Способ оценки уровня антител, специфичных к различным вариантам hbsag вируса гепатита в

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммунобиотехнологии, и может быть использовано для оценки потенциала, эффективности и специфической активности вакцин против вируса гепатита В (ВГВ), для изучения антигенных свойств HBsAg с разными субтипами и несущих различные мутации, в том числе серологически значимые мутации иммунологического и вакцинального ускользания, а также для клинической диагностики. Сущность изобретения: при оценке уровня специфических по отношению к тому или иному варианту HBsAg антител, полученных в результате иммунизации, используют сэндвич-ИФА. В качестве иммуносорбента применяют полистироловые планшеты, покрытые поликлональными антителами к HBsAg. Планшеты обрабатывают нативным или рекомбинантным HBsAg, охарактеризованным по генотипу, субтипу и наличию мутаций, после чего добавляют тестируемую сыворотку. На финальном этапе планшеты обрабатывают конъюгатом антител к суммарным иммуноглобулинам IgG, IgM и IgA с пероксидазой хрена и выявляют связавшийся конъюгат по цветной реакции с ТМБ. Способ позволяет увеличить спектр тестируемых антител, специфичных к различным формам HBsAg вируса гепатита В, включая субтипические и мутантные формы, а также провести количественную оценку уровня этих антител. 6 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммунобиотехнологии, и может быть использовано для оценки потенциала, эффективности и специфической активности вакцин против вируса гепатита В (ВГВ), для изучения антигенных свойств HBsAg с разными субтипами и несущих различные мутации, в том числе серологически значимые мутации иммунологического и вакцинального ускользания, а также для клинической диагностики.

Классическая диагностика больных с ВГВ основывается не только на выявлении различных антигенов вируса, в частности HBsAg, но также на определении напряженности гуморального иммунитета, определяемого по уровню антител к антигенам этого вируса, в том числе анти-HBsAg антител [1]. Для оценки течения инфекционного процесса и его исхода важное клиническое значение имеет динамический контроль за системой HBsAg. Эффективность иммунизации оценивают по концентрации антител к HBsAg у вакцинированных лиц [2]. Тем не менее, широко распространенные во всем мире ИФА тест-системы для выявления антител к HBsAg ВГВ не способны различать анти-HBsAg антитела, обладающие разной специфичностью, т.е. направленные к разным вариантам HBsAg, мутантным и субтипическим. А это было бы актуально для разработки и/или оценки потенциала новых вакцин, направленных против гепатита В. Например, по концентрации пост-вакцинальных антител к какому-либо мутантному HBsAg можно сделать заключение о наличии серопротективного уровня в отношении данного мутанта ВГВ.

Соответствующие разделы нормативной документации на вакцины против гепатита В указывают, что специфическую активность вакцин можно определять как методом in vivo на лабораторных животных, так и методом in vitro с применением различных иммунохимических методов исследования. При оценке специфической активности вакцины методом in vivo проводится количественное определение уровня антител в сыворотках лабораторных животных к HBsAg с использованием подходящего иммунохимического метода (ИФА, РИА) [3, 4]. Определяется распределение уровней реактивности в сыворотке неиммунизированных животных и выбирается наибольший уровень реактивности неиммунизированного животного. Любой уровень антител сыворотки иммунизированного животного, превышающий уровень реактивности неиммунизированного животного, считается сероконверсией. Специфическая активность исследуемой вакцины по отношению к референс-препарату определяется статистическим методом пробит-анализа. В соответствии с требованиями Европейской фармакопеи, значение верхнего допустимого предела специфической активности, определенного при 95% доверительном интервале, должно быть не ниже 0,5.

