Способ оценки антиоксидантной активности растительного сырья из сабельника болотного (comarum palustre l.)


 


Владельцы патента RU 2535139:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Орловский государственный аграрный университет" (ФГБОУ ВПО Орел ГАУ) (RU)

Изобретение относится к способу оценки антиоксидантной активности растительного сырья из сабельника болотного (Comarum palustre L.). Способ оценки антиоксидантной активности растительного сырья из сабельника болотного (Comarum palustre L.) заключается в определении антиоксидантной активности в водных настоях сабельника болотного по снижению уровня свободно-радикального окисления, который определяют по уровню малонового диальдегида (МДА) методом взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой в модельной системе перекисного окисления липидов, представленной полученными из лецитина липосомами. Вышеописанный способ снижает трудоемкость определения антиоксидантной активности и упрощает обработку полученных результатов, снижает стоимость проведения анализа, повышает точность определения. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для оценки антиоксидантной активности сабельника болотного (Comarum palustre L.), в частности для разработки способов лечения окислительного стресса у животных и птиц.

Установлено, что ряд патологических состояний в организме животных и птиц сопровождается усилением свободно-радикального окисления липидов и снижением антиоксидантной защиты. Это состояние рассматривают как окислительный стресс. Показателем уровня свободно-радикального окисления липидов при окислительном стрессе принято считать уровень малонового диальдегида (МДА). МДА относится к карбольным соединениям, являющихся одной из основных групп продуктов перекисного окисления липидов как в живых организмах, так и in vitro (Зайцев В.Г. Модельные системы перекисного окисления липидов и их применение для оценки антиоксидатного действия лекарственных препаратов: дисс. … канд. биол. наук. Волгоград, 2001). - [1]

В связи со снижением антиоксидантной защиты у животных и птиц при окислительном стрессе требуется введение дополнительных антиоксидантов, лучше природного происхождения. Поэтому в последнее время ведется поиск растений для производства природных антиоксидантных препаратов.

В отличие от синтетических лекарственных препаратов препараты из растительного сырья обладают малой токсичностью и лучшей переносимостью. Поэтому актуальной задачей является создание антиоксидантного препарата из растительного сырья, обладающего антиоксидантным действием, и разработка способов оценки антиоксидантной активности растительного сырья. Таким сырьем может являться сырье из сабельника болотного (Comarum palustre L.), обладающего различным фармакологическим действием, в том числе и антиоксидантным.

Сабельник болотный (Comarum palustre L.) как лекарственное растение используется издавна и представляет большой интерес для ветеринарной медицины. Однако несмотря на широкое использование сабельника болотного (Comarum palustre L.) в медицине (Титович Л.В. Терапевтическая эффективность препаративных форм сабельника болотного при стронгилятозах желудочно-кишечного тракта молодняка жвачных // Международный вестник ветеринарии. - 2011. - №1. - С.40-44) - [2], для применения в ветеринарии антиоксидантных препаратов на его основе не разработано.

Для разработки и создания антиоксидантного препарата из сырья сабельника болотного (Comarum palustre L.) необходимо произвести оценку его антиоксидантного действия. Антиоксидантная активность не может измеряться напрямую, обычно измеряют влияние антиоксидантов на степень окисления (Яшин Я.И., Яшин А.Я. Проблема определения содержания антиоксидантов / Я.И. Яшин, А.Я. Яшин // Компетентность. - 2009. - №8 - С.50-53). - [3]

Известен электрохимический способ оценки антиоксидантной активности растительного сырья, в частности сабельника болотного (Comarum palustre L.), заключающийся в кулонометрическом титровании растительных вытяжек электрогенерированным бромом, который получают электрохимическим окислением брома на платиновом электроде в кислых средах. Электрогенерированный бром вступает в радикальные и окислительно-восстановительные реакции, а также реакции электрофильного замещения и присоединения по кратным связям с соединениями, обладающими антиокидантными свойствами. Для количественной оценки антиоксидантной активности введена антиоксидантная бромная способность, выраженная в единицах количества электричества, затраченного на титрование 100 мл или 100 г препарата электрогенерированным бромом (Абдуллин И.Ф. Экспрессная оценка антиоксидантной активности растительного сырья / И.Ф. Абдуллин, Н.Н. Чернышева, Е.Н. Турова, Е.Н. Офицеров, Г.К. Будников, Р.Ш. Хазиев // II Всероссийская конференция Химия и технология растительных веществ. - 2002. - С.77-78). - [4]

Недостатками данного способа оценки антиоксидантной активности растительного сырья является трудоемкость, необходимость специального дорогостоящего оборудования, сложного в эксплуатации, дорогостоящих реагентов (платиновые электроды), что, вместе с определенной сложностью интерпретации получаемых результатов, делает этот метод мало подходящим для широкомасштабных скрининговых экспериментов. Кроме того, бром и йод могут окислить не только антиоксиданты, но и другие соединения [3]. Это исказит истинные результаты по определению антиоксидантной активности, то есть уменьшит точность ее определения.

