Производные мочевины и их терапевтическое применение при лечении, среди прочего, заболеваний дыхательного пути

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где R¹ представляет собой радикал формулы (IA), (IB), или (IC), где R^4b представляет собой C₁-С₆ алкил, С₃-С₆ циклоалкил, фенил, который необязательно является замещенным 1-2 заместителями, выбранными из галогена, гидрокси или О-бензила; или радикал формулы (IIa) или (IIb), где n равно 1 или 2; a R³ и R⁴ представляют собой независимо Н или C₁-С₆ алкил; R^3b представляет собой необязательно замещенный C₁-C₆ алкил, где заместитель выбран из (C₁-C₆) алкокси; Y представляет собой -O-; А представляет собой циклоалкиленовый радикал, имеющий 5, 6 или 7 атомов кольца, конденсированных с фенильным кольцом; R² представляет собой радикал формулы (IIIa), (IIIb),(IIIc), где q равно 0, 1, 2 или 3; R⁷ представляет собой -СН₃; R⁸ представляет собой -СН₃ или -С₂Н₅ и каждое наличие R⁶ представляет собой независимо Н, C₁-С₆ алкил. Также изобретение относится к фармацевтической композиции, ингибирующей активность МАР-киназы р38, содержащей эффективное количество соединения формулы I, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Технический результат - соединения для применения при лечении заболевания или состояния, которое имеет положительный результат от ингибирования активности МАР-киназы р38. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 табл., 22 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Данное изобретение относится к соединениям и композициям, которые являются ингибиторами MAPK p38, применимым в качестве противовоспалительных средств при лечении, среди прочего, заболеваний дыхательного пути.

Предшествующий уровень техники

Митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK) составляют семейство пролин-направленных серин/треониновых киназ, которые активируют их субстраты посредством двойного фосфорилирования. Существуют четыре известных человеческих изоформы МАР-киназы р38, p38α, p38β, p38γ и p38δ. Киназы р38, которые также известны как цитокин-подавляющие, связывающие противовоспалительные средства белки (CSBP), активируемые стрессом протеинкиназы (SAPK) и RK, являются ответственными за фосфорилирование (Stein et al., Ann. Rep. Med Chem., 1996, 31, 289-298) и активацию транскрипционых факторов (таких как ATF-2, MAX, CHOP и C/ERPb), а также других киназ (таких как MAPKAP-K2/3 или MK2/3), и сами активируются посредством физического и химического стресса (например, УФ, осмотического стресса), провоспалительными цитокинами и бактериальным липополисахаридом (LPS) (Herlaar E. & Brown Z., Molecular Medicine Today, 1999, 5, 439-447). Было показано, что продукты фосфорилирования p38 опосредуют выработку воспалительных цитокинов, включающих фактор некроза опухолей альфа (TNFα) и интерлейкин- (IL-)-1, и циклооксигеназу-2 (COX-2). Также известно, что IL-1 и TNFα стимулируют выработку других провоспалительных цитокинов, таких как IL-6 и IL-8.

IL-1 и TNFα являются биологическими веществами, продуцируемыми разнообразными клетками, такими как моноциты или макрофаги. Было продемонстрировано, что IL-1 опосредует разнообразные биологические активности, которые, как полагают, являются важными при иммунорегуляции и других физиологических состояниях, таких как воспаление (например, Dinarello et al., Rev. Infect. Disease, 1984, 6, 51). Избыточная или нерегулируемая выработка TNF (особенно, TNFα) вовлечена в опосредование или обострение ряда заболеваний, и полагают, что TNF может вызывать или способствовать эффектам воспаления в целом. IL-8 представляет собой хемотактический фактор, продуцируемый некоторыми типами клеток, включающими моноядерные клетки, фибробласты, эндотелиальные клетки и кератиноциты. Его выработка из эндотелиальных клеток индуцируется IL-1, TNF или липополисахаридом (LPS). IL-8 стимулирует ряд функций in vitro. Было показано, что он имеет хемоатрактантные свойства для нейтрофилов, T-лимфоцитов и базофилов. Увеличение выработки IL-8 также является ответственным за хемотаксис нейтрофилов в воспалительный участок in vivo.

Ожидается, что ингибирование сигнальной трансдукции через p38, который в дополнение к IL-1, TNF и IL-8, описанным выше, также требуется для синтеза и/или действия некоторых дополнительных провоспалительных белков (например, IL-6, GM-CSF, COX-2, коллагеназы и стромелизина), является высокоэффективным механизмом для регуляции избыточной и деструктивной активации иммунной системы. Это ожидание основано на высоких и разнообразных противовоспалительных активностях, описанных для ингибиторов киназы р38 (Badger et al., J. Pharm. Exp. Thera., 1996, 279, 1453-1461; Griswold et al., Pharmacol. Comm., 1996, 7, 323-229). В частности, ингибиторы киназы р38 были описаны в качестве потенциальных средств для лечения ревматоидного артрита. В дополнение к связи между активацией p38 и хроническим воспалением и артритом, есть данные, указывающие на роль p38 в патогенезе заболеваний дыхательных путей, в частности, COPD и астма. Стрессовые факторы (включающие табачный дым, инфекции или продукты окисления) могут вызывать воспаление внутри легочного окружения. Было показано, что ингибиторы p38 ингибируют индуцируемые LPS и овальбумином в воздушных путях TNF-α, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-5 и IL-13 (Haddad et al. Br. J. Pharmacol., 2001, 132 (8), 1715-1724; Underwood et al., Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. 2000, 279, 895-902; Duan et al., 2005 Am. J. Respir. Crit. Care Med., 171, 571-578; Escott et al. Br. J. Pharmacol., 2000, 131, 173-176; Underwood et al., J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000, 293, 281-288). Кроме того, они значительно ингибируют нейтрофилию и высвобождение MMP-9 у животных моделей с LPS, озоном или сигаретным дымом. Существует также значительный объем доклинических данных, указывающих на благоприятные эффекты ингибирования киназы р38, которые могут иметь отношение к легким (Lee et al., Immunopharmacology, 2000, 47, 185-200). Таким образом, терапевтическое ингибирование активации p38 может быть важным при регуляции воспаления дыхательных путей.

Роль пути p38MAPK при разнообразных заболеваниях была рассмотрена в обзоре P. Chopra et al. (Expert Opinion on Investigational Drugs, 2008, 17(10), 1411-1425). Полагают, что соединения настоящего изобретения могут применяться для лечения p38-опосредованных заболеваний, таких как: астма, хроническое или острое сужение бронхов, бронхит, острое повреждение легкого и бронхоэктаз, гипертензия легочной артерии, туберкулез, рак легкого, общее воспаление (например, воспалительное заболевание кишечника), артрит, нейровоспаление, боль, лихорадка, фиброзные заболевания, легочные расстройства и заболевания (например, гипероксическое альвеолярное повреждение), сердечно-сосудистые заболевания, постишемическое реперфузионное повреждение и острая сердечная недостаточность, кардиомиопатия, инсульт, ишемия, реперфузионное повреждение, почечное реперфузионное повреждение, отек мозга, нейротравма и мозговая травма, нейродегенеративные расстройства, расстройства центральной нервной системы, заболевание печени и нефрит, желудочно-кишечные состояния, язвенные заболевания, болезнь Крона, глазные заболевания, офтальмологические состояния, глаукома, острое повреждение ткани глаза и глазные травмы, диабет, диабетическая нефропатия, состояния, относящиеся к коже, миалгии вследствие инфекции, гриппа, эндотоксического шока, синдром токсического шока, аутоиммунное заболевание, отторжение трансплантата, костно-резорбцинные заболевания, рассеянный склероз, псориаз, экзема, нарушения женской репродуктивной системы, патологические (но незлокачественные) состояния, такие как гемангиомы, ангиофиброма носоглотки, и аваскулярный некроз костей, доброкачественные и злокачественные опухоли/неоплазия, включающие рак, лейкемию, лимфому, системную красную волчанку (SLE), ангиогенез, включая неоплазию, кровотечение, коагуляцию, радиационное повреждение и/или метастазы. Хроническое высвобождение активного TNF может вызывать кахексию и анорексию, и TNF может быть летальным. TNF также принимает участие при инфекционных заболеваниях. Они включают, например, малярию, микобактериальную инфекцию и менингит. Они также включают вирусные инфекции, такие как ВИЧ, вирус гриппа и вирус герпеса, включая вирус простого герпеса типа-1 (HSV-1), вирус простого герпеса типа-2 (HSV-2), цитомегаловирус (CMV), вирус ветряной оспы (VZV), вирус Эпштейна-Барра, вирус герпеса человека-6 (HHV-6), вирус герпеса человека-7 (HHV7), вирус герпеса человека-8 (HHV-8), псевдобешенство и ринотрахеит, среди прочих.

Известные ингибиторы киназы р38 рассмотрены в обзоре G. J. Hanson (Expert Opinions on Therapeutic Patents, 1997, 7, 729-733) J Hynes et al. (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2005, 5, 967-985), C. Dominguez et al. (Expert Opinions on Therapeutics Patents, 2005, 15, 801-816) и L. H. Pettus & R. P. Wurtz (Current Topics in Medicinal Chemistry, 2008, 8, 1452-1467). Ингибиторы киназы р38, содержащие триазолопиридиновый мотив, являются известными в данной области, например, WO07/091152, WO04/072072, WO06/018727.

Краткое описание изобретения

Соединения настоящего изобретения являются ингибиторами митоген-активируемой протеинкиназы p38 ("p38 MAPK", "киназы р38" или "p38"), включая киназу p38α, и являются ингибиторами выработки цитокинов и хемокинов, включая выработку TNFα и IL-8. Они имеют ряд терапевтических применений, при лечении воспалительных заболеваний, конкретно, аллергических и неаллергических заболеваний дыхательных путей, более конкретно, обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей, таких как хроническая обструктивная болезнь легких ("COPD") и астма. Они, следовательно, являются особенно подходящими для легочной доставки, посредством ингаляции через нос или рот.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В соответствии с изобретением предоставлено соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемая соль:

где;

R¹ представляет собой радикал формулы (IA) или (IB), или (IC):

где

R^4b представляет собой C₁-C₆ алкил, C₃-C₆ циклоалкил, фенил, который необязательно является замещенным, 5- или 6-членный моноциклический гетероарил, который необязательно является замещенным, или радикал формулы (IIa) или (IIb)

где n равно 1 или 2; а R³ и R⁴ представляют собой независимо H или C₁-C₆ алкил, или R³ и R⁴, взятые вместе с азотом, к которому они присоединены, образуют 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно содержащее дополнительный гетероатом, выбранный из N и O;

R^3b представляет собой необязательно замещенный C₁-C₆ алкил, -NH₂; моно- или ди- (C₁-C₆) алкиламино; моно- или ди- (C₁-C₃) алкил-X-(C₁-C₃)алкиламино, где X представляет собой O, S или NH; N-морфолино; N-пиперидинил, N-пиперазинил или N-(C₁-C₃)алкилпиперазин-1-ил;

Y представляет собой -O- или -S(О)_p-, где p равно 0, 1 или 2;

A представляет собой необязательно замещенный циклоалкиленовый радикал, имеющий 5, 6 или 7 атомов кольца, конденсированных с фенильным кольцом;

R² представляет собой радикал формулы (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) или (IIIe):

;

где

q равно 0, 1, 2 или 3;

T представляет собой -N= или -CH=;

R⁵ представляет собой H или F;

R⁷ представляет собой -CH₃; -C₂H₅ - CH₂OH, -CH₂SCH₃-SCH₃ или -SC₂H₅;

R⁸ представляет собой -CH₃ или -C₂H₅ и

каждое наличие R⁶ представляет собой независимо H, C₁-C₆ алкил, гидрокси или галоген; или единичное наличие R⁶ представляет собой радикал формулы (IVa), (IVb) или (IVc)

в то время как любое другое наличие R⁶ представляет собой независимо H, C₁-C₆алкил, гидроксил или галоген,

где в формулах (IVa), (IVb) и (IVc) n и p являются такими, как определено выше;

и, где в R⁶

R^61а и R^61b представляют собой H, алкил, или R^61a и R^61b могут быть объединены вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 4-7 членного гетероциклического кольца, необязательно содержащего дополнительный гетероатом, выбранный из N и O, такого как кольцо пиперидина, пиперазина или морфолина.

