Способ определения антигепариновой активности сыворотки крови

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

611 6 1 ОО 16К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свил-ву— (22) Заявлено29.03.76 (21) 2340973/28 13 (5!) М. Кл. (01 Й 33/16 с присоединением заявки i¹

Государственный «он«тат

Совете Инннстроа СССР

fl0 делам изобретений и ат«рытнй (23) Г1риоритет— (43) Опубликовано 05.06,78 Бюллетень Х«21 (53) УДК 615.361..36 (088.8 ) (45) Дата опубликования описаиия15.05.78 (72) Авторы изобретения

Р. В. Болдырев

Ленинградский эрдена Трудовэго Красного Знамени педиатрический медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ Of ff ÃI1ÅË HIIH AIITfff ЕГ!А1эИНОВОЙ АКТИВНОСТИ

СБ1ВОРОТКИ КРОВИ

100 х Б

Х = 100

Изэбретение этнэсится к бнэхимин крэ-. ви и может быть испэльзэванэ для определения антигепаринэвой активнэсти сыворотки крови., Известен аналогичный спэсэб эсушествля- 5 емый смешиванием гепарнна с испытуемэй сывороткой и с изотоническим раствором хло-: рик.того натрия, йнкубацией смеси и последующим определением активности 1

Однако известный способ не обеспечивает lO. высокой чувствительности определения.

Цель изобретения — повышение чувствитеетьности определения.

Цель достигается тем, что инкубнруют смесь в течение 50-70 мин, дополнительно f5 добавляют плазму донорской кровй, 0,5%-ный раствор хлористого кальция при соотношении плазмы, хлористого кальция и гепарина 0,91,1:0,8-1,2:1 и активность определяют по времени рекальцификации смеси. 30

Способ осуществляют следующим образом.

Берут две параллельные пробы сыворотки .крови объемом по 0,1 мл каждая, одну из них смеш.ивают с плазмой, используемой как реактив (в), а другой — с гепарином (г) и М ннкубируют ее при температуре 37оС в течение 50-70 мин. Для.проб (в) и (г) опреде ляют время рекальцификации.

Кроме того, дополнительно готовят смесь плазмы с раствором хлористэго кальция и изотэннческого раствора хлористого .натрия

I (а) и такую же смесь в присутствии гепари на (б). Для проб (а) н (б) также опредеаяют время реквльцификации.

Сопоставление четырех полученных значений времени рекальцификации характеризует антигепариновую активность сыворотки крови выраженную в ) анактивированного сывороткой антикЬагуляциэнного действия гепарина по формуле где А = б-а;

Б =г-в;

П ример 1. (а) 0,1 мл плазмы+

+ 0,2 мл изотонического раствора хлористо го натрия + 0,1 мл 0,5%-ного раствора хлористого кальция — 285

610016 х - lao — = 81,2

100 х ЭО

170

Х=100100х95

= 44,1

Составитель С. Малютина

Редактор Г. Бельская Техред E Давидович Корректор Н. Яцемирская

Заказ 3000/33 Тираж 1132 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 (б) 0,1 мл плазмы + 0,1 мл стандартного раствора гепарина + 0,1 мл изотонического рас .вора хлористого натрия + 0„3 мл

0,5%-ного раствора хлористого кальция455 ".

А 455 - 285 = 170 (a) 0,1 мл исследуемой сыворотки крови + 0,1 мл стандартного раствора гепарина, инкубнрованные в течение 50-70 минут при 37 С + 0,1 мл плазмы + 0,1 мл 0„5%» 0 ного раствора хлористого кальция — 340».

Б 140" - 110 " 30"

Пример 2.(а) - тоже, чтовпримере 1. (б) — то же, что в примере 2. (в)180". (г) - 180". Х = 100

Пример 3. (а) то же, что в примере 1. (б) - то же, что в примере 1 ° .(в) — 135". (г ) - 230 .

Б 230 — 135" = 95"

Предлагаемый способ увеличивает досто: верность определении, упрошает и удешевляет процесс, а также повышает чувствительность определения интигепариновой активнос.ти и 10 раз, Формул а изобре тенин

Способ определения антигепариновой активности сыворотки крови путем смешивания гепарина с испытуемой сывороткой и с изстоническнм раствором хлористого натрия инкубации смеси и последуюшем определении активности, о т л и ч а ю ш и.й с я тем, что, с целью повышения чувствительности определения, инкубируют смесь в течение

50-70 мин, дополнительно добавляют плазму донорской крови, 0,5%-ный раствор хлористого кальция при соотношении плазмы, хлористого кальция н гепарина 0,9-1,1:0,8-1,2:1 и активность определяют по времени рекальцификации смеси.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Гепарин. — Тезисы Щ Всесоюзной конференции, М., 1973, с. 75.