Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена c60, ресвератрола и бетаина гидрохлорида

Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно ветеринарной фармации, представляет гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мг: Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу; Ресвератрол - 25 мг; Бетоина гидрохлорид - 10 мг. Техническим результатом настоящего изобретения является стимулирование защитных функций печени и антиоксидантный эффект, ингибирование свободнорадикальных процессов в организме животных, повышение стрессоустойчивости организма, снижение токсичности, повышение удобства применения и дозирования. 3 пр., 10 табл., 8 ил.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарной фармации, в частности к препаратам для профилактики и лечения заболеваний печени, свободнорадикальной патологии у животных и может быть использовано в ветеринарной медицине.

Уровень техники

Известно соединение водного раствора фуллерена enC₆₀. Установлено, что водный раствор фуллерена dnC₆₀ проявляет выраженную вирулицидную, профилактическую и терапевтическую активность. Терапевтический эффект in vivo тестировали на модели кожной герпетической инфекции мышей. В результате лечения животных водным раствором фуллерена dnC₆₀ наблюдали статистически значимое снижение клинических проявлений герпетической инфекции. Полученные результаты позволяют заключить, что водный раствор проявляет выраженную терапевтическую активность против ВПГ-1-инфекции, при этом его лечебный эффект сопоставим с референс-препаратом АЦВ, при использовании в 500 раз меньшей концентрации (См. пат. № RU 2694754 С1, опубл. 16.07.2019).

Недостатком соединения водного раствора фуллерена dnC₆₀ является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.

Известен способ получения вакцины, содержащей фуллерен С₆₀-сер в качестве адъюванта. При этом обеспечено существенное (адъювантное) иммуностимулирующее действие фуллерена по отношению к антигенным экстрактам из биомассы бактерий. Способ предусматривает обработку антигенного экстракта из биомассы микроба периодатом натрия при его концентрации 0,5-1,5 мг/мл по содержанию общего белка и концентрации периодата натрия 20-120 мМ/мл в реагентной смеси при рН среды 5,0-6,0. В качестве адъюванта используют фуллерен С₆₀-сер. (См. пат. RU 2184566 С1, опубл. 10.07.2002 г.).

Недостатком способа получения вакцины, содержащей фуллерен С₆₀-сер, в качестве адъюванта в качестве препарата является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.

Известно применение водорастворимых производных фуллерена в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия (См. пат. № RU 2704483 С2, опубл. 29.10.2019 г.).

Недостатком водорастворимых производных соединений фуллерена в качестве лекарственных препаратов нейропротекторного и противоопухолевого действия является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.

Известно фуллереновое производное гликопептида формулы I: Glc Nac-Mur Nac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH₂)5NHC60-H], обладающие адъювантной активностью. Получено путем синтеза фуллеренового производного аминокапроновой кислоты и последующего его присоединения к лизиновому производному гликопептида. Эксперименты, проведенные на группе мышей (самки линии Balb/c), показали, что при низких дозах 1-10 нм/животное синтезированное соединение обладает высокими адъювантными свойствами (См. пат. № RU 2124022 С1, опубл. 27.12.1998 г.).

Недостатком фуллереновое производное гликопептида формулы I: Glc Nac-Mur Nac-Ala-DiGln[Lys-ε-CO(CH₂)5NHC60-H], является отсутствие гепатопротекторного и антиоксидантного эффектов. Не применяется в ветеринарной фармакологии.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является разработка высокоэффективного препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀, обладающего выраженными гепатопротекторным и антиоксидантным, иммуностимулирующим действием, низкой токсичностью, высокой эффективностью в профилактике и лечении патологий печени, свободнорадикальной патологии у животных, удобством введения и дозировки.

Технический результат, который может быть, достигнут с помощью предлагаемого изобретения, сводится к стимулированию защитных функций печени и антиоксидантному эффекту, ингибированию свободнорадикальных процессов в организме животных, повышению стрессоустойчивости организма, снижению токсичности, повышению удобства применения и дозирования.

Технический результат достигается с помощью гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, включающего водный раствор Фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Заявляемый гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представляет собой прозрачный раствор темно-коричневого цвета, без запаха, обладающий выраженным гепатопротекторным, антиоксидантным, антигипоксическим эффектом, является ингибитором свободнорадикальных процессов, повышает стрессоустойчивость организма, низкотоксичен и удобен в введении и дозировании.

