Патент ссср 323010

 

OnMCAH И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

3230IO

Союз Советскиз

Социелистическиз

Республии

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 20.1.1969 (№ 1299621/23-4) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 30.111.1972. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 1 VL1972

М. Кл. С 0719/08

Комитет по делам изобретений и открытий ори Совете й1ииистрое

СССР

УДК 547.26 118.07 (088.8) Авторы изобретения В. М. Вдовенко, В. H Боброва, Л. С. Гордеева и В. К. Дедова

3 а я в итель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗ И Н-8"-H-5 -МОНОФОСФАТА

Изобретение относится к области получения меченых радиоактивными изотопами биологически активных соединений, а именно к способу получения не описанного в литер атуре аденозин-8 -Н-5 -монофосфата, аденозин-5 -монофосфата, меченного тритием в

8 положении пуринового кольца.

Это соединение, являясь предшественником

РНК, может быть применено в биологии и ,биохимии для изучения синтеза рибонуклеиновых кислот в живом организме.

Известный до сих пор неопределенно меченный тритием аденозин-5 -моно|фосфат получен изотопного обмена и имеет удельную активность 0,25 — 0,75 кюри/ммоль.

Предлагаемый способ дает возможность получить аденозин-5 -монофосфат, фиксированно меченный тритием в 8 положении пуринового кольца. Определенность метки представляет существенную ценность для биохимических исследований синтеза рибонуклеиновых кислот.

Описываемый спосо б основан на том, что

8-бром-2,3 -О-изопропилиденадеиозин фосфорилируют пирофосфорилхлоридом. Образующийся при этом 8-бромаденозин-5 -монофосфат далее по известной реакции дегалогенируют тритием в водно-щелочной среде в присутствии катализатора палладий на носителе.

Целевой продукт выделяют известными приемами. Удельная активность его около

5 кюри/ммоль.

П р и мер. К 386 мг (1 ммоль) 8-бром-2,3 5 О-изопропилиденаденозина, охлажденному до — 2 0 С приливают 1,2 мл (10 ммоль) пирофосфорилхлорида, температуру реакционной смеси постепенно доводят до комнатной, при этом происходит полное растворение. Смесь обра10 батывают 25 л л эфира, растворитель дека(нтируют, а остаток растворяют в 15 мл воды.

Раствор доводят 5 н. раствором гидроокиси лития до рН 1 и выдерживают при 20 С в течение 48 час. Реакционную смесь доводят

15 до рН 8 — 9 и 8-бромаденозин-5 -монофосфат (Br — АМФ) выделяют на колонне со смолой

Dowex (C1-форма) .

Нуклеотид выделяют при элюировании раствором 0,005 ммоль НС1+ О,О1 ммоль LICL

20 Контроль за концентрацией нуклеотида осуществляют измерением плотности при Km>x

263(H+). Кислый раствор нуклеотида доводят

5 н. раствором гидроокиси лития до рН 7 — 8 и выпаривают, досуха при 30 — 35 С и давле25 нии 10 — 12 мм рт. ст. Сухой остаток для освобождения от хлористого лития экстрагируют смесью метанол-ацетон (1:9) до отрицательной реакции на хлор-ион. Br — АМФ сушат в вакуум-эксикаторе над хлористым кальцием

30 в течение б час. Выход 200 мг (37%).

Вычислено, о/о. N 13,26; Вг 15,15.

С10Н12И507РЬ12 5Н20. Найдено, % . N 13,38; 13,77; Br 14,54; 14,57.

Хаак (H+) 263 ммк.

Для получения аденозин-8 -Н-5 -монофосфата проводят дегалогенирование Br — АМФ тритием над катализатором 5 /о Pd/С. Для этого

50 мг 8-бромаденозин-5 -монофосфата растворяют в 3 мл воды, содержащей 1,2 мл 0,1 и. раствора едкого натра, добавляют 50 мг 5%

Pd/Ñ, предварительно насыщенного водородом, и подают тритий-газ при перемешивании и комнатной температуре. Продолжительность реакции 2 час. После отделения катализатора и нейтрализации раствор упаривают досуха в вакууме. Неорганические соли экстрагируют метанолом, аденозин-8 -Н-5 -монофосфат отделяют центрифугированием и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход 30 — 38 /о. Удельная

323010 активность 10 кюри/г (5 кюри/ммоль), Радиохимическая чистота 98+2 /o, метод контроля— хроматографический анализ в системах: и-пропанол-аммиак-вода (55: 10: 35) — ме5 тод восходятцей хроматографии; и-бутанол-уксусная кислота-вода (7: 1: 5)— метод восходящей хроматографии; этанол-ацетат аммония до рН 7,5 (7: 3)— метод нисходящей хроматографии.

Предмет изобретения

Способ получения аденозин-8 -Н-5 -монофосфата, отличающийся тем, что 8-бром-2,3 -Оизопропилиденаденозин фоофорилируют пиро15 фосфорилхлоридом и образующийся при этом

8-бромаденозин-5 -монофосфат далее дегалогенируют тритием в водно-щелочной среде в присутствии катализатора палладий на носителе.

Составитель М. Макарон

Редактор T. Пилипенко Техред Е. Борисова Коррекгор Т. Баоакнна

Заказ 1477/1 Изд. Ма 612 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2