Инъекционная фармацевтическая композиция, включающая трабектедин, для применения вне желудочно-кишечного тракта и способ её получения

Группа изобретений относится к области фармацевтики и касается инъекционной фармацевтической композиции, включающей трабектедин, для применения вне желудочно-кишечного тракта и способу ее получения. Инъекционная парентеральная фармацевтическая композиция трабектедина содержит первый эксципиент и второй эксципиент. Первый эксципиент представляет собой одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из моносахарида и полиола. Второй эксципиент представляет собой одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропил-бета-циклодекстрина, мальтодекстрина и полиэтиленгликоля. Инъекционная композиция трабектедина может быть получена путем восстановления лиофилизированного состава. Другим воплощением является способ получения указанной композиции, включающий следующие стадии: 1) растворяют трабектедин в кислотном буферном солевом растворе с получением буферного раствора трабектедина; 2) растворяют требуемые первый эксципиент и второй эксципиент в буферном солевом растворе и доводят рН до заданного значения; 3) хорошо перемешивают два раствора со стадии 1) и стадии 2), а затем доводят рН до заданного значения. Использование группы изобретений позволяет повысить стабильность композиции. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 17 табл., 2 ил., 10 пр.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к инъекционной парентеральной фармацевтической композиции трабектедина и способу ее получения.

Предшествующий уровень техники

Трабектедин (Эктеинасцидин-743, ЕТ-743) представляет собой алкалоид тетрагидроизохинолин, первоначально выделенный из морского организма Ecteinascidia turbinate и в настоящее время получаемый, в основном, путем химического синтеза. Трабектедин имеет уникальный и сложный механизм. Он может ингибировать транскрипцию гена, индуцирующего тепловой шок, и может также взаимодействовать с системой эксцизионной репарации нуклеозидов, сопряженной с транскрипцией, что приводит к образованию цепи летальной ДНК. Трабектедин обладает сильной in vitro активностью против множества линий опухолевых клеток, таких как саркома мягких тканей, лейкоз, меланома, рак молочной железы, немелкоклеточный рак легких и рак яичников.

Структура ЕТ-743 (Формула I) является следующей:

ЕТ-743 представляет собой сложное соединение с ограниченной растворимостью в чистой воде. Растворимость ЕТ-743 в воде может быть увеличена путем доведения рН раствора до 4. Однако ЕТ-743 имеет слабую термическую стабильность. Он быстро разрушается при комнатной температуре (25°С) и может храниться только в течение 1 месяца при охлаждении до 5°С. Поэтому трабектедин можно хранить в течение длительного времени только при -20°С, что значительно ограничивает его клиническое применение. Таким образом, необходимо улучшить термическую стабильность ЕТ-743 с помощью фармацевтики. Между тем, это также является большой проблемой для специалистов в данной области.

Основными примесями в трабектедине являются ЕТ-701, ЕТ-745, ЕТ-759В и ЕТ-789А (Synthesis of Natural Ecteinascidins (ET-729, ЕТ-745, ET-759B, ET-736, ET-637, ET-594) from Cyanosafracin B, Journal of Organic Chemistry 2003 68(23) Page 8859-8866). Среди них примесь ЕТ-701 является гидролизатом и представляет собой основную примесь во время процессов лиофилизации и хранения состава; примесь ЕТ-745 является продуктом восстановления трабектедина. Их структуры являются следующими:

В WO 0069441 раскрыт стерильный лиофилизированный состав, содержащий ЕТ-743, маннит и фосфатный буфер. Этот лиофилизированный состав можно использовать для внутривенной инъекции после восстановления и разведения. Однако этот состав является нестабильным при длительном хранении при охлаждении или при комнатной температуре. Его необходимо хранить при температуре от -15 до -25°С в темноте. В CN 102018714 A раскрыт лиофилизированный состав ЕТ-743, содержащий дисахарид, выбранный из группы, состоящей из лактозы, сахарозы и трегалозы. В ходе исследования было установлено, что эти составы демонстрируют разрушение активного ингредиента при хранении в течение 3 месяцев в ускоренных условиях при 40°С и относительной влажности 70%, что свидетельствует о том, что эти составы все еще нестабильны при хранении в течение длительного времени. Поэтому существует необходимость в разработке новой и стабильной композиции ЕТ-743.

