Реактив для определения холестерина

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К AATEHTY

Сеюз Соаетсинк

Сфцнаинстнчвскни

Рес ублнк (и)б22424 (6!) Дополнительный к патенту—

2 (51) М. Кл.

С(01 К 33/16 (22) Заявлено 24.02.76 (21) 1928101/2325958/

/28-13 (23) ПриоритЕт 1705.7а (32) 17 05.72

Государственный комитет

Соаета Министров СССР по делам изобретений и открытий (31) Р 22 24 132. 3 (33) ФРГ (53) УЙ)(621 015 ° 11

1(088.8) (43) Опубликовано 30 08 78Бюллетень №32 (45) Дата опубликования описания 1007.78

Иностранцы

Вольфганг Грубер, Ханс Ульрих Бергмайер, Эрих Бернт, .Александр,Хагей Петер Рошлау, Гюнтер Ланг и Клаус Бокан (ФРГ) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Берингер Маннхайм Гмбх (ФРГ) Pl) Заявитель (54) РЕАКТИВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ XOJIECTEPHHA

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики различных заболеваний.

Известен реактив для определения холестирина в общей фракции липидов, содержащий буферно-солевую среду и поверхностно-акти. ное вещество (1) .

Однако известный реактив не обеспечивает высокой специфичности и чувствительности анализа в отношении холестерина.

Цель изобретения - повышение специфичности и чувствительности анали- за.

Эта цель достигается тем, что предлагаемый реактив дополнительно содер- жит.холестериноксидаэу, 2,4-динитрофенилгидразин и холестеринэстеразу при следующем соотношении компонен.тов, вес.%:

Холестериноксидаза 0,025-1,500

2,4-Динитрофенилгидразин i,000-5,О00 .Холестеринэстераза 0,025-1,500

Поверхностно-активное вещество 0,040-8,000

Буферно-соленая

l среда Остальное.

Реактив пригоден для определения холестерина в таких водных средах, как экстракты продуктов питания,жидкости, содержащиеся в теле и сыворотки. Благодаря большой специфичности при помощи нового реактива может быть произведено определение только свободного холестерина. Однако связанный холестерин, который, как известно, находится в этерифицированной форме, может быть определен после предварительного химического или ферментативного омыления. Химическое омыление производят, например, спиртовым раствором гидроокиси калия, а ферментативное омыление — экстераэой, преимущественно холестеринэстеразой полученной из печени или поджелудочной железы.

H p и и е р. Определение холестенона. Берут 0,,2 мл сыворотки, разбавленной водой s соотношении 1:10, смешивают с 0,05 мл 20%-ного раствора гидроксиполиэтоксидодекана и 0,15Ч холестериноксидазы. Спустя 15 мин прибавляют 2 мл раствора, содержащего

1 М 2,4-динитрофенилгидраэин в 1н.соляной кислоте, через 30 мин прибавляют 4 мл воды (в количестве образо-, l

622424

Формула изобретения

1,000-5у000

0,025-1,500

Составитель С.Малютина

Редактор H ° Xóáëàðoâà Техред А, Богдан Корректор Н. яцемирская

Заказ. 4729 Тираж 1.1 1 2 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 вавшегося гидразона) и замеряют в фотометре в области 405 нм. Оценку производят по стандартной кривой,при нимая во внимание значение, полученное в контРольном опыте. Измерение также можно проводить в области 546 нм после добавления щелочи.

Измерение, проведенное- на типичной пробе, показало) 60 мгЪ свободного холестерина и -154 мг В общего холестерина (омыление спиртовым раствором гидроотсиСи калия) .

Проведенное для сравнения определение по Лиеберману и,Бурхарду дало . результат 170 мг % общего холестери- 15 на Ф

Для омыления этерифицированного холестерина (определение общего холестерина в сыворотке) смешивают 1 мг сыворотки, 1 мл 20%-ного раствора 20 гидроксиполиэтоксидодекана и 5 мл

0,5 М раствора гидроокисн калия в

90%-ном этиловом спирте, смесь нагревают 30 мин при 70 С, затем раствору дают возможность охладиться, смешива-25 ют его с 10 мл 0,1 N раствора сернокислого магния и центрифугируют. Раствор над осадком (13 мп) содержит общий холестерин в свободной форме.

Дпя омыления:этерифицированного холестерина с использованием эстеразы печени — холестеринэстераэы сйворотку выдерживают 30 мин при 37 С и рН от 6 до 8.

ПРеДлагаемый реактив для определе-<5 ния холестерина специфичен и высокочувствителен и может найти широкое применение в медицине для диагности ческих целей, так как повышенное содержание холестерина в крови является важным показателем возникновения артериосклероза, а при высоком содержании холестерина,. т.е. при гиперхолестеринемии, коронарная недостаточность и инфаркты сердца наблюдаются чаще, чем при низком содержании холе. стерина. Гиперхолестеринемия благоприятствует возникновению артериосклероза и коронарной болезни.

Повышенное содержание холестерина также наблюдается при сахарном диабе" те, невротическом синдроме, гипотиреозе и при болезнях печени, например, при бина."пом циррозе.

Благодаря предлагаемому реактиву анализы могут быть проведены быстро и дать достоверные результаты, что имеет большое значение для лечения.

Реактив для определения холестерина в общей фракции липидов, содержащий буферно-солевую среду и поверхностно-активное вещество, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения специфичности и чувствитель ности анализа, реактив дополнительно содержит холестериноксидазу, 2,4-ди нитрофенилгидразин и холестеринэстеразу при следующем соотношении компонентов, вес.3г

Холестериноксидаза 0,025-1,500

2,4-Динитрофенилгидразин

Холестеринэстераза

Поверхностно-активное вещество -0,040-8,000

Буферно-солевая среда Остальное.