молибдат натрия 0.0005
Сульфат железа(II) 0.003
Сахароза 20.0
Цеолит 2.5
Вода дистиллированная до 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для такого случая приведены в Таблице 1.

Пример 6 (сравнительный)

Осуществляют таким же образом, как и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат 0.015
Молибдат натрия 0.0003
Сульфат железа(II) 0.001
Сахароза 14.0
Цеолит 1.5
Вода дистиллированная до 1 л

Сведения о скорости роста микроорганизмов для этого случая даны в Таблице 1.

Пример 7 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но выращивание консорциума вышеуказанных микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат 0.09
Молибдат натрия 0.0010
Сульфат железа(II) 0.006
Сахароза 28.0
Цеолит 1.5
Вода дистиллированная до 1 л

Величины скорости роста обоих этих микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.

Пример 8 (сравнительный)

Выполняют как и Пример 1, но для выращивания консорциума микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.50
Гидрофосфат калия 0.09
Сульфат магния гептагидрат 0.10
Хлорид натрия 0.15
Сульфат кальция дигидрат 0.015
Молибдат натрия 0.0003
Сульфат железа(II) 0.001
Сахароза 14.0
Цеолит 2.5
Вода дистиллированная до 1 л

Значения скорости роста микроорганизмов для этого случая представлены в Таблице 1.

Пример 9 (сравнительный)

Выполняют таким же образом, как и Пример 1, но выращивание консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.90
Гидрофосфат калия 0.30
Сульфат магния гептагидрат 0.30
Хлорид натрия 0.35
Сульфат кальция дигидрат 0.09
Молибдат натрия 0.0010
Сульфат железа(II) 0.006
Сахароза 28.0
Цеолит 2.5
Вода дистиллированная до 1 л

Данные скорости роста микроорганизмов для этого случая см. в Таблице 1.

Пример 10 (по прототипу [3])

Выполняют с использованием той же общей схемы, что и в Примере 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.64
Гидрофосфат калия 0.16
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Сульфат кальция дигидрат 0.05
Молибдат натрия 0.0005
Сульфат железа(II) 0.003
Сахароза 20.0
Вода дистиллированная до 1 л

Сведения о скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая также приведены в Таблице 1.

Пример 11 (по аналогу [1])

Выполняют с использованием той же технологической схемы, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.10
Гидрофосфат калия 0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.20
Хлорид натрия 0.20
Карбонат кальция 5.00
Сахароза 20.0
Вода дистиллированная до 1 л

Данные по скорости роста микроорганизмов для указанного случая также приведены в Таблице 1.

Пример 12 (по аналогу [2])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:

Сульфат калия 0.20
Хлорид кальция гексагидрат 3.30
Фосфат натрия додекагидрат 3.80
Кукурузный экстракт 0.20
Глюкоза 10.0
Аспарагин 1.00
Вода дистиллированная до 1 л

Показатели, характеризующие рост микроорганизмов для рассматриваемого случая, также приведены в Таблице 1.

Таблица 1
№ примера Содержание цеолита в питательной смеси, г/л Средняя скорость роста азотфиксирующих микроорганизмов (Pseudomonas brassicacearum), млн·г-1·сут-1 Средняя скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов (Sphingobacterium multivorum), млн·г-1·сут-1
1 1.0 34/6 720/6
2 1.5 35/6 740/6
3 2.0 35/6 740/6
4 (сравнительный) 0.7 33/6 640/6
5 (сравнительный) 2.5 36/6 730/6
6 (сравнительный) 1.5 33/6 680/6
7 (сравнительный) 1.5 32/6 690/6
8 (сравнительный) 2.5 33/6 670/6
9 (сравнительный) 2.5 33/6 680/6
10 (по прототипу)[3]) - 36/6 175/6
11 (по аналогу [1]) - 55/6 6/6
12 (по аналогу [2]) - 12/6 180/6