Сущность изобретения

В настоящем изобретении предложена стабильная фармацевтическая композиция трабектедина. В частности, в настоящем изобретении предложена инъекционная фармацевтическая композиция для парентерального применения, включающая трабектедин и первый эксципиент, где первый эксципиент представляет собой одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из моносахарида и полиола. Предпочтительно первый эксципиент в соответствии с настоящим изобретением может быть выбран из группы, состоящей из моносахаридов, таких как одно или более чем одно вещество, выбранное из глюкозы, фруктозы и галактозы, а также может быть выбран из группы, состоящей из полиолов, таких как одно или более чем одно вещество, выбранное из сорбита, маннита, глицерина и лактита. Первым эксципиентом предпочтительно может быть глюкоза, сорбит или смесь этих двух веществ.

Основной функцией первого эксципиента в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению является улучшение стабильности активного ингредиента трабектедина в процессе лиофилизации.

В предпочтительном варианте осуществления композиция согласно настоящему изобретению также содержит второй эксципиент, который в основном играет защитную роль в процессе хранения. Второй эксципиент может быть выбран из группы, состоящей из высокополимерных материалов, таких как одно или более чем одно вещество, выбранное из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропил-бета-циклодекстрина, мальтодекстрина и полиэтиленгликоля.

Декстран, используемый в настоящем изобретении, предпочтительно является декстраном 40.

Вышеупомянутые первый эксципиент и второй эксципиент могут быть произвольно объединены. Предпочтительная комбинация включает первый эксципиент, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, и второй эксципиент, который является одним или более чем одним веществом, выбранным из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы и гмдроксипропил-бета-циклодекстрина; или первый эксципиент, выбранный из группы, состоящей из сорбита, и второй эксципиент, который является одним или более чем одним веществом, выбранным из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы и гидроксипропил-бета-циклодекстрина.

Хотя первый эксципиент, используемый в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению, может улучшить стабильность трабектедина в процессе лиофилизации, температура стеклования первого эксципиента является низкой, что приводит к плохой формуемости лиофилизированного продукта и недостаточной стабильности в процессе хранения. Поэтому в предпочтительном варианте осуществления изобретения первый эксципиент используют в сочетании со вторым эксципиентом, который имеет более высокую температуру стеклования и гигроскопичность, тем самым дополнительно улучшая внешний вид и стабильность при хранении лиофилизированного продукта.

Защитный эффект композиции в лиофилизированном составе ЕТ743 согласно настоящему изобретению в основном отражается в двух процессах лиофилизации и хранения. 1) Процесс лиофилизации: чтобы играть защитную роль, гидроксильные группы в защитном агенте могут конкурировать с гидроксильными группами в воде; 2) процесс хранения: аморфный материал, особенно высокополимерный материал в защитном агенте, обладает высокой гигроскопичностью, поэтому он может поддерживать низкую относительную влажность в закрытой среде, такой как флакон, тем самым играя защитную роль.

В дополнение к вышеуказанным эксципиентам композиция согласно настоящему изобретению также содержит буфер. Буфер выбирают из группы, состоящей из фосфатного буфера, лактатного буфера, ацетатного буфера и цитратного буфера, предпочтительно один из дигидрофосфата калия и дигидрофосфата натрия.

В фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению массовое соотношение трабектедина к первому эксципиенту составляет от 1:10 до 1:2000, предпочтительно от 1:20 до 1:1500, более предпочтительно от 1:30 до 1:1000 и наиболее предпочтительно от 1:40 до 1:500.

В фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению массовое соотношение трабектедина ко второму эксципиенту составляет от 1:10 до 1:1000, предпочтительно от 1:10 до 1:500, более предпочтительно от 1:10 до 1:300 и наиболее предпочтительно от 1:10 до 1:100.

В особенно предпочтительном варианте осуществления изобретения первым эксципиентом является глюкоза, а вторым эксципиентом является декстран. Массовое соотношение глюкозы к декстрану составляет от 1:1 до 10:1 и предпочтительно от 1:1 до 1,5:1. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения масса глюкозы составляет 2-15% и предпочтительно 5-8% от общей массы композиции. Масса декстрана составляет 1-10% и предпочтительно 3-5% от общей массы композиции. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения масса глюкозы и масса декстрана составляют 6,65% и 4,55% от общей массы композиции, соответственно.

Поскольку изменение рН будет влиять на стабильность трабектедина, необходим буфер для поддержания рН системы в определенном диапазоне. Массовое соотношение трабектедина к буферу предпочтительно составляет от 1:10 до 1:100, более предпочтительно от 1:15 до 1:50 и наиболее предпочтительно от 1:20 до 1:40.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть приготовлена в виде лиофилизированного состава.

