Ингибитор вирусов

 

О П И С А Н И Е 380!3l

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Союз Советских

Социалистических

Республик

Заявлено 18.111.! 971 (№ 1629117/31-16}

Й1г1 С 12k 700 с присоединением заявки ¹ —Гоеударственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изооретений н открытий

Приоритст —Опубликовапо 27.1Х.1973. Ь|оллетень ¹ 38

1 Д1; 576.858 (088,8) Дата опебликова ния описания 27Х.197.!

Авторы изобретения О. T. Андреева, В. И. Вотяков, Л. С. Станишевский, И. Г. Тищенко, А. Я. Гузиков и Л. И. Никонович

Заявители Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и Белорусский государственный ордена Трудового Красного Знамени университет имени В. И. Ленина

ИНГИБИТОР ВИРУСОВ

ОН

Изобретение относится к медицине, а именно к вирусологии.

Предлагаемое соединение в качестве ингибитора вирусов в патентной литературе не описано.

В качестве ингиоитора вирусов предложено применять З-окси-1,3-диметил-б-арилпиперидоны-4 общей формулы где Аг --- арильный радикал, содержащий в о-, м- и и-положениях галоид, алкильные и алкоксильные группы.

Пример. К раствору 0,3 г-моль метиламина в 70 мл изопропанола прибавляют

0,13 г-моль 1,2 эпокси-2-метил-5-арил-4-пентен-3-она. Реакционную смесь встряхивают при комнатной температуре в течение 30 час.

Изопропа нол отгоняют,при пониженном давлении, а остаток подкисляют 5%-ной соляной кислотой. Кислый раствор экстрагируют эфиром для удаления нейтральных продуктов, а затем подщелачивают поташом.

Выделившийся продукт отфильтровывают, промывают на фильтре водой, сушат и кристаллизуют из гексана. Получают З-окси-1,3диметил-6-арилпиперидоны-4 (1 — 111) с BblxQдом до 84%. 1 (Аг=СвН;), т. пл. 53 С, хлоргндрат, т. ил. 124 С; Il (Аг=п-РСвНв), т. пл.

87 С, хлоргидрат, т. пл. 113"C; III (Аг=п-СН.-ОС6Н4), т. пл. 95 С, хлоргпдрат, т. пл.

165 С.

1о Хлоргпдраты З-окси-!,3-днметил-б-арилпиперидинов-4 представляют собой белые кристаллические вещества, легко растворимые в воде.

Антивирусную активность названных соединений определяют на модели аденовируса

3 типа.

Эталонный штамп 3 типа получен пз музея вирусов Института вирусологии им. Д. И. Ивановского АМН СССР. В опытах применяют впрусосодержащую культуральную жидкость с титром 5,3 lg ТЦД5о. Первичный отбор ингибирующпх соединений проводят на пассируемых кожно-мышечных клетках эмбриона человека по сниженшо цитопатнческого действия (ЦПД) вируса.

Пассируемые кожно-мышечные клетки эмориона человека выращивают на среде из 5% гемогидролизата с 10% бычьей сыворотки.

Используют пробирочные культуры на четвер30 тые сутки роста с посевной дозой клеток в

380131

Предмет изобретения

ОН

СН

З0

Составитель С. Щеиева

Текрел Л. Богдаиова

Корректор Т. Хворова г едактор г1. Сииридоиова

I!одписное

Заказ 1001 Изд. № 1080 Тираж 467

111111И11И Государствеппого комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-З5, 1за)шокаи наб., д. 4/5

Обл. ríí. Костромского управле.гии пздагельств, полигра< >ии и книжкой торговли

1,0 мл 4 10 — 2.10 . В качестве поддерживающей среды применяют «гемогидролизат-поддерживающую» среду.

Влияние соединений на инфекционную акгивность вируса определяют на культуре трипсинизированных клеток почки эмбриона человека (ПЭЧ), Клетки ПЭЧ выращивают в пробирках с посевной дозой 5 105 †105 в

1,0 мл по общепринятому методу на 0,5о/о-ном растворе гидролизата лактальбумина с 10% бычьей сыворотки. Берут опыт на 5-е сутки роста и поддерживают на той же среде, но без сыворотки. Перед инфицированием культуру клеток однократно отмывают соответствующей поддерживающей средой. В отборочных опытах вирус с множественностью инфекций 0,03 — 0,3 ТЦДко/кл инкубируют в присутствии 1,0 мл поддерживающей среды, содержащей препарат в нетоксичной дозе для культуры клеток в течение 7 — 10 суток. Учитывают разницу ЦПД вируса, обработанного препаратом и контрольного в процентах поражения клеточного монослоя. ЦПД оценивают по общепринятой четырехкрестной системе, где:

1+ соответствует 25%, 2+ — 50%,, 3+ — 75%, 4+ — 100% поражения клеточного пласта.

Инфекционную активность вируса определяют методом титрования по ЦПД. Титр вируса вычисляют по методу L. Reed, Н. Muench (1938). Сравнивают титр вируса репродуцированного в присутствии соединения и контрольного. Достоверность различий принята на уровне 95%.

Препараты являются мало токсичными.

Лишь такие высокие концентрации как

1600 мкг/мл оказывают цитотоксическое действие, а дозы 800 мкг/мл и ниже не вызывают никаких морфологических изменений. Соединение хлоргидрат-З-окси-1,3 диметил-6-фенилпнперндона-4 (I) снижает репродукцию вируса более чем на 2,0 1g ТЦДао/0,1 в концентрации 800, 40 мкг/мл и в концентрации 200,100 мкг/мл — на 1,0 — 0,8 1g. Второе соединение хлоргидр ат-З-окси-1,3-дйметил-6- (n-F-фенил) пнперидона-4 (II) снижает титр репродуцированного вируса на 1,8 1 в концентрации

800 мкг/мл, на 1,0 — 0,8 Ig ТЦДко/0,1 в концентрации 400 — 100 мкг/мл.

Таким образом, для обоих препаратов максимально действующая концентрация равна

800 мкг/мл, а минимально действующая—

100 мкг/мл.

Оба препарата снижают репродукцию аденовируса 3 ти па на 2,0 — 2,8 Ig ТЦДао/0,1.

В то же время препараты не облада1от ни вирулицидным, ни профилактическим действием, а на стадии адсорбции снижают на 0,5—

0,8 1g ТЦД5p/0,1 титр вируса.

Применение З-окси-1,3-диметил-6-арилпиперидонов-4 общей формулы

35 где Ar — арильный радикал, содержащий в о-, м- и и-положениях галоид, алкильные и алкоксильные группы, в качестве ингибитора вир сов.