Из приведенных в Таблице 1 данных видно, что использование заявляемой нами питательной среды, содержащей цеолит в количестве (1.0-2.0) г/л, позволяет весьма значительно увеличить скорости роста фосфатмобилизующих (Sphingobacterium multivorum) микроорганизмов при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих [Pseudomonas brassicacearum) организмов в рамках их консорциума по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3] и сред-аналогов [1] и [2]. Отметим, что заявляемые нами количества цеолита в питательной смеси являются существенными: при превышении указанного верхнего заявляемого уровня (2.0 г/л) дальнейшего прироста скорости роста как тех, так и других микроорганизмов уже не наблюдается (и даже происходит некоторое ее снижение), при уменьшении же ниже указанного нижнего заявляемого уровня (1.0 г/л) имеет место снижение скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов,

Аналогичные результаты были получены нами и на других культурах азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов (в частности, Azotobacter chroococcum, регистрационный номер в ВКПМ В-10387 и Achromobacter xylosoxidans, регистрационный номер в ВКПМ В-10386).

Источники информации

[1] Руководство к практическим занятиям по микробиологии. 3-е издание переработанное, под ред. Н.С.Егорова. М.: Издательство Московского университета. 1995. С.204.

[2] Основные микробиологические и биохимические методы исследования почвы (Методические рекомендации) / Под ред. Ю.М.Возняковской. - Л.: ВНИИСХМ, 1987. С.31.

[3] Патент РФ 2.177.466 (2001), МПК C05F 11/08, C12N 1/20 (прототип).

Питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит цеолит при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Дигидрофосфат калия 0.60-0.70
Гидрофосфат калия 0.12-0.20
Сульфат магния гептагидрат 0.15-0.25
Хлорид натрия 0.15-0.25
Сульфат кальция дигидрат 0.02-0.06
Молибдат натрия 0.0005-0.0007
Сульфат железа(II) 0.002-0.004
Сахароза 18.0-22.0
Цеолит 1.0-2.0
Вода дистиллированная до 1 л



 

Похожие патенты:

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются слитого белка для специфического ингибирования свертывания крови, экспрессионной плазмидной ДНК, кодирующей такой слитый белок, бактерии, принадлежащей к роду Escherichia, трансформированной такой ДНК, и способу получения слитого белка.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к питательной среде для культивирования легионелл. Питательная среда для культивирования легионелл, в состав которой входит: ферментативный гидролизат сои бобов, калий фосфорнокислый 1 - замещенный, калий фосфорнокислый 2 - замещенный - 3 - водный, L-цистеина гидрохлорид, уголь активный древесный, агар микробиологический и ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, вода дистиллированная, взятые в определенном соотношении.
Изобретения относятся к биохимии. Предложен штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-11475, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены варианты рекомбинантных штаммов бактерий Escherichia coli, являющихся продуцентами янтарной кислоты и содержащих ген, кодирующий пируваткарбоксилазу.

Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и касается биологически активного пептида. Охарактеризованный пептид хоминин KLP-1, продуцируется штаммом Staphylococcus hominis KLP-1 и проявляет антибактериальную активность против представителей следующих родов бактерий: Arthrobacter, Bacillus, Corynebacterium, Enterococcus, Lactobacillus, Micrococcus, Mycobacterium, Propionibacterium, Rhodococcus, Staphylococcus, Streptococcus, имеет молекулярную массу 2985 Да, чувствителен к протеазам, обладает высокой термостабильностью и имеет следующий аминокислотный: 51,1% катионных и 31,7% гидрофобных аминокислот, а также специфическую аминокислоту - лантионин.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для разработки антитоксических препаратов и кормовых добавок для профилактики микотоксикозов у сельскохозяйственных животных и птицы.

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано для регулирования проницаемости метан-продуцирующей клетки. Получают полипептид, который способен проникать в метан-продуцирующую клетку и повышать ее проницаемость, характеризующийся аминокислотной последовательностью SEQ ID NO:117, 118 или 119 или по меньшей мере 90% идентичностью к указанной последовательности или по меньшей мере 15 последовательно расположенными аминокислотами указанной последовательности.