Из вышеупомянутых ингредиентов сначала получают композицию в виде раствора для лиофилизации. рН описанного раствора для лиофилизации может составлять 3-5, предпочтительно 3,5-4,5, более предпочтительно 3,6-4,2 и наиболее предпочтительно 3,9-4,1. Если значение рН раствора, приготовленного только из указанных выше ингредиентов, не находится в пределах требуемого диапазона, значение рН можно довести регулятором рН, например, регулятором рН, например, одним или более регуляторов рН, выбранных из группы состоящей из фосфорной кислоты, уксусной кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, лимонной кислоты, гидроксида натрия и гидроксида калия, предпочтительно из фосфорной кислоты и гидроксида калия.

В растворе для лиофилизации в соответствии с настоящим изобретением содержание трабектедина составляет 0,1-0,5 мг/мл, предпочтительно 0,2-0,3 мг/мл и более предпочтительно 0,25 мг/мл; содержание защитного агента составляет 10-100 мг/мл, предпочтительно 20-80 мг/мл и более предпочтительно 20-60 мг/мл; содержание эксципиента составляет 1-100 мг/мл, предпочтительно 5-50 мг/мл и более предпочтительно 5-30 мг/мл; и содержание буфера составляет 1-10 мг/мл, предпочтительно 4-8 мг/мл и более предпочтительно 6-7 мг/мл.

В настоящем изобретении также предложена инъекционная композиция трабектедина, которую получают путем восстановления вышеупомянутого лиофилизированного состава.

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно получить следующим способом:

1) растворяют трабектедин в кислотном буферном солевом растворе с получением буферного раствора трабектедина, где предпочтительно кислота представляет собой фосфорную кислоту, а буферная соль представляет собой дигидрофосфат калия;

2) растворяют требуемые первый эксципиент и второй эксципиент в буферном солевом растворе и доводят рН до заданного значения;

3) хорошо перемешивают вышеуказанные два раствора, а затем доводят рН до заданного значения.

Для получения лиофилизированного состава способ дополнительно включает стадию лиофилизации смешанного раствора со стадии 3).

Лиофилизированный состав согласно настоящему изобретению может быть получен обычным способом лиофилизации в данной области. Например, способ лиофилизации согласно настоящему изобретению включает три стадии: предварительное замораживание, первичную сушку и вторичное сублимирование. Температура предварительного замораживания составляет от -25 до -50°С, температура первичной сушки составляет от -10 до -40°С, а температура вторичной сушки составляет от 15 до 30°С. Во время первичной сушки и вторичной сушки степень вакуума составляет 0,1-0,5 мбар. Перед окончанием процесса лиофилизации подают газообразный азот, предпочтительно за 5-10 минут перед окончанием процесса лиофилизации.

Фармацевтическая композиция, предложенная в настоящем изобретении, обладает высокой стабильностью и ее легко получать промышленным путем.

Краткое описание графических материалов

Фиг. 1А: Спектр инфракрасного сканирования лиофилизированного образца (5% декстрана 40, содержание воды в декстране 40 составляет 9%, фактическая доза декстрана 40 составляет 4,55%).

Фиг. 1В: Спектр инфракрасного сканирования лиофилизированного образца (5% декстрана 40/6,65% глюкозы, содержание воды в декстране 40 составляет 9%, фактическая доза декстрана 40 составляет 4,55%).

Фиг. 2А: Спектр дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) лиофилизированного образца (5% декстрана 40, содержание воды в декстране 40 составляет 9%, фактическая доза декстрана 40 составляет 4,55%).

Фиг. 2В: Спектр DSC лиофилизированного образца (5% глюкозы).

Фиг. 2С: Спектр DSC лиофилизированного образца (5% декстрана 40/6,65% глюкозы, содержание воды в декстране 40 составляет 9%, фактическая доза декстрана 40 составляет 4,55%).

