Способ получения фитогемагглютинина

 

О П И С А Н И Е (ц 5712е7

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советсккх

Социапнстнческнх

Ресяублнн

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 10.06.78 (21)2144026/13 (51) М. Кл.

А 61 К 35/78 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опублиновано05.09.77.Бюллетень № 33

ГесударстееахыЯ кемхтет

Ваавта тееелстреа СССР аа делан хэоаретеахЯ и еткрнтхЯ (53) УДК j6 15.45.

:6 Ц,Ц.9 (088.8) (45) Дата опубликования оцисания 03.10.77

М. Д. Луцик, И. Ю. Ниедра и С. М, Малей (72) Авторы изобретения

Львовский государственный медицинский. институт и Олайнсквй,,завод химреактивов (71) Ваявитетей (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИТОГЕМА1ТЛЮТИНИНА

Изобретение относится к способам получения биологически активных веществ, которые могут найти применение в биологии и медицине в качестве стимуляторов митозов вкули туре клеток, а также как стимулятор кроветворения при введении в организм.

Известен способ получения фитбгемагглю гиниЮа из муки различных сортов фасоли пу:тем высаливания из раствора целевого про;дукта сульфатом аммония в кислом зна- )0 чении рН, диализа, добавлечия солей и окончательным отделением; фитогемагглюринина в ацетоне с последующей стерилизацией и концентрированием продукта.

Однако такой способ не обеспечивает И высокой чистоты и активности щаевого продукта.

С целью повышения чистоты и активнос-. ти целевого продукта по предлагаемому спо- собу в качестве источника сырья исполь- 2Я зуют сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы, из которых после экстракции выделяют фитогемагглютннин путем обработки раствора экстрактом щитовидной железы, затем осадок растворяют в воде, нейтра- М

Лизуют, после диализа добавляют хлориотый кальций и хлористый марганец.

Для получения митогенноактивных препаратов фитогемагглютининов пригодны сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы со средними размерами 16х8х5,2 мм и весом 400-500 r Ma 1 |тыс. семян.

Размол бобов фасоли проводят на гоМогенизаторе типа кофемолки с достаточной пропускной способностью или на жерновой мель» нице. Для хорошего выхода препарата раЛмер частиц муки не более 0,5 мм.

3 кг фасолевой муки экстрагируют 15 л, 1%-ного раствора хлористого натрия при постоянном перемешивании 1 ч. Иентрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость доводят до,- рН 4 концентрированной соляной кислотой, и осадок

:удаляют центрифугированием 20 мин. Надосадочную жидкость доводят цо рН 8 20%-ныл раствором едкого натра и осадок удаляют центрифугированием 15 мин. Надосадочную жидкость собирают и доводят до рН 6,5 концентрированной соляной кислотой.

571267

Составитель С. Малютина

Редактор Л. Гончарова Техред A. Демьянове Корректор Л. Небопе

Заказ 3150/4 Тираж 677 Пниннаннн

11НИИПИ Государственного комитете Совете Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москве, Ж-35, Раушская иаб., д. 4/5

Филиал ППП 11етент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

К надосадочной жидкости добавляют

900 мл экстракте щитовидной железы. Смесь: оставляют не 0,5 -2 ч, после чего осадок собирают центрифугированием 15 мин ,при 300О об/мин. Осадок отмывают 3 ра- 5 эа трехкратным объемом .холодного физраствора.

Экстракт щитовидной железы получают путем размалывения щитовидных желез круп. ного рогатого скоте на мясорубке экстре- д гирования 2 ч трехкратным объемом физраствора и центрифугирования 15 мин при

3000 об/мин.

Осадок, полученный на предъщущей стадии, размешивают в воде до объема 800- И

1000 мп и доводят до рН 3 концентрированной соляной кислотой. К раствору добавляют сульфат аммония из расчета 550 г/л

lj: и корректируют рН f1o.3. Осадок собирают центрифугированием:15 мин при 6000 об/мин,„и

Затем ос.адок размешивают в трехкратном, объеме воды, доводят до рН 3 и центрифугируют 15 мин при 6000 об/мин. K полученной надоседочной жидкости добавляют сульфат аммония из расчета 400-450 г/л. 25

Осадок собирают центрифугироЬанием 20мин при 6000 об/мин, растворяют его в 100 мл воды и доводят до рН 7. Полученный раствор диепизуют против дистиллированной воо ды 24 ч при 4 С. При этом часть белка 30 выпадает в оседок. К полученной таким образом суспензии добавляют иэ расчета на

100 мл 1 г хлористого натрия 200 мг хлористого кальция и 50 мг хлористого мар ганца„после чего диелизуют еще 12 ч против 1 % хлористого натрия. Ifo окончании диалиэа раствор центрифугируют для удаления небольшого осадка, стерипизуют фильтрованием через фильтр Зейца, стерильно фасуют во флаконы по 10 мг белка и лиофилизуют.

Выход продукта 2-2„5 r иэ 1 кг сырья.

Полученный фитргемагглютинин облад@рт митогенпой активностью, обеспечивавшей

1 не менее 150 метафазных пластинок на

100 мкг ФГА и вызывают балластное превращение не менее 75% лимфоцитов в куль туре, Предлагаемый способ обеспечивает увеличение выхода продукта в 3-4 раза с высокой степенью чистоты и активностью продукта. формула изобретения

Способ получения фитогемагглютинина путем экстракции фасолевой муки раствором хлористого натрия и последующим высаливанием сульфатом аммония и диализом, отличающийся тем, что,с целью повышения чистоты и активности целевого продукта, в качестве источника сырья исполь. зуют сорте фасоли, имеющие белые почковидные бобы, из которых после. экстракции выделяют фитогемагглютинин путем обработки раствора экстрактом щитовидной желе. эы, затем осадок растворяют в воде, нейтрализуют после диализа добавляют хпористый кальций и хлористый марганец.