Для определения специфической активности вакцин против гепатита В методом in vitro рекомендуется применять твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) и радиоиммунный анализ (РИА) с использованием моноклональных антител против иммуногенных эпитопов [4, 5, 6]. В процессе постановки реакции необходимо приготовить достаточное число разведений исследуемой вакцины и референс-препарата, полученные данные обрабатываются по методу параллельных линий. Критерии приемлемости для референс-препарата устанавливаются Национальным органом контроля в соответствии с результатами валидации метода. Существуют методы количественного электрофореза, иммунофлюоресценции и одиночной радиальной иммунодиффузии, однако на практике применяется исключительно метод ИФА с использованием валидированной иммуноферментной тест-системы «Abbott Auszyme Monoclonal», предназначенной для выявления - HBsAg. Принцип метода заключается в количественном определении HBsAg по отношению к референс-образцу специфической активности рекомбинантной вакцины против гепатита В. Тем не менее, не существует единого референс-препарата для всех вакцин [3]. Следует учитывать, что оценка специфической активности вакцин в данном варианте анализа вообще не направлена на выявление и характеризацию пост-вакцинальных антител и подразумевает только лишь оценку HBsAg антигена - специфического компонента вакцины.

Таким образом, вышеупомянутые методы не предназначены для углубленной характеристики спектра анти-HBsAg, получаемого в результате иммунизации, и не способны оценить достигаемый серопротективный уровень в отношении мутантных форм и субтипических вариантов HBsAg.

Для выявления анти-HBsAg были также предложены тест-системы, основанные на другом принципе. Например, в патенте RU 2360253 C2 от 27.06.2009 был описан способ выявления антител к антигенам вирусов гепатита А, В, С. Способ характеризовался тем, что одновременно определяли антитела классов G и М к антигенам вирусов гепатита А, В, С с помощью иммунохроматографического стрипа, состоящего из стекловолоконной несорбирующей матрицы, с нанесенными и иммобилизованными с помощью высушивания полосами, содержащими конъюгаты окрашенных частиц с моноклональными антителами к иммуноглобулинам G и М человека. Кроме стекловолоконной матрицы иммунохроматографический стрип содержит пластиковую подложку, покрытую адгезионным слоем с низкой проницающей способностью, на которой смонтирована микропористая нитратцеллюлозная мембрана с напыленной на прилежащую к подложке сторону защитной полимерной основой, причем на мембрану с незащищенной стороны нанесены перпендикулярно длинной стороне стрипа смеси антигенов вирусов гепатита А, В, С из растворов с концентрацией 0,1-1 мг/мл. Стрип смачивают исследуемой сывороткой крови и при обнаружении окрашенной полосы в районе полосы антигенов гепатита А выявляют антитела к антигену вируса гепатита А, при обнаружении окрашенной полосы в районе полосы антигенов гепатита В выявляют антитела к антигену вируса гепатита В, при обнаружении окрашенной полосы в районе полосы антигенов гепатита С выявляют антитела к антигену вируса гепатита С, которые образуются при связывании антител сыворотки крови с коньюгатами антител к иммуноглобулинам G и М с окрашенными частицами [7]. Таким образом, предложенный тип тест-системы не имеет возможности идентифицировать антитела с различной специфичностью по отношению к вариантам самого антигена вируса гепатита В.

Известна нанодиагностическая тест-система для выявления вируса гепатитов, включающая использование двухканального биосенсора "резонансное зеркало" с биочипом, состоящим из биосенсорной кюветы. В основании этой кюветы расположена призма с сопряженным с ней волноводом, образованным из слоя среды с высоким показателем преломления - "nel" и слоя кварца с низким показателем преломления "ncl" толщинами порядка нескольких сотен нанометров в зависимости от материала слоя, к чувствительной поверхности которого, являющейся одновременно поверхностью дна кюветы, иммобилизуются молекулы-зондов. Эти зонды образуют в биологической жидкости специфичные комплексы с макромолекулярными маркерами заболеваний в поверхностном к волноводу слое размером нескольких сотен нанометров. Это происходит путем взаимодействия молекул антител (анти-HBs) и HBsAg (антигена вируса гепатита В), и/или гибридизацией олигонуклеотидов с комплементарными участками к ДНК вируса гепатита В, с последующим определением изменения коэффициента преломления света в поверхностном слое на границе волновода (заявка на изобретение RU 2004134192/15). Недостатком данной системы является необходимость наличия специальных приборов для детекции и интерпретации полученных результатов. Кроме того, данный вариант не предусматривает дифференциацию специфичности анти-HBsAg.