В еще одном аспекте, изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие соединение изобретения, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями и/или эксципиентами. Особенно предпочтительными являются композиции, приспособленные для ингаляции для легочного введения.

В еще одном аспекте, изобретение включает применение соединения изобретения для лечения заболеваний или состояний, которое имеет положительный результат от ингибирования активности МАР-киназы р38. Лечение обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей является предпочтительным применением. Все формы обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей являются потенциально излечимыми с применением соединений настоящего изобретения, в частности, обструктивное или воспалительное заболевание дыхательных путей, которое является заболеванием, выбранным из группы, состоящей из хронической эозинофильной пневмонии, астмы, COPD, COPD, которая включает, хронический бронхит, эмфизему легких или одышку, ассоциированную или не ассоциированную с COPD, COPD, которая характеризуется необратимой, прогрессирующей обструкцией дыхательных путей, острого респираторного дистресс-синдрома у взрослых (ARDS), обострения гиперреактивности дыхательных путей, являющегося следствием другой лекарственной терапии, и заболевания дыхательных путей, которое является ассоциированным с легочной гипертензией, хроническими воспалительными заболеваниями, включающими кистозный фиброз, бронхоэктаз, и фиброз легких (идиопатический). Эффективность действия предполагают, когда ингибиторы киназы р38 вводят либо местно в легкое (например, посредством ингаляции и интраназальной доставки) или посредством системных путей (например, пероральной, внутривенной и подкожной доставки).

Терминология

Как используют здесь, термин "(C_a-C_b)алкил" где a и b являются целыми числами, относится к прямоцепному или разветвленному алкильному радикалу, имеющему от a до b углеродных атомов. Таким образом, когда a равно 1 и b равно 6, например, термин включает метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил.

Как используют здесь, термин "карбоциклический" относится к моно-, би- или трициклическому радикалу, имеющему до 16 атомов кольца, все из которых представляют собой углерод, и включает арил и циклоалкил.

Как используют здесь, термин "циклоалкил" относится к моноциклическому насыщенному карбоциклическому радикалу, имеющему от 3-8 атомов углерода и включает, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.

Термин "дивалентный циклоалкиленовый радикал" относится к циклоалкильному радикалу, имеющему две ненасыщенных валентности, такому как 1,3-циклопентилен, 1,4-циклогексилен и 1,4-циклогептилен, следующим образом:

Как используют здесь, неограниченный термин "арил" относится к моно- или би-циклическому карбоциклическому ароматическому радикалу, и включает радикалы, имеющие два моноциклических карбоциклических ароматических кольца, которые являются непосредственно связанными ковалентной связью. Иллюстративными такими радикалами являются фенил, бифенил и нафтил.

Как используют здесь, неограниченный термин "гетероарил" относится к моно- или бициклическому ароматическому радикалу, содержащему один или несколько гетероатомов, выбранных из S, N и O, и включает радикалы, имеющие два таких моноциклических кольца, или одно такое моноциклическое кольцо и одно моноциклическое арильное кольцо, которые являются непосредственно связанными ковалентной связью. Иллюстративными примерами таких радикалов являются тиенил, бензотиенил, фурил, бензофурил, пирролил, имидазолил, бензимидазолил, тиазолил, бензотиазолил, изотиазолил, бензизотиазолил, пиразолил, оксазолил, бензоксазолил, изоксазолил, бензизоксазолил, изотиазолил, триазолил, бензотриазолил, тиадиазолил, оксадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, индолил и индазолил.

Как используют здесь, неограниченный термин "гетероциклил" или "гетероциклический" включает "гетероарил", как определено выше, и в его неароматическом значении относится к моно-, би- или трициклическому неароматическому радикалу, содержащему один или несколько гетероатомов, выбранных из S, N и O, и к группам, состоящим из моноциклического неароматического радикала, содержащего один или несколько таких гетероатомов, который является ковалентно связанным с еще одним таким радикалом или с моноциклическим карбоциклическим радикалом. Иллюстративными такими радикалами являются пирролил, фуранил, тиенил, пиперидинил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, тиадиазолил, пиразолил, пиридинил, пирролидинил, пиримидинил, морфолинил, пиперазинил, индолил, морфолинил, бензофуранил, пиранил, изоксазолил, бензимидазолил, метилендиоксифенил, этилендиоксифенил, малеимидо и сукцинимидо группы.

Если не установлено иным образом в контексте, в котором это присутствует, термин "замещенный" в применении к любому арильному или гетероарильному фрагменту в данном документе, означает замещенный, по меньшей мере, одним заместителем, например, выбранным из (C₁-C₆) алкила, (C₁-C₆) фторалкила, (C₁-C₆) алкокси (включая метилендиокси и этилендиокси замещение у смежных атомов углерода ароматического кольца), (C₁-C₆)фторалкокси, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₆)алкила, бензилокси-(C₁-C₆)алкила, (C₁-C₆)алкокси-(C₁-C₆)алкокси, бензилокси-(C₁-C₆)алкокси, гидрокси, гидрокси(C₁-C₆)алкила, гидрокси(C₁-C₆)алкокси, гидрокси(C₁-C₆)алкилтио, меркапто, меркапто(C₁-C₆)алкила, (C₁-C₆)алкилтио, циклопропила, галогена (включая фтор и хлор), O-бензила, нитро, нитрила (циано), -COOH, тетразолила, -COOR^A, -COR^A, -SO₂R^A, -CONH₂, -SO₂NH₂, -CONHR^A, -SO₂NHR^A, -CONR^AR^B, -SO₂NR^AR^B, -NH₂, -NHR^A, -NR^AR^B, -OCONH₂, -OCONHR^A, -OCONR^AR^B, -NHCOR^A, -NHCOOR^A, -NR^BCOOR^A, -NHSO₂OR^A, -NR^BSO₂OR^A, -NHCONH₂, -NR^ACONH₂, -NHCONHR^B, -NR^ACONHR^B, -NHCONR^AR^B или -NR^ACONR^AR^B, где R^A и R^B представляют собой независимо (C₁-C₄)алкильную группу, или R^A и R^B, когда они присоединены к одному и тому же азоту, могут образовывать, вместе с этим азотом, циклическую аминогруппу, такую как морфолинильную, пиперидинильную или пиперазинильную группу. "Необязательный заместитель" может представлять собой одну из замещающих групп, охватываемых приведенным выше описанием.

Соединения изобретения могут существовать в одной или нескольких геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных и таутомерных формах, включающих, но не ограниченных лишь ими, цис- и транс-формы, E- и Z-формы, R-, S- и мезо-формы, кето- и енольные формы. Если не утверждается иначе, ссылка на конкретное соединение включает все такие изомерные формы, включая их рацемические и другие смеси. Там, где требуется, такие изомеры могут быть выделены из их смесей посредством применения или адаптации известных способов (например, хроматографических методов и методов перекристаллизации). При необходимости, такие изомеры могут быть получены с применением адаптации известных способов (например, асимметрического синтеза).

Как используют здесь, термин "соль" включает основно-аддитивные, кислотно-аддитивные и аммониевые соли. Как вкратце указано выше, соединения изобретения, которые являются кислотными, могут образовывать соли, включающие фармацевтически приемлемые соли, с основаниями, такими как гидроксиды щелочных металлов, например, гидроксиды натрия и калия; гидроксиды щелочно-земельных металлов, например, гидроксиды кальция, бария и магния; с органическими основаниями например, N-метил-D-глюкамином, холином, трис(гидроксиметил)амино-метаном, L-аргинином, L-лизином, N-этилпиперидином, дибензиламином и т.п. Те соединения изобретения, которые являются основными, могут образовывать соли, включающие фармацевтически приемлемые соли с неорганическими кислотами, например, с галогенводородными кислотами, такими как хлористоводородная или бромистоводородные кислоты, серная кислота, азотная кислота или фосфорная кислота и т.п., и с органическими кислотами, например, с уксусной, трифторуксусной, винной, янтарной, фумаровой, малеиновой, яблочной, салициловой, лимонной, метансульфоновой, п-толуолсульфоновой, бензойной, бензолсульфоновой, глутаминовой, молочной и миндальной кислотами и т.п. Те соединения, (I), которые имеют основный азот, могут также образовывать четвертичные аммониевые соли с фармацевтически приемлемым противоионом, таким как аммоний, хлорид, бромид, ацетат, формиат, п-толуолсульфонат, сукцинат, геми-сукцинат, нафталин-биссульфонат, метансульфонат, трифторацетат, ксинафоат и т.п. В качестве обзора по солям, см. Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002).

Ожидается, что соединения изобретения могут быть получены в форме гидратов и сольватов. Любая ссылка в данном документе, включая формулу изобретения, на "соединения, к которым относится изобретение" или "соединения изобретения", или "настоящие соединения", и т.п., включает ссылку на соли, гидраты и сольваты таких соединений. Термин 'сольват' применяют здесь для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение изобретения и стехиометрическое количество одной или нескольких фармацевтически приемлемых молекул растворителя, например, этанола. Термин 'гидрат' используют, когда указанным растворителем является вода.

Индивидуальные соединения изобретения могут существовать в нескольких полиморфных формах и могут быть получены в различных кристаллических формах.

Соединения могут также вводиться в форме их пролекарств. Таким образом, некоторые производные соединений, которые могут быть активными сами по себе, или могут сами иметь небольшую фармакологическую активность или не иметь ее, могут при введении в или на организм, превращаться в соединения изобретения, имеющие желательную активность, например, посредством гидролитического расщепления. Такие производные упоминаются как 'пролекарства'. Дополнительную информацию по применению пролекарств можно найти в Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi and V.J. Stella) и Bioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (ed. E. B. Roche, American Pharmaceutical Association; C.S. Larsen and J. Østergaard, Design and application of prodrugs, in Textbook of Drug Design and Discovery, 3^rd Edition, 2002, Taylor and Francis).

Пролекарства в соответствии с изобретением могут, например, быть получены посредством замены соответствующих функциональностей, присутствующих в соединениях формулы (I), на определенные фрагменты, известные квалифицированным специалистам в данной области как 'про-фрагменты', как описано, например, в Design of Prodrugs by H. Bundgaard (Elsevier, 1985). Такие примеры могут представлять собой пролекарство карбоксильной группы (такое как -CO-О-CH₂-О-CO-tBu, как применяют в пролекарстве пивампициллин для ампициллина), амид (-CO-NH-CH₂-NAlk₂) или амидин (-C(=N-О-CH₃)-NH₂).

