Способ прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития внутрижелудочковых кровоизлияний (ВЖК) у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией. В лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, определяют концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота и ангиогенина. Затем вычисляют прогностический индекс D по формуле и при D менее 0 прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде, а при D более 0 судят об отсутствии ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией. Способ позволяет своевременно производить профилактические мероприятия для предотвращения формирования данной патологии путём прогнозирования развития ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорождённых за счёт оценки совокупности наиболее значимых показателей. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний (ВЖК) в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией (ПЭ).

Актуальность определяется тем, что в структуре перинатальной заболеваемости одно из важных мест по частоте и значимости для дальнейшей жизни человека занимают перинатальные поражения центральной нервной системы (ЦНС), составляющие до 80% всех заболеваний нервной системы в детском возрасте. Наиболее частым поражением головного мозга у недоношенных новорожденных являются ВЖК. Они могут приводить как к летальным исходам, так и к развитию широкого спектра неврологических расстройств в детском возрасте. [Mukerji A., Shah V., Shah P.S. Periventricular/intraventricular hemorrhage and neurodevelopmental outcomes: a meta-analysis // Pediatrics. - 2015. - Vol. 136. - P. 1132 - 1143]. Частота встречаемости ВЖК у новорожденных имеет обратную зависимость от срока гестации, так, у недоношенных 25 - 29 недель гестации ВЖК выявляются в 25 - 39% случаев, 30 - 32 недель - в 15-20% случаев, 32 - 34 недель - в 10% случаев, 34-36 недель - менее, чем в 5% случаев [Неонатология: национальное руководство / под ред. Н.Н. Володина. - М.: ГЕОТАР- Медиа, 2007 . - 848 с.].

Известно, что ПЭ является фактором риска развития перинатальных поражений ЦНС у новорожденных детей. Частота встречаемости ВЖК у новорожденных от матерей с умеренной ПЭ составляет 19,1%, с тяжелой ПЭ - 45,3%. [Состояние здоровья новорожденных, родившихся от матерей с гипертензивными расстройствами при беременности / Н.В. Харламова, Т.В. Чаша, И.А. Панова и др. // Вестник Ивановской медицинской академии. - 2017. - Т. 22, № 3. - С. 19-23].

Разработка способа прогнозирования ВЖК у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с ПЭ, позволит своевременно проводить профилактические мероприятия для предотвращения формирования данной патологии, что улучшит показатели здоровья и качества жизни детей.

Известен способ прогнозирования ВЖК у доношенных новорожденных в первые часы жизни путем измерения показателей церебральной гемодинамики в передней мозговой артерии методом ультразвуковой допплерографии и расчета индекса резистентности (ИР). При значениях ИР в пределах от 0,9 и выше в первые 12 часов жизни ребенка и резком его падении до 0,55 и ниже в последующие 12 часов жизни прогнозируют развитие ВЖК с точностью 98,1% [Патент № 2187964 Российская Федерация. Способ прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний у доношенных новорожденных / Лобанова Л.В., Философова М.С., Реброва Н.П., Быстрова В.А. // Изобретения. Полезные модели. - 2002. - № 24].

Недостатки способа:

1. Применение способа возможно только у доношенных новорожденных, так как церебральная гемодинамика у недоношенных новорожденных имеет четкую взаимосвязь с показателями центральной гемодинамики, которая в первые сутки жизни зависит от наличия асфиксии при рождении, использования медикаментозных препаратов и других факторов [Допплерография перинатальных поражений головного мозга / Е.А. Зубарева, И.В. Дворяковский, А.Р. Зубарев, А.Б. Сугак. - М.: Видар, 1999. - 96 с.; Клайман Ч.С., Сери И. Гемодинамика и кардиология / пер. с англ.; под ред. Р. Полина, В.А. Кокорина, А.А. Купряшова, К.С.Шведова. - М.: Логосфера, 2015. - 512 с.].

2. Требуется дорогостоящее оборудование и высококвалифицированный персонал для проведения ультразвуковой допплерографии.

