Способ количественного определения триглицеридов

 

37I734

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союэ Соеетскик

Социалистических

Республик

Зависимый от патента №

М. Кл. G 01п 33/16

Заявлено 23.XI I.1970 (№ 1607102/31-16)

Приоритет 02.I.1970, № P 2000127,8, ФРГ

Опубл иковано 22.ll.1973. Бюллетень № 12

Комитет пс делам иаобретений н открытий прн Совете Министров

СССР

УДК 612.123(088.8) Дата опубликования описания 12.IV.,1973

Авторы изобретения

Иностранцы

Харальд Шторк и Феликс Хельмут Шмидт (Федеративная Республика Германии) Иностранная фирма

«Берингер Маннхайм ГмбХ» (Федеративная Республика Германии) Заявитель

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ТРИГЛИЦЕРИДОВ

Изобретение относится к области медицинской биохимии, а именно к способам количественного определения триглицеридов.

Известен способ определения триглицеридов в сыворотке крови путем расщепления 5 жиров гидролизом, определения жирных кислот, общего холестерола и фосфолипидов, Однако такой способ не позволяет получить достаточно точные и надежные результаты определения триглицеридов в жидкостях орга- 10 низма, например, в сыворотке крови.

Целью изобретения является уточнение и упрощение методики определения триглицеридов.

Достигается это тем, что липопротеиды и 15 не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством полученной из

Rhizopus arrhizus липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин определяют известным способом. 20

Пример 1. 10 л сыворотки человеческой крови смешивают по очереди со следующими реактивами:

1,5 мл буферного раствора триэтаполамина (0,1 М с величиной рН 7,6, содержащего 25

НАДХ (0,12 ммоль) и сульфата магния (0,74 ммоль);

0,1 м г соли фосфоэнолпировиноградной натрий-кислоты (4,8 ммоль) и аденозинтрифосфата (1,3 ммоль), растворенного в буферном 30 растворе триэтаноламина (0,1 M) с рН 7,6;

0,2мл липазы из Rhizopus arrhisus (4мг/мл) (3,500 ед./мг = 14.000 ед./мл);

0,005 мл лактатдегидрогеназы (900 ед./мл) (пируваткиназы 150 ед./мл).

Полученный таким путем раствор через

5 мин подают в кювету и определяют экстинкцию при 366 нм (Е1). Благодаря добавке

0,005 лил глицерокиназы (85 ед./мл) происходит ферментная реакция, которая ведет через соль пировиноградной кислоты с уменьшением

НАДХ к НАД (ни котин амид-аденин-динуклеотид). Через 10 мин считывают второй коэффициент экстинкции (Е2) . Из разности экстинкций AE=Ei — Е2 получают содержание триглицерида по следующей формуле

ЛЕ >(4224 = мг /о триглицеридов

Пример 2. 2,5 мл водного буферного раствора следующего состава (мг): триэтаноламингидрохлорид 65, тригпдроксиметиламинометан 25, динатриевая соль аденозитрифосфата 1,25, сульфат магния (MgSQ )(7НаО)

1,25,— смешивают с таблеткой, содержащей (мг): НАДХ 4,5, фосфоэнолпировиноградная натрий-кислота 6,0, глицин 58,8, хлорид калия

14,8, поливоск 6000 4,4. После растворения таблетки подготовленный таким образом рабочий раствор вводят в кювету и смешивают с 20мл сыворотки и 30 мл ферментной смеси, 371734

Составитель T. Головина

Техред Е. Борисова Корректор О. Тюрина

Редактор Н. Спиридонова

Заказ 926/16 Изд. № 1237 Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 состоящей из лактатдегидрогеназы, пируваткиназы и глицерокиназы.

По окончании предварительной реакции определяют экстинкцию, смесь смешивают с

20 мл липазы из Rhizopus arrhizus и вычисляют из второго коэффициента экстинкции триглицерида, как описано в примере 1.

Предмет изобретения

Способ количественного определения триглицеридов, связанных с липопротеинами, и не содержащих протеипов нейтральных Жиров в растворах, например, в жидкостях организма, путем фермеьтативного расщепления жиров, от.гичающийся тем, что, с целью уточне5 ния и упрощения методики, липопротеиды и не содержащие протеинов нейтральные жиры расщепляют посредством полученной из

Rhizopus arrhizus липазы и полученный в качестве продукта расщепления глицерин опре10 деляют известным способом.