Печень как жизненно важный орган выполняет широкий спектр функций в организме, включая детоксикацию, синтез белков плазмы и хранение гликогена. Окислительный стресс рассматривается как дисбаланс между производством активных форм кислорода (АФК) и механизмом антиоксидантной защиты. Это основная причина развития заболеваний печени (Ксейко Д.А. Антиоксидантная белковая система в печени при острой кровопотере / Ульяновский медико-биологический журнал. - 2012. - №1. - С. 64-67). Различные типы заболеваний печени характеризуются циррозом, желтухой, опухолями, метаболическими и дегенеративными поражениями, некрозом клеток печени и т.д. Лечение заболеваний печени по-прежнему остается проблемой для современной ветеринарной медицины (Решетняк В.И., Маев И.В., Решетняк Т.М., Журавель С.В., Писарев В.М. Заболевания печени и гемостаз (обзор) часть 1. нехолестатические заболевания печени и гемостаз - Общая реаниматология. 2019. - Т. 15. - №5. - С. 74-87.).

Окислительный стресс представляет собой один из наиболее распространенных факторов токсичности. Все типы агентов (химические, физические и биологические) могут вызывать окислительно-опосредованный стресс в тканях и клетках. Более того, окислительно-опосредованные реакции участвуют во многих фундаментальных аспектах жизненных процессов, таких как клеточное дыхание (митохондрии), синтез липидов, метаболизм металлов, лизосомы, иммунитет и ксенобиотическая биотрансформация органических соединений (Скрипниченко Е.В. Влияние физической нагрузки на окислиельно востановительные процессы в организме спортсмена: «Физическое воспитание и спорт в высших учебных заведениях», сборник статей XVI Междунар. науч. конф. - Белгород, 2020. - С. 139-144.).

Печень также поражается из-за повреждающего действия свободных радикалов и приводит к жировым изменениям в печени. Хорошо известно, что нормальная функция печени необходима для поддержания здоровья ЦНС. Измененные продукты метаболизма, накопленные из-за дисфункции гепатоцитов, могут вызывать нарушения в головном мозге и способствовать повреждению центральной нервной системы (ЦНС). Важно отметить, что печеночная недостаточность, вызванная различными факторами, вызывает значительные изменения в поддерживающих нейронах клетках, называемых астроцитами. Астроциты являются наиболее распространенным типом клеток, представленных в ЦНС. Они обеспечивают метаболическую и трофическую поддержку нервных клеток, поддерживают гематоэнцефалический барьер, модулируют синаптическую активность и защищают нейроны от повреждений (Арутюнян А.В., Милютина Ю.П., Залозняя И.В., Щербицкая А.Д., Керкешко Г.О. Роль нейротрофических факторов плаценты в развитии мозга плода при гипергомоцистеинемии - Молекулярная медицина. - 2019. - Т. 17. - №3. - С. 3-7.

Высвобождение активных форм кислорода во время этих процессов нейтрализуется набором антиоксидантных соединений в попытке защитить целостность клеток или тканей.

Хрупкий баланс между антиоксидантами и производством активных форм кислорода может быть нарушен воздействием токсичных веществ.

Антиоксидантным свойствам фуллеренов посвящено множество обзоров.

Фуллерены являются относительно новой группой соединений и представляют собой класс сферических молекул, полностью состоящих из атомов углерода.