Отдельной областью в разработке методов, позволяющих определять антитела к ВГВ, является разработка сывороточных панелей, охарактеризованных в отношении различных антигенов вируса гепатита В и антител к этим антигенам. Например, в патенте RU 2367960 C2 от 20.09.2009 разработанная панель содержит весь спектр антител к ВГВ и позволяет контролировать эффективность применяемого способа лечения гепатита В [8] (ближайший аналог). Однако данная панель включает только сыворотки, откалиброванные по HBsAg дикого типа, и не охарактеризована на содержание антител к HBsAg, относящегося к разным субтипам и мутантным формам.

Таким образом, в настоящее время не были описаны подходы по определению специфичности анти-HBsAg антител в сыворотках иммунизированных животных и людей, способные различать и определять полуколичественно (количественно) разновидности антител, специфических к мутантным вариантам HBsAg, а также к различным субтипам HBsAg. Такие методы отсутствуют, несмотря на существование моноклональных антител, распознающих различные мутантные и субтипические варианты HBsAg, и использование их в тест-системах по выявлению HBsAg, как, например, в опубликованной работе [9].

Предложенный способ оценки уровня специфических по отношению к тому или иному варианту HBsAg антител, полученных в результате иммунизации, основан на использовании метода сэндвич-ИФА. В качестве иммуносорбента применяются полистироловые планшеты, покрытые поликлональными антителами к HBsAg. Эти планшеты обрабатывают нативным или рекомбинантным HBsAg, охарактеризованным по генотипу, субтипу и наличию мутаций. Затем добавляют тестируемую сыворотку. Для каждой тестируемой сыворотки ставится дополнительный отрицательный контроль, выявляющий так называемый «собственный фон». Для этого сыворотки параллельно тестируются в лунках, в которые на предыдущей стадии проведения реакции вносили буфер для разведения образцов (например, ФСБ-Т) вместо HBsAg. С целью контроля за корректностью получаемых результатов при осуществлении способа можно использовать в качестве положительных контролей моноклональные антитела, реагирующие с HBsAg дикого типа, а также мутант- (или субтип-) специфические антитела (как описано в пр. 1). На финальном этапе планшеты обрабатывают конъюгатом антител к суммарным иммуноглобулинам IgG, IgM и IgA с пероксидазой хрена и выявляют связавшийся конъюгат по цветной реакции с ТМБ. При обработке полученных результатов из величины сигнала в лунках с соответствующим HBs-антигеном вычитают «собственный фон» данной конкретной сыворотки в лунках с ФСБ-Т-контролем. Эта «дельта» и представляет собой искомую величину специфической реакции.

Предложенный способ позволяет не только различать антитела, реагирующие с HBsAg дикого типа, или с HBsAg, несущим различные интересующие мутации, или субтипические варианты HBsAg, но и определять титр специфических антител в сыворотках.

Техническим результатом изобретения является увеличение спектра тестируемых антител, специфичных к различным формам HBsAg вируса гепатита В, включая субтипические и мутантные формы, а также количественная оценка уровня этих антител.

Сущность способа

Постановка состоит из следующих этапов:

1. В лунки планшета с иммобилизованными поликлональными антителами к HBsAg внести по 100 мкл раствора природного HBsAg дикого типа, мутантного HBsAg или рекомбинантного HBsAg и, для постановки контроля «собственного фона», внести ФСБ-Т. Инкубировать 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыть 5-кратно ФСБ-Т. Отбить планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

2. Внести тестируемые образцы антисывороток в оптимальных для анализа разведениях по 100 мкл по схеме. Инкубировать 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыть 5-кратно ФСБ-Т. Отбить планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

3. Приготовить раствор конъюгата (КГ) с пероксидазой хрена оптимальной концентрации.