Подробное описание изобретения

Пример 1

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, глюкозы в качестве первого эксципиента, гидроксиэтилкрахмала в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты/гидроксида калия в качестве регулятора рН и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозы следующие:

q.s. - необходимое количество

Способ получения:

1. 102 мг дигидрофосфата калия добавляли к 2 мл воды, затем добавляли 0,645 мл фосфорной кислоты (0,1 N) и смесь хорошо перемешивали с получением буферного раствора дигидрофосфат калия/фосфорная кислота;

2. 3,75 мг трабектедина добавляли к вышеуказанному буферному раствору дигидрофосфат калия/фосфорная кислота и смесь перемешивали до полного растворения лекарственного средства с получением раствора лекарственного средства;

3. 750 мг глюкозы и 450 мг гидроксиэтилкрахмала добавляли к 9 мл воды для инъекций, смесь растворяли при перемешивании, а затем рН доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты;

4. раствор лекарственного средства со стадии 2 добавляли к раствору со стадии 3 и хорошо перемешивали, а затем рН полученного раствора доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты или раствора гидроксида калия;

5. вышеуказанный раствор доводили до общей массы и заполняли им контейнер, который затем частично закупоривали.

Вышеуказанный промежуточный раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина. Исследовали внешний вид, содержание воды, восстановление и рН. Определяли изменение сопутствующих примесей после лиофилизации и стабильность при помещении в ускоренные условия (25°С и 60% относительная влажность) и длительные условия (2-8°С).

Экспериментальные выводы и анализ: лиофилизированный продукт получали с использованием глюкозы в качестве первого эксципиента и гидроксиэтилкрахмала в качестве второго эксципиента. Внешний вид, содержание воды и рН лиофилизированного продукта соответствуют требованиям, и восстановление является хорошим. Лиофилизированный состав обладает хорошей стабильностью при длительных условиях и в ускоренных условиях. Показано, что композицию глюкозы и гидроксиэтилкрахмала можно использовать в качестве лиопротектора состава трабектедина для улучшения стабильности трабектедина в процессе лиофилизации и в процессе хранения.

Пример 2

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, глюкозы в качестве первого эксципиента, натрийкарбоксиметилцеллюлозы в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты/гидроксида калия в качестве регулятора рН и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозы следующие:

Способ получения:

1. 102 мг дигидрофосфата калия добавляли к 2 мл воды, затем добавляли 0,645 мл фосфорной кислоты (0,1 N) и смесь хорошо перемешивали с получением буферного раствора дигидрофосфат калия/фосфорная кислота;

2. 3,75 мг трабектедина добавляли к вышеуказанному буферному раствору дигидрофосфат калия/фосфорная кислота и смесь перемешивали до полного растворения лекарственного средства с получением раствора лекарственного средства;

3. 1,3125 г глюкозы и 562,5 мг натрийкарбоксиметилцеллюлозы добавляли к 9 мл воды для инъекций, смесь растворяли при перемешивании, а затем рН доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты;

4. раствор лекарственного средства со стадии 2 добавляли к раствору со стадии 3 и хорошо перемешивали, а затем рН полученного раствора доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты или гидроксида калия;

5. вышеуказанный раствор доводили до общей массы и заполняли им контейнер, который затем частично закупоривали.

Вышеуказанный промежуточный раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина. Исследовали внешний вид, содержание воды, восстановление и рН. Определяли изменение сопутствующих примесей после лиофилизации и стабильность при помещении в ускоренные условия (25°С и 60% относительная влажность) и длительные условия (2-8°С).

Экспериментальные выводы и анализ: лиофилизированный продукт получали с использованием глюкозы в качестве первого эксципиента и натрийкарбоксиметилцеллюлозы в качестве второго эксципиента. Внешний вид, содержание воды и рН лиофилизированного продукта соответствуют требованиям, и восстановление является хорошим. Лиофилизированный состав обладает хорошей стабильностью при длительных условиях и в ускоренных условиях. Показано, что композицию глюкозы и натрийкарбоксиметилцеллюлозы можно использовать в качестве лиопротектора состава трабектедина для улучшения стабильности трабектедина в процессе лиофилизации и в процессе хранения.

Пример 3

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, глюкозы в качестве первого эксципиента, декстрана 40 в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты/гидроксида калия в качестве регулятора рН и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозы следующие:

Способ получения:

1. 102 мг дигидрофосфата калия добавляли к 2 мл воды, затем добавляли 0,645 мл фосфорной кислоты (0,1 N) и смесь хорошо перемешивали с получением буферного раствора дигидрофосфат калия/фосфорная кислота;

2. 3,75 мг трабектедина добавляли к вышеуказанному буферному раствору дигидрофосфат калия/фосфорная кислота и смесь перемешивали до полного растворения лекарственного средства с получением раствора лекарственного средства;

3. 750 мг глюкозы и 450 мг декстрана 40 добавляли к 9 мл воды для инъекций, смесь растворяли при перемешивании, а затем рН доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты;

4. раствор лекарственного средства со стадии 2 добавляли к раствору со стадии 3 и хорошо перемешивали, а затем рН полученного раствора доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты или гидроксида калия;

5. вышеуказанный раствор доводили до общей массы и заполняли им контейнер, который затем частично закупоривали.