Фуллерен обладает двумя основными свойствами, за которые его можно назвать двуликим Янусом - это способность нейтрализовать свободные радикалы, выступая в роли антиоксиданта, и способность генерировать активные формы кислорода при облучении (Пиотровский Л.Б., Литасова Е.В., Думпис М.А. Зачем нам сегодня нужны фуллерены? - 2019. - Т. 17. - №2. - С. 5-15. https://doi.org/10.7816/RCF1725-15, Пиотровский Л.Б., Киселев О.И. Фуллерены в биологии. - СПб.: Росток, 2006. - 334 с.). Именно способность нейтрализовать свободные радикалы, выступать в виде ловушки, то есть проявлять свойства антиоксиданта, и является основным свойством фуллерена, определяющим его востребованность в различных областях народного хозяйства. Впервые способность улавливать свободные радикалы, то есть антиоксидантное действие фуллерена, обнаружил Krusic et al. (Krusic PJ, Wasserman E, Keizer PN, et al. Radical reaction of С₆₀. Science. 1991;254:1183-1185. https://doi.org/10.1126/science.254.5035.1183). Они даже назвали фуллерен С₆₀ «губкой для радикалов» (radical sponge) из-за того, что он улавливал 34 метальных или 15 бензильных радикалов. Присоединение радикалов к фуллерену С₆₀ происходит по двойной связи С=С с образованием соответствующих аддуктов (McEwen CN, McKay RG, Larsen BS. C₆₀ as a radical sponge. J Am Chem Soc. 1992;114(11):4412-4414. https://doi.org/10.1021/ja00037a064), что и составляет химическую основу способности фуллеренов проявлять в биологических системах свойства антиоксидантов и цитопротекторов (Yin JJ, Lao F, Fu PP, et al. The scavenging of reactive oxygen species and the potential for cell protection by functionalized fullerene materials. Biomaterials. 2009;30(4):611-621. https://doi.org/10.1016/j.biomaterials.2008.09.061).

Сущность полученного гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Раствор смешивают в асептических условиях и упаковывают.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения получения и испытания с помощью гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.

Пример 1.

Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Полученный раствор оказал существенное воздействие на процессы перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы. Концентрация диеновых коньюгатов в сыворотке крови снизилась на 49,8% (Фиг. 1).

Концентрация малонового диальдегида (МДА) понизилась в сыворотке крови - на 38,8%, в ткани головного мозга - на 39,4%, в легких - на 18,2%, почках - на 18,1%, печени - на 24,8%, сердце - на 14,9%, скелетных мышцах - на 12,4%, в желудке - на 17,6% в тонком отделе кишечника - на 19,5% и толстом отделе кишечника - на 20,4% (Табл. 1).

Активность каталазы после введения препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀ достоверно повысилась в сыворотке крови на 7,5%, в ткани головного мозга на 10,4%, в легочной ткани - на 9,7%, в ткани желудка - на 11,8% и ткани тонкого отдела кишечника - на 7,6%. В остальных тканях активность фермента находилась в пределах физиологической нормы (Табл. 1).

Пример 2.

Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу.

Ресвератрол - 25 мг.

Бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Полученный раствор оказал существенное воздействие на состояние белково-азотистого обмена и мочевинообразовательной функции печени, которую оценивали по динамике в крови общего белка, ферментов трансаминирования, а также метаболитов орнитинового цикла и системы глутаминовая кислота-глутамин (табл. 2). Препарат вводили подкожно белым крысам.

Установлено, что после введения изучаемого соединения содержание общего белка, мочевины, аммиака и орнитина повышается на 8,6%, 10,0%, 10,0%) и 11,7% соответственно, по сравнению со здоровыми (табл. 2). Достоверных различий в содержании глутамина в сыворотке крови до и после введения изучаемого соединения не выявлено.

Мочевина и глутамин играют важную роль в кислотно-щелочном регулировании. Почечная продукция аммиака из глутамина является хорошо известной реакцией на метаболический ацидоз. Так как наряду с экскрецией аммония с мочой, синтез глутамина является вторым основным механизмом, с помощью которого млекопитающие может усваивать избыток аммиака.

После введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида повышается и активность ферментов трансаминирования (фиг. 2, 3).

Транаминазы обычно высвобождаются с постоянной скоростью, при этом их обычные уровни у здоровых животных представляют собой равновесие между нормальным оборотом гепатоцитов в результате запрограммированной гибели клеток (апоптоз) и выведения ферментов из плазмы.

Аланинаминотрансфераза (АЛТ) присутствует только в цитоплазме гепатоцитов, тогда как аспартатаминотрансфераза (ACT) присутствует как в цитоплазме гепатоцитов, так и в митохондриях. Функции обеих этих трансаминаз представляют важные метаболические связи между углеводным и белковым обменом. АЛТ участвует в «глюкозо-аланиновом цикле» и обменивает аланин и пируват и может регенерировать глюкозу, потребляемую мышцами, так же, как лактатдегидрогеназа обменивает лактат и пируват в «цикле Кори» для регенерации глюкозы из лактата в анаэробном метаболизме.

Весьма существенно, что у животных содержание орнитина в крови после введения изучаемого соединения повысилось на 11,7%. Так как орнитин помогает выводить из организма два вредных газа, аммиак и углекислый газ. Аммиак очень токсичен для центральной нервной системы и должен быть выведен из организма. Этапы этого цикла происходят в митохондриях и цитоплазме.