3. Необходимость 2-х кратного обследование новорожденного в первые сутки жизни делает способ сложным в исполнении и продолжительным по времени (24 часа).

Известен способ прогнозирования ВЖК у недоношенных новорожденных путем их обследования в первый день жизни, отличающийся тем, что у новорожденных с гестационным возрастом менее 28 недель определяют гестационный возраст, измеряют вес и рост при рождении, в периферической венозной крови определяют содержание нейромодулина (GAP-43) и вычисляют прогностический индекс D по формуле:

D = 33,14437 + 15,33889 × А1 - 0,56505 × А2 - 1,09329 × A3 + 2,406192 × А4, где:

А1 - вес новорожденного, кг;

А2 - рост новорожденного, см;

A3 - срок гестации в полных акушерских неделях;

А4 - содержание нейромодулина (GAP-43), нг/мл;

33,14437 - CONSTANT,

при D более 0 прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде, а при D менее 0 судят об отсутствии ВЖК в раннем неонатальном периоде [Патент 2741722 Российская Федерация Способ прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний у недоношенных новорожденных / Харламова Н.В., Андреев А.В., Кузьменко Г.Н., Попова И.Г., Назаров С.Б. // Изобретения. Полезные модели. - 2021. - № 4].

Недостатки способа:

1. Способ позволяет прогнозировать ВЖК только у недоношенных новорожденных со сроком гестации менее 28 недель.

2. Способ является инвазивным для новорожденного. Возможными осложнениями венепункции являются образование подкожной гематомы, флебит, воспалительные явления мягких тканей в месте венепункции (инфильтрат, абсцесс, некроз кожи), септицемия. По мнению многих авторов потеря крови при венепункциях является одним из основных механизмов развития анемии недоношенных [Жетишев Р.А. Анемии новорожденных (клинико-лабораторные варианты, дифференцированная лечебная тактика): автореф. дис… д-ра мед. наук. - СПб., 2002. - 28 с.; Widness J.A. Pathophysiology of anemia during the neonatal period, including anemia of prematurity // NeoReviews. - 2008. - Vol. 9. - P. 31-35].

Наиболее близким к заявляемому способу является способ прогнозирования ВЖК у новорожденных путем определения в пуповинной крови концентрации сероводорода и при ее значении, равном 35 мкмоль/л или более, прогнозируют развитие ВЖК. [Патент № 2676703 Российская Федерация. Способ прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний у новорожденных / Назаров С.Б., Попова И.Г., Ситникова О.Г., Малышкина А.И., Кузьменко Г.Н., Чаша Т. В., Харламова Н. В. // Изобретения. Полезные модели. - 2019. - № 1].

Способ имеет существенный недостаток - ограничение по времени выполнения: определение концентрации сероводорода должно производиться в течение часа после забора крови, так как сероводород быстро расщепляется и не имеет стойких метаболитов в крови.

Указанный недостаток предлагается устранить в заявляемом способе.

Техническим решением заявляемого способа является расширение арсенала прогностических средств и повышение доступности прогнозирования ВЖК у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией, за счет увеличения времени хранения биологического материала, необходимого для осуществления прогнозирования.

Технический результат достигается путем определения в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) и ангиогенина (ANG) с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле:

D = 2,086 - 0,5156 × А1 - 0,0951 × А2, где:

А1 - концентрация эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), нг/мл,

А2 - концентрация ангиогенина (ANG), пг/мл,

2,086 - CONSTANT,

Если D менее 0 прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией;

Если D более 0 - прогнозируют отсутствие ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией, с точностью 84,6%.