4. Приготовленный рабочий раствор КГ по 100 мкл внести в лунки отмытого тест-планшета. Инкубировать 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыть 8-кратно ФСБ-Т. Отбить планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

5. Приготовить рабочий раствор субстрата (ТМБ), добавив 6 мл раствора ТМБ к 6 мл дилюента для ТМБ.

6. Внести в лунки по 100 мкл раствора субстрата. Инкубировать 30 мин при +37°C во влажной камере.

7. Остановить реакцию добавлением 50 мкл 2М H2SO4 (стоп-реагент).

8. Считать результаты при длине волны 450 нм и дифференцирующей волне 620 нм.

Изобретение поясняется двумя примерами и иллюстрируется таблицами и графиками, представленными на фиг. 1-6.

Пример 1

Оценка уровня антител к HBsAg с мутацией G145R (Esc) в сыворотках мышей, иммунизированных рекомбинантными HBsAg дикого типа (референс-антиген) и HBsAg с данной мутацией.

Для иммунизации использовали следующие вакцины:

1. Референс-вакцина (ayw+adw). «Вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая, суспензия для внутримышечного введения». Содержит в 0,5 мл 5 мкг HBsAg(adw), 5 мкг HBsAg(ayw) и 0,25 мг гидроксида алюминия.

2. «Бубо-Унигеп» (ayw+adw+Esc). Содержит в 1,0 мл 10 мкг HBsAg(adw), 10 мкг HBsAg(ayw), 10 мкг HBsAg(Esc) и 0,5 мг гидроксида алюминия.

Для характеризации спектра специфичности антител, полученных после иммунизации мышей, использовали несколько HBsAg:

1. Нативный HBsAg ИМБИО (субтип ayw). Рекомендуемая концентрация раствора 2 мкг/мл.

2. Нативный HBsAg с мутацией G145R - сыворотка «111» (субтип adw3). Рекомендуемое разведение 1/100.

3. Нативный HBsAg с мутацией G145R - сыворотка «2043» (субтип ayw2). Рекомендуемое разведение 1/100.

4. Рекомбинантный HBsAg (Esc-19), моделирующий нативный вариант с мутацией G145R.

В качестве положительного контроля (контрольных антител к HBsAg) использовали моноклональные антитела 11F3, наиболее активно реагирующие с HBsAg дикого типа, но практически не распознающие HBsAg, несущий мутацию G145R, а также моноклональные антитела Н2, наиболее эффективно реагирующие с HBsAg, несущий мутацию G145R. Оптимальная концентрация антител Н2 составляет 200 нг/мл, а концентрация антител 11F3 - 100 нг/мл. Детальная постановка эксперимента описана ниже.

1. В лунки планшета с иммобилизованными поликлональными антителами к HBsAg внесли по 100 мкл раствора природного HBsAg дикого типа - ИМБИО, мутантного HBsAg - сыворотки 111 и 2043, рекомбинатного HBsAg (Esc-19) и для постановки контроля «собственного фона» внесли ФСБ-Т. Инкубировали 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыли 5-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

2. Внесли тестируемые образцы мышиных антисывороток в оптимальных для анализа разведениях по 100 мкл. В контрольные лунки внесли по 100 мкл раствора моноклональных антител 11F3 и Н2 в оптимальных концентрациях. Инкубировали 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыли 5-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

3. Приготовили рабочий раствор конъюгата антител кролика специфичных к суммарным иммуноглобулинам (IgG, IgA, IgM) мыши с пероксидазой хрена с концентрацией 0,4 мкг/мл в буфере, состоящем из 9,6 мл ФСБ-Т и 2,4 мл нормальной кроличьей сыворотки.

4. Приготовленный рабочий раствор конъюгата по 100 мкл внесли в лунки отмытого тест-планшета. Инкубировали 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыли 8-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

5. Приготовили рабочий раствор субстрата (ТМБ), добавив 6 мл раствора ТМБ к 6 мл дилюента для ТМБ.

6. Внесли в лунки по 100 мкл раствора субстрата. Инкубировали 30 мин при +37°C во влажной камере.

7. Остановили реакцию добавлением 50 мкл 2М H2SO4 (стоп-реагент).

