Способ определения гамма-оксибутирата натрия

 

г г, I . f

l г.

О П И С А Н И Е (10 466449

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 21.07.72 (21) 1808658/23-4 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 05.04.75. Бюллетень № 13

Дата опубликования описания 29.07.75 (51) М. Кл. G 01n 31/08

Государственный комитет

Совета Министров СССР ,по .делам изобретений и открытий (53) УДК 543.544.45 (088.8) (72) Автор изобретения

А. Л. Перцовский

Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ГАММА-ОКСИБУТИ РАТА НАТРИЯ

Изобретение относится к способам определения у-оксибутирата натрия (натриевой соли у-оксимасляной кислоты) — лекарственного вещества, применяемого при нервных и психических заболеваниях и в анестезиологии.

Известен способ определения оксибутирата натрия, например, в крови путем циклизации анализируемого вещества циклизирующим агентом, например многоосновной кислотой, при температуре до 100 С с последующим "азожидкостным хроматографированием полученного при этом продукта.

Недостатком такого способа является длительность (2 час) процесса подготовки пробы для проведения газожидкостного хроматографирования. Кроме того, способ трудоемок и каждая операция подготовки пробы связана с ошибкой. Общая ошибка определения 6,6%.

Целью изобретения является исключение трудоемких подготовительных операций, повышение точности способа и сокращение времени анализа.

Поставленная цель достигается тем, что циклизацию и газожидкостную хроматографию проводят непосредственно при 200—

250 C.

В качестве циклизирующих агентов используют малолетучие многоосновные кислоты или их кислые соли (10 — 30%-ные водные растворы серной, ортофосфорной кислот или их ислые соли, например соли калия, насыщенный водный раствор щавелевой кислоты или ее кислой соли, например соли калия).

Предлагаемый способ осуществляется сле5 дующим образом.

Биологическую пробу помещают в цснтрифужную пробирку, вводят в нее циклизирующий агент, перемешивают и центрифугируют. Аликвоту верхнего слоя вводят в дозатор

I0 хроматографа (например, марки Хром-2, колонка которого заполнена хромосорбом Р, покрытым полппропиленглпкольадипатом). Хроматографирование проводят в течение 10 мин при следующих параметрах: температура ко15 лонки хроматографа 140 С, температура дозатора хроматографа 200 С вЂ” 250 С, скорость газа-носителя (азота) 50 мл/мин, расход водорода 40 мл/мин, воздуха 600 мл/мин, после чего анализируют полученную хроматограмму, 20 измеряя высоту пика, соответствуюьцего у-бутиролактону (ГБЛ), и определяя по калибровочному графику концентрацию -оксибутпрата натрия в организме.

Пример 1. 0,05 мл крови (или сыворотки

23 крови) смешивают с равным объемом одного из циклизирующих агентов, напрпмер 20%-ного водного раствора серной кпслоты. Полученную смесь центрифугируют 3 мин со скоростью 8000 — 1000 об,ЪI1IH и 5 мкл верхнего слоя

30 вводят в дозатор хроматографа, после чего

ГБЛ

Фиг.l

Щемя мин б0

t3 20

Е о

Составитель В. Чехлатов

Техред T. Курилко

Корректор Л. Орлова

Редактор 3. Горбунова

Изд. № 70-:.

Тираж 902

Подписное

"-à .аз 1816,,6

Типографии, пр. Сапу сва, 2 проводят хроматографпрование в течение

10 мин, а затем анализ хроматограммы.

Пример 2. 0,02 — 0,03 г ткани смешивают в соотношении 1:4 с раствором одного из циклизирующих агентов (циклизирующие агенгы и последующие операции такие же, как в примере 1).

На фиг. 1, 2 и 3 приведены хроматограммы, полученные по вышеописанной методике анализа гомогената ткани мозга крысы после введения ей внутрибрюшного раствора: смеси у-оксибутирата натрия и циклизирующего агента — насыщенного водного раствора щавелевой кислоты (см. фиг. 1, где пунктиром показана хроматограмма без введения у-оксибутирата натрия), чистого у-бутиролактона (см, фиг. 2), у-оксибутирата натрия с добавкой в анализируемый гомогенат чистого у-бутиролактона (см. фиг. 3).

Количественный анализ проводят по хроматограммам методом ",áñîëþòíîé калибровки.

На фпг. 4 приведены калибровочные графики

4 для крови (кривая А) и ткани мозга (кривая

Б) при анализе на. хроматографе «Хром-2».

Калибровочные графики строят на основании данных, полученных при анализе искусствен5 но составленных смесей крови или гомогена. тов ткани с точно известным количеством

Т-оксибутирата натрия. Относительная ошибка определения 37о. Чувствительность метода для ткани 5 мкг/г, для крови 2 мкг/мл.

Предмет изобретения

Способ определения гамма-оксибутирата натрия путем циклизации анализируемого вещества циклизирующим агентом, например

15 малолетучей многоосновной кислотой, с последующим газожидкостным хроматографированием образующегося при этом гамма-бутиролактона, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения време20 пи анализа, циклизацию и газожидкостное хроматографирование проводят при 200—

250 С непосредственно в хроматографе.

yz< q Юапичест5о = вксибутирагпа натрия, МКГ/мл нрааи или

МКГУЕ гпнани