Изобретение касается способа определения генотипов золотистого стафилококка. Представленный способ включает получение чистой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде с последующим выделением и амплификацией ДНК возбудителя с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) и с детекцией результатов методом электрофореза в агарозном геле.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae ДЗИВ-12 обладает высокими биохимическими и технологическими свойствами.
Изобретение относится к биохимии. Предложен способ очистки воды и мерзлотной почвы от нефти и нефтепродуктов.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к питательной среде для культивирования легионелл. Питательная среда для культивирования легионелл, в состав которой входит: ферментативный гидролизат сои бобов, калий фосфорнокислый 1 - замещенный, калий фосфорнокислый 2 - замещенный - 3 - водный, L-цистеина гидрохлорид, уголь активный древесный, агар микробиологический и ферментативный гидролизат желтка куриного яйца, вода дистиллированная, взятые в определенном соотношении.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой жидкую среду высушивания для стабилизации биомассы вторичного сбора чумного микроба вакцинного штамма EV.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Serratia species является продуцентом внеклеточных рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, обладающих противовирусной активностью в отношении вирусов птичьего гриппа A/chickenKurgan/05/2005 (H5N1) и вируса гриппа человека A/Aichi/2/68 (H3N2).
Изобретения относятся к биохимии. Предложен штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-11475, обладающий фунгицидным и бактерицидным действием.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается видовой и штаммовой идентификации бифидобактерий филотипа Bifidobacterium longum. Представленный способ основан на комбинации и полиморфизме генов токсин-антитоксин суперсемейства RelBE и характеризуется тем, что для идентификации проводят амплификацию с геномной ДНК с использованием набора видо- и штаммоспецифичных олигонуклеотидов, ПЦР продукты анализируют в агарозном геле, а размер полученного фрагмента определяют с помощью ДНК-маркера.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для разработки антитоксических препаратов и кормовых добавок для профилактики микотоксикозов у сельскохозяйственных животных и птицы.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа идентификации лактобацилл. Представленный способ основан на комбинации и полиморфизме генов токсин-антитоксин суперсемейств RelBE и MazEF и характеризуется тем, что для идентификации проводят амплификацию геномных ДНК с использованием набора олегонуклеотидов определенной структуры, ПЦР-продукты анализируют в агарозном геле, а размер полученного фрагмента определяют с помощью ДНК-маркера.

Изобретение относится к области биотехнологии и нанотехнологии. Способ предусматривает трансформацию клеток архей рекомбинантной плазмидой, выращивание клеток, выделение жгутиков и модификацию поверхности жгутиков.

Изобретение касается способа определения генотипов золотистого стафилококка. Представленный способ включает получение чистой культуры микроорганизмов на плотной питательной среде с последующим выделением и амплификацией ДНК возбудителя с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) и с детекцией результатов методом электрофореза в агарозном геле.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для очистки почв, вод, сточных вод, шламов от нефти и нефтепродуктов. Штамм Rhodotorula sp.
Изобретение относится к сельскому хозяйству. Способ получения почвосмеси для проращивания семян и развития саженцев, который характеризуется тем, что приготавливают биогумус путем бактериальной обработки увлажненных целлюлозосодержащих отходов, в качестве которых используют гидролизат скопа, полученный с помощью 0.5% водного раствора диаммоний фосфата в течение 20-40 мин под давлением при температуре 120°С, или скоп, или комбинацию скопа с измельченной корой или измельченными опилками, пробиотической кормовой добавкой Ферм-КМ и препаратом Глиокладин™, причем в случае использования гидролизата скопа для бактериальной обработки дополнительно используют сухие кормовые дрожжи Saccharomyces cerevisiae, процесс ведут в течение недели при температуре 25-30°С, при этом бактериальную обработку осуществляют в течение месяца при температуре 25-30°С и регулярном ворошении массы, а полученный продукт подвергают вермикомпостированию красным калифорнийским червем в течение 2-3-х мес., после чего полученный биогумус высушивают и смешивают с торфом в соотношении 10-30% биогумуса и соответственно 90-70% торфа.
Наверх