8. Считали результаты при длине волны 450 нм и дифференцирующей волне 620 нм.

Результаты анализа сывороток после иммунизации референс-вакциной и вакциной Бубо-Унигеп приведены на фиг. 1-4. Из этих данных следует, что при однократной иммунизации мышей эти вакцины способствовали выработке антител, взаимодействующих с нативными мутантными антигенами 111 и 2043, а также с рекомбинантным мутантом Esc-19. Выработка антител происходила дозозависимым способом.

Сравнение количества антител, взаимодействующих с антигенами 2043 (ayw2) и 111 (adw3), после иммунизации вакциной с мутантом EscAg (G145R ayw2) показывает, что определяются антитела, выработанные на антиген соответствующего серотипа. Так, при иммунизации вакциной, содержащей мутантный антиген серотипа ayw2, количество мышей выработавших антитела именно к этому серотипу ayw2 (фиг. 4 - синий) намного превышает количество мышей, выработавших антитела к серотипу adw3 (фиг. 4 - зеленый).

Пример 2

Оценка уровня антител к HBsAg с мутацией G145R в сыворотках баранов, иммунизированных рекомбинантными HBsAg дикого типа (референс-антиген) и HBsAg с данной мутацией.

Для иммунизации использовали следующие вакцины:

1. Референс-вакцина (ayw+adw). «Вакцина гепатита В рекомбинантная дрожжевая, суспензия для внутримышечного введения». Содержит в 0,5 мл 5 мкг HBsAg(adw), 5 мкг HBsAg(ayw) и 0,25 мг гидроксида алюминия.

2. Вакцина «ESC-19». Содержит в 1,0 мл 22 мкг HBsAg (ESC-19) и 0,25 мг гидроксида алюминия. Расфасовано по 0,5 мл. Хранение при температуре +4°C.

Для характеризации спектра специфичности антител, полученных после иммунизации баранов, также используются HBsAg различных субтипов: ИМБИО (субтип ayw), сыворотка «111» (субтип adw3) и сыворотка «2043» (субтип ayw2) (см. выше).

Особенности данной постановки:

1. В лунки планшета с иммобилизованными поликлональными антителами к HBsAg внесли по 100 мкл раствора природного HBsAg дикого типа - ИМБИО, мутантного HBsAg - сыворотки 111, 2043 и для постановки контроля «собственного фона» внесли ФСБ-Т. Инкубировали 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыли 5-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

2. Внесли тестируемые образцы бараньих антисывороток в оптимальных для анализа разведениях по 100 мкл. Отмыли 5-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

9. Приготовили рабочий раствор конъюгата антител кролика специфичных к суммарным иммуноглобулинам (IgG, IgA, IgM) овцы с пероксидазой хрена с концентрацией 0,8 мкг/мл в буфере, состоящем из 7,6 мл ФСБ-Т, 2,4 мл нормальной козьей сыворотки и 2 мл 10% раствора БСА.

3. Приготовленный рабочий раствор конъюгата по 100 мкл внесли в лунки отмытого тест-планшета. Инкубировали 1 ч при +37°C во влажной камере. Отмыли 8-кратно ФСБ-Т. Отбили планшет на сухую чистую влаговпитывающую бумагу.

4. Приготовили рабочий раствор субстрата (ТМБ), добавив 6 мл раствора ТМБ к 6 мл дилюента для ТМБ.

5. Внесли в лунки по 100 мкл раствора субстрата. Инкубировали 30 мин при +37°C во влажной камере.

6. Остановили реакцию добавлением 50 мкл 2М H2SO4 (стоп-реагент).

7. Считали результаты при длине волны 450 нм и дифференцирующей волне 620 нм.

Результаты анализа сывороток после иммунизации приведены на фиг. 5 и фиг. 6. Как видно из представленных данных, ESC-антиген в составе моновакцины вызывал образование у иммунизированных овец специфических антител, реагирующих с нативным HBsAg дикого и мутантного типа. При этом итоговый иммунный ответ на нативные мутантные G145R варианты (ау и ad), развившийся после реиммунизации антигеном ESC-19, был намного сильнее, чем при реиммунизации референсной бивалентной вакциной.