Варианты осуществления изобретения

В некоторых вариантах осуществления изобретения R¹ представляет собой радикал формулы (IA) или (IB). Из этих радикалов, формула (IB) является в настоящее время предпочтительной. В радикалах (IA) или (IB):

R^4b может представлять собой C₁-C₆ алкил, такой как изопропильная группа;

R^4b может представлять собой C₃-C₆ циклоалкил, такой как циклопентил;

R^4b может представлять собой фенил; более конкретно, фенильная группа является замещенной одной или двумя группами, выбранными из C₁-C₆ алкила, галогена (например, хлора) или гидрокси; например, фенильная группа может быть замещена во 2- и/или 6-положении; конкретно, R^4b может представлять собой 2,6-дихлорфенил, 2-хлорфенил или 2-гидроксифенил;

R^4b может представлять собой группу формулы (IIa) или группу формулы (IIb);

В других вариантах осуществления изобретения R¹ представляет собой радикал формулы (IC). В радикале или формуле (IC):

R^3b может представлять собой C₁-C₆ алкил, такой как C₁-C₃ алкил, примерами являются метил, этил, н- или изо-пропил. R^3b может представлять собой замещенный C₁-C₆ алкил, такой как замещенный C₁-C₃ алкил, указанные заместители определены выше. Примеры таких заместителей включают C₁-C₆ алкокси, C₁-C₆ алкилсульфонил, предпочтительной группой R^3b является метоксиметил.

R^3b может также представлять собой -NH₂; моно- или ди- (C₁-C₆) алкиламино; моно- или ди-(C₁-C₃) алкил-X-(C₁-C₃) алкиламино, где X представляет собой O, S или NH; N-морфолино; N-пиперидинил, N-пиперазинил или N-(C₁-C₃)алкилпиперазин-1-ил;

Линкер Y

Y представляет собой -O- или -S(О)_p-. Например, Y может представлять собой -O- или -S-. В настоящем, предпочтительно, чтобы Y являлся -О-;

Группа A

A может представлять собой, например, дивалентный радикал формулы (Va) в любой ориентации:

где t равно 1, 2 или 3.

Радикал -N(H)-A-Y- может представлять собой дивалентный радикал, имеющий одну из стереоспецифических формул (B), (C), (D), (E), (F), (G), (H), (I) или (J), где Y определен со ссылкой на формулу (I):

В формулах (B)-(J), Y является предпочтительно -O- .

В частности, радикал -N(H)-A-Y- может иметь формулу (B), (C), (D), (E), (I) или (J), где Y является -О-.

Группа R²

Группа R² представляет собой группу формулы (IIIa-e), как определено выше. Удобным образом, R² является группой (IIIb) или (IIIc), где R⁷ и R⁸ представляет собой этил или метил.

Один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIIA):

где Y, R^4b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Еще один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIIB):

где Y, R^4b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Еще один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIIC):

где Y, R^4b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Еще один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIID):

где Y, R^3b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Еще один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIIE):

где Y, R^3b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Еще один подкласс соединений изобретения имеет формулу (IIIF):

где Y, R^3b и R² являются такими, как определено по отношению к формуле (I).

Применимость

Как указано выше, соединения изобретения представляют собой ингибиторы p38MAPK и, таким образом, могут иметь применимость для лечения заболеваний или состояний, которое имеет положительный результат от ингибирования фермента p38. Такие заболевания и состояния известны из литературы, и некоторые из них были указаны выше. Однако соединения имеют общее применение в качестве противовоспалительных средств, особенно, для применения при лечении респираторного заболевания. Конкретно, соединения могут применяться при лечении хронической обструктивной болезни легких (COPD), хронического бронхита, фиброза легких, пневмонии, острого респираторного дистресс-синдрома (ARDS), эмфиземы легких или эмфиземы, индуцированной курением, наследственной (неаллергической астмы и экзогенной (аллергической) астмы, мягкой астмы, умеренной астмы, тяжелой астмы, астмы, устойчивой к стероидам, нейтрофильной астмы, бронхитной астмы, астмы, индуцированной нагрузкой, профессиональной астмы и индуцированной астмы после бактериальной инфекции, кистозного фиброза, фиброза легких и бронхоэктаза.

Композиции

Как указано выше, соединения, к которым относится изобретение, представляют собой ингибиторы киназы р38 и являются применимыми при лечении некоторых заболеваний, например, воспалительных заболеваний дыхательных путей. Примеры таких заболеваний приведены выше и включают астму, ринит, аллергический синдром дыхательных путей, бронхит и хроническую обструктивную болезнь легких.

Будет понятно, что конкретный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от разнообразных факторов, включающих активность конкретного используемого соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, диету, время введения, путь введения, скорость выведения, комбинацию лекарственного средства и тяжесть конкретного заболевания, подвергаемого лечению. Оптимальные дозовые уровни и частота дозирования будут определяться клиническими испытаниями, как требуется в области фармацевтики. В целом, интервал суточной дозы для перорального введения будет находиться в пределах интервала от приблизительно 0,001 мг до приблизительно 100 мг на кг массы тела человека, часто, от 0,01 мг до приблизительно 50 мг на кг, например, от 0,1 до 10 мг на кг, в однократной или разделенных дозах. Как правило, интервал суточной дозы для ингаляционного введения будет находиться в пределах интервала от приблизительно 0,1 мкг до приблизительно 1 мг на кг массы тела человека, предпочтительно 0,1 мкг до 50 мкг на кг, в однократной или разделенных дозах. С другой стороны, может быть необходимо применять дозировки вне этих пределов в некоторых случаях. Для цели изобретения, ингаляционное введение является предпочтительным.

Соединения, к которым относится изобретение, могут быть получены для введения посредством любого пути в соответствии с их фармакокинетическими свойствами. Перорально вводимые композиции могут находиться в форме таблеток, капсул, порошков, гранул, пастилок, жидких или гелеобразных препаратов, таких как пероральные, местные или стерильные парентеральные растворы или суспензии. Таблетки и капсулы для перорального введения могут находиться в представительной форме однократной дозы, и могут содержать общепринятые эксципиенты, такие как связующие, например, сироп, акация, желатин, сорбитол, трагакант или поливинил-пирролидон; наполнители, например, лактозу, сахар, кукурузный крахмал, фосфат кальция, сорбитол или глицин; таблетирующую смазку, например, стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль или оксид кремния; разрыхлители, например, картофельный крахмал или приемлемые увлажнители, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты в соответствии со способами, хорошо известными в обычной фармацевтической практике. Пероральные жидкие препараты могут находиться в форме, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров, или могут быть представлены в виде сухого продукта для восстановления с водой или другой подходящей средой перед применением. Такие жидкие препараты могут содержать общепринятые добавки, такие как суспендирующие агенты, например, сорбитол, сироп, метилцеллюлоза, сироп глюкозы, желатин, гидрированные съедобные жиры; эмульгирующие агенты, например, лецитин, сорбитанмоноолеат или акация; неводные наполнители (которые, могут включать съедобные масла), например, миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, масляные сложные эфиры, такие как с глицерином, пропиленгликолем или этиловым спиртом; консерванты, например, метил- или пропил п-гидроксибензоат или сорбиновая кислота и по желанию общепринятые ароматизирующие или окрашивающие агенты.

Для местного нанесения на кожу, лекарственное средство может быть введено в крем, лосьон или мазь. Кремовые или мазевые готовые лекарственные формы, которые могут применяться для лекарственного средства, являются общепринятыми готовыми формами, хорошо известными в данной области, например, как описано в стандартных руководствах по фармацевтике, таких как Британская фармакопея.

Активный ингредиент может также вводиться парентерально в стерильной среде. В зависимости от используемых основы и концентрации, лекарственное средство может либо быть суспендировано или растворено в среде. Преимущественным образом, вспомогательные лекарственные вещества, такие как местный анестетик, консервант и буферные вещества могут растворяться в основе.

Однако для лечения воспалительного заболевания дыхательных путей, соединения изобретения могут также быть составлены для ингаляции, например, как назальный спрей или сухой порошок или аэрозольные ингаляторы. Для доставки посредством ингаляции, активное соединение находится предпочтительно в форме микрочастиц. Они могут быть получены разнообразными методами, включающими распылительную сушку, лиофилизацию и микронизацию. Генерация аэрозоля может осуществляться с использованием, например, струйных распылителей под давлением или ультразвуковых распылителей, предпочтительно, с использованием пропеллентных дозируемых аэрозолей или безпропеллентного введения микронизированных активных соединений из, например, ингаляционных капсул или других систем доставки "сухого порошка".

Посредством примера, композиция изобретения может быть получена в виде суспензии для доставки из небулайзера или в виде аэрозоля в жидком пропелленте, например, для применения в ингаляторе отмеренных доз с распылением сжатым воздухом (PMDI). Пропелленты, пригодные для применения в PMDI, известны квалифицированному специалисту и включают CFC-12, HFA-134a, HFA-227, HCFC-22 (CCl₂F₂) и HFA-152 (CH₄F₂ и изобутан).

В предпочтительном варианте осуществления изобретения, композиция изобретения находится в форме сухого порошка, с использованием для доставки ингалятора сухого порошка (DPI). Известны многие типы DPI.

Микрочастицы для доставки посредством введения могут быть составлены с эксципиентами, которые способствуют доставке и высвобождению. Например, в готовой лекарственной форме сухого порошка, микрочастицы могут быть составлены с крупными частицами носителя, которые способствуют потоку из DPI в легкое. Известны подходящие частицы носителя, и они включают частицы лактозы; они могут иметь среднемассовый аэродинамический диаметр, больший, чем 90 мкм.

В случае готовой лекарственной формы на основе аэрозоля, пример представляет собой:

Соединение изобретения	24 мг/баллон
Лецитин, NF Жидк. Конц.	1,2 мг/баллон
Трихлорфторметан, NF	4,025 г/баллон
Дихлордифторметан, NF	12,15 г/баллон

Активные соединения могут быть дозированы, как описано, в зависимости от применяемой ингаляторной системы. В дополнение к активным соединениям, формы для введения могут дополнительно содержать эксципиенты, такие как, например, пропелленты (например, Frigen в случае дозируемых аэрозолей), поверхностно-активные вещества, эмульгаторы, стабилизаторы, консерванты, ароматизаторы, наполнители (например, лактоза в случае порошковых ингаляторов) или, если целесообразно, дополнительные активные соединения.

Для целей ингаляции доступно большое число систем, с помощью которых аэрозоли с оптимальным размером частиц могут генерироваться и вводиться, с использованием ингаляционного метода, который является подходящим для пациента. В дополнение к применению адапторов (спэйсеров, расширителей) и грушевидных контейнеров (например, Nebulator®, Volumatic®), и автоматизированных устройств, испускающих распылительный спрей (Autohaler®), для дозируемых аэрозолей, в частности, в случае порошковых ингаляторов, доступен ряд технических решений (например, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® или ингаляторы, например, как описано в EP-A-0505321). Дополнительно, соединения изобретения могут быть доставлены в многокамерные устройства, таким образом, обеспечивая доставку комбинационных агентов.