Способ осуществляют следующим образом:

Выделение эндотелиальных клеток из вены пуповины проводят методом J.C. Gerlach и соавторов [Large-Scale isolation endothelial cells from pig and human liver / J.C. Gerlach, K. Zeilinger, G. Spatkowski et al. // Journal of Surgical Research. - 2001. - Vol. 100, № 1. - P. 39-45]. Забор пуповины осуществляют после рождения недоношенного ребенка от матери с преэклампсией, после того, как была пересечена пуповина и отделена плацента. Отделенный для исследований фрагмент пуповины длиной 10 - 15 см погружают в закрытый резервуар, содержащий стерильный 0,9% раствор NaCl (физиологический раствор), в котором он может храниться до 48 часов при комнатной температуре. После извлечения фрагмента пуповины из резервуара с физиологическим раствором внешнюю поверхность пуповины промывают 0,9% раствором NaCl. Вену пуповины промывают раствором ЭДТА при помощи пупочного катетера до полного удаления сгустков крови. Для ферментативной диссоциации полость пупочной вены заполняют 10 мл смеси растворов ферментов, состоящей из 5 мл 0,04% раствора трипсина и 5 мл 0,1% раствора коллагеназы, концы пуповины фиксируют зажимами и закрепляют ее вертикально на штативе, инкубируют при комнатной температуре в течение 15 мин. После инкубации собранный ферментативный раствор, содержащий клетки эндотелия, помещают в центрифужную пробирку с добавлением натриевой соли аденозинфосфата (АДФ-Na) в концентрации 1 мг/мл. Полученную смесь механически перемешивают в течение 10 мин аккуратным встряхиванием пробирки, после чего центрифугируют при 200 g в течение 5 мин для удаления агрегатов тромбоцитов. Супернатант, свободный от тромбоцитов, переносят в другую пробирку и центрифугируют при 200 g в течение 15 минут для осаждения эндотелиальных клеток. Затем надосадочную жидкость аккуратно удаляют, а полученный осадок суспендируют в 0,1 мл 0,9% раствора NaCl и перемешивают стеклянной палочкой. Полученной суспензией заполняют камеру Горяева. Количество клеток эндотелия подсчитывают методом фазово-контрастной микроскопии, результат количества подсчитанных клеток умножают на 10⁴/л [Hladovec J. Physiol Bohemoslov. Circulating endothelial cells as a sign of vessel wall lesions // Physiologia bohemoslovaca. - 1978. - Т. 27, № 2. - P. 140-144; Диагностическая ценность определения десквамированных эндотелиальных клеток в крови / Н.Н. Петрищев, О.А. Беркович, Т.Д. Власов и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - № 1. - С. 50-52]. Полученную суспензию клеток разливают на аликвоты, которые, в необходимом объеме, содержат 500 клеток. Лизат клеток получают путем замораживания суспензии клеток при температуре -70°С в течении 30 минут. В лизатах эндотелиальных клеток проводят определение концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) и ангиогенина (ANG) наборами реактивов фирмы «RayBiotech» (США) иммуноферментным методом на анализаторе «EL-808» (США). Время проведения анализа 2 часа 30 минут. Концентрация eNOS выражался в нг/мл, концентрация ANG - в пг/мл.

На основании математической обработки полученных данных методом дискриминантного анализа определяют прогностический индекс D по формуле:

D = 2,086 - 0,5156 × А1 - 0,0951 × А2, где:

А1 - концентрация эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), нг/мл,

А2 - концентрация ангиогенина (ANG), пг/мл,

2,086 – CONSTANT.

Если D менее 0 - прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией.

Если D более 0 - прогнозируют отсутствие развития ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается прогнозировать развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией, по определению в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, концентрации eNOS и ANG.