Сравнение количества антител, взаимодействующих с мутантными антигенами, после иммунизации вакциной с мутантом EscAg (G145R) показывает, что определяются антитела, выработанные на соответствующий антиген. Так при двукратной иммунизации овец вакциной, содержащей мутантный антиген, уровень антител именно к мутантам G145R (фиг. 6 (В, С) - красный) намного превышает уровень антител к антигену дикого типа (фиг. 6 (А) - красный). И, наоборот, при вакцинации референс-вакциной определяется больше антител к антигену дикого типа, чем к мутантному антигену (фиг. 6 - зеленый).

Таким образом, предлагаемый способ дает возможность различать антитела, реагирующие с HBsAg дикого типа или с HBsAg разных серотипов, несущих мутацию G145R.

Источники информации

1. Ильина Е.Н., Фомина Е.Е., Артемов Е.К., Говорун В.М., Иваников И.О., Сюткин В.Е. Хронические вирусные заболевания печени // Методическое пособие для врачей - Москва. - 2011 г. - с. 21.

2. Кожанова Т.В., Клушкина В.В., Кюрегян К.К., Михайлов М.И. Оценка иммунологической эффективности массовой вакцинации против гепатита В // Медицинская вирусология - 2013. - Т. XXVIII (1). - с. 16-25.

3. Коровкин А.С. Сравнительная характеристика современных иммуноферментных тест-систем для определения специфической активности вакцин против гепатита В // Дисс. к.м.н. - Москва. - 2011 г. - с. 123.

4. Assay Of Hepatitis В Vaccine (rDNA) // European Pharmacopeia 4. - P. 175-176.

5. Saito H., Kurokawa M., Takahashi Т., Goto Y., Hashimoto T. Studies on the in vitro antigenicity test of the hepatitis В surface antigen preparation and its relationship to the in vivo potency estimate // Jpn. J. Med Sci. Biol. - 1983. - V. 36, N. 5. - P. 273-280.

6. Schofield T. In vitro versus in vivo concordance: a case study of the replacement of an animal potency test with an immunochemical assay // Dev. Biol (Basel). - 2002. - V. 111. - P. 299-304.

7. Зарайский Е.И., Яновский Ю.Г., Алехин А.И., Снегирева Н.С., Погорелова Л.В. Способ выявления антител к антигенам вирусов гепатитов // Патент RU 2360253 С2 от 27.06.2009. - с. 8.

8. Канев А.Н., Юдина И.В., Черепанова Н.С., Бектимиров Т.А., Шалунова Н.В., Мусина Е.Ф., Бочарова Н.Г. Способ изготовления панели сывороток для определения антител к вирусу гепатита В // Патент RU 2367960 С2 от 20.09.2009 г. - с. 13.

9. Swenson P.D., Riess J.T., Krueger L.E. Determination of HBsAg subtypes in different high risk populations using monoclonal antibodies // J. Virol Methods. - 1991. - V. 33, N. 1-2. - P. 27-38.

Способ оценки уровня антител, специфичных к различным формам HBsAg вируса гепатита В, в том числе субтипическим и мутантным формам, включающий сэндвич-ИФА, отличающийся тем, что образцы, содержащие HBsAg, охарактеризованный по генотипу, субтипу и наличию мутаций, наносят на полистироловые планшеты, покрытые поликлональными антителами к HBsAg, добавляют образец тестируемой сыворотки, затем планшеты обрабатывают конъюгатом антител к суммарным иммуноглобулинам IgG, IgM и IgA с пероксидазой хрена, и выявляют связавшийся конъюгат по цветной реакции с тетраметилбензидином, после чего проводят оценку уровня антител.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицинской вирусологии. Предложен способ получения диагностикума для обнаружения антигена гепатита С в реакции агломерации объемной (РАО).
Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии и представляет собой способ получения слабоположительной контрольной сыворотки, содержащей AD и AY субтипы HBsAg, включающий отбор донорских сывороток с помощью ИФА, титрование положительной сыворотки, содержащей AD & AY субтипы HBsAg в разводящем стабилизированном растворе, генотипирование, проведение теста термодеградации для установления сроков годности панели, отличающийся тем, что положительные контрольные сыворотки, содержащие AY и AD субтипы HBsAg, разводят до диапазона концентраций от 0,05 до 0,025 МЕ/мл и вязкости, равной вязкости нормальной сыворотки человека, а в качестве разводящего стабилизированного раствора используют отрицательную дефибринизированную и безлипидную сыворотку, не содержащую маркеры HBV инфекции, для выявления которой предназначена искомая тест-система.

Изобретение относится к технологии изготовления референс-панелей сывороток, содержащих антигены вирусных инфекций. .
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть применено для определения обострения течения хронического гепатита С у детей подростков. .
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в педиатрии, инфектологии и гепатологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и касается способа определения степени активности хронического гепатита. .
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике внутренних болезней. .
Изобретение относится к способу изготовления рабочего стандарта (PC) сывороток, содержащих антитела к вирусу гепатита С. .

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа определения, имеется ли у пациента с гепатитом В (HBV) повышенная вероятность положительного результата лечения гепатита В по сравнению со средней вероятностью в популяции пациентов с гепатитом В. Представленный способ включает установление, содержит ли содержащий нуклеиновую кислоту образец указанного пациента с гепатитом В ассоциированный с положительным результатом G аллель SNP rs 12356193. Изобретение позволяет определить, будет ли пациент с HBV отвечать на HBV-терапию до начала такой терапии, и дает возможность избежать лишних расходов и появления побочных эффектов и осложнений при лечении. 8 з.п. ф-лы, 24 ил., 3 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и касается способа прогнозирования эффективности лечения гепатита С у детей первого года жизни. Сущность способа: перед проведением противовирусной терапии у ребенка определяют полиморфизм генов, кодирующих IL28 (γIFN) rs809917 и rs12979860, и при наличии:- гомозиготных форм [ТТ] по гену rs809917 и [СС] по гену rs12979860 - прогноз благоприятный,- форм [TG] или [GG] по гену rs809917 и [ТТ] или [СТ] по гену rs12979860 - прогноз неблагоприятный.Способ позволяет заранее, до начала лечения скорректировать терапию, позволяет предсказать его эффективность и, тем самым, выделить группу детей, терапия которым строго показана ввиду очень высокого шанса на излечение до возникновения осложнений, и группу, в которой шанс на успех проводимой терапии минимален, и, учитывая длительность и относительную дороговизну препаратов при отсутствии эффективности, лечение не целесообразно. Предлагаемый способ прост и может найти широкое применение в клинической практике в стационарах и консультативно-диагностических центрах. 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммунобиотехнологии, и может быть использовано для оценки потенциала, эффективности и специфической активности вакцин против вируса гепатита В, для изучения антигенных свойств HBsAg с разными субтипами и несущих различные мутации, в том числе серологически значимые мутации иммунологического и вакцинального ускользания, а также для клинической диагностики. Сущность изобретения: при оценке уровня специфических по отношению к тому или иному варианту HBsAg антител, полученных в результате иммунизации, используют сэндвич-ИФА. В качестве иммуносорбента применяют полистироловые планшеты, покрытые поликлональными антителами к HBsAg. Планшеты обрабатывают нативным или рекомбинантным HBsAg, охарактеризованным по генотипу, субтипу и наличию мутаций, после чего добавляют тестируемую сыворотку. На финальном этапе планшеты обрабатывают конъюгатом антител к суммарным иммуноглобулинам IgG, IgM и IgA с пероксидазой хрена и выявляют связавшийся конъюгат по цветной реакции с ТМБ. Способ позволяет увеличить спектр тестируемых антител, специфичных к различным формам HBsAg вируса гепатита В, включая субтипические и мутантные формы, а также провести количественную оценку уровня этих антител. 6 ил., 2 пр.

Наверх