Продуцент целлюлолитических ферментов

 

О Л Й С А Н Й Е 282248

ЙЗОБРЕТЕН ЙЯ

V аИ ОЛЕСКОМУ CBVip ETIE33bCii8

Союз Советских

Социалистических

Ре .—., бони.; 11 н11:с1111сс От авт. свидетельства №

-Ф г а я в л с и 0 2 4. I J . 1 9 6 9 (№ 1 3 2 3 4 2 8/ 2 8- 1 3 ) Кл. 6а, 22/0-1 с присоединением заявки №

Приор?:1! с н1ПК С 12<1 13/10

С 07g 7/028

С 121< 3/00

УДК 577,15.07(088,8) Коьтнтот по делам изобретений и от1:рь!тич прн Совете Министров

СССР

Опубликовано 28.IX.1970. Б1О/!лстснь ¹ 30

Дата опубликования описания 17. 11.1970

Авторы изобрстсшгя

С. С. 1Целокова и И, Г. Су

Отдел микробиологии АН Узбе

Заявитель

UITAMM ASPERGILLUS ТЕ1<1<1)Я УзЦ-1 — ПРОДУЦЕНТ

ЦЕЛАЮАОАИТИЧЕСКИХ ФEPMEHTOB

Предлагаемый штамм Aspergillus terTeuз

УзЦ-1 является продуцентом целлюлолитических ферментов.

Штамм выделен из содержимого рубца крупного рогатогс скота.

Для получения целлюлолитических ферментов гриб культивируют в глубинных условиях на минеральной среде Чапека, содержащей

2 — 3 !р фильтровальной бумаги, при значении рН среды 5,0 и температуре 30 C в течение

10 суток. Целлюлолптическая активность культуральной жидкости гриба: карбоксимети;Iцеллюлозная 40500 ед/л, целлюлозна я

1310 ед/л.

Карбоксиметилцеллюлозная и целлюлозкая активность ферментного препарата, полученного из культуральной жидкости осаждением этанолом, соответственно составляет 22800 и б20 ед/г.

Выход фермента 1,б г.

Карбсксимстилцеллюлозная активность культуральной жидкости известного гриба

-Ьрегф11нз fumigBtus составляет лишь

4800 ед/л, фсрментного препарата 4100 ед/г.

Целл1слолитическую активность (ф— ферме IT) ) . bT p а JlbHQH ?кидкссти, B также ферментного препарата определгиот по степени падения вязкости субстрата карбоксиметилцеллюлозы (степень по7Hмеризации 400, степень замещения Зб) под действием фермента и по количеству редуцирующих сахаров, Qoразсвавшихся при гидролизе этого субстрага.

Степень падения вязкости определяют с !Ioмощью вискозиметра Оствальда 110 времени

5 истечения 5»л 03%-ного раствора NB-КМЦ, 1< I

При определении активности по количеству

10 образовавшихся редуцирующих сахаров к

5 л л 1%-кого раствора Ха-КМЦ добавляют

1 ?»л той ?I

После 1 час гидрслиза при 30 С определи с!

15 количество рс уцирующих сахаров по методу

Сомоджи и Нельсона в модификации

М. И. Верховцевой.

Активность фермента выражают в процентах падения вязкости NB-КМЦ, .»г/?»л обра20 зовавшихся редуцирующих сахаров, а также

B условных един щах активности.

Целлюлозную активность (Сг — фермент) определяют методом, описанным Н. А. Раднонсвой и др., по количеству образ ищи.;ся са25 харон при действии 1<ультуралънОЙ жидкосг .1

1:а i1oпск.

Морфология. Сусло — агар. Снороношение конидиальнос, кснидии шаровидные 2,5 — 3,0 !г в диаметре, располо?кены цепочками. соеди30 ненными в колонку. Конидиеносцы бесцветные

28 2248

Предмет изобретения

Составитель В. Дунье

Техрсд А. А. Камышиикова К корректор Г. С. Мухина

Редактор А. Б. Бер

Заказ 55%, !прахи 480 По;1писиос

LIIHHIIiIII Комптс".а по делам изобретений и открыти!! при Свисте Ми!шстров СССР

Москва, 3У-35, Раушская паб., д. 4j5

ГIIIIÎI !3а(1ии1, пр, - и! ° !Ова, 2 гладк! с, размером 5- б (150 — 160 !!. Лнамс-.р верхушечного нузыр;! 12- — 14 и Стсригмы большей iасгьк! !вуря.!ные: перви !1!! !е

1,7 6,0-- 7.0 11, P 1орп иь!е 1,7 5,0 — 6,0 !! на целлюлозном аг; ре; гриб морфологпческ 5 почти не отличается.

Твердая среда Чапека --Докса. Через двое суток после посева колонии ое,7ь с, г у!1!ис.1!1с, в центре вы пук.7ые упг!отнепп1!с, На т!рстьи четвертые сутки середина колоний окраши- 7О вается в светло-коричневый цвет вследствие образования конидий, край остается белым.

На пягые-седьмые сг!кн вся ко7oiiня становится коричневой (цвет корицы). Выделяет желтый пигме! т iB среду, обратная сторона j5 колоний оранжево-кор ичневая. жидкая минеральная среда Чапека — Докса (c полоской фильтровà JIьной бумаги) . Через двое суток на полоске фильтровальной бумаги появляется коричневый мицелий, который 20 со временем замещает всю бумагу, находящуюся над уровнем питательной среды.

Часть .бумаги, погру кенна!! в среду, растворяется. На поверхности среды образуется коричневая мицелиальная пленка. 25

Сусло — агар. В. двухсуточной культуре колонии белые, пушистые, в центре выпуклые, уплотненныс, к краю мицелий тонкий. На третьи сутки на выпуклой части появляется светло-коричнеьое окрашивание от кониднй, зр на пятые сутки вся колония становится коричневой бархатистой. Обратная сторона коло шй оранжево-коричневая. Диаметр 4 -5 с!!.

Целлюлозный агар. На вторые-третьи сутки гриб образует слаборазвитый мицелий. I(олопни коричневые, клочковатые, 3 — 5 сл в диаметре. Пигмент в среду не выделяется. Обратная сторона колоний не окрашена. На молочно-белом целлюлозном агаре образуют:я прозрачные зоны растворения целлюлозы. 4р

Отношение к углеводам. Лссим!!лирует гл!окозу, сахарозу, мальтозу, целлобиозу и целлюлозу. В качестве источника углеводйстого и тания для дBHHQI штамма может служить естественная клетчатка, содержащаяся, например, в пшеничной, ржаной и рнсогой соломе.

Отношение к источникам азота, Хорошо усваивает минеральный азот в виде ХаN0„ (1!Н4). 01, п7050 — органический в виде поп- 50 тона.

Ферментный препарат целлюлозы, полученный с помощью предлагаемого штамма, может быть использован для разрушения оболочки растительных клеток с целью лучшей 55 экстракции содержащихся в них веществ; B пищевой промышленности, например, при производстве пива и соков для увеличения вы Уода экстракта и осветлсния, а также в сельском козий!стве при 1гронзводс!ве кормов. Применение целсиолозы прп обработке грубых кормов оудст способствовать 1!свь1п е. !и!о содержания легкоусвсяемых углеводов !i размягчению корма, Штангу! Лврсг, 111Lls 1сггевз УзЦ-1 --- про 1 цент целлюлолитических ферментов.

Морфология. Сусло — агар. Спороношение конидиальное. Конпдии шаровнднь|е, диаметр пY 2,5 — 3,0 Ll, расположены цепочками, oсдппсиными в колонку. Конпдиеносцы бссцве1ные гладкие, размером 5 — 6х,150--160 !1. Дпамс!р верхушечного пузыря 12 — 14 LL Стеригмы большей частью двурядные: размер первичных 1,7к,6,0 — 7,0 IL, вторичны.; 1,7 5,0 — 6,0 1!.

Т вердая среда Чапека — Докса. Через двое суток колонии белые, пушистые, в центре выпуклые плотные. На третьи-четвертые * сутк середина колоний окрашивается в светло-коричневый цвет вследствие образования кз гндий, край остается белым. На пятые-седьмые сутки вся колония становится кори !невой (цвет корицы), выделяет желтый пигмент в среду, ооратнчя сторона колоний оранжезокоричнсвого цвета. жидкая минеральная среда чапека — Доке!! (с полоской фильтровальной бумаги). Через двое суток на полоске бумаги появляется кори !невый! мицелий, которьш со временем замещает вс!о бумагу, находящуюся над уровнем питательной среды. Часть бумаги, погруженная в среду, растворяется. На поверхности среды образуется коричневая мицелиальная пленка.

Сусло †аг. В двухсуточной культуре колонии белые, пушистые, в центре выпуклые уплотненные, к краю мицслий тонкий. I-Iа третья сутки на выпуклой части появляется светлокоричневое окрашивание от конидий. На пятые сутки вся колония становится коричпевой бархатистой. Обратная сторона колоний оранжево-коричневая. Диаметр колоний 4 — 5 с:!!.

Целлюлозный агар. На вторые-третьи су1ки гриб образует слаборазвитый мицслий. Ко;!опи!! кор!!чнсвые, клочковатые, диамегр нх

3 — 5 слс. Пигмент в среду не выделяется, обратная сторона коло!!!!й IIe 0KpHIIIOHB. I IQ 1!оло гпо-белом целлюлозном агаре образу!отся прозрачные зоны растворения целлюлозы.

Отношение к углеводам. Ассимилирует гл!окозу, сахарозу, мальтозу, целлюлозу, целлобиозу.

Отношение к источникам азота. Хорошо усваивает минеральный азот в виде INaN0>, (NH<) 50, плохо органический — пептон.