Ангиогенин - полифункциональный белок, образуется в печени и является естественным стимулятором роста капилляров, а также участвует в процессе ангиогенеза [Angiogenin-induced tRNA fragments inhibit translation initiation / P. Ivanov, M.M. Emara, J. Villen et al. // Molecular Cell. - 2011. - Vol. 43, № 4. - P. 613-623]. ANG экспрессируется ключевыми плацентарными клетками, а именно сосудистыми, трофобластическими и амниональными клетками. [Angiogenin distribution in human term placenta, and expression by cultured trophoblastic cells / N. Pavlov, E. Hatzi, Y. Bassaglia et al. // Angiogenesis. - 2003. - Vol. 6, № 4. - P. 317-330. doi: 10.1023/B:AGEN.0000029412.95244.81]. ANG соединяется с рецепторами на клетке и проникает внутрь клетки, где накапливается в ядрышках и в цитоплазме. [Angiogenin expression in burn blister fluid: implications for its role in burn wound neovascularization / S.C. Pan, L.W. Wu, C.L. Chen et al. // Wound Repair Regen. - 2012. - Vol. 20, № 5. - P. 731-739. doi: 10.1111/j.1524-475X.2012.00819.x.]. Его функции в плаценте не ограничиваются ангиогенезом, он участвует в поддержании сосудистого и тканевого гомеостаза, а также материнской иммунной толерантности к плоду. [Angiogenin expression during early human placental development; association with blood vessel formation / N. Pavlov, J.L. Frendo, J. Guibourdenche et al. // Biomed. Res. Int. - 2014. - Vol. 2014. - P. 781632. doi: 10.1155/2014/781632]. Отмечено, что ANG является также нейропротектором и играет важную роль для защиты нейронов мозга от повреждений при гипоксии [Control of motoneuron survival by angiogenin / D. Kieran, J. Sebastia, M.J. Greenway et al. // J. Neurosci. - 2021. - Vol. 41, № 35. - P. 7509-7510. doi: 10.1523/JNEUROSCI.3399-08.2008].

Ранее определение содержания ANG использовалось в качестве маркера для оценки активности воспаления при заболеваниях кишечника [Serum angiogenin in inflammatory bowel disease / I.E. Koutroubakis, C. Xidakis, K. Karmiris et al. // Dig. Dis. Sci. - 2004. - Vol. 49, № 11-12. - P. 1758-1762. doi: 10.1007/s10620-004-9565-4], для оценки морфологических изменений и ангиогенеза в яичниках [Angiogenin is involved in morphological changes and angiogenesis in the ovary / H.S. Lee, I.S. Lee, T.C. Kang et al. // Biochem Biophys Res Commun. - 1999. - Vol. 257, № 1. - P. 182-186. doi: 10.1006/bbrc.1999.0359].

Эндотелиальная синтаза оксида азота представляет собой фермент, синтезирующий оксид азота (NO), который является небольшой газообразной и липофильной молекулой, участвующей в биологических процессах [The polymorphism for endothelial nitric oxide synthase gene, the level of nitric oxide and the risk for pre-eclampsia: A meta-analysis / В. Dai, Т. Liu, В. Zhang et al. // Gene. - 2013. - Vol. 519, № 1. - P. 187-193]. NO необходим для регуляции сосудистого тонуса, что обеспечивает нормальное кровообращение жизненно важных органов плода и постнатальную адаптацию новорожденного [Fish J.E., Marsden P.A. Endothelial nitric oxide synthase: insight into cell-specific gene regulation in the vascular endothelium // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2006. - Vol. 63, № 2. - P. 144-162. doi:10.1007/s00018-005-5421-8, Блошинская И.А. Роль основных вазоактивных факторов сосудистого эндотелия // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2003. - № 4. - С. 7-10]. Выявлена взаимосвязь между эффектом ангиогенина, как основного ангиогенного фактора и высвобождением внеклеточного NO. Было показано, что ангиогенин запускает активность синтазы оксида азота (NOS), тем самым увеличивает уровни NO [Angiogenin Induces Nitric Oxide Synthesis in Endothelial Cells through PI-3 and Akt Kinases / R. Trouillon, D.K. Kang, H. Park et al. // Biochemistry. - 2010. - Vol. 49, № 15. - P. 3282-3288. https://doi.org/10.1021/bi902122w]. В крови беременных с преэклампсией выявлено резкое уменьшение активности фермента, стимулирующего образование оксида азота и, следовательно, уровня эндотелиального релаксирующего фактора [Киселева Н.И., Занько С.Н., Солодков А.П. Маркеры дисфункции эндотелия при гестозе // Дисфункции эндотелия: экспериментальные и клинические исследования: труды III международной научно-практической конференции. - Витебск: Изд-во ВГМУ, 2004. - С. 201- 204]. Известно, что при преэклампсии во время беременности у женщины происходит нарушение маточно-плацентарного кровообращения, что приводит к развитию эндотелиальной дисфункции у плода. [Клинико-лабораторная оценка эндотелиальной дисфункции в сосудах пупочного канатика при гестозе / Е.В. Филькина, Л.В. Посисеева, С.Б. Назаров и др. // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2009. - Т. 8, № 3(31). - С. 73-75].