Комбинации

Другие соединения могут комбинироваться с соединениями, к которым относится изобретение, для профилактики и лечения воспалительных заболеваний, особенно, респираторных заболеваний. Таким образом, настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим терапевтически эффективное количество соединения изобретения и одно или несколько других терапевтических средств. Подходящие терапевтические средства для комбинированной терапии соединениями изобретения включают, но не ограничены лишь ими: (1) кортикостероиды, такие как флутиказона пропионат, флутиказона фуроат, мометазона фуроат, беклометазона дипропионат, циклезонид, будезонид, GSK 685698, GSK 870086, QAE 397, QMF 149, TPI-1020; (2) агонисты β2-адренорецепторов, такие как сальбутамол, альбутерол, тербуталин, фенотерол и агонисты β2-адренорецепторов пролонгированного действия, такие как салметерол, индакатерол, формотерол (включая формотерола фумарат), арформотерол, кармотерол, GSK 642444, GSK 159797, GSK 159802, GSK 597501, GSK 678007, AZD3199; (3) комбинированные продукты кортикостероид/β2-агонист пролонгированного действия, такие как салметерол/флутиказона пропионат (Адваир/Серетид), формотерол/будезонид (Симбикорт), формотерол/флутиказона пропионат (Флутиформ), формотерол/циклезонид, формотерол/мометазона фуроат, индакатерол/мометазона фуроат, Индакатерол/QAE 397, GSK 159797/GSK 685698, GSK 159802/GSK 685698, GSK 642444/GSK 685698, GSK 159797/GSK 870086, GSK 159802/GSK 870086, GSK 642444/GSK 870086, арформотерол/циклезонид; (4) антихолинергические средства, например, антагонисты мускаринового-3 (M3) рецептора, такие как ипратропия бромид, тиотропия бромид, Аклидиний (LAS-34273), NVA-237, GSK 233705, Даротропий, GSK 573719, GSK 961081 , QAT 370, QAX 028; (5) M3-антихолинергические/β2-адренорецепторные агонисты с двойным фармакологическим действием, такие как GSK961081; (6) модуляторы лейкотриенов, например, антагонисты лейкотриенов, такие как монтелукаст, зафируласт или пранлукаст или ингибиторы биосинтеза лейкотриенов, такие как Зилейтон или BAY-1005, или антагонисты LTB4, такие как Амелубант или ингибиторы FLAP, такие как GSK 2190914, AM-103; (7) ингибиторы фосфодиэстеразы-IV (PDE-IV) (пероральные или ингалируемые), такие как рофлумиласт, циломиласт, Оглемиласт, ONO-6126, Тетомиласт, Тофимиласт, UK 500,001, GSK 256066; (8) антигистаминные средства, например, селективные антагонисты рецептора гистамина-1 (H1), такие как фексофенадин, цитиризин, лоратидин или астемизол или двойные антагонисты H1/H3 рецептора, такие как GSK 835726, GSK 1004723; (9) противокашлевые средства, такие как кодеин или декстраморфан; (10) муколитическое средство, например, N-ацетилцистеин или фудостеин; (11) отхаркивающее средство/мукокинетический модулятор, например, амброксол, гипертонические растворы (например, физиологический раствор или маннит) или поверхностно-активное средство; (12) пептидное муколитическое средство, например, рекомбинантная человеческая дезоксирибонуклеаза I (дорназа-альфа и rhДНаза) или гелицидин; (13) антибиотики, например, азитромицин, тобрамицин и азтреонам; (14) неселективные ингибиторы COX-1/COX-2, такие как ибупрофен или кетопрофен; (15) ингибиторы COX-2, такие как целекоксиб и рофекоксиб; (16) антагонисты VLA-4, такие как описанные в WO97/03094 и WO97/02289; (17) ингибиторы TACE и ингибиторы TNF-α, например, моноклональные антитела против-TNF, такие как Remicade и CDP-870 и иммуноглобулиновые молекулы рецептора TNF, такие как Enbrel; (18) ингибиторы матриксной металлопротеазы, например, MMP-12; (19) ингибиторы эластазы человеческих нейтрофилов, такие как ONO-6818 или описанные в WO2005/026124, WO2003/053930 и WO06/082412; (20) антагонисты A2b, такие как описанные в WO2002/42298; (21) модуляторы функции хемокинового рецептора, например, антагонисты CCR3 и CCR8; (22) соединения, которые модулируют действие других простаноидных рецепторов, например, антагонист тромбоксана A₂; антагонисты DP1, такие как MK-0524, антагонисты CRTH2, такие как ODC9101 и AZD1981 и смешанные антагонисты DP1/CRTH2, такие как AMG 009; (23) агонисты PPAR, включающие агонисты PPAR-альфа (такие как фенофибрат), агонисты PPAR-дельта, агонисты PPAR-гамма, такие как Пиоглитазон, Розиглитазон и Балаглитазон; (24) метилксантины, такие как теофиллин или аминофиллин и комбинации метилксантин/кортикостероид, такие как теофиллин/будезонид, теофиллин/флутиказона пропионат, теофиллин/циклезонид, теофиллин/мометазона фуроат и теофиллин/беклометазона дипропионат; (25) агонисты A2a, такие как описанные в EP1052264 и EP1241176; (26) антагонисты CXCR2 или IL-8, такие как SCH 527123 или GSK 656933; (27) модуляторы сигнального пути IL-R, такие как кинерет и ACZ 885; (28) антагонисты MCP-1, такие как ABN-912.

Способы синтеза

Соединения изобретения могут быть получены посредством рутинной адаптации способов, описанных здесь в Примерах.

Например, соединения изобретения могут быть получены в соответствии с путями, иллюстрируемыми на Схеме 1.

Схема 1

Соединения общей формулы (a) могут быть получены из соединений общей формулы (d):

посредством реакции с соединением общей формулы (b):

где R^b является таким, как определено для R² в общей формуле (I), в подходящем растворителе, таком как диметилсульфоксид, 1,4-диоксан или ацетонитрил, в присутствии основания, такого как диизопропилэтиламин в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 100°C.

Соединения общей формулы (b) могут быть получены из аминов общей формулы (c) в соответствии с известными литературными методиками (например, WO2006009741, EP1609789).

Соединения общей формулы (e), где R^c представляет собой водород, могут быть получены из соединений общей формулы (e):

где R^c может являться подходящей защитной группой посредством удаления защиты, в соответствии со способами, известными квалифицированным специалистам в данной области.

Соединения общей формулы (e) могут быть получены из соединений общей формулы (f):

посредством реакции с соединением общей формулы (g):

Используя трет-бутоксид калия и 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинон в подходящем растворителе, таком как толуол, 1,4-диоксан или ацетонитрил, в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 100°C.

Соединения общей формулы (g), где R^c представляет собой водород, могут быть получены из соединений общей формулы (h) или (i), как описано в WO2008/043019.

Соединения общей формулы (h), где R^c представляет собой амид, предпочтительно трифторацетамид, могут быть получены из соединений общей формулы (j), как описано в WO2008/043019, используя RuCl[S,S-Tsdpen(п-цимол)]. Будет понятным, что соединения формулы (j) могут быть гомохиральными, как иллюстрировано для (j) выше, или являться противоположными энантиомерами или рацемическими.

Специалисты в данной области смогут понять, что может быть получена любая комбинация стереоцентров, как показано в (g), с использованием N-((R)-4-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-ацетамида или N-((S)-4-оксо-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-ацетамида, используя RuCl[R,R-Tsdpen(п-цимол)] или RuCl[S,S-Tsdpen(п-цимол)]. Соединение (g) изображено без определенных стереоцентров, но любая комбинация может взаимодействовать, как проиллюстрировано на Схеме 1.

Соединения общей формулы (f) могут быть получены из соединений общей формулы (k):

с использованием подходящего окислителя, такого как хлорамин Т, тетраацетат свинца или диацетат фенилйода(III), в подходящем растворителе, таком как дихлорметан или этанол, в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 100°C.

Соединения общей формулы (k) могут быть получены из соединений общей формулы (m):

посредством реакции с альдегидом общей формулы (I):

R^aCHO (l),

в подходящем растворителе, таком как этанол или тетрагидрофуран, в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 80°C.

Альтернативно, соединения формулы (f) могут быть получены из соединений формулы (n):

с использованием подходящего дегидратирующего средства, такого как реагент Берджесса, трифенилфосфин и гексахлорэтан, оксихлорид фосфора, уксусная кислота или условия Мицунобу (диэтилазодикарбоксилат/трифенилфосфин/триметилсилилазид), в отсутствие или присутствии подходящего растворителя, такого как тетрагидрофуран, толуол или NMP, в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 120°C.

Соединения формулы (n) могут быть получены из соединений формулы (m):

посредством реакции с соединением общей формулы (o):

R^aCO₂H (o),

с использованием подходящего ацилирующего/дегидратирующего агента, такого как трифенилфосфин/трихлорацетонитрил в присутствии основания, такого как диизопропилэтиламин, в подходящем растворителе, таком как дихлорметан или ацетонитрил, в интервале температур, предпочтительно между комнатной температурой и 150°C.

Общие экспериментальные подробности

Сокращения, применяемые в экспериментальном разделе: водн. = водный; ДХМ = дихлорметан; DIPEA = диизопропилэтиламин; ДМФА = N,N-диметилформамид; ДМСО = диметилсульфоксид; EDC = 1-этил-3-(3'-диметиламинопропил)карбодиимид; EtOAc = этилацетат; EtOH = этанол; Et₂O = диэтиловый эфир; ФКХ = флэш-колоночная хроматография; ч = час; HATU = гексафторфосфат 2-(7-аза-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония; HOBt = 1-гидрокси-бензотриазол; ВЭЖХ = высокоэффективная жидкостная хроматография; ЖХМС = жидкостная хроматография-масс-спектрометрия; MeCN = ацетонитрил; MeOH = метанол; мин = минуты; ЯМР = ядерный магнитный резонанс; КТ = комнатная температура; Rt = время удерживания; нас. = насыщенный; SCX-2 = сильная катионообменная хроматография; TFA = трифторуксусная кислота; ТГФ = Тетрагидрофуран; H₂O = вода; IMS = промышленный метилированный спирит; Et₃N = триэтиламин; EtNiPr₂ = диизопропилэтиламин

Номенклатуру структурам присваивали, используя программное обеспечение Autonom 2000 Name от MDL Inc. Стереохимические присвоения соединений основаны на сравнениях с данными, приведенными в WO2008/043019 для ключевых промежуточных соединений. Все реакции осуществляли в атмосфере азота, если не установлено иначе.

Спектры ЯМР получали на спектрометре Varian Unity Inova 400 с тройным резонансным зондом обратного детектирования с размером 5 мм, работающим при 400 МГц или на спектрометре Bruker Avance DRX 400 с тройным резонансным зондом TXI обратного детектирования с размером 5 мм, работающим при 400 МГц, или на спектрометре Bruker Avance DPX 300 со стандартным зондом двойной частоты с размером 5 мм, работающим при 300 мГц. Сдвиги приведены в мд относительно тетраметилсилана. Отнесение спектров ЯМР проводили, используя программное обеспечение DataChord Spectrum Analyst Version 4.0.b21.

Там, где продукты очищали посредством флэш-колоночной хроматографии, 'флэш оксид кремния' относится к силикагелю для хроматографии, от 0,035 до 0,070 мм (от 220 до 440 меш) (например, Fluka силикагель 60), и применяемому давлению азота до 10 п.с.и. для ускоренного элюирования с колонки или применению системы очистки CombiFlash® Companion или применению системы очистки Biotage SP1. Все растворители и промышленные реагенты использовали в том виде, как их получали.

