Способ получения плазмозаменителяраствора гемоглобина
И 3 О Б Р Е Т Е н I II ц
Е!)АХЕИ (,,7
)!
1 (f ) ) {6I ) Доит) lil« li )),н))й к пате))ту
М. Кл.
А 61 К 35/14 (22) Яайндеи)з 1(104 74 (21)) 20 939- ",, 28-13 (Qg) Дрипритот — {;12 ii
g? Яij
Государственный комитет (.овета Чииистров (:(:С I но делам изобретений и открытий (, I I ) 350 225 { 1 7) О1))ЛА
442275 (43) ()пуДл«кттвa(ттт 25,1078.5)одлетет(ь %39 (®) УЛ (6 1 5 . 4 5: 6 1 2 . .111 11 (088.R) (45) Лата тзнубликпванип опт:.сани!т 1209 78
Иностран .:
Абрахам Мазур (С))(А) ) Иное.тра )::.-";-. фирма
Pl) 3айВИТЕдЬ Дзе Коммунит« Бла;) Коу«<7 -!i о.-. Р).-.---;-)О П --„!3npl< И к (С1 )7)) (5 4 ) СПОСОБ ПОЛУЧГ !! l! Л J.À3. =.— 4-1!! Т. - - 8
РА СТ ВО Р А Г Б."4О ГП C j= j j.! ".
p1I 7, 1 8, 5 г)Г)и
1: =-зле«и« тризтиламина.
)ОД, у ОС 1ОЯ) )«И )1
7;.««а с мол.в. )ы)е е: ..) 7 50««с имеющего мол. в
|) )) ! 0«уч=
:ъ;<; 1. ) ) .3 со
Изобретение относи-.ñ;ÿ :к медицинс кой промыт)ленности.
Способ получения плазмозаменнтеля раствора гемоглобина в пате«твой литературе не описан.
1),елью изобретениЯ ЯвлЯетсЯ п)Олучение препарата, способствующе"n регулированию кровяного давления и препятствующего возникновению отека.
Это достигается тем, что раствор гемоглобина обрабатывают при рН от
7,4 до 8,5 сшивающим агентом из группы диалкилОвых зфирОВ диими«ОКB.Г)бc новых кислот с числом метиленовых групп от 1 до 12, например дизтил— дииминомалонатом, и образовав< ийся целевой продукт с мол.в. От 68000 до 600000 отделяют от низкомолекулярных продуктов преципитацией.
Способ осуществляют следующим образом.
Первоначально гемоглобин получают из красных кровяных клеток путем промывания красных клеток и выделением всех мембран центрифугированием с высокой скоростью. Получаюшийся димер или тетрамер геМоглобина затем взаимодействуют при температуре от — 5 до +10 C с сшивающим аген;ос.)е з-.nl G т-олуче«ный продvKт у =".лаю";,:, е. до()ав пенття сульфата
=..;,.О.-:«я —,G «=:cû!Icl(и« 3, 2-0, 25.-, в
ОЕ.. у, -. —;-- -Е =- i: OC:а7)СУ)аЕТСЯ ВЫСОКО..-рный проду <т с мо:.I, в . 600000 . .= — з ).е«три. )уг:-.рова««R осадка в
-:G. т- но Очищенны(реакционный про— n5a: i. .:-эт сульфа-:.;:ммония до
".=- сыщ)е«и я у in.-учают сшитый гслоби и с мол, в . 68000-600000 .
)с а). )зе««. и пpодукт с льфат а)в«О— c LJH 7 .- - ) ii) o I ;i o 6 l H т) Од в е 7) г а )о т
П:..-.. У)ИЗ у у)ЛЯ ДЭЛЕ ИЯ СУЛЬф;-3: а 3,"171О—
;.)Gi IGá «« I «c no-c«<1 гс тв, ющем соле во: растворе 7 остается с-шитый т емогло(. и с мол.в.,68000
flfl)\оfl.;::-:ую рО ь в:-2;-.pàâ!1 -. ««и процес—
cа «L» Опреу еле«ии т)случающихся и Р ОД:у к т с в -и г Р а: i< o H i; E i» т Р а ц) и и г е м<.) г лоби«а в рас Ii ре в < )<)(том «$7,<) дится сi тиваю:;и-:)=: агент. ( ) 1
)1 (ь )):(;
) ) ( ( ((.(. 7
) .! а)-.7(( (1(.),() 1 (i(. (.