Известно, что при беременности, осложненной преэклампсией, у женщин отмечается снижение белка в крови, что обусловлено как частичным разведением плазмы крови, вследствие задержки жидкости в организме, так и понижением концентрации альбумина. [Айламазян Э.К., Соколов Д.И., Сельков С.А. Гестоз и атеросклероз: общность патогенетических механизмов // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009. - Т. LVIII, № 1. - С. 4-15]. Ранее в исследованиях было отмечено снижение количества альбумина у новорожденных, родившихся от матерей с преэклампсией и в пуповинной и в венозной крови, взятой на первые сутки жизни [Особенности эндотелиальной функции в период ранней постнатальной адаптации у новорожденных от матерей с гестозом / И.Г. Попова, С.Б. Назаров, О.М. Филькина и др. // Мать и дитя в Кузбассе. - 2014. - № 2(57). - С. 82-86]. Известно, что впервые дни жизни у новорожденного уровень ангиогенина в крови низкий, его максимальное количество поступает в организм ребенка от матери. [The Potential of Angiogenin as a Serum Biomarker for Diseases: Systematic Review and Meta-Analysis / Y. Cai, W. Zhou, J. Sheng, Xu. Zhengping // Hindawi Disease Markers. - 2018. - Vol. 1984718. - Р. 15. https://doi.org/10.1155/2018/1984718].

Мы предполагаем, что повышенное избирательное накопление eNOS и ангиогенина в клетки эндотелия пуповины приводит к недостаточному содержанию этих показателей в пуповинной крови, при этом снижается их вазопротекторное и нейропротекторное действие, что приводит к развитию гемодинамических нарушений в сосудах мозга у плода и формированию в последующем внутрижелудочковых кровоизлияний у новорожденных в раннем неонатальном периоде.

Отличительные признаки способа:

в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, определяют концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) и ангиогенина (ANG) с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле:

D = 2,086 - 0,5156 × А1 - 0,0951 × А2, где:

А1 - концентрация эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), нг/мл,

А2 - концентрация ангиогенина (ANG), пг/мл,

2,086 - CONSTANT,

при D менее 0 прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде, а при D более 0 судят об отсутствии ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами:

Пример 1. Женщина П., 26 лет, поступила в стационар с диагнозом: Беременность 26 недель 6 дней. Головное предлежание плода. Тяжелая преэклампсия. Ожирение II степени. Пациентка госпитализирована в палату интенсивной терапии, назначена противосудорожная, антигипертензивная терапия, профилактика респираторного дистресс-синдрома плода. На фоне лечения в течение 4 часов отмечено отсутствие эффекта от проводимой терапии. В связи с отсутствием эффекта от проводимой терапии тяжелой преэклампсии выполнено досрочное родоразрешение путем операции кесарева сечения. Родилась живая недоношенная девочка с массой тела 1050 г, длиной тела 37 см, оценка по шкале Апгар 4-5 баллов.

Согласно предложенному способу после рождения в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, определены концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота, которая составила 0,52 нг/мл, и ангиогенина, которая составила 4,12 пг/мл, с последующим вычислением прогностического индекса D:

D = 2,086 - 0,5156 × 0,52 - 0,0951 × 4,12= 1,42, то есть D больше 0, что указывает на вероятное отсутствие развития ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенного новорожденного, родившегося у матери с преэклампсией.

Состояние новорожденного с рождения определено как крайне тяжелое по дыхательной недостаточности, незрелости, неврологической симптоматике (синдром угнетения). В родильном зале выполнена интубация трахеи, начата искусственная вентиляция легких. Ребенок переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных.

