Продуцент протеолитическихферментов

 

ОГ)ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Кл. 6а, 22/04

6а, 14

Заявлено 21.1.1969 (№ 1302445/28-13) с присоединением заявки ¹

Приоритет

МПК С 12d 13/10

С 121. 1/02

УДК 576.8.094 (088.8) Комитет по делам изобретений и открытий

ilpH Совете Министров

СССР

Опуоликовано 26.V.1970. Бюллетень ¹ 18

Дата опубликования описания 27Х111.1970

Авторы изобретения

И. Д. Касаткина и Е. Т. Желтова

Институт микробиологии АН СССР

Заявитель

ШТАММ ASPERGILLUS TERPICOLA

И НМ И Н-20 — П РОДУЦЕНТ П РОТЕОЛ ИТ И Ч ЕСКИХ

Ф EPMEHTOB

Предлагаемое изобретение предназначено для использования в ферментной промышленности. а именно для получения протеолитических ферментных препаратов, обладающих фибринолитическими и тромболитическпмп свойствами.

Известен штамм Aspergillus terricola, продуцирующий протеолитические ферменты, обладающие фибринолитическими свойствами.

Ппедлагаемый штамм Asperpillus terricola

ИНМИ Н-20 позволяет получать ферменты более высокой активности. Он получен путем ультрафиолетового облучения конидий исходного штамма Asoergillus terricola ИНМИ ¹ 5 при дозе 12><10 эрг/лсме- и последующего отбора колоний.

Предлагаемый штамм по сравнению с исходным продуцирует протеолитические ферменты более высокой активности. Фибринолитическая активность его в среднем íà 70% выше, чем исходного штамма. Высокая фибринолитическая активность получена при выращивании мутанта на простой сахарозноминеральной среде (без дополнительного внесения органических источников азота), что имеет важное значение прп очистке и выделении фермента в кристаллическом состоянии.

Морфология гриба (при выращивании на агаре Чапека с сахарозой). Гифы прямые или слегка извитые, шириною 5 — 8 лск, Конидиеносцы прямые, обильные, бесцветные, септированные, достигающие 750 — 1400 лск длины и более, от 8 до 15 лск ширины. Верхушечный пузырь почти круглый, 24 — 65 сяк в диаметре.

5 Встречсиотся мелкие, конидиальные головки диаметром 150 .ик и крупные — диаметром

220 — 300 лск.

Стеригмы однорядные 12 — 170(5 — 7 лск.

Иногда встречаются уродливые стеригмы, ко10 роткие и тонкие 10,5 4,0 лск или более длинные 18Х4,8 лск. Конидип полпморфны, круглые, реже овальные с шероховатой оболочкой. Наиболее часто встречаются круглые конидии 6,9 — 7,0 ик в диаметре.

15 Органическая среда. На сусло-агаре колонии круглые, темно-коричневые, пушистые, рыхлой структуры. Диаметр восьмпсуточной гигантской колонии равен 90 лслс.

На разбавленном сусло-агаре (3,5 Блг) ко20 нидиеобразование обильное. Край колоний белый, пушистый, не погруженный в агар. Колония с нижней поверхности серовато-кремовая, слабоскладчатая. Штамм образует склероции, особенно в старых культурах.

25 Синтетическая среда. На агаризованной среде Чапека с сахарозой колонии слабоскладчатые, бархатистые, рыхлой структуры.

На восьмыс сутки роста при 32 С диаметр колонии равен 85 — 87 лслс, а у исходного

30 штамма 65 — 80 лслс, цвет верхней поверхности

271471

Составитель Полянская !

Ч дактор О. Кузнецова Тсхрсд Л. В. Куклина 1 орректор И. С. Хлыстова

Заказ 2317/13 Тираж 480 Подписное

ЦН11ИПИ Комитета по дслаги изобретений и открытий при Советс Министров СССР

Москва, >К-35, Раушская паб., д. 4г5

Типография, пр. Сапунова, 2 колонии изменяется с возрастом от желтого до бурого п темно-коричневого. Конпдиеобразованпе обильпое. Отличается от псходпого штамма более темным цветом конидий. Край колонии серовато-белый, пушистый. Контуры колонии неровные. Цвет нижней поверхности колонии изменяется с возрастом от серого, оранжевого до коричневого с фиолетовым оттенком. На поверхности колонии образуются склероцпи черного цвета.

Мясо-пептонная желатина (МПЖ). При выращивании на желатине образует складчатую пленку, мицелий белый, желатину раз>кижает полностью.

На молоке — poor B виде пленки, мицелий белый с кремовым оттенком, молоко свертывает и пентонизирует. Пигмента в молоко не выделяет.

На ломтиках картофеля — рост бархатистый, коричнев!яй, более темный. чем у исходного штамма. Конидиеобразование обильное.

Окраску субстрата не изменяет.

На жидкой сахарозо-минеральной среде желтого пигмента не образует в отличие от исходного штамма. Мицелий и культуральпая жидкость гриба серого цвета.

Грибы выращивали глубинным методом на сахарозо-минеральной среде следующего состава, %. сахарозы 0,72; глюкозы 0,36; КХОа

0,2; MgSO4 0,123; КН.,РО,; 1,36; микроэлементы (FeSO<, ZnSO<, МпЯОт) следы, рН среды 6,8.

Фибринолитическую активность культуральной жидкости определяли двумя методами: на пластинках фибрина по методу Astr up u

iMtilertz (1952) и на экспериментально полученных тромбах крови человека в опытах

in vitro. Фпбринолитическая активность штамма Н-20 составляет в среднем 855 ед/лл, а активность исходного штамма в тех же условиях равна 496 ед/лл, т. е. активность штамма Н-20 на 70 /о выше, чем у исходного.

Растворение тромба крови под действием культуральной жидкости исходного штамма происходит за 4 — 5 час, а у штамма Н-20 оно наступает через 3 «ас. Таким образом, предлагаемый штамм Aspergillus terricola Н-20 обладает более активным комплексом протеолитических ферментов, действующих па фибрин и растворяющих тромбы крови, по сравнению с исходной культурой.

Фермент ггивные свойства штамма Н-20 стойко сохраняются прп пересевах и хранении. культуры на 3,5 Ьлг сусло-агаре в течение двух лет.

Предмет изобретения

Штамм Aspergillus lerricola ИНМИ 1-1-20— продуцент протеолитических ферментов.

Морфология. Гифы прямые или слегка пзвитые, шириною 5 — 8 лк. Конидиеносцы прямые, обильные, бесцветные, септированные, длина их достигает 750 — 1400 лк, ширина

8 —:15 лк.

Верхушечный пузырь круг.пый диаметром

24 — 65 лк. Встречаются мелкие конидиальные головки диаметром 150 лк и крупные—

220 — 300 лк.

Стеригмы однорядные 12 — 17X5 — 7 лк.

Конидии круглые, реже овальные с шероховатой оболочкой, диаметром 5 — 8 як.

Синтетическая среда. На среде Чапека с сахарозой колонии бархатистые, слабоскладчатые, рыхлые, цвет верхней поверхности колоний изменяется с возрастом от желтого до бурого и темно-коричневого. Край колонии серовато-белый, пушистый. Контуры колоний неровные. Цвет нижней поверхности изменяется от серого, оран>кевого до коричневого с фиолетовым оттенком. Штамм образует склероции черного цвета. Диаметр колонии на восьмые сутки роста достигает 85 — 87 л!л.

Органическая среда. На сусло-агаре колонии круглые, темно-коричневые, пушистые, рыхлой структуры. Край колоний белый, пушистый, не погруженный в агар. Обратная сторона колонии серовато-кремовая.

Мясо-пептонный желатин образует складча40 тую пленку, мицелий белый, желатин разжижает.

На молоке — рост в виде пленки, мицелий белый с кремовым оттенком, молоко свертывает и пептонизирует, Пигмента в молоко не

45 выделяет.

На ломтиках картофеля — рост бархатистый, коричневый. Конидиеобразование обильное. Окраску субстрата не изменяет.