Анти-cd79b антитела и иммуноконъюгаты и способы их применения

Настоящая группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное анти-CD79b антитело. Также рассмотрены: полинуклеотид, вектор, клетка-хозяин и способ получения анти-CD79b антитела; иммуноконъюгаты, композиции, применение антитела и иммуноконъюгатов для получения лекарственного средства; способ определения присутствия CD79b в образце и способ получения иммуноконъюгата. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии и диагностике заболеваний, ассоциированных с CD79b. 13 н. и 44 з.п. ф-лы, 20 табл., 51 ил., 9 пр.

 

1. Анти-CD79b антитело, содержащее тяжелую цепь и легкую цепь,

где легкая цепь содержит последовательность SEQ ID NO:307 и

тяжелая цепь содержит последовательность SEQ ID NO:308.

2. Полинуклеотид, кодирующий антитело по п.1.

3. Вектор экспрессии, содержащий полинуклеотид по п.2.

4. Клетка-хозяин для продукции антитела по п.1, содержащая вектор по п.3.

5. Клетка-хозяин по п.4, которая представляет собой эукариотическую клетку-хозяин.

6. Иммуноконъюгат для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством, содержащий антитело по п.1, ковалентно соединенное с цитотоксическим средством.

7. Иммуноконъюгат по п.6, где указанное цитотоксическое средство выбрано из группы, состоящей из токсина, терапевтического средства, молекулы лекарственного средства, антибиотика, радиоактивного изотопа и нуклеолитического фермента.

8. Иммуноконъюгат для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством, содержащий структуру согласно формуле: Ab-(L-D)_р, где:

a) Ab представляет собой анти-CD79b антитело по п.1;

b) L представляет собой линкерную группу;

c) D представляет собой молекулу лекарственного средства; и

d) p варьируется от примерно 1 до 20.

9. Иммуноконъюгат по п.8, где L включает линкер, выбранный из одного или более из: 6-малеимидокапроила (MC), малеимидопропаноила (MP), валина-цитруллина (val-cit), аланина-фенилаланина (ala-phe), п-аминобензилоксикарбонила (PAB), N-сукцинимидил-4-(2-пиридилтио)пентаноата (SPP), N-сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилата (SMCC) и N-сукцинимидил-(4-йодацетил)аминобензоата (SIAB).

10. Иммуноконъюгат по п.8, где D выбран из группы, состоящей из майтанзиноида, ауристатина и доластатина.

11. Иммуноконъюгат по п.10, где D представляет собой ауристатин или доластатин, и где D представляет собой молекулу лекарственного средства формулы DE или DF:

и где каждый R² и R⁶ представляет собой метил, каждый R³ и R⁴ представляет собой изопропил, R⁵ выбран из H и метила, R⁷ представляет собой втор-бутил, каждый R⁸ независимо выбран из CH₃, O-CH₃, OH и H; R⁹ представляет собой H; R¹⁰ представляет собой арил; Z представляет собой –O– или –NH–; R¹¹ представляет собой H, C₁-C₈ алкил или –(CH₂)₂–O–(CH₂)₂–O–(CH₂)₂–O–CH₃; и R¹⁸ представляет собой –C(R⁸)₂–C(R⁸)₂–арил.

12. Иммуноконъюгат по п.8, где D выбран из MMAE и MMAF.

13. Иммуноконъюгат по любому из пп.8-12, где L включает val-cit, MC, PAB и/или MC-PAB.

14. Иммуноконъюгат по любому из пп.8-12, где L включает MC-val-cit-PAB.

15. Иммуноконъюгат по любому из пп.8-10, где D представляет собой майтанзиноид.

16. Иммуноконъюгат по п.15, где майтанзиноид выбран из DM1, DM3 и DM4.

17. Иммуноконъюгат по п.8 или 9, где иммуноконъюгат содержит структуру, выбранную из группы, состоящей из:

;

;

;

; и

;

где Val представляет собой валин и Cit представляет собой цитруллин.

18. Иммуноконъюгат по п.17, где иммуноконъюгат содержит структуру

19. Иммуноконъюгат по любому из пп.8-18, где p представляет собой значение от примерно 1 до примерно 8.

20. Иммуноконъюгат по любому из пп.8-19, где p представляет собой значение от примерно 2 до примерно 5.

21. Иммуноконъюгат для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством, содержащий структуру согласно формуле:

где Val представляет собой валин; Cit представляет собой цитруллин; p представляет собой значение от примерно 2 до примерно 5; и

Ab представляет собой анти-CD79b антитело по п.1.

22. Композиция для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством, содержащая эффективное количество антитела по п.1.

23. Композиция для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством, содержащая эффективное количество иммуноконъюгата по любому из пп.6-21.

24. Применение эффективного количества антитела по п.1 для получения лекарственного средства для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством.

25. Применение эффективного количества иммуноконъюгата по любому из пп.6-21 для получения лекарственного средства для лечения индивидуума, страдающего злокачественным В-клеточным пролиферативным расстройством.

26. Применение по п.24 или 25, где указанное злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство выбрано из группы, состоящей из лимфомы, миеломы, неходжкинской лимфомы (НХЛ), диффузной крупноклеточной B-клеточной лимфомы, агрессивной НХЛ, бессимптомной лимфомы, фолликулярной лимфомы, рецидивирующей агрессивной НХЛ, рецидивирующей бессимптомной НХЛ, рецидивирующей НХЛ, не поддающейся лечению НХЛ, не поддающейся лечению бессимптомной НХЛ, хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ), мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лейкоза, ретикулоэндотелиоза (РЭ), острого лимфоцитарного лейкоза (ОЛЛ) и лимфомы клеток коры головного мозга.

27. Применение по п.26, где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ).

28. Применение по п.26, где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому.

29. Применение по п.26, где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой рецидивирующий НХЛ или не поддающийся лечению НХЛ.

30. Применение по п.26, где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой фолликулярную лимфому.

31. Применение п.24 или 25, где лекарственное средство используется в комбинации с эффективным количеством другого терапевтического средства.

32. Применение по п.31, где терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из антитела, химиотерапевтического средства, цитотоксического средства, антиангиогенного агента, иммунодепрессанта, пролекарства, цитокина, антагониста цитокина, цитотоксической лучевой терапии, кортикостероида и ингибирующего рост средства.

33. Применение по п.31, где терапевтическое средство выбрано из группы, состоящей из одного или более из: тамоксифена, летрозола, эксеместана, анастрозола, иринотекана, цетуксимаба, фульвестранта, винорелбина, эрлотиниба, бевацизумаба, винкристина, мезилата иматиниба, сорафиниба, лапатиниба, трастузумаба, цисплатина, гемцитабина, метотрексата, винбластина, карбоплатина, паклитаксела, 5-фторурацила, доксорубицина, бортезомиба, мелфалана, преднизона и доцетаксела.

34. Применение по п.31, где терапевтическое средство представляет собой анти-CD20 антитело.

35. Применение по п.31, где терапевтическое средство представляет собой анти-CD20 антитело и где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой диффузную крупноклеточную B-клеточную лимфому.

36. Применение по п.31, где терапевтическое средство представляет собой анти-CD20 антитело и где злокачественное В-клеточное пролиферативное расстройство представляет собой фолликулярную лимфому.

37. Применение по любому из пп.34-36, где анти-СD20 антитело представляет собой ритуксимаб.

38. Применение по п.32, где терапевтическое средство представляет собой химиотерапевтическое средство.

39. Применение п.38, где химиотерапевтическое средство включает один или более из циклофосфамида, гидроксидаунорубицина, винкристина и преднизона.

40. Применение п.38, где химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизон.

41. Применение п.38, где химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизолон.

42. Применение п.38, где химиотерапевтический агент включает алкилирующий агент.

43. Применение п.34, где лекарственное средство используется в комбинации с эффективным количеством химиотерапевтического агента.

44. Применение п.43, где химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизон.

45. Применение п.43, где химиотерапевтический агент включает циклофосфамид, доксорубицин и преднизолон.

46. Применение п.43, где химиотерапевтический агент включает алкилирующий агент.

47. Применение по любому из пп.43-46, в котором злокачественное В-клеточное пролиферативное заболевание представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ).

48. Применение по п.47, где анти-СD20 антитело представляет собой ритуксимаб.

49. Применение по любому из пп.43-46, где злокачественное В-клеточное пролиферативное заболевание представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.

50. Применение по п.49, где анти-CD20 антитело представляет собой ритуксимаб.

51. Способ in vitro определения присутствия CD79b в биологическом образце, предположительно содержащем CD79b, включающий

приведение указанного образца в in vitro контакт с антителом по п.1 и

определение уровня связывания указанного антитела с CD79b в образце,

где связывание указанного антитела с CD79b в образце является показателем присутствия белка в образце.

52. Способ получения соединения иммуноконъюгата, содержащего анти-CD79b антитела (Ab) по п.1 и молекулу ауристатинового или майтанзиноидного лекарственного средства (D), где антитело связано с посредством одной или нескольких цистеиновых аминокислот с помощью линкерной группы (L) с D; где соединение имеет формулу I:

где p варьирует от примерно 1 до 20; где способ включает стадии:

(a) взаимодействия цистеиновой группы антитела с линкерным реагентом с образованием промежуточного соединения антитело-линкер Ab-L; и

(b) взаимодействия Ab-L с активированной молекулой лекарственного средства D с образованием иммуноконъюгата;

или включает стадии:

(c) взаимодействия нуклеофильной группы молекулы лекарственного средства с линкерным реагентом с образованием промежуточного соединения лекарственное средство–линкер D-L; и

(d) взаимодействия D-L с цистеиновой группой антитела; таким образом, с образованием иммуноконъюгата.

53. Способ по п.52, дополнительно включающий стадию экспрессии антитела в клетке яичников китайского хомячка (CHO).

54. Способ по п.52 или 53, дополнительно включающий стадию обработки экспрессируемого антитела восстановителем.

55. Способ по п.54, где указанный восстановитель выбран из TCEP и DTT.

56. Способ по п.54, дополнительно включающий стадию обработки экспрессируемого антитела окислителем после обработки восстановителем.

57. Способ по п.56, где указанный окислитель выбран из сульфата меди, дегидроаскорбиновой кислоты и воздуха.