На второй и седьмой дни жизни ребенку проводилась нейросонография для контроля динамики состояния центральной нервной системы, по результатам которой выявлена церебральная ишемия II степени, признаки ВЖК не были зафиксированы ни в одном исследовании.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

В возрасте 12 дней жизни ребенок был переведен на второй этап выхаживания с клиническим диагнозом: Респираторный дистресс-синдром новорожденного. Перинатальное поражение центральной нервной системы, церебральная ишемия II степени. Синдром угнетения. Недоношенность 27 недель. Очень низкая масса тела при рождении.

Пример 2. Женщина К, 30 лет, поступила в стационар с диагнозом: Беременность 35 недель 5 дней. Головное предлежание плода. Умеренная преэклампсия. Рубец на матке после двух операций кесарево сечение. Назначена антигипертензивная терапия. Через 2 дня произошло дородовое излитие околоплодных вод. Учитывая излитие околоплодных вод у повторнородящей с рубцом на матке после двух операций кесарево сечение женщина родоразрешена в экстренном порядке путем операции кесарево сечение в сроке беременности 36 недель. Родился живой недоношенный мальчик с массой тела 2600 г, ростом 44 см, оценкой по шкале Апгар 5/7 баллов.

Согласно предложенному способу после рождения в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, определены концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота, которая составила 2,52 нг/мл, и ангиогенина, которая составила 34,12 пг/мл, с последующим вычислением прогностического индекса D:

D = 2,086 - 0,5156 × 2,52 - 0,0951 × 34,12 = -2,46, то есть D меньше 0, что указывает на вероятное развития ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенного новорожденного, родившегося у матери с преэклампсией.

Состояние новорожденного с рождения определено как тяжелое по дыхательной недостаточности, неврологической симптоматике (синдром угнетения). В родильном зале начата респираторная поддержка nCPAP. Ребенок переведен в отделение реанимации и интенсивной терапии новорожденных.

На третий день жизни ребенку проводилась нейросонография для контроля состояния центральной нервной системы, по результатам которой были выявлены признаки церебральной ишемии II степени и ВЖК I степени слева.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Ребенок был переведен на второй этап выхаживания в возрасте 7 дней с клиническим диагнозом: Врожденная пневмония, средней тяжести, смешанной этиологии. Перинатальное поражение ЦНС, церебральная ишемия II степени, ВЖК I слева, синдром угнетения. Открытое овальное окно. Анемия легкая, смешанной этиологии, нормохромная. Недоношенность 36 недель.

Указанным способом исследовано 52 фрагмента пуповины и обследовано 52 недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1
Показатель	Количество обследованных
Всего обследовано новорожденных	52
Истинно - положительный результат	18
Ложно - положительный результат	6
Истинно - отрицательный результат	26
Ложно - отрицательный результат	2
Точность заявляемого способа	84,6%,
Специфичность заявляемого способа	81,3%
Чувствительность заявляемого способа	90%

Преимущества способа:

1. Простота и безопасность для матери и ребенка забора биологического материала для выполнения способа: забор пуповины проводится после ее пересечения и отделения последа.

2. Способ не имеет временных ограничений при выполнения, так как фрагмент пуповины может храниться в стерильном физиологическом растворе до 48 часов при комнатной температуре.

3. Способ позволяет среди недоношенных новорожденных от матерей с преэклампсией выделить группу риска по развитию ВЖК в раннем неонатальном периоде и своевременно проводить профилактические мероприятия, что улучшит показатели здоровья и качества жизни этих детей.

Способ прогнозирования внутрижелудочковых кровоизлияний (ВЖК) у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией, путем исследования биологического материала, отличающийся тем, что в лизате эндотелиальных клеток, выделенных из вены пуповины, определяют концентрации эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS) и ангиогенина (ANG) с последующим вычислением прогностического индекса D по формуле

D = 2,086 – 0,5156 × А1 - 0,0951 × А2,

где А1 – концентрация эндотелиальной синтазы оксида азота (eNOS), нг/мл,

А2 – концентрация ангиогенина (ANG), пг/мл,

2,086 – CONSTANT,

при D менее 0 прогнозируют развитие ВЖК в раннем неонатальном периоде, а при D более 0 судят об отсутствии ВЖК в раннем неонатальном периоде у недоношенных новорожденных, родившихся у матерей с преэклампсией.