Соединения, очищенные посредством препаративной ВЭЖХ, очищали, используя C18-обращенно-фазовую колонку (100 × 22,5 мм вн. диам. колонка Genesis с размером частиц 7 мкм), или колонка Phenyl-Hexyl (250 × 21,2 мм вн. диам. колонка Gemini с размером частиц 5 мкм), УФ-детектрование при 230 или 254 нм, скорость потока 5-20 мл/мин), элюирование с градиентами от 100-0 до 0-100% вода/ацетонитрил (содержащими 0,1% TFA или 0,1% муравьиной кислоты) или вода/MeOH (содержащими 0,1% TFA или 0,1% муравьиной кислоты). Фракции, содержащие требуемый продукт (идентифицированный посредством анализа ЖХМС), отбирали, органическую фракцию удаляли упариванием, и оставшуюся водную фракцию лиофилизировали, с получением конечного продукта. Продукты, очищенные посредством препаративной ВЭЖХ, выделяли в виде формиатных или трифторацетатных солей, если не утверждается иначе.

Применяемые системы жидкостной хроматографии-масс-спектроскопии (ЖХМС) и ВЭЖХ представляют собой:

Способ 1

Waters Platform ЖХ-квадрупольный масс-спектрометр c C18-обращенно-фазовой колонкой (30 × 4,6 мм Phenomenex Luna размер частиц 3 мкм). Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: метанол + 0,1% муравьиной кислоты:

Градиент - Время	скорость потока мл/мин	% А	% В
0,00	2,0	95	5
0,50	2,0	95	5
4,50	2,0	5	95
5,50	2,0	5	95

6,00

2,0

95

5

Детектирование - МС, ELS, УФ (200 мкл сплит в МС с проточным детектором HP1100 DAD). МС способ ионизации - Электрораспыление (положительные и отрицательные ионы).

Способ 2

Waters ZMD квадрупольный масс-спектрометр с C18-обращенно-фазовой колонкой (30 × 4,6 мм Phenomenex Luna размер частиц 3 мкм). Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: метанол + 0,1% муравьиной кислоты:

Градиент - Время	скорость потока мл/мин	% А	% В
0,00	2,0	95	5
0,50	2,0	95	5
4,50	2,0	5	95
5,50	2,0	5	95
6,00	2,0	95	5

Детектирование - МС, ELS, УФ (200 мкл сплит в МС с проточным детектором Waters 996 DAD). МС способ ионизации - Электрораспыление (положительные и отрицательные ионы).

Способ 3

Waters ZMD квадрупольный масс-спектрометр с C18-обращенно-фазовой колонкой (30 × 4,6 мм Phenomenex Luna размер частиц 3 мкм), Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: ацетонитрил + 0,1% муравьиной кислоты:

Градиент - Время	скорость потока мл/мин	% А	% В
0,00	2,0	95	5
0,50	2,0	95	5
4,50	2,0	5	95
5,50	2,0	5	95
6,00	2,0	95	5

Детектирование - MS, ELS, УФ (200 мкл сплит в МС с проточным детектором HP1100 DAD). МС способ ионизации - Электрораспыление (положительные и отрицательные ионы).

Способ 4

Waters ZMD квадрупольный масс-спектрометр с Higgins Clipeus 5 микрон C18 100 × 3,0 мм, установленной при 40°C. Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: MeOH + 0,1% муравьиной кислоты:

Градиент - Время	скорость потока мл/мин	% А	% В
0,00	1,0	85	15
1,00	1,0	85	15
13,00	1,0	5	85
20,00	1,0	5	85
22,00	1,0	85	15

Детектирование - МС, УФ PDA. МС способ ионизации - Электрораспыление (положительные и отрицательные ионы).

Способ 5

Waters ZMD квадрупольный масс-спектрометр с Acquity BEH C18 1,7 мкм 100 × 2,1 мм, Acquity BEH Shield RP18 1,7 мкм 100 × 2,1 мм или Acquity HSST3 1,8 мкм 100 × 2,1 мм, установленными при 40°C. Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: CH₃CN + 0,1% муравьиной кислоты:

Градиент - Время	скорость потока мл/мин	% А	% В
0,00	0,4	95	5
0,40	0,4	95	5
6,00	0,4	5	95
6,80	0,4	5	95
7,00	0,4	95	5
8,00	0,4	95	5

Детектирование - МС, УФ PDA. МС способ ионизации - Электрораспыление (положительные и отрицательные ионы).

Способ 6

Phenomenex Gemini C18-обращенно-фазовая колонка (250 × 21,20 мм с размером частиц 5 мкм), Градиентное элюирование с A: вода + 0,1% муравьиной кислоты; B: CH₃CN + 0,1% муравьиной кислоты - 10% A/90% B до 98% A/2% B в течение 20 мин - скорость потока 18 мл/мин. Детектирование - проточный УФ-детектор, установленный при длине волны 254 нм.

Пример 1

(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

а. (+/-) Цис-4-азидо-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол

Раствор 1-тетралона (2,92 г, 20 ммоль), N-бромсукцинимида (3,56 г, 20 ммоль) и азодибутиронитрила (80 мг) в тетрахлориде углерода (80 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 1,25 ч, затем упаривали в вакууме. Полученное в результате масло растворяли в ДМФА (8 мл), обрабатывали азидом натрия (2,6 г, 40 ммоль) и перемешивали при КТ в течение 2 ч. Реакционную смесь распределяли между Et₂O (200 мл) и H₂O (50 мл). Полученный в результате органический слой сушили (MgSO₄), отфильтровывали и упаривали в вакууме. Полученное в результате масло растворяли в EtOH (100 мл), охлаждали до 0°C под аргоном и обрабатывали боргидридом натрия (0,76 г, 20 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч, концентрировали в вакууме до приблизительно 50 мл и распределяли между H₂O и Et₂O. Водный слой экстрагировали ДХМ (100 мл) и EtOAc (100 мл) и объединенные органические слои сушили (MgSO₄), отфильтровывали, концентрировали в вакууме и очищали посредством ФКХ, с использованием 0-30% циклогексан/диэтиловый эфир с получением соединения заголовка при Rf 0,2 в виде темно-красного масла (1,5 г, 40%). ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,57-7,52 (1H, м), 7,43-7,28 (3H, м), 4,81-4,72 (1H, м), 4,55-4,49 (1H, м), 2,13-1,99 (3H, м), 1,79 (1H, м).

b. (+/-) Цис 4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол

Раствор соединения стадии а Примера 1 (1,086 г, 5,7 ммоль) и трифенилфосфина (1,81 г, 6,84 ммоль) в ТГФ (20 мл) и H₂O (4 мл) перемешивали при КТ в атмосфере азота в течение 6,5 ч. Реакционную смесь разбавляли Et₂O и экстрагировали 0,4M раствором HCl. Водный слой подщелачивали 10N раствором раствором гидроксида натрия и экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), отфильтровывали, концентрировали в вакууме и очищали посредством ФКХ с использованием 0-20% ДХМ/2M NH₃ в MeOH с получением соединения заголовка (0,55 г, 59%). ЖХМС (способ 1): Rt 0,41, 1,50 мин, m/z 164 [MH⁺].

c. N'-(5-фтор-пиридин-2-ил)-гидразид изомасляной кислоты

Раствор 5-фтор-2-гидразинил-пиридина (0,59 г, 4,65 ммоль), изомасляной кислоты (528 мг, 6 ммоль) и гидрата HOBt (153 мг, 1 ммоль) в ДХМ (10 мл) обрабатывали EDC (1,15 г, 6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение 40 мин, выливали в насыщенный водный раствор бикарбоната натрия (40 мл), экстрагировали четырьмя частями ДХМ, сушили (Na₂SO₄), упаривали и очищали посредством ФКХ с использованием 10-30% EtOAc/ДХМ с получением соединения заголовка (0,42 г, 46%). ЖХМС (способ 2): Rt 2,46 мин, m/z 198 [MH⁺].

d. 6-Фтор-3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин

Раствор соединения стадии с Примера 1 (0,41 г, 2,08 ммоль), трифенилфосфина (763 мг, 2,91 ммоль) и триэтиламина (0,87 мл, 6,24 ммоль) в ТГФ (5 мл) при 0°C обрабатывали 1,2-гексахлорэтаном (690 мг, 2,91 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 40 мин, затем при КТ в течение 20 мин, гасили водой, экстрагировали дважды EtOAc, сушили (Na₂SO₄), упаривали и очищали дважды посредством ФКХ (циклогексан/EtOAc 1/0 до 1/1) с получением соединения заголовка (274 мг, загрязненного 20% PPh₃O, 58%) в виде белого твердого вещества. ЖХМС (способ 1): Rt 2,58 мин, m/z 180 [MH⁺].

e. (+/-) 4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-иламин

Раствор соединения стадии b Примера 1 (367 мг, 2,05 ммоль) и трет-бутоксида калия (255 мг, 2,25 ммоль) в толуоле (1 мл) и 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1H)-пиримидиноне (0,5 мл) добавляли к соединению стадии d Примера 1, (334 мг, 2,05 моль). Реакционную смесь перемешивали, в то время как температура возрастала от 50°C до 80°C в течение 20 мин. Реакционную смесь охлаждали, гасили водой и экстрагировали 10% лимонной кислотой. Водную фазу промывали CH₂Cl₂, подщелачивали KOH до pH10 и экстрагировали CH₂Cl_2, Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), концентрировали и очищали посредством ФКХ (0-9% MeOH/NH₃-CH₂Cl₂) с получением соединения заголовка в виде коричневой камеди, которая отверждалась при стоянии (400 мг, 60%). ЖХМС (способ 3): RT 2,45 мин, m/z 323 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,43-1,55 (6H, м), 1,85-2,15 (3H, м), 2,30-2,45 (1H, м), 3,27 (1H, кв., J 6,85), 3,97-4,04 (1H, м), 5,24 (1H, т, J 4,7), 5,29 (1H, с), 7,07-7,14 (1H, м), 7,22-7,50 (5H, м), 7,56-7,62 (1H, м), 7,65-7,71 (1H, м).

f. (+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Раствор соединения Примера 1e (87 мг, 0,27 ммоль) в диоксане (2 мл) с EtNiPr₂ (49 мкл, 0,3 ммоль) и 2,2,2-трихлорэтил-3-трет-бутил-1-п-толил-1H-пиразол-5-илкарбаматом (109 мг, 0,27 ммоль) нагревали при 70°C в течение 20 ч. Реакционной смеси давали охладиться, распределяли между H₂O-EtOAc, органическую фазу сушили (Na₂SO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали посредством ФКХ (0-6% 9:1 MeOH/0,88 NH₃-CH₂Cl₂) и суспендировали в MeOH с получением соединения заголовка в виде бесцветного твердого вещества (57 мг). ЖХМС (способ 4): Rt 12,03 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 7,59 (1H, д, J 9,8), 7,42 (1H, д, J 1,9), 7,39 (2H, д, J 8,2), 7,32-7,24 (4H, м), 7,20 (2H, д, J 8,1), 7,03 (1H, дд, J 9,8, 1,9), 6,52 (1H, шир.с), 6,28 (1H, с), 5,47 (1H, д, J 8,7), 5,19 (1H, т, J 3,9), 5,09 (1H, тд, J 8,9, 5,2), 3,29-3,18 (1H, м), 2,35 (3H, с), 2,25 (1H, м), 2,13-2,03 (2H, м), 1,93 (1H, м), 1,47 (3H, д, J 6,9), 1,44 (3H, д, J 6,9), 1,32 (9H, с).