) I
1 ((((,), 1 ((:1
Li ( тз:..=—
), 1 )
7 ;,,1
1 (;)
1 ((7( (((,)((:, (((Т ( (7 (:!) . у (!!"(" (:, ))(:(:I (() !(() ) ) 1 ( 37( (1 °
Г
208») »"
7:;
Пример 1. Г реак rop <. маг.нитной мещалк<>й, охлажденнь»й по эагт)ужан)т 2,4 г дизтит(дииминома»(аната Гид?)ох лори да ра с тв Ооеl н ., >" 0 В г
> мл О, - (!. буферного фосфата натрия, рН 8,5, Затем (то каплям д<)бав> я.-з5 р ра -.тво»> fl,ë (?Н до ех ОО - "(-:а реак!\Ионный раствор Нс станет («<; 10 -"— ного цвета рН 7-8),. пос> е ч"»-.ão (ь стро добанляют 50 мл 10 с — нoã-> рас в<>r)a гемоглобина; рН доводят до 8» =,—.абанле»:ием щелочи и поддерживают ::а таком уровне по мере протекания акции, через 1,5-2 >гас реакц;:-H завершается, что обнаруживают по прек-ращению выделения кислоты.
Полигемогл(обин ОТДеляют От HH=.êÎмолекулярного материал"-. Осаждени"м сульфa:Ом аммо и я дОв О>тi —. с Одер .":а ние его до О, 5 и затем отделяют центрифугиронанием. Осадок снова пас-:=оряют в воде и снова два><ды (ер:-ос-.: даЮт СуЛЬ рата?r(.=..О(. я, Пo„i ни я 1 О „- — Ho-,Î о= »>а - . .(о!)в
ДИаЛИЗу ОТНОСИТЕЛi>HО 3 .О и:- .,-(гиос C"-J(?1OHO(-O pr".CXaap t O =!>=.-..» На Тр:, рН 7, 4, фHJ:üòт)у(;т -"(=л::t>iü — = диаме тром пг.-,: .",, 2 5 к; и,<рс-,. т; (.«г(е о а тур =Б.е(хоо>! в тре:; о -»ытах со= .! ::! i-.
40 4, . /, 7Ä" "° . («
И ЗаВИСИТ О. .<О (1 СH. .) «ЦИ((»P.". .: ге."::оглоби,;р и м e p 2. «слк: ию и вь(:(» лен" » (тр о(?,::к-, а о-",o -в (t > -! е н ! -. тп О, O« "I бу:()ет>нот о ?)с.. я(, >- та натрия, р т 8 5
".а0" используют т:)кэти>
>/?(ень(((ения с; е?1(>HИ д.-. на;"у-:а и<мот Г(Г)б «на ftpttи r!05,»я !ct««(t. сильной щело ги.
Bfti>
IO,)УЧ ГЕ?НFIHIA -,-,О I (P «?/(Эг>>) tt >
>pи . H - 5 OJ!ьi toе кoJ. (ес ."во —;1> . i мол. в . BGOOOG, которая =-,к>сог о5разованию нет)ас.-.=.оримог э (иа.»ЕГО ВНГтелттют п>ОГ»1»ас? тег.ьн(>-, Ос; —:,<—
НИЕМ С»Льва > О?> с)Р(МОН((?! . :0::От ..:1;", зия 0,20 — 0>25, Э о- осадок вают и остаз.=>ийс. псл! г==:
0r а::,»4Q ft> t: Jy —, t-tt«,,-?-t -t -.;;., с с ""О
Н О?.(Г: О С:
Поли гемo.-;.L>5» а; и. =- тель лу т??» покрот.?io -o ..?О так как сам ге?-..".глобин i-.p-.
В ПЛа З?>У ИМЕЕ т О )-.>а?(:. r».-:;i О .. ! жИЗНЕСПОСОбНОСт<-: ЕМОГЛ<> . лиссоциирова-ь:-с3 лиме(-:-.. -...: ..О».=:
В с?«?.7>»»Е::.IСТ Ppt>Ò С Н>эт) .-;.-.—: В,, . = "> О
ЛС)б>и?-:ОМ П>i 1?.,Ь! r. О>> =, > >а ;«« лекса, котортп вьцтеля т:я .--- -. .т > ()0
=. riДОТЕ i И i!J ?«hp iт .- ;": а;,?! селезенки и:<отор! = ..=:.".:->т .Ол. в .
3 4 0 О О, бла -ода о "- - =. :., ОИH вы
О., >»,,;-.», 7.»,, «, - °; . Е:„.. -, > — r(05(«1» а и (. .-.З:«; !.>?(Е "i(С-"-. "-" .Гrt(П: ОГЛС.бИНОМ (1»(àа
:>е д -;-. „:::-.1 ? 0" !o.тность?з на
; -5.>.i(> —:1-..,- =; Ip:-: 1 .» кот.> >:..!е ?!пгуT
Г (>ав-.-,a — ИЕ В1>С»:,Е-li;(Ейп-I В ii Я В I!>1а Э—
;:) ) t.;