Задачей предлагаемого способа является снижение трудоемкости определения антиоксидантной активности и упрощение обработки полученных результатов, снижение стоимости проведения анализа, повышение точности определения.

Поставленная задача решается благодаря тому, что в известном способе определения антиоксидантной активности сабельника болотного (Comarum palustre L.), заключающемся в определении антиоксидантной активности в водных настоях сабельника болотного (Comarumpalustre L.) по снижению уровня свободно-радикального окисления, согласно изобретению уровень свободно-радикального окисления определяют по уровню малонового диальдегида (МДА) методом взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой в модельной системе перекисного окисления липидов, представленной полученными из лецитина липосомами.

Данная система не включает в себя дорогостоящих реактивов, что позволяет проводить широкомасштабные скрининговые исследования и повышает точность определения.

Реализация способа состоит в следующем:

Готовят 2 модельные системы перекисного окисления липидов: контрольную (1) - без добавления сабельника болотного (Comarum palustre L.) и опытную (2) - с добавлением сабельника болотного (Comarum palustre L.). В модельных системах перекисного окисления липидов исследуют уровень свободно-радикального окисления липидов по показателю МДА.

Определение МДА в используемой модельной системе дает высокую точность, так как МДА не взаимодействует с химическими веществами, не обладающими антиоксидантной активностью. Метод является не трудоемким и не дорогостоящим, поскольку стоимость фотоколориметра КФК-2 (стоимость оборудования составляет 18500 руб. (по данным www.Pro-partner.ru)) намного ниже стоимости потенциостата (стоимость оборудования 55000-130000 рублей (по данным www.Elins.su)).

Пример. Экспериментальные исследования проводились в химических лабораториях ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный Университет» и в инновационном научно-исследовательском испытательном центре ФГБОУ ВПО «Орловский государственный аграрный Университет».

Объектами исследований являлось растительное сырье из сабельника болотного.

1 этап. Готовились 2 модельные системы перекисного окисления липидов по одной и той же схеме:

1 - контрольная (система без добавления сабельника болотного)

2 - опытная (с добавлением сабельника болотного)

Приготовление липосом. Для приготовления 10% раствора лецитина вводили лецитина в 5 мл 96%-го спирта, нагревали до 30-40°C и интенсивно перемешивали до однородного состояния. Липосомы готовили инжекционным способом: в 5 мл дистиллированной воды при постоянном интенсивном помешивании шприцом с тонкой иглой быстро впрыскивали 0,25 мл раствора 10%-го раствора лецитина.

Окисление липосом. В приготовленные суспензии липосом контрольной (1) и опытной (2) модельных систем (обеих систем) впрыскивали 0,125 мл 3 мМ перекись водорода (H2O2) и нагревали при температуре 37°C в течение 6 часов. Далее 2 суток выдерживали при комнатной температуре.

2 этап. Определение концентрации МДА в модельной системе. В контрольную модельную систему (I): к 0,5 мл суспензии липосом добавляли 0,5 мл 0,92 М раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 49 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Нагревали 15 минут на кипящей водяной бане. После чего исследовали полученные растворы на фотоколориметре при длине волны 532 нм против дистиллированной воды.

В опытную модельную систему (2); к 0,5 мл суспензии липосом добавляли 0,0035 мл настоя, затем 0,5 мл 0,92 М раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 49 мМ 2-тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Нагревали 15 минут на кипящей водяной бане. После чего исследовали полученные растворы на фотоколориметре при длине волны 532 нм против дистиллированной воды.

В модельных системах (контрольной и опытной) перекисного окисления липидов исследовали уровень свободно-радикального окисления липидов по показателю МДА, МДА определяли по реакции с ТБК. Уровень МДА в контрольной модельной системе перекисного окисления липидов без добавления сабельника болотного (Comarum palustre L.) составил - 1,06 ед. опт.пл., а в опытной модельной системе перекисного окисления липидов с добавлением сабельника болотного (Comarum palustre L.) уровень МДА составил - 0,7775 ед. опт. пл.