Пример 2

(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[4-(3-изопропил[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-транс-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

a. (+/-) Транс 4-азидо-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол

Соединение заголовка получали из соединения стадии а Примера 1 посредством ФКХ (циклогексан/диэтиловый эфир 100/0 до 70/30) при Rf 0,1 в виде темно-красного масла (0,4 г). ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃): 7,57-7,52 (1H, м), 7,43-7,28 (3H, м), 4,81-4,72 (1H, м), 4,55-4,49 (1H, м), 2,13-1,99 (3H, м), 1,79 (1H, м).

b. (+/-) Транс 4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол

Раствор соединения стадии b Примера 2 (0,3 г, 1,59 ммоль) и трифенилфосфина (0,5 г, 1,9 ммоль) в ТГФ (10 мл) и H₂O (4 мл) перемешивали при КТ в атмосфере азота в течение 6,5 ч. Реакционную смесь разбавляли Et₂O и экстрагировали 0,5 M раствора HCl. Водный слой подщелачивали раствором K₂CO₃ и экстрагировали ДХМ. Объединенные органические слои сушили (MgSO₄), отфильтровывали, концентрировали в вакууме и очищали посредством ФКХ (ДХМ/MeOH, содержащий NH₃ 9/1) с получением соединения заголовка (1,13 мг). ЖХМС (способ 1): Rt 0,41, 1,50 мин, m/z 164 [MH⁺].

b.(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3a]пиридин-6-илокси)-транс-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично стадиям e и f Примера 1 исходя из продукта стадии b Примера 2. ЖХМС (способ 4): Rt 12,01 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 7,59 (1H, д, J 9,2), 7,43 (1H, д, J 1,5), 7,35 (2H, д, J 8,1), 7,32-7,25 (4H, м), 7,19 (2H, д, J 8,4), 7,09 (1H, дд, J 9,8, 1,8), 6,49 (1H, шир.с), 6,25 (1H, с), 5,38 (1H, д, J 8,3), 5,23 (1H, т, J 5,0), 5,16 (1H, кв., J 6,3), 3,23 (1H, м), 2,40-2,30 (4H, м), 2,19-2,06 (2H, м), 1,85-1,75 (1H, м), 1,46 (3H, д, J 6,9), 1,43 (3H, д, J 6,9), 1,31 (9H, с).

Соединения следующих примеров были получены аналогично Примеру 1.

Пример №	Структура	ЯМР (400 МГц) δ	ЖХМС
3	(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-{4-[3-(2-хлор-фенил)-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-илокси]-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил}-мочевина	(CDCl3): 1,31 (9H, с), 1,80-1,93 (1H, м), 1,94-2,09 (2H, м), 2,17-2,28 (1H, м), 2,36 (3H, с), 4,99-5,09 (1H, м), 5,10-5,18 (2H, м), 6,18 (1H, с), 6,24 (1H, с), 7,11 (1H, дд, J 2,0, 8,0), 7,17-7,31 (6H, м), 7,34-7,40 (3H, м), 7,44-7,61 (3H, м), 7,67 (1H, дд, 1,6, 7,6), 7,72-7,76 (1H, м)	(Способ 5) Rt 5,22 мин m/z 646[MH+]

4	(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-{4-[3-(2,6-дихлор-фенил)-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-илокси]-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил}-мочевина	(d6-DMSO) 1,26 (9Н, с), 1,75-2,10 (4Н, м), 2,35 (3Н, с), 4,73-4,81 (1Н, м), 5,48-5,53 (1Н, м), 6,31 (1Н, м), 7,05 (1Н, д, J 8,0), 7,19-7,38 (9Н, м), 7,67-7,78 (3Н, м), 7,89 (1Н, д, J 12,0), 7,96 (1Н, с), 8,03 (1Н, с)	(Способ 5) Rt 5,30 мин m/z 680 [MH+]
5	(+/-) 1-{4-[3-(2-бензилокси-фенил)-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-илокси]-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил}-3-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-мочевина	(d4-MeOH) 1,32 (9Н, с), 1,66-1,98 (4Н, м), 2,40 (3Н, с), 4,73-4,84 (1Н, м), 5,13 (1Н, т, J 4,7), 5,19 (2Н, с), 6,35 (1Н, с), 7,04-7,40 (18Н, м), 7,60-7,68 (3Н, м), 7,73 (1Н, д, J 9,5)	(Способ 4) Rt 12,5 мин m/z 717 [MH+]

6

(+/-) 1-(5-трет-бутил)-изоксазол-3-ил)-(3-[4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-илокси]-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

(d6-DMSO) 1,28 (9Н, с), 1,38 (6Н, т, J 7,2), 1,85-2,22 (4Н, м), 3,57 (кв., 1Н, J 6,6), 4,87-4,95 (1Н, м), 5,55 (1Н, т, J 4,17), 6,40 (1Н, с), 7,02 (1Н, д, J 9,0), 7,22 (1Н, дд, J 10, 2,4), 7,27-7,45 (4Н, м), 7,69 (1Н, д, J 10,0), 8,21-8,24 (1Н, м), 9,32 (1Н, с).

(Способ 5) Rt 4,35 мин m/z 488 [MH+]

Пример 7

(+/-)1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-{4-[3-(2-гидрокси-фенил)[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси]-цис-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил}-мочевина

Раствор соединения Примера 5 (50 мг, 69,6 ммоль) в IMS (5 мл) перемешивали с гидроксидом палладия (20 мг) в атмосфере водорода в течение 24 ч. Реакционную смесь отфильтровывали через Hyflo, концентрировали в вакууме и очищали с использованием препаративной ВЭЖХ по способу 6. Фракции, содержащие продукт, лиофилизировали с получением соединения заголовка в виде грязно-белого твердого вещества. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,87 мин, m/z 627 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₄-MeOH): 1,31 (9H, с), 1,86-2,33 (4H, м), 2,39 (3H, с), 4,85-4,91 (1H, м), 5,33 (1H, т, J 4,1), 6,34 (1H, с), 7,02-7,08 (2H, м), 7,19-7,36 (12H, м), 7,42-7,48 (1H, м), 7,58 (1H, дд, J 2,7, 8,3), 7,69-7,75 (2H, м).

Пример 8

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1R,4R)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали с использованием (1R,4R)-4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ола (WO2008/043019) аналогично стадиям e и f Примера 1. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,71 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,26 (9H, с), 1,35-1,41 (6H, м), 1,69-1,80 (1H, м), 1,97-2,07 (1H, м), 2,08-2,19 (2H, м), 2,35 (3H, с), 3,56 (1H, кв., J 6,95), 4,86-4,93 (1H, м), 5,53-5,59 (1H, м), 6,32 (1H, с), 7,01 (1H, д, J 8,34), 7,20-7,43 (9H, м), 7,68 (1H, д, J 10,4), 7,96 (1H, с), 8,19-8,22 (1H, м).

Пример 9

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1R,4S)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

a. 2,2,2-Трифтор-N-((1R,4S)-4-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-ацетамид

Соединение заголовка получали как описано для 2,2,2-трифтор-N-((1R,4R)-4-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидронафталин-1-ил)ацетамида в WO2008/043019, используя RuCl[(S,S)-Tsdpen(цимол)]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,61-1,82 (2H, м), 2,04-2,16 (2H, м), 4,56-4,64 (1H, м), 5,03-5,13 (1H, м), 5,28 (1H, д, J 7,5), 7,06 (1H, д, J 7,5), 7,21-7,32 (2H, м), 7,49 (1H, д, J7,5), 9,79 (1H, д, J 8,5).

b. (1S,4R)-4-Амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол

Соединение заголовка получали, используя соединение стадии а Примера 9, как описано в WO2008/043019. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,80-1,93 (4H, м), 3,98-4,02 (1H, м), 4,50-4,55 (1H, м), 7,21-7,28 (2H, м), 7,39-7,47 (2H, м).

c. 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1R,4S)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1S,4R)-4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол (Пример 9, стадия b) аналогично Примеру 1, стадиям e и f. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,84 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,27 (9H, с), 1,35-1,40 (6H, м), 1,80-1,98 (2H, м), 2,02-2,13 (2H, м), 2,36 (3H, с), 3,56 (1H, кв., J 7,2), 4,78-4,86 (1H, м), 5,53 (1H, т, J 5,2), 5,75 (1H, с), 6,32 (1H, с), 7,09 (1H, д, J 8,3), 7,16 (1H, дд, J 9,7, 2,0), 7,25-7,41 (7H, м), 7,68 (1H, д, J 9,7), 8,03 (1H, с), 8,19-8,22 (1H, м).

Пример 10

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,4R)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1R,4S)-4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол, аналогично Примеру 1, стадиям e и f. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,85 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,32 (9H, с), 1,42-1,49 (6H, м), 1,86-1,98 (1H, м), 2,01-2,13 (2H, м), 2,21-2,30 (1H, м), 3,35 (3H, с), 3,24 (1H, кв., J 6,8), 5,04-5,13 (1H, м), 5,17-5,21 (1H, м), 5,45 (1H, д, J 8,6), 6,27 (1H, с), 6,53 (1H, с), 7,04 (1H, дд, J 9,7, 2,1), 7,20 (1H, д, J 8,0), 7,23-7,44 (8H, м), 7,59 (1H, д, J 9,9).

Пример 11

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,4S)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1S,4S)-4-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ол, и аналогично Примеру 1, стадиям e и f. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,74 мин, m/z 578 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,30 (9H, с), 1,40-1,48 (6H, м), 1,70-1,87 (4H, м), 2,07-2,19 (2H, м), 2,33 (3H, с), 3,23 (1H, кв., J 5,2), 5,11-5,19 (1H, м), 5,20-5,27 (1H, м), 5,46 (1H, д, J7,8), 6,25 (1H, с), 6,58 (1H, с), 7,10 (1H, д, J 9,5), 7,17 (1H, д, J 8,2), 7,23-7,37 (4H, м), 7,44 (1H, с), 7,58 (1H, д, J 9,5).

Пример 12

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1R,3R)-3-(3-изопропил[1,2,4]триазоло[4,3a]пиридин-6-илокси)-индан-1-ил]-мочевина

(R)-3-амино-индан-1-он (EP1316542A1) получали из (R)-(N-ацетил)-β-аланина, как описано в EP1316542A1, Bioorg. Med. Chem. Lett, 2008, 18, 4224-4227 и Chem. Lett., 2002, (3), 266. (1R,3R)-3-амино-индан-1-ол получали из (R)-3-амино-индан-1-она, используя методики, описанные в WO2008/043019. Соединение заголовка получали, используя (1R,3R)-3-амино-индан-1-ол аналогично Примеру 1, стадиям e и f. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,61 мин, m/z 564 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,31 (9H, с), 1,42-1,48 (6H, м), 2,14-2,25 (1H, м), 2,34 (3H, с), 2,82 (1H, дд, J 3,2, 15,3), 3,23 (1H, кв., J 6,4) 5,56-5,71 (3H, м), 6,27 (1H, с), 6,62 (1H, с), 7,05 (1H, д, J 9,7), 7,15-7,22 (2H, м), 7,23-7,45 (7H, м), 7,56 (1H, д, 10,5).

