Способ получения липопротеидлипазы

 

О П И C А Н И Е I»i43>5 3

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 10.08,72 (21) 1819924/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет—

Опубликоваото 15.08,74, Бюллетень ¹ 30

Дата опубликования описа нпя 06.03.75 (51) М.Кл. С 12d 13/10

А 611< 19/00

Государственный комитет

Совета 1иинистрое СССР оо делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Автс ры изобретения

И. Г. Колесникова, В. А. Яковлев, Т. П, Левчук, В. А. Вовк и Н. С. Акатова

Институт микробиологии AH СССР и Всесоюзный научно-исследовательский витаминный институт (71) Заявители (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИПОПРОТЕИДЛИПАЗЫ

0,5

1,5

1,0

Мясной бульон

Пептон

Глюкоза

Изобретение относится к ферментной промышленности, в частности к способам получения липопротеидлипазы.

Известны способы получения липопротеидлипазы путем культивирования бактерий рода

Pseudomonas, например Pseudomonas aerugiпоза, Pseudomonas fluorescens, в аэробных условия .иа питательной среде, содержащей источники углерода (глюкозу), азота (мясной бульон, пептон), индуктор (оливковое масло) и минеральные соли (КН РОi, NgSO<), С целью повышения выхода фермента по предлагаемому способу в качестве продуцента липопротеидлипазы из бактерий рода Pseudomonas используют вид Pseudomonas aurantiaca, а,в качестве индуктора — хиломикроны.

При этом из вида Pseudomonas а«гantiaca используют штамм ИНМИ-К.

П р.и м е р. Посевную культуру Pseudomonas

aurantiaca ИНМИ-,К выращивают иа круговой zo качалке в течение 24 час. при 28 С на среде. содержащей 1% мясного бульона и 0,1% искусственных хиломикронов.

Затем полученный посевной материал в количестве 5 мл переносят в колбы, содержащей

50 мл питательной среды следующего состаКнзро 0,2

Мо SO4 0,05

Хиломикроиы 0,1

Вода Остальное и осуществляют культивирование прп 28 С на круговой качалке при 200 — 300 об/мнн, в течение 48 час. Через 48 час в среде накапливается липопротеидлипаза в количестве 0,5 г на 1л.

Выход фермента определяют титрованием освобождающихся при гидролизе хиломикронов высших жирных кислот по методу Дола.

При пересчете на граммы удельная активность липопротеидлипазы равна 2500 мк.моль высших жирных кислот (час) мг. белка.

Фермент липопротеидлипаза, как и липаза, я вляется гидролазой триглицеридов, но в отлпчие от обычных липаз гидролизует триглицериды, входящие в состав хиломикронов и других липопротеидов плазмы крови с очень низкой плотностью. Полученный фермент может оыть применен в медицине для лечения нарушений липидного обмена, а также в производстве вакцин.

Характеристика штамма Pseudomona=

aurantiaca ИНМИ-К. Штамм выделен из южных почв Советского Союза.

Морфология, Палочки мелкие, бесспоровые. подвижные, размером 2 — 3 >(0,5 мк. Имеет полярно расположенные жгутики в количестве

439513

Предмет изобретения

Составитель Т. Полянская

Техред Е. Борисова Корректор Л. Орлова

Редактор В. Блохина

Заьаз 118 Изд. М 1950 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушскзя наб., д, 4/5

Обл. TIIII. Костромского управления издательств, полиграфии н книжной торговли о — 7 штук. Грамотрицательный.

Культуральные и физиолого-биохимические признаки.

На мясопептонном агаре образует крупные блестящие колонии оранжевого цвета. В субстрат выделяет оранжево-красный флуоресцирующий пигмент. На мясопептонном бульоне ооразует обильную муть оранжевого цвета и кольцо на стенках п робирки. Штамм синтезирует смесь окрашенных флуоресцирующих и 1п нефлуоресцирующих пигментов различного химического состава. Хорошо растет на средах с картофелем и солодовом сусле. Штамм хорошо растет с образованием пигмента прои 28 С, при 4 С наблюдается рост, но без образования 1> пигмента.

Желатину разжижает.

Молоко пептонизирует.

Крахмал и клетчатку не разлагает.

Индол и сероводород не образует. 20

Отношение к источнику углерода.

Использует с подкислением среды арабинозу,,ксилозу, глюкозу, маннозу, галактозу, фруктозу, мальтозу, сорбит, маннит и глицер пн. 25

Ассимилирует лимонную, янтарную, фумаровую, глюконовую, 2-кетоглюконовую кислоты.

Не растет на синтетических средах с углеводородами и ароматическими соединениями (бен- зо зойной, салициловой, m-аминобензойной кислотами, фенолом) за исключением а.нтраниловой кислоты, Источники азота. Использует хлористый аммоний, мочевину. и аминокислоты.

Аэро б, гомоферментативен.

Проверка патогенности Pseudomonas проводилась сравнительно с условно патогенными штаммами Pseudomonas aeruginosa. Внутрибрюшинное введение суспензии Pseudomonas

aurantiaca ИНМИ-К не вызвало гибели мышей, в то время при введении суспензии

Pseudomonas aeruginosa погибло 90 /в мышей.

1. Способ получения липопротеидлипазы путем аэробного культивирования бактерий рода Pseudomonas на питательной среде, содержащей индуктор фермента, источники углерода, .азота и минеральные соли, с последующим выделением фермента из культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода фермента, в качестве продуцента липопротеидлипазы из бактерий рода.

Pseudomonas используют вид aurantiaca, а в качестве индуктора — хиломикроны.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что пз вида Pseudomonas aurantiaca используют штамм ИНМИ-К.