Таблица
Уровень МДА в модельных системах перекисного окисления липидов при использовании сабельника болотного (Comarum palustre L.) и без него
Изучаемые показатели Модельная система перекисного окисления липидов с добавлением сабельника болотного (Comarum palustre L.) Модельная система перекисного окисления липидов без добавления сабельника болотного (Comarum palustre L.)
Уровень МДА, ед. опт. пл. 0,7775 1,06

Как видно из таблицы, уровень МДА с использованием сабельника болотного (Comarum palustre L.) снижается на 0,2825 ед. опт. пл. (26,65%), что указывает на снижение уровня свободно-радикального окисления (по уровню МДА) в модельной системе перекисного окисления липидов при введении препарата из сабельника болотного (Comarum palustre L.).Полученные результаты показали снижение стоимости проведения анализа антиоксидантной активности сабельника болотного (Comarum palustre L.), увеличение точности, а также снижение трудоемкости исследования, что упрощает получение конечных результатов. Таким образом, использование предлагаемого способа определения антиоксидантной активности сабельника болотного (Comarum palustre L.) позволяет подтвердить антиоксидантные свойства растительного сырья из сабельника болотного (Comarum palustre L.) и предложить его использование в ветеринарии в качестве антиоксидантного препарата.

Способ оценки антиоксидантной активности растительного сырья из сабельника болотного (Comarum palustre L.), заключающийся в определении антиоксидантной активности в водных настоях сабельника болотного (Comarum palustre L.) по снижению уровня свободно-радикального окисления, отличающийся тем, что уровень свободно-радикального окисления определяются по уровню малонового диальдегида (МДА) методом взаимодействия с тиобарбитуровой кислотой в модельной системе перекисного окисления липидов, представленной полученными из лецитина липосомами.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области радиобиологии и экспериментальной медицины. Способ оценки фармакологических и токсикологических свойств веществ заключается в том, что исследуемое вещество вносят в питательную среду личинок и мух Drosophila melanogaster, сочетающих в своем геноме гипоморфные мутации ss- и СG5017-генов.

Изобретение относится к области экологии и предназначено для мониторинга загрязнения природной среды от техногенного точечного источника аэрозольно-пылевых загрязнений.

Изобретение относится к области поверхностных явлений и может быть использовано в разных отраслях, в том числе для характеристики дисперсных материалов или раздробленных материалов, песка, цемента и т.п.

(57) Заявленное изобретение относится к области кормопроизводства и предназначено для определения энергетической ценности зерна белого люпина. Энергетическую ценность определяют на основе расчета энергий активации химических компонентов как сумму энергий активации оболочки и ядра зерна белого люпина, умноженную на массовую долю оболочки и ядра в зерне соответственно.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для мониторинга эструса и овуляции животных и планирования предпочтительного времени оплодотворения.

Изобретение относится к области физической и коллоидной химии, нанотехнологиям микродвигателей, а также к другим областям для проведения анализа и характеристики материалов.

Изобретение относится к способу и системе автоматизированного контроля процессов в первичных и вторичных отстойниках или отстойниках-илоуплотнителях очистных сооружений объектов водоотведения жилищно-коммунального хозяйства.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к фосфолипидному флуоресцентному зонду, и может быть использовано в медицине. Указанный фосфолипидный флуоресцентный зонд, характеризующийся следующим названием 1-[13-(4,4-дифтор-1,3,5,7-тетраметил-4-бора-3а,4а-диаза-s-индацен-8-ил)тридеканоил]-2-(10-{[(2-гидроксинафтил-1)азофенил-4]азофенил-4}деканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолин, используют в составе тест-системы для определения активности фосфолипазы А2 группы IIA (секФЛА2(IIA)) в сыворотке крови, которая также содержит везикулярную фосфолипидную матрицу для включения зонда, состоящую из фосфатидилхолина, лизофосфатидилхолина и фосфатидилглицерина, буферный раствор и фосфолипазу А2 пчелиного яда в качестве стандарта.

Изобретение относится к области воздухотехнического оборудования помещений здравоохранения и предназначено для контроля качества воздуха в операционном помещении.

