Применение серебряной соли n-{ 4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил} -1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида в качестве противогрибкового средства в отношении штаммов грибов c. tropicalis, c. krusei и c. glabrata
Владельцы патента RU 2763724:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный национальный исследовательский университет" (ПГНИУ) (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Пермская государственная фармацевтическая академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ПГФА) (RU)
Изобретение относится к применению серебряной соли N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида формулы (I) в качестве противогрибкового средства в отношении штаммов грибов C. tropicalis, C. krusei и C. glabrata. Указанная соль обладает низкой токсичностью и может найти применение в медицине. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к противогрибковому средству на основе серебряной соли N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида формулы (I):
,
что позволяет предположить возможность его применения в медицине в качестве лекарственного противогрибкового средства в отношении грибов Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata.
Ближайшими аналогами по структуре и действию заявляемому соединению являются N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамид (II) и его натриевая соль (III) (Синтез и биологическая активность 5-арил-N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенилпиразол-3-карбоксамидов и их солей / В.Л. Гейн, О.В. Бобровская, А.А. Русских, В.В. Новикова, О.Н. Гейн, Ю.Н. Карпенко, С.В. Чащина, М.В. Дмитриев, А.Н. Янкин // Журн. общей химии. - 2019. - Т. 89, №4. - С. 542-551) формулы:
Структурные аналоги (II, III) обладают низкой противогрибковой активностью (таблица 1) в отношении штаммов грибов Candida albicans и не изучены на наличие противогрибковой активности в отношении штаммов грибов Candida non-albicans: Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata и острой токсичности.
В медицинской практике широко используется флуконазол в качестве противогрибкового лекарственного средства, аналогичное по фармакологическому действию заявляемому соединению (I), которое выбрано нами в качестве эталона сравнения (Машковский М.Д. Лекарственные средства - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - С. 920).
Целью изобретения является поиск соединений с высоким противогрибковым действием и низкой токсичностью в ряду серебряных солей 5-арил-N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенилпиразол-3-карбоксамидов.
Поставленная цель достигается применением серебряной соли N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (I), которая обладает противогрибковой активностью в отношении грибов Candida tropicalis, Candida krusei, Candida glabrata.
Соединение (I) синтезируют взаимодействием N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (II) с нитратом серебра в смеси этанол-ДМФА в соотношении 2:1 по схеме:
Синтез исходного N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (II) осуществлен согласно ранее описанной методики (Синтез и биологическая активность 5-арил-N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенилпиразол-3-карбоксамидов и их солей / В.Л. Гейн, О.В. Бобровская, А.А. Русских, В.В. Новикова, О.Н. Гейн, Ю.Н. Карпенко, С.В. Чащина, М.В. Дмитриев, А.Н. Янкин // Журн. общей химии. - 2019. - Т. 89, №4. - С. 542-551.).
Пример 1. Получение соединения (I).
К горячему раствору 2,18 г (0,004 моль) N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (II) в 35 мл смеси этанол-ДМФА (2:1) приливали горячий раствор 0,68 г (0,004 моль) серебра нитрата в 34 мл этанола (2% раствор). Выпавший осадок отфильтровывали, промывали на фильтре от следов серебра нитрата этанолом и водой, сушили, снова промывали этанолом и сушили. Выход 1,75 г (67%). Т. пл. 217-219°С. Найдено, %: С 49.82; H 3.36; N 10.67; S 9.88. C27H22AgN5O4S2. Вычислено, %: С 49.70; H 3.40; N 10.73; S 9.83. ИК спектр (ИК-Фурье спектрометр IRAffinity-1 Shimadzu (Япония), в таблетках с KBr, ν, см-1): 3494, 3368 (NH), 1688 (CON), 1319, 1139 (SO2). Спектр ЯМР 1H (Bruker АМ-300, рабочая частота 300 МГц, DMSO-d6, TMS, δ, м.д.): 1.30 т (3Н, СН3СН2О, J 6.90 Гц), 4.04 к (2Н, СН3СН2О, J 6.90 Гц), 6.83 д (1Н, С5Нтиазол, J 4.20 Гц), 7.04 с (1Н, С4Нпиразол), 7.19 д (1Н, С4Нтиазол, J 4.20 Гц), 6.86-7.98 м (13Н, CHAr), 10.26 с (1Н, CONH).
Соединение (I) представляет собой белое с желтоватым оттенком кристаллическое вещество, растворимое при нагревании в диметилформамиде, диметилсульфоксиде, ледяной уксусной кислоте и нерастворимое в воде, этаноле, изопропаноле.
Пример 2. Исследование противогрибковой активности и острой токсичности соединения (I).
Острую токсичность (ЛД50, мг/кг) соединения (I) изучали на белых мышах (самках) массой 18-22 г при однократном внутрибрюшинном введении (Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильева, О.Л. Верстаковой, М.В. Журавлевой, В.К. Лепахина, Н.В. Коробова, В.А. Меркулова, С.Н. Орехова, И.В. Сакаевой, Д.Б. Утешева, А.Н. Яворского. - Ч. 1. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.). За животными вели наблюдение в течение 10 суток, фиксируя поведение, интенсивность и характер двигательной активности, наличие судорог, координацию движений, тонус скелетной мускулатуры, реакции на тактильные, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску видимых слизистых оболочек, потребление воды и пищи, изменение массы тела.
Рассчитывали острую токсичность, соблюдая рекомендации государственного фармакологического комитета по изучению общетоксического действия биологически активных веществ (Методические рекомендации по изучению общетоксического действия фармакологических средств. Утв. 25. 12. 97 / Вестн. фармакоп. комитета. - 1998. - №1. - С. 27-32).
Установлено, что ЛД50 для заявляемого соединения (I) составляет>1000 мг/кг. Внутрибрюшинное введение животным высоких доз изучаемого соединения (I) 1000 мг/кг не приводило к гибели животных. Следовательно, ЛД50 соединения (I) находится в дозах больших, чем 1000 мг/кг. Соответственно заявляемое соединение (I) по токсичности не уступает эталону сравнения флуконазолу, ЛД50 которого 1273 мг/кг (Режим доступа: https://chem.nlm.nih.gov/chemidplus/name/fluconazole).
Согласно классификации токсичности препаратов соединение (I) относится к классу практически нетоксичных веществ (Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии (справочник) / Н.Ф. Измеров, И.В. Саноцкий, К.К. Сидоров - М.: Медицина, 1977. - С. 196-197).
Противогрибковую активность заявляемого соединения (I) определяли пробирочным методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильева, О.Л. Верстаковой, М.В. Журавлевой, В.К. Лепахина, Н.В. Коробова, В.А. Меркулова, С.Н. Орехова, И.В. Сакаевой, Д.Б. Утешева, А.Н. Яворского. - Ч. 1. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.).
Скрининг противогрибковой активности осуществляли в отношении типовых штаммов Candida albicans АТСС 885-653, Candida tropicalis РКПГΥ-1513/784, Candida krusei РКПГΥ-1472/310, Candida glabrata РКПГΥ-1485/47. Исследуемое соединение массой 0,05 г растворяли в 5 мл ДМСО, получая основной раствор вещества в концентрации 104 мкг/мл. Данный раствор служил основой для рабочего раствора, имеющего концентрацию 2×103 мкг/мл, который последовательно разводили двукратно в жидкой питательной среде в ряду из 10 пробирок. Концентрация исследуемого соединения в первой пробирке ряда разведений в питательной среде составляла 1000,0 мкг/мл. Для определения противогрибковой активности использовали бульон Сабуро (ФБУН ГНЦ ПМБ, г. Оболенск). Для приготовления взвеси дрожжевых культур применяли двухсуточные культуры, выращенные на агаре Сабуро. Концентрация микробных клеток в опыте составила 2-5×104 КОЕ/мл. В качестве положительного контроля использовали питательную среду с внесенной исследуемой культурой. В качестве отрицательного контроля использовали интактную питательную среду. Посевы инкубировали в термостате при температуре 25±2°С. Оценку антимикотической активности осуществляли визуально на 40-48 ч инкубирования. Исследования проводили в двух повторах. В качестве значения МПК (минимальной подавляющей концентрации) принимали концентрацию соединения в последней прозрачной пробирке серии разведения.
Фунгистатический эффект заявляемого соединения (I) сравнивали с экспериментальными и литературными данными флуконазола (Minimum inhibitory concentrations of amphotericin В, azoles and caspofungin against Candida species are reduced by farnesol / R.A. Cordeiro, C.E.C. Teixeira, R.S.N. Brilhante [et al.] // Medical Mycology. -2013. - Vol. 51, Iss. 1. - P. 53-59). Кроме того, противогрибковую активность заявляемого соединения (I) сравнивали с активностью аналогов по структуре (II, III). Результаты испытаний представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы 1, структурные аналоги (II, III) обладают низкой противогрибковой активностью. Введение в структуру пиразол-3-карбоксамида (II, III) ионов серебра с образованием серебряной соли N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (I) приводит к резкому усилению биологического действия в отношении изучаемой культуры. Заявляемое соединение (I) по противогрибковой активности превосходит эффект эталона сравнения флуконазола в отношении Candida albicans АТСС 885-653 ~ в 2-64 раза (МПК 2,0/1,0 и 64,0/1,0).
В связи с наличием высокой противогрибковой активности заявляемого соединения (I) в отношении типового штамма Candida albicans АТСС 885-653 было изучено его действие на другие штаммы грибов рода Candida. Результаты испытаний представлены в таблице 2.
Проведенные исследования показали наличие у заявляемого соединения (I) высокой антифунгальной активности, превосходящей эффект эталона сравнения флуконазола в отношении изученных штаммов C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata (табл. 2).
Таким образом, серебряная соль N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида (I) проявляет высокую противогрибковую активность, которая превышает действие структурных аналогов (II, III) и эталона сравнения флуконазола, а также является практически нетоксичной, что делает возможным - использование ее для создания нового лекарственного средства, обладающего антифунгальной активностью.
Применение серебряной соли N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)сульфамоил]фенил}-1-фенил-5-(4-этоксифенил)пиразол-3-карбоксамида формулы (I)
в качестве противогрибкового средства в отношении штаммов грибов C. tropicalis, C. krusei и C. glabrata.