Полученные нами результаты свидетельствует о том, что после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида активность аргиназы повышается на 20,7% по сравнению с контрольными животными (фиг. 4).

Что же касается активности лактатдегидрогеназы (фиг. 5), то после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, она достоверно не изменилась.

Установлено, что концентрация общего белка после введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида повысилась на 8,6% по отношению к контрольным животным (табл. 3). Другие исследованные показатели белкового обмена, изменялись по-разному. Так, содержание в крови альбуминов повысилось на 11,5%. В то же время концентрация α-глобулинов после введения изучаемого соединения достоверно не изменилось, β-глобулинов повысилось на 10,7% и γ-глобулинов - на 16,7% относительно контроля.

Таким образом, гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена C₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг, оказывает выраженный гепатопротектроный эффект.

Пример 3.

Острую токсичность гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида (24 животных) и белых крысах (24 животных).

Белым крысам препарат вводили подкожно в дозах 550, 825, 1100, 2500, 5000 мг/кг по действующему веществу, белым мышам - внутрижелудочно в тех же дозах. За животными наблюдали в течение 14 суток после введения препарата. Объем вводимого раствора составлял белым крысам до 1,0 мл, белым мышам до 0,5 мл. Результаты исследований приведены в таблицах 4 и 5.

Клиника токсического действия при подкожном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида у белых крыс, сопровождалась следующими симптомами (Табл. 6).

Животные, получавшие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в изучаемых дозах течение всего периода наблюдения (14 суток) активно передвигались по клеткам, по пищевому и питьевому поведению мало отличались от крыс контрольной группы, адекватная реакция на внешние раздражители (звук, свет) была на уровне контроля.

При внутрижелудочном введении препарата в дозе 2500 мг/кг белые мыши в течение первых суток были угнетены, малоподвижны, отказывались от корма. Реакция на внешние раздражители была понижена. На вторые сутки после введения препарата восстанавливалось пищевое и питьевое поведение, реакции на внешние раздражители (Табл. 7).

В течение 14 суток исследований падежа опытных животных не отмечено. В связи с этим установить LD₅₀ не представилось возможным. Это позволяет считать гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, нетоксичным в испытанном диапазоне и варьировать его дозами в широких пределах.

Пример 3.

Оценку раздражающего действия гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида проводили на морских свинках и кроликах на основании результатов постановки метода накожных аппликаций и конъюнктивальных проб.

Для постановки метода накожных проб гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в несколько серий использовались морские свинки и кролики. Раздражающее действие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида оценивали на морских свинках в количестве 10 животных, разделенных на 2 группы.

Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С₆₀ 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.

Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида применяли накожно. Местом введения являлась правая боковая поверхность середины туловища. На левую боковую поверхность туловища в качестве контроля наносили дистиллированную воду. Предварительно участок тела размером 2 см × 2 см коротко выстригали. Растворы препарата на основе водного раствора фуллерена С₆₀ для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных и дистиллированную воду наносили по 3 капли один раз в день в течение 14 суток. Для исключения развития контактного дерматита механическое воздействие на опытный участок кожи свели к минимуму (Фиг. 6, 7).

Реакцию кожи морских свинок при накожном применении водных растворов фуллерена С₆₀ оценивали по Шкале оценки аппликационных кожных тестов по Паттерсону (Табл. 8). После нанесения препарата вели непрерывное наблюдение за животными в течение 20 минут. Затем тестируемые показатели снимали через каждые 24 часа. В ходе опытов установлено, что гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида не вызывает раздражающего действия на кожу опытных морских свинок.

Раздражающее действие гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида изучали во 2 серии опытов. Для этого использовали морских свинок в количестве 10 голов, разделенных на 2 группы.

Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мае. мг: водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг (Табл. 9).

Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С₆₀ - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.

На поверхность спины с правой стороны наносили дистиллированную воду для снятия контрольных данных.

Ежедневно наблюдая за состоянием кожи в местах нанесения препарата установлено, что изучаемый препарат в 1 и 2 виде водных растворов не вызывает стойких морфологических изменений в различных слоях кожи у морских свинок за весь период наблюдений.