Использование: для применения в мониторинге множества параметров, таких как время, температура, время-температура, оттаивание, замораживание, микроволновое излучение, влажность, ионизирующее излучение, стерилизация и химикаты.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему нефропротекторным действием. Лекарственное средство с нефропротекторным действием, содержащее экстракт травы с корнями и корневищами касатика тонколистного (Iris tenuifolia), стабилизаторы и консерванты, взятые в определенном соотношении, где экстракт получен путем экстракции травы с корнями и корневищами касатика тонколистного (Iris tenuifolia) 30-70% водным раствором многоатомного спирта.
(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения кожных болезней животных. Препарат для местной терапии включает сосновую живицу, хлорофилло-каротиновую пасту, березовый деготь, касторовое масло при следующем соотношении: сосновая живица : хлорофилло-каротиновая паста : березовый деготь : касторовое масло - 10:5:5:80.

Изобретение относится к косметической и фармацевтической отраслям промышленности, а именно представляет собой способ замедления выпадения волос, или стимуляции их роста, и/или возобновления роста и композицию, применяемую для осуществления способа.

Изобретение относится к области косметологии. Описана стабильная и безопасная антиоксидантная композиция, которую можно применять ежедневно.
Группа изобретений относится к области средств для ухода за полостью рта и способам их применения. Композиция для ухода за полостью рта содержит от 0,6% до 1% по массе аргинина в D- или L-форме или в виде соли с лауроилсерной кислотой, по меньшей мере, один мукоадгезивный полимер, по меньшей мере, одно соединение пирофосфата и, по меньшей мере, один компонент, выбранный из группы, состоящей из солей цинка, солей калия, солей стронция и их смесей.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего антимикробной активностью. Способ получения средства, обладающего антимикробной активностью, где надземную часть свежесобранного лука медвежьего (Allium ursinum L.) или лука победного (Allium victoriale L.) измельчают до кашицеобразного состояния, заливают спиртом этиловым, настаивают трехкратно, при определенных условиях, после каждой экстракции извлечения сливают, полученные извлечения объединяют.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу повышения антитоксической функции организма у здоровых лиц, работающих в условиях химической нагрузки.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для наружного лечения и профилактики инфекций, вызванных вирусом герпеса типа 1, 2, и бактериальных осложнений, вызываемых герпетической инфекцией, содержащую в качестве активных ингредиентов лизоцим, пероксидазу, повиаргол, в качестве противовоспалительных ингредиентов эсцин и глициризиновую кислоту или ее соли, в качестве носителей - липосомы на основе высокоактивных гидрированных лецитинов в комбинации с холестерином и фармацевтически приемлемые носители и эксципиенты, причем компоненты в композиции находятся в определенном соотношении в мас.%.

Настоящее изобретение относится к области средств для гигиены полости рта. Предлагаемая зубная паста содержит лизин, ферменты - папаин, декстраназу, альфа-амилазу, глюкоамилазу, супероксиддисмутазу, глюкозооксидазу, лактопероксидазу или пероксидазу, инвертазу, цитохром С-оксидазу, а также экстракт сфагнума или туи, дикалия глицирризинат, калия тиоцианат, натрий-кальциевую соль сополимера полиметилвинилового спирта и малеиновой кислоты, бетаин, DL-пирролидонкарбоксилат N-кокоил этиларгината и натрия фторид, полимерный загуститель, эмульгатор, ароматизатор, сорбитол 70%, воду деминерализованную.

Настоящее изобретение относится к области средств для гигиены полости рта. Состав исходных компонентов предлагаемой зубной пасты для лечения и профилактики воспалительных заболеваний зубочелюстной системы включает стимулятор регенерации тканей, выбранный из гиалуроновой кислоты или сукральфата, или натриевой соли ε-ацетиламинокапроновой кислоты, ферменты - лизоцим, папаин и гиалуронидазу, а также абразивный компонент, увлажнитель, гидроколлоид, поверхностно-активное вещество, натрия фторид, тетракалия пирофосфата, консервант, ароматизатор и воду, в определенных количествах.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием. Средство, обладающее противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием, представляющее собой сухой экстракт листьев и цветков аврана лекарственного, полученный путем измельчения их, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения, выпаривания, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой, затем добавления хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее, при определенных условиях. Вышеописанное средство обладает выраженным противовоспалительным, жаропонижающим и антимикробным действием. 5 ил., 5 табл., 2 пр.
Наверх