Пример 13

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,3S)-3-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-индан-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1S,3S)-3-амино-индан-1-ол аналогично Примеру 12. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,61 мин, m/z 564 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,31 (9H, с), 1,42-1,48 (6H, м), 2,14-2,25 (1H, м), 2,34 (3H, с), 2,82 (1H, дд, J 3,2, 15,3), 3,23 (1H, кв., J 6,4) 5,56-5,71 (3H, м), 6,27 (1H, с), 6,62 (1H, с), 7,05 (1H, д, J 9,7), 7,15-7,22 (2H, м), 7,23-7,45 (7H, м), 7,56 (1H, д, 10,5).

Пример 14

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1R,3S)-3-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-индан-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1S,3R)-3-амино-индан-1-ол аналогично Примеру 12. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,68 мин, m/z 564 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,29 (9H, с), 1,36-1,45 (6H, м), 1,92-2,00 (1H, м), 2,26 (3H, с), 3,03-3,14 (1H, м), 3,24 (1H, кв., J 6,8), 5,33-5,45 (1H, м), 5,49-5,46 (1H, м), 5,94-6,01 (1H, м), 6,25 (1H, с), 6,90 (1H, шир. с), 6,96-7,01 (1H, м), 7,09 (2H, д, J7,8), 7,25-7,42 (7H, м), 7,51 (1H, д, J9,3).

Пример 15

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,3R)-3-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-индан-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка получали, используя (1R,3S)-3-амино-индан-1-ол, аналогично Примеру 12. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,68 мин, m/z 564 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,29 (9H, с), 1,36-1,45 (6H, м), 1,92-2,00 (1H, м), 2,26 (3H, с), 3,03-3,14 (1H, м), 3,24 (1H, кв., J 6,8), 5,33-5,45 (1H, м), 5,49-5,46 (1H, м), 5,94-6,01 (1H, м), 6,25 (1H, с), 6,90 (1H, шир. с), 6,96-7,01 (1H, м), 7,09 (2H, д, J7,8), 7,25-7,42 (7H, м), 7,51 (1H, д, J9,3).

Пример 16

1-(5-трет-бутил-изоксазол-3-ил)-3-[(1S,4S)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям e и f исходя из продукта стадии b Примера 2 и 2,2,2-трихлорэтилового сложного эфира (5-трет-бутил-изоксазол-3-ил)-карбаминовой кислоты (WO2006091671). ЖХМС (Способ 5): Rt 4,36 мин, m/z 489 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₄-MeOH): 1,27 (9H, с), 1,39 (6H, т, J 6,65), 1,81-1,82 (1H, м), 2,06 (1H, м), 2,19 (2H, м), 3,53-3,62 (1H, м), 4,99 (1H, с), 5,63 (1H, с), 6,38 (1H, с), 6,96 (1H, д, J 8,22), 7,23 (1H, дд, J 9,86 и 2,09), 7,34-7,35 (3H, м), 7,43 (1H, д, J 7,45), 7,69 (1H, дд, J 9,85 и 0,79), 8,24 (1H, д, J 2,02), 9,24 (1H, с).

Пример 17

N-(5-трет-бутил-3-{3-[(1S,4S)-4-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-уреидо}-2-метокси-фенил)-метансульфонамид

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям e и f, исходя из продукта стадии b Примера 2 и 2,2,2-трихлорэтилового сложного эфира (5-трет-бутил-3-метансульфониламино-2-метокси-фенил)-карбаминовой кислоты. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,31 мин, m/z 621 [MH^*]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₄-MeOH): 1,31 (9H, с), 1,47 (6H, дд, J 12,55 и 6,88), 1,92-1,93 (1H, м), 2,29-2,31 (3H, м), 3,03 (3H, с), 3,50-3,59 (1H, м), 3,75 (3H, с), 5,12 (1H, м), 5,58 (1H, м), 7,16 (1H, д, J 2,30), 7,33-7,34 (4H, м), 7,45 (1H, д, J 7,68), 7,66 (1H, дд, J 9,90 и 0,81), 8,00 (1H, д, J 2,31), 8,05 (1H, д, J 1,98).

Пример 18

(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[9-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-цис-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ил]-мочевина

а. (+/-) Цис-9-амино-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ол

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям а и b, используя 9-азидо-6,7,8,9-тетрагидро-бензоциклогептен-5-он. Диастереоизомеры разделяли посредством ФКХ, и региоизомеры идентифицировали после анализа NOE(SY). ЖХМС (Способ 3): Rt 1,44 мин, m/z 178 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,69-1,70 (3H, м), 2,06-2,07 (1H, м), 2,18-2,19 (1H, м), 2,49-2,51 (1H, м), 4,26 (1H, дд, J 5,97 и 1 ,56), 4,68 (1H, д, J 6,36), 7,15-7,22 (3H, м), 7,29 (1H, д, J 7,19).

b. (+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[9-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-цис-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ил]-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям e и f, исходя из продукта стадии a Примера 18. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,84 мин, m/z 592 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,24 (12H, м), 1,34 (3H, д, J 6,82), 1,4-2,2 (6H, м), 2,36 (3H, с), 3,43 (1H, м), 5,03-5,08 (1H, м), 5,71 (1H, м), 6,26 (1H, с), 7,11 (1H, м), 7,21-7,39 (8H, м), 7,44-7,48 (1H, м), 7,67 (1H, д, J 9,83), 7,91 (1H, с), 8,34 (1H, шир. с).

Пример 19

(+/-) 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[9-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-транс-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ил]-мочевина

a. (+/-) Транс-9-амино-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ол.

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям а и b, используя 9-азидо-6,7,8,9-тетрагидро-бензоциклогептен-5-он. Диастереоизомеры разделяли посредством ФКХ, и региоизомеры идентифицировали после анализа NOE(SY). ЖХМС (Способ 3): Rt 0,81 мин, m/z 178 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,57-2,14 (6H, м), 4,51 (1H, м), 5,12 (1H, м), 7,21-7,22 (2H, м), 7,36 (2H, м).

b. (+/-)-1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[9-(3-изопропил-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-транс-6,7,8,9-тетрагидро-5H-бензоциклогептен-5-ил]-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 1, стадиям e и f исходя из соединения стадии a Примера 19. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,87 мин, m/z 592 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,11 (3H, д, J 6,82), 1,17 (3H, д, J 6,84), 1,21 (9H, с), 1,69-1,71 (4H, м), 2,24 (2H, м), 2,33 (3H, с), 3,31 (1H, м), 5,47 (2H, м), 6,24 (1H, с), 7,02-7,03 (1H, м), 7,09-7,24 (4H, м), 7,30-7,32 (5H, м), 7,59 (1H, д, J 9,87), 7,98 (1H, с), 8,18 (1H, с).

Пример 20

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-((1S,4S)-4-{3-[2-(2-гидрокси-этилсульфанил)-фенил]-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси}-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-мочевина

a. 6-Фтор-3-{2-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)-этилсульфанил]-фенил}-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин

Раствор 2-[2-(6-фтор-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-3-ил)-фенилсульфанил]-этанола (400 мг, 1,38 ммоль), 4-метилбензолсульфоновой кислоты (65 мг, 0,345 ммоль) и 3,4-дигидро-2H-пирана (251 мкл, 2,76 ммоль) в ДХМ (5 мл) перемешивали при КТ в атмосфере азота в течение 36 ч. Реакционную смесь разбавляли ДХМ и экстрагировали насыщенным раствором NaHCO₃. Органический слой сушили над MgSO₄, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали посредством ФКХ, используя MeOH в ДХМ (от 0 до 5%) с получением соединения заголовка в виде бледно-желтого масла (381 мг, 74%). ЖХМС (Способ 3): Rt 3,10 мин, m/z 374 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): 1,49 (6H, м), 3,01-3,02 (2H, м), 3,42-3,59 (2H, м), 3,80-3,80 (2H, м), 4,52 (1H, м), 7,34-7,35 (2H, м), 7,55-7,55 (2H, м), 7,67-7,68 (2H, м), 7,90 (1H, дд, J 9,97 и 4,82).

b. (1S,4S)-4-(3-{2-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)-этилсульфанил]-фенил}-1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-иламин

Раствор соединения стадии а Примера 20 (381 мг, 1,02 ммоль), стадии b Примера 2 (183 мг, 1,12 ммоль), трет-бутоксида калия (125 мг, 1,12 ммоль) и DMPU (492 мкл, 4,08 ммоль) нагревали при 50°C в течение 2 ч, затем при 80°C в течение 1,5 ч. Реакционную смесь охлаждали до КТ и распределяли между H₂O-EtOAc. Органический слой сушили над MgSO₄, отфильтровывали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали посредством ФКХ, используя 2M NH₃-MeOH в ДХМ (от 0 до 50%) с получением соединения заголовка (146 мг, 28%). ЖХМС (Способ 3): Rt 2,29 мин, m/z 517 [MH⁺].

c. 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,4S)-4-(3-{2-[2-(тетрагидро-пиран-2-илокси)-этилсульфанил]-фенил}-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Раствор соединения стадии b Примера 20 (60 мг, 0,11 ммоль), DIPEA (26 мкл 0,15 ммоль) и 2,2,2-трихлорэтил-3-трет-бутил-1-п-толил-1H-пиразол-5-илкарбамата (56 мг, 0,138 ммоль) в диоксане (5 мл) нагревали при 80°C в течение 20 ч. Реакционной смеси давали охладиться до КТ, ее распределяли между H₂O-ДХМ, органическую фазу сушили (MgSO₄) и концентрировали в вакууме. Остаток очищали посредством ФКХ, используя MeOH в ДХМ (от 0 до 5%) с получением соединения заголовка в виде желтой пены (38 мг, 45%). ЖХМС (Способ 3): Rt 4,09 мин, m/z 772 [MH⁺].

d. 1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-((1S,4S)-4-{3-[2-(2-гидрокси-метилсульфанил)-фенил]-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиридин-6-илокси}-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-мочевина

Раствор стадии c Примера 20 (38 мг, 0,05 ммоль) и 4-метилбензолсульфоновой кислоты (9 мг, 0,05 ммоль) в MeOH (2 мл) перемешивали при КТ в течение 3 ч, затем при 60°C в течение 5 ч. Смесь охлаждали до КТ и концентрировали в вакууме. Остаток очищали посредством ФКХ, используя MeOH в ДХМ (от 0 до 10%) с получением соединения заголовка в виде желтого твердого вещества (15 мг, 44%). ЖХМС (Способ 5): Rt 4,83 мин, m/z 688 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₆-DMSO): 1,26 (9H, с), 1,69 (1H, м), 2,00-2,11 (3H, м), 2,35 (3H, с), 3,01 (2H, т, J 6,60), 3,50 (2H, т, J 6,60), 4,87 (1H, м), 5,55 (1H, м), 6,32 (1H, с), 6,98 (1H, д, J 8,10), 7,11 (4H, д, J 7,86), 7,31-7,33 (5H, м), 7,47 (4H, м), 7,63-7,71 (1H, м), 7,79 (1H, с), 7,96 (1H, д, J 3,40).

Пример 21

1-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-3-[(1S,4S)-4-(3-трет-бутил[1,2,4]триазоло[4,3a]пиридин-6-илокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично Примеру 2. ЖХМС (Способ 5): Rt 4,86 мин, m/z 592 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d₄-MeOH): 1,29 (9H, с), 1,50 (9H, с), 1,72-1,80 (1H, м), 2,11-2,19 (2H, с), 2,22-2,29 (1H, с), 2,37 (3H, с), 4,99 (1H, т, J 4), 5,46 (1H, т, J 4), 6,32 (1H, с), 7,18-7,34 (10H, м), 7,63-7,65 (1H, м), 7,93 (1H, с).

Пример 22

N-(4-{(1S,4S)-4-[3-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-уреидо]-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-илоксиметил}-пиридин-2-ил)-2-метокси-ацетамид

a. Трет-бутиловый сложный эфир ((1S,4S)-4-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил)-карбаминовой кислоты

Раствор соединения стадии b Примера 2 (0,47 г, 2,9 ммоль) и ди-трет-бутилдикарбонат (0,7 г, 3,19 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) перемешивали при КТ в течение 20 ч. Растворители удаляли в вакууме, и остаток очищали посредством ФКХ, используя EtOAc в циклогексане (от 0 до 40%) с получением соединения заголовка в виде розового твердого вещества (0,56 г, 74%). ¹H ЯМР (400 МГц, d6-DMSO): 1,41 (9H, с), 1,62 (2H, м), 1,95-2,14 (2H, м), 4,54 (1H, м), 4,66 (1H, м), 5,18 (1H, д, J 6,29), 7,18-7,19 (3H, м), 7,41-7,43 (1H, м).

b. Трет-бутиловый сложный эфир [(1S,4S)-4-(2-амино-пиридин-4-илметокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-карбаминовой кислоты

Раствор соединения стадии а Примера 21 (240 мг, 0,912 ммоль) в ДМФА (5 мл), охлаждали до 0°C, обрабатывали гидридом натрия (70 мг, 1,82 ммоль) и гидробромидной солью 4-бромметил-пиридин-2-иламина (249 мг, 0,93 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, затем давали ей возможность нагреться до КТ. Растворитель упаривали в вакууме, и остаток очищали посредством ФКХ, используя EtOAc в ДХМ (от 0 до 100%) с получением соединения заголовка в виде коричневой камеди (145 мг, 43%). ЖХМС (Способ 3): Rt 2,47 мин, m/z 370 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d6-DMSO): 1,43 (9H, с), 1,62-1,64 (1H, м), 1,80-1,82 (1H, м), 2,08 (1H, м), 2,16-2,25 (1H, м), 4,46-4,49 (3H, м), 4,72 (1H, м), 5,86 (2H, шир. с), 6,44-6,45 (2H, м), 7,19-7,27 (3H, м), 7,37-7,38 (1H, м), 7,84 (1H, д, J 5,16).

c. 4-((1S,4S)-4-Амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-илоксиметил)-пиридин-2-иламин

Раствор соединения стадии b Примера 21 (130 мг, 0,35 ммоль) и ТФУ (1 мл) в ДХМ (5 мл) перемешивали при КТ в течение 2 ч и концентрировали в вакууме с получением соединения заголовка в виде оранжевой камеди (68 мг, 72%). ЖХМС (Способ 3): Rt 0,31 мин, m/z 270 [MH+].

d. 1-[(1S,4S)-4-(2-амино-пиридин-4-илметокси)-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-ил]-3-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-мочевина

Соединение заголовка было получено аналогично стадии c Примера 20, исходя из продукта стадии c Примера 21. ЖХМС (Способ 3): Rt 2,64 мин, m/z 525 [MH+].

e. N-(4-{(1S,4S)-4-[3-(5-трет-бутил-2-п-толил-2H-пиразол-3-ил)-уреидо]-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-1-илоксиметил}-пиридин-2-ил)-2-метокси-ацетамид

Раствор соединения стадии d Примера 21 (40 мг, 0,076 ммоль), DIPEA (28 мкл, 0,167 ммоль) и метоксиацетилхлорида (15,2 мкл, 0,16 ммоль) в ДХМ (1 мл) перемешивали при КТ в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и остаток очищали посредством ВЭЖХ (от 30 до 95% CH₃CN в H₂O+0,1% муравьиной кислоты) с получением соединения заголовка в виде белого твердого вещества (21 мг, 46%). ЖХМС (Способ 5): Rt 5,05 мин, m/z 597 [MH⁺]. ¹H ЯМР (400 МГц, d6-DMSO): 1,26 (9H, с), 1,62-1,68 (1H, м), 2,05-2,07 (3H, м), 2,35 (3H, с), 3,36 (3H, с), 4,05 (2H, с), 4,63-4,64 (3H, м), 4,84 (1H, м), 6,31 (1H, с), 6,96 (1H, д, J 8,33), 7,10 (1H, д, J 5,15), 7,28-7,29 (7H, м), 7,40-7,44 (1H, м), 7,98 (1H, с), 8,11 (1H, с), 8,26 (1H, д, J 5,10), 9,93 (1H, с).

Биологические анализы

Анализ киназы р38

Человеческий рекомбинантный фермент p38, экспрессируемый в E. coli и активируемый посредством инкубации с ферментом MKK6 (Calbiochem #559324) использовали в качестве источника ферментной активности.

Анализ осуществляли в высокосвязывающих, прозрачных, плоскодонных 96-луночных аналитических планшетах, которые покрывали рекомбинантной ATF-2 (Biosource #PHF0043). Тестируемые соединения инкубировали с киназой р38 в течение 2 ч перед инициацией киназного анализа посредством добавления АТФ для получения аналитической концентрации, равной 250 мкМ. Фосфорилирование ATF-2 обнаруживали и количественно оценивали, используя ELISA. Тест состоял из последовательной инкубации в присутствии против-фосфо-ATF2, биотинилированных против-IgG и стрептавидин-HRP. Инкубация с HRP хромогенным субстратом (TMB) приводит к поглощению, которое является пропорциональным количеству продуцируемого фосфорилированного субстрата. Поглощение обнаруживают, используя устройство для считывания многолуночных планшетов.

Соединения разбавляют в ДМСО перед добавлением к аналитическому буферу, причем конечная концентрация ДМСО в анализе составляет 1%.

IC₅₀ определяют как концентрацию, при которой данное соединение достигает 50% ингибирования от контроля.

Результаты показаны в следующей Таблице:

Таблица 1
Пример	ингибирование р38а
Пример 1	++++
Пример 2	++++
Пример 3	++++
Пример 4	++++
Пример 5	+++
Пример 6	++++
Пример 7	++++
Пример 8	++
Пример 9	++
Пример 10	++++
Пример 11	++++
Пример 12	++
Пример 13	++++
Пример 14	+
Пример 15	+
Пример 16	++++
Пример 17	++++
Пример 18	+++
Пример 19	+++
Пример 20	++++
Пример 21	НТ
Пример 22	++++

В приведенной выше таблице, активности связывания p38α (значения IC₅₀) указаны следующим образом: <7000-500 нМ '+'; <500-100 нМ '++'; 10-<100 нМ '+++'; <10 нМ '++++'. Все тестируемые соединения проявляли значения IC₅₀ <7000 нМ. НТ - не тестировали.

Функциональный анализ p38

Ингибирование клеточного p38 подавляет высвобождение TNF-α, функциональный ответ которого количественно оценивают посредством измерения количества TNF-α в супернатантах ЛПС-активированных клеток THP-1 (иммортализованная моноцитарная клеточная линия) или моноядерных клеток периферической крови (PBMC's), выделенных из свежесобранной человеческой крови.

Клетки, высеваемые в 96-луночных планшетах, предварительно обрабатывают посредством добавления ингибиторов p38 в течение 1 ч с последующим добавлением липополисахарида (ЛПС) для активации выработки и высвобождения цитокинов. Количество TNFα, высвобождаемого в клеточные супернатанты, количественно оценивают, используя набор для фермент-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA) от R&D Systems (продукт DY210), следуя инструкциям изготовителя.

Соединения разбавляют в ДМСО перед добавлением, причем конечная концентрация ДМСО в анализе составляет 0,3%. EC₅₀ определяют как концентрацию, при которой данное соединение достигает 50% ингибирования от контроля. Результаты тестируемых соединений показаны в Таблице 2:

Таблица 2
Пример	EC50 (THP-1)
Пример 1	++++

Пример 2	++++
Пример 3	++++
Пример 4	++++
Пример 6	++++
Пример 7	++++
Пример 10	++++
Пример 11	++++

В Таблице 2 выше, значения EC₅₀ указаны следующим образом: <7000-500 нМ '+'; <500-100 нМ '++'; 10 -<100 нМ '+++'; <10 нМ '++++'. Все тестируемые соединения проявляли значения EC₅₀ <2000 нМ.

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:

где
R¹ представляет собой радикал формулы (IA), (IB) или (IC):

где
R^4b представляет собой C₁-С₆ алкил, С₃-С₆ циклоалкил, фенил, который необязательно является замещенным 1-2 заместителями, выбранными из галогена, гидрокси или О-бензила; или радикал формулы (IIa) или (IIb)

где n равно 1 или 2; a R³ и R⁴ представляют собой независимо Н или C₁-С₆ алкил;
R^3b представляет собой необязательно замещенный C₁-C₆ алкил, где заместитель выбран из (C₁-C₆) алкокси;
Y представляет собой -O-;
А представляет собой циклоалкиленовый радикал, имеющий 5, 6 или 7 атомов кольца, конденсированных с фенильным кольцом;
R² представляет собой радикал формулы (IIIa), (IIIb),(IIIc):

где
q равно 0, 1, 2 или 3;
R⁷ представляет собой -СН₃;
R⁸ представляет собой -СН₃ или -С₂Н₅ и
каждое наличие R⁶ представляет собой независимо Н, C₁-С₆ алкил.

2. Соединение по п.1 или 2, где А представляет собой дивалентный радикал формулы (Va) в любой ориентации:

где t равно 1, 2 или 3.

3. Соединение по п.1, где -NH-A-Y- представляет собой дивалентный радикал, имеющий одну из стереоспецифических формул (В), (С), (D), (Е), (F), (G), (Н), (I) или (J), где Y является таким, как определен со ссылкой на формулу (I):

4. Соединение по п.3, где -NH-A-Y- имеет формулу (В), (С), (D), (Е), (I) или (J), как определено в п.3, и где Y представляет собой -O-.

5. Соединение по п.1, где R^4b представляет собой изопропил, циклопентил или фенил, который необязательно является замещенным одной или двумя группами, выбранными из галогена и гидрокси.

6. Соединение по п.1, где R^4b представляет собой 2,6-дихлорфенил, 2-хлорфенил или 2-гидроксифенил.

7. Соединение по п.1, где R^3b представляет собой метоксиметил.

8. Соединение по п.1, где R² представляет собой группу (IIIb) или (IIIc), где R⁷ представляет собой метил и R⁸ представляют собой этил или метил.

9. Фармацевтическая композиция, ингибирующая активность МАР-киназы р38, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп.1-8, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями.

10. Композиция по п.9, которая является приспособленной для ингаляции для легочного введения.

11. Соединение по п.1 для применения при лечении заболевания или состояния, которое имеет положительный результат от ингибирования активности МАР-киназы р38.