Аналогичные опыты на кроликах проведены с гепатопротекторным и антиоксидантным препаратом для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. С этой целью подобрано 2 группы кроликов по 6 голов в каждой.

Кроликам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мас. мг: водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг (Табл. 10).

Кроликам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С₆₀ - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.

Установлено, что нанесение на кожу 1 и 2 раствора не оказывало патологического воздействия на кожу кроликов как на 7, так и 14 сутки опытов.

Проведенные исследования по оценке раздражающего действия на кожу животных гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида позволяют сделать вывод о том, что препарат на основе водного раствора фуллерена С₆₀ для профилактики и лечения свободнорадикальной патологии у животных не вызывает выраженных морфологических изменений в различных слоях кожи опытных животных.

Для постановки конъюнктивальной пробы были использованы морские свинки. Морским свинкам 1 опытной группы применяли гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида, при следующем соотношении компонентов в мае. мг: водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, ресвератрол - 25 мг, бетоина гидрохлорид - 10 мг.

Морским свинкам 2 опытной группы вводили гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида. Раствор готовят путем смешивания в 1 мл водного раствора Фуллерена С₆₀ - 1 мл, 1 мг по действующему веществу, 2500 мг ресвератрола, 1000 мг - бетоина гидрохлорида.

Готовые растворы по 1 капле вводили глазной пипеткой под верхнее веко правого глаза, а левый глаз служил контролем, и вводили дистиллированную воду. Для оценки аллергизирующего эффекта каждого препарата использовали 10 голов морских свинок по 5 животных в группах.

Гиперчувствительность немедленного типа оценивали через 15 минут после введения препаратов. Гиперчувствительность замедленного типа оценивали через 24-48 ч. Результаты исследований (Табл. 8) оценивали по следующей шкале:

1 - легкое покраснение слезного протока;

2 - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице;

3 - покраснение всей конъюнктивы и склеры. Реакция сопровождается зудом и при расчесывании лапками возможно развитие гнойного офтальмита.

В течение 6 ч непрерывного наблюдения за животными изменений в клиническом состоянии организма морских свинок после нанесения препарата на конъюнктиву зарегистрировано не было (Фиг. 9). Согласно методике, после 24 часового и 48 часового периода наблюдения, в состоянии морских свинок также не было зарегистрировано изменений.

Краткое описание чертежей и иных материалов

Графическое изображение содержание диеновых коньюгатов в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлено на фиг. 1.

Концентрация продуктов перекисного окисления в крови животных и активность антиоксидантных ферментов в крови животных представлены в таблице 1.

Показатели белково-азотистого обмена в крови белых крыс представлены в таблице 2.

Графическое изображение активности аспартатаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 2.

Графическое изображение активности аланинаминотрансферазы, (ед/л), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 3.

Графическое изображение активности аргиназы, (мкмоль/мочевины/г сырой ткани), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 4.

Графическое изображение активности лактатдегидрогеназы, (ммоль/г), в сыворотке крови белых крыс после подкожного введения гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлены на фигуре 5.

Показатели белкового обмена в крови белых крыс представлены в таблице 3.

Острая токсичность для белых крыс гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлена в таблице 4.

Острая токсичность для белых мышей гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида представлена в таблице 5.

Состояние физиологических параметров белых крыс при однократном подкожном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу представлено в таблице 6.

Состояние физиологических параметров белых мышей при однократном внутрижелудочном введении гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида в дозе 2500 мг/кг по действующему веществу представлено в таблице 7.

На фиг. 6, 7 - иллюстрации кожно-резорбтивной реакции для морских свинок гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.

Шкала оценки аппликационных кожных тестов представлена в таблице 8.

Оценка раздражающего действия гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида для морских свинок и кроликов представлена в таблице 9.

Результаты конъюнктивальных проб гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида для кроликов представлены в таблице 10.

На фиг. 8 представлены иллюстрации аллергической реакции для морских свинок на введение гепатопротекторного и антиоксидантного препарата для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида.

Гепатопротекторный и антиоксидантный препарат для животных на основе водного раствора фуллерена С₆₀, ресвератрола и бетаина гидрохлорида при следующем соотношении компонентов в мг:

Водный раствор фуллерена С₆₀, стабилизированный плуроником F-127 - 1 мл, 1 мг по действующему веществу;

Ресвератрол - 25 мг;

Бетоина гидрохлорид - 10 мг.