Способ получения литических ферментов

 

ОП ИСЛН И Е

ИЗОБРЕТЕН Ия

" 4l5294

Сааз Сьзеккмк

Социалисты ма:ва

Респубпмк

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 06.06.72 (21) 1793898,28-13 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет—

Опубликовано 15.02.74. Бюллетень № 6

Дата опубликования описания 18.09.74 (51) М.Кл. С 12d 13/10

Гасударственный комитет

Совета 1нннкстроа СССР ло делам нзооретеннй и открытий (53) УЛК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

О. В. Кислухина, В. Ю. Авиженис и К. A. Калунянц

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к области микробиологической промышленности и может быть использовано при производстве препаратов литических фар ментов из культур бакте р ий группы сенной и картофельной палочек, например Bacillus subtilis 402, выращенных глубинным способом.

Известен способ получения литических ферментов путем выращивания микроорганизмов например, Bacillus subtilis 402, на водной питательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минеральные соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости.

С целью повышения активности литических ферментов и снижения себестоимости продукта по предлагаемому способу в качестве источников азота и углерода в среду вводят осахаренный ячменный солод, в количестве

2,3 — 2,7% от общего объема среды.

Д робленый ячменный солод суюпендмруют в воде в концентрации около 5%, подогревают суспензию дю 70+2 С, выдерживают прои этой температуре и постоянном перемешивании в течение 1 час, а затем повышают темлературу суспензии до 80-1-2 С и продолжают процесс до перехода крахмала в неокрашиваемые йодом декстрины, При высокой активности амилазы в солоде процесс осахарпвания может закончиться менее чем за 1 час при 70 С;

2 при э ом выдсржнвапгь суспензию при 80 С не нужно. По окончшпш осахарпвания раствор кипятят в 1еченцс 10 — 15 дан, затем стерплизуют 30 — 35 лан прп 135i-2 С. Отдельно при5 готавли вают раствор солей, в который внюсят сухие пивные дрожжи. Объем этого раствора определяют исходя нз конечного объема среды, объема суспензии солода и количества конденсата, образующегося при стерилизации.

1р Раствор солей (с пивными дрожжами) стерилизуют 30 — 35 лан прп 135+2 С. Простерилизованные компоненты среды соединяют в ферментере, охлаждают до 40+1 С, устанавливают в среде рН 6,90+0,2 с помощью кон15 центрированных растворов аммиака и ортофосфорной кислоты, а затем засевают среду культурой бактерии из группы сенной и картофельной палочек, например Bacillus subtilis

402. Посевной материал выращивают при

2с 37+1 С в течение 48 — 3 час на пшеничных отрубях, увлажненны 1,5 вес. ч. воды и простерилизованных в течение 50 — 60 мин п ри давлении 1!0,1 ата. Для засева 1 чз питательной среды достаточно культуры, выра25 щенной на 30!10 " пшеничных отрубей (по воздушно-сухому в"cy). Ферментацпю ведут в теченпе 12 — 16 час прп 37 1 С, постоянном перемешиванип и количестве продуваемого воздуха 0,5 0,05 объемов в 1 .чан. Актив30 ноеть литнческнх ферментов в фильтрате

415294

Составитель Б. Дунье

Техред Г. Васильева

Корректор М. Лейзерман

Редактор В. Блохина

Заказ 3070 Изд. № 1288 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Рвушская наб., д. 4/о

Загорская типография

3 культуры по окончании ферментации составляет 22000 — 29000 ед. ЛА/мл.

П р им е р. 20 г дробленого ячменного солода помещают в реактор, содержащий 400 л холодной водопроводной воды. Взвесь нагревают до 70 С при по стоя нно м перемешиванви. Процесс осаха ривания солода при

70 С, длится 30 мин. Затем суспензию солода нагревают до кипения, кипятят в течение 10 мин, охлаждают и перекачивают с помощью насоса в ферментер емкостью

1500 л и в нем простерилизовывают в течение

30 мин при 135 С. Во второй реактор, содержащий 260 л холодной водопроводной воды, вносят 3,2 кг/ХН4/2НР04, 0,48 кг КС1, 0,08 кг

MgSO4 ° 7Н20, 0,088 кг СаС12 и 0,4 кг сухих пивных дрожжей. Раствор перемешивают в течение 15 мин, а затем перекачивают в сателлит ферментера и простерилизовывают в течение 30 мин при 135 С, после чего стерильную жидкость передают под давлением в ферментер. Среду охлаждают до 40 С; рН среды составляет 6,9, объем — около 800 л, Среду засевают водной суспензией культуры

Bacillus subtilis 402, выра щенной в течение

48 час при 37 С на 20 г пшеничных отрубей, 4 увлажненных 30 мл водопроводной воды и простерилизованных в течение 1 час при давлении 1 ати. Ферментацию ведут в течение

13 час при 37+1 С, постоянном перемешива5 нии в количестве продуваемого воздуха

23 — 26 мз/час, По окончании ферментации активность литического фермента составляет

25700 ед. ЛА/мл.

10 Предмет изобретения

1. Способ получения литических ферментов путем выращивания микроорганизмов, например Bacillus subtilis 402, на водной пи1б тательной среде, содержащей источники углерода, азота, стимуляторы роста и минеральные соли, с последующим выделением ферментов из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения активно20 сти литичеоких ферментов и снижения себестоимости продукта, в качестве источников азота и углерода в,среду вводят осахаренный ячменный солод, 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

25 ячменный солод вводят в среду в количестве

2,3 — 2,7% от общего объема среды.