Вышеуказанный промежуточный раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина. Исследовали внешний вид, содержание воды, восстановление и рН. Определяли изменение сопутствующих примесей после лиофилизации и стабильность при помещении в ускоренные условия (25°С и 60% относительная влажность) и длительные условия (2-8°С).

Экспериментальные выводы и анализ: лиофилизированный продукт получали с использованием глюкозы в качестве первого эксципиента и декстрана 40 в качестве второго эксципиента. Внешний вид, содержание воды и рН лиофилизированного продукта соответствуют требованиям, и восстановление является хорошим. Лиофилизированный состав обладает хорошей стабильностью при длительных условиях и в ускоренных условиях. Показано, что композицию глюкозы и декстрана 40 можно использовать в качестве лиопротектора состава трабектедина для улучшения стабильности трабектедина в процессе лиофилизации и в процессе хранения.

Пример 4

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, глюкозы в качестве первого эксципиента, гидроксипропил-бета-циклодекстрина в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты/гидроксида калия в качестве регулятора рН и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозы следующие:

Способ получения:

1. 102 мг дигидрофосфата калия добавляли к 2 мл воды, затем добавляли 0,645 мл фосфорной кислоты (0,1 N) и смесь хорошо перемешивали с получением буферного раствора дигидрофосфат калия/фосфорная кислота;

2. 3,75 мг трабектедина добавляли к вышеуказанному буферному раствору дигидрофосфат калия/фосфорная кислота и смесь перемешивали до полного растворения лекарственного средства с получением раствора лекарственного средства;

3. 750 мг глюкозы и 750 мг гидроксипропил-бета-циклодекстрина добавляли к 9 мл воды для инъекций, смесь растворяли при перемешивании, а затем рН доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты;

4. раствор лекарственного средства со стадии 2 добавляли к раствору со стадии 3 и хорошо перемешивали, а затем рН полученного раствора доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты или гидроксида калия;

5. вышеуказанный раствор доводили до общей массы и заполняли им контейнер, который затем частично закупоривали.

Вышеуказанный промежуточный раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина. Исследовали внешний вид, содержание воды, восстановление и рН. Определяли изменения сопутствующих примесей после лиофилизации и стабильность при помещении в ускоренные условия (25°С и 60% относительная влажность) и длительные условия (2-8°С).

Экспериментальные выводы и анализ: лиофилизированный продукт получали с использованием глюкозы в качестве первого эксципиента и гидроксипропил-бета-циклодекстрина в качестве второго эксципиента. Внешний вид, содержание воды и рН лиофилизированного продукта соответствуют требованиям, и восстановление является хорошим. Лиофилизированный состав обладает хорошей стабильностью при длительных условиях и ускоренных условиях. Показано, что композицию глюкозы и гидроксипропил-бета-циклодекстрина можно использовать в качестве лиопротектора состава трабектедина для улучшения стабильности трабектедина в процессе лиофилизации и в процессе хранения.

Пример 5

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, сорбита в качестве первого эксципиента, натрийкарбоксиметилцеллюлозы в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты/гидроксида калия в качестве регулятора рН и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозы следующие:

Способ получения:

1. 102 мг дигидрофосфата калия добавляли к 2 мл воды, затем добавляли 0,645 мл фосфорной кислоты (0,1 N) и смесь хорошо перемешивали с получением буферного раствора дигидрофосфат калия/фосфорная кислота;

2. 3,75 мг трабектедина добавляли к вышеуказанному буферному раствору дигидрофосфат калия/фосфорная кислота и смесь перемешивали до полного растворения лекарственного средства с получением раствора лекарственного средства;

3. 1,5 г сорбита и 375 мг натрийкарбоксиметилцеллюлозы добавляли к 9 мл воды для инъекций, смесь растворяли при перемешивании, а затем рН доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты;

4. раствор лекарственного средства со стадии 2 добавляли к раствору со стадии 3 и хорошо перемешивали, а затем рН полученного раствора доводили до 3,9±0,3 с использованием определенной концентрации раствора фосфорной кислоты или гидроксида калия;

5. вышеуказанный раствор доводили до общей массы и заполняли им контейнер, который затем частично закупоривали и лиофилизовали.

Вышеуказанный промежуточный раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина. Исследовали внешний вид, содержание воды, восстановление и рН. Определяли изменения сопутствующих примесей после лиофилизации и стабильность при помещении в ускоренные условия (25°С и 60% относительная влажность) и длительные условия (2-8°С).

Экспериментальные выводы и анализ: лиофилизированный продукт получали с использованием сорбита в качестве первого эксципиента и натрийкарбоксиметилцеллюлозы в качестве второго эксципиента. Внешний вид, содержание воды и рН лиофилизированного продукта соответствуют требованиям, и восстановление является хорошим. Лиофилизированный состав обладает хорошей стабильностью при длительных условиях и в ускоренных условиях. Показано, что композицию сорбита и натрийкарбоксиметилцеллюлозы можно использовать в качестве лиопротектора состава трабектедина для улучшения стабильности трабектедина в процессе лиофилизации и в процессе хранения.

Пример 6

Чтобы оптимизировать соотношение и дозировку декстрана 40 и глюкозы, мы использовали Методологию поверхности отклика - Центральное композиционное планирование (RSM-CCD, от англ. «Response Surface Methodology - Central Composite Design»), где дозировку декстрана 40 ограничивали до 2-5%, а дозировку глюкозы ограничивали до 4-10%. Программное обеспечение Design Expert разработало в общей сложности 13 составов. Результаты испытаний сопутствующих примесей в лиофилизированном продукте в начальной точке и после ускоренных условий 2 М приведены в таблице 11 ниже:

Кроме того, также оценивали внешний вид лиофилизированных продуктов, как показано в Таблице 12:

Результаты и анализ:

Для анализа и прогнозирования оптимальной дозировки глюкозы и декстрана 40 использовали программное обеспечение Design Expert с использованием всех примесей в начальной точке и при ускоренных условиях 2 М, ЕТ-701 в начальной точке и при ускоренных условиях 2 М и внешнего вида в качестве значений отклика.

Результаты моделирования показывают, что когда дозировка декстрана 40 составляет 5% (содержание воды составляет 9%), а дозировка глюкозы составляет 6,65%, общее количество примесей и ЕТ-701 в начальной точке составляет 1,800% и 0,066%, соответственно, общее количество примесей и ЕТ-701 при ускоренных условиях 2 М составляет 1,799% и 0,059%, соответственно, а оценка внешнего вида составляет 2,707 (лучшая оценка внешнего вида - 3), что соответствует нашему требованию к составу. Поэтому оптимальные дозировки глюкозы и декстрана 40 (абсолютные дозировки) составляют соответственно 6,65% и 4,55%.

Пример 7

Чтобы продемонстрировать влияние декстрана 40 в процессе лиофилизации и в процессе длительного хранения, было проведено углубленное исследование с помощью инфракрасной спектроскопии и дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC).

(1) Инфракрасная характеристика межмолекулярных водородных связей

Инфракрасное сканирование проводили на лиофилизированных образцах, содержащих только 4,55% декстрана 40 и содержащих одновременно 4,55% декстрана 40 и 6,65% глюкозы. Результаты (фиг. 1А и фиг. 1В) показывают, что в лиофилизированном образце, содержащем 4,55% декстрана 40, пик валентного колебания альдегидной группы в декстране 40 появляется при волновом числе 1649,81. Однако в образце, содержащем 4,55% декстрана 40 и 6,65% глюкозы, этот пик появляется при волновом числе 1636,36. Показано, что имеется взаимодействие посредством водородной связи между гидроксильной группой в глюкозе и альдегидной группой в декстране 40, что приводит к уменьшению амплитуды валентного колебания альдегидной группы и уменьшению волнового числа. (Примечание: взаимодействие между глюкозой и декстраном 40 в основном представляет собой взаимодействие посредством водородной связи между гидроксильными группами. Вследствие сложности характеристики взаимодействия посредством водородной связи для характеристики выбирают характеристический пик альдегидной группы, поскольку существует также взаимодействие посредством водородной связи между альдегидной группой и гидроксильной группой).

(2) Термический анализ лиофилизированных образцов путем DSC

Из-за взаимодействия между декстраном 40 и глюкозой для анализа характеристик теплового ответа лиофилизированных образцов также используют DSC. Результаты (фиг. 2А, фиг. 2В и фиг. 2С) показывают, что в спектре DSC лиофилизированного образца, содержащего 4,55% декстрана 40, имеется один эндотермический пик и один экзотермический пик; в лиофилизированном образце, содержащем 5% глюкозы, имеется один широкий эндотермический пик; в то время как в лиофилизированном образце, содержащем 4,55% декстрана 40 и 6,65% глюкозы, имеется два эндотермических пика и один экзотермический пик из-за наличия глюкозы, причем исходный эндотермический пик декстрана 40 смещается в направлении высокой температуры, что еще раз демонстрирует взаимодействие между этими двумя веществами.

Пример 8

Для дальнейшего изучения влияния соотношения декстран 40/глюкоза на сопутствующие примеси разработали высокотемпературный тест для оценки и подтверждения рациональности и эффективности оптимального состава. Результаты испытаний показаны в таблице 13.

API - активный фармацевтический ингредиент

Результаты и анализ:

(1) Исходный образец: Влияние различных соотношений глюкозы к декстрану 40 на сопутствующие примеси отражается, в основном, на общем количестве примесей. ЕТ-701 находится на низком уровне, и нет никаких существенных различий в других известных примесях. Когда содержание глюкозы и декстрана 40 выше или ниже, появляется определенное увеличение общего количества примесей (Примечание: разница небольшая).

(2) 40°С 10 дней

Через 10 дней при высокой температуре 40°С существенного изменения внешнего вида образца не наблюдалось. Результаты испытаний сопутствующих примесей показывают, что через 10 дней при 40°С ЕТ-701 значительно возрастает и повышаются отдельные неизвестные примеси, что приводит к увеличению общего количества примесей. Степени увеличения различных соотношений вспомогательных материалов несколько отличаются. Оптимальным является соотношение глюкоза : декстран 40 = 6,65%:4,55%.

(3) 60°С 10 дней

Через 10 дней при высокой температуре 60°С все образцы показали сильную усадку, а образец, содержащий API, оказался ярко-желтым. Результаты испытаний сопутствующих примесей показывают, что общее количество примесей значительно увеличивается. Что касается составов, содержащих различные соотношения глюкоза/декстран 40, то степень увеличения общего количества примесей различна. Оптимальным является соотношение глюкоза : декстран 40 = 6,65%:4,55%, а степень увеличения в этом составе является наименьшей.

Пример 9

Для соответствия требованию клинического применения исследовали стабильность раствора, полученного при восстановлении лиофилизированного продукта. 0,25 мг образца согласно спецификации (защитные агенты: 6,65% глюкозы и 4,55% декстрана 40) восстанавливали в 5 мл воды для инъекций. Исследовали изменение сопутствующих примесей при комнатной температуре и охлаждении (2-8°С). Результаты показаны в таблице 14 и таблице 15 ниже:

Результаты показывают, что после восстановления продукта количество примесей постепенно возрастает при комнатной температуре; после восстановления продукта стабильность является хорошей при охлаждении. Поэтому рекомендуется, чтобы образец использовался как можно скорее после восстановления. Образец следует охлаждать, если он предназначен для хранения в течение периода времени.

Пример 10

Чтобы дополнительно продемонстрировать на образце защитный эффект глюкозы и декстрана 40 в количестве 6,65% и 4,55%, соответственно, исследовали стабильность лиофилизированного образца при длительных условиях и в ускоренных условиях.

Раствор трабектедина для лиофилизации готовили с использованием трабектедина в качестве активного ингредиента, глюкозы в качестве первого эксципиента, декстрана 40 в качестве второго эксципиента, дигидрофосфата калия в качестве буфера, фосфорной кислоты и гидроксида калия в качестве регулятора рН, и воды для инъекций в качестве растворителя. Конкретные ингредиенты состава и их дозировки являются следующими:

Примечание [1]: Содержание воды в декстране 40 - 6,6%, и фактическая концентрация - 45,5 мг/мл.

Способ получения:

1. При комнатной температуре добавляли 80 мл воды для инъекций в стакан на 500 мл, затем добавляли 816 мг дигидрофосфата калия, 5,88 г декстрана 40 и 7,98 г глюкозы, растворяли при перемешивании и хорошо перемешивали.

2. 30 мг трабектедина добавляли к 5,16 мл раствора фосфорной кислоты (0,1 N) и растворяли при перемешивании.

3. Добавляли раствор со стадии 2 к раствору со стадии 1 и хорошо перемешивали, рН доводили до 3,6-4,2 фосфорной кислотой или гидроксидом калия, и раствор доводили до общей массы.

4. Раствор фильтровали через мембрану 0,22 мкм и наполняли флаконы на 10 мл (спецификация: 0,25 мг, 1 мл/флакон) или флаконы на 20 мл (спецификация: 1 мг, 4 мл/флакон).

5. Раствор лиофилизировали с получением лиофилизированного состава трабектедина.

Вышеуказанные лиофилизированные составы выдерживали в ускоренных условиях (25°С, 60% относительная влажность), сопутствующие примеси и содержание воды измеряли в разные моменты времени.

Результаты и анализ: Результаты испытаний сопутствующих примесей показывают, что после хранения в ускоренных условиях и при длительных условиях в течение 3 месяцев не произошло существенного изменения отдельных примесей и общего количества примесей по двум спецификациям образцов. В частности, в ускоренных условиях ключевая примесь ЕТ-701 существенно не увеличивается, и тенденции к увеличению содержания воды в образцах не наблюдается. Показано, что стабильность образца в ускоренных условиях и при длительных условиях может быть значительно улучшена за счет использования в качестве эксципиентов глюкозы и декстрана 40 в определенном соотношении.

1. Инъекционная парентеральная фармацевтическая композиция трабектедина, содержащая первый эксципиент и второй эксципиент, где первый эксципиент представляет собой одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из моносахарида и полиола, а второй эксципиент представляет собой одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы, гидроксипропил-бета-циклодекстрина, мальтодекстрина и полиэтиленгликоля.

2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что первый эксципиент выбран из группы, состоящей из глюкозы, и второй эксципиент выбран из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы и гидроксипропил-бета-циклодекстрина.

3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что первый эксципиент выбран из группы, состоящей из сорбита, и второй эксципиент выбран из группы, состоящей из альбумина, декстрана, гидроксиэтилкрахмала, натрийкарбоксиметилцеллюлозы и гидроксипропил-бета-циклодекстрина.

4. Композиция по п. 1, где массовое соотношение трабектедина и первого эксципиента составляет от 1:10 до 1:2000, предпочтительно от 1:20 до 1:1500, более предпочтительно от 1:30 до 1:1000 и наиболее предпочтительно от 1:40 до 1:500.

5. Композиция по п. 1, где массовое соотношение трабектедина и второго эксципиента составляет от 1:10 до 1:1000, предпочтительно от 1:10 до 1:500, более предпочтительно от 1:10 до 1:300 и наиболее предпочтительно от 1:10 до 1:100.

6. Композиция по п. 2, где первый эксципиент представляет собой глюкозу, и второй эксципиент представляет собой декстран.

7. Композиция по п. 6, где массовое соотношение глюкозы и декстрана составляет от 1:1 до 10:1 и предпочтительно от 1:1 до 1,5:1.

8. Композиция по п. 6, где массовое содержание глюкозы составляет 2-15% и предпочтительно 5-8% от общей массы композиции.

9. Композиция по п. 6, где массовое содержание декстрана составляет 1-10%, предпочтительно 3-5% от общей массы композиции.

10. Композиция по любому из пп. 1-9, отличающаяся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере один буфер, где буфер выбран из группы, состоящей из фосфатного буфера, лактатного буфера, ацетатного буфера и цитратного буфера, предпочтительно один из дигидрофосфата калия, дигидрофосфата натрия, цитрат калия и цитрата натрия.

11. Композиция по п. 10, где массовое соотношение трабектедина и буфера составляет от 1:10 до 1:100, более предпочтительно от 1:15 до 1:50 и наиболее предпочтительно от 1:20 до 1:40.

12. Композиция по любому из пп. 1-9, где композиция представляет собой лиофилизированный состав.

13. Композиция по п. 12, отличающаяся тем, что состав представляет собой раствор с pH 3-5, предпочтительно pH 3,5-4,5, перед лиофилизацией.

14. Инъекционная композиция трабектедина, полученная путем восстановления лиофилизированного состава по п. 12 или 13.

15. Способ получения композиции по любому из пп. 1-13, включающий следующие стадии:

1) растворяют трабектедин в кислотном буферном солевом растворе с получением буферного раствора трабектедина;

2) растворяют требуемые первый эксципиент и второй эксципиент в буферном солевом растворе и доводят рН до заданного значения;

3) хорошо перемешивают два раствора со стадии 1) и стадии 2), а затем доводят рН до заданного значения.

16. Способ получения композиции по п. 15, где кислота представляет собой фосфорную кислоту, а буферная соль представляет собой дигидрофосфат калия.

17. Способ получения по любому из пп. 15, 16, дополнительно включающий стадию лиофилизации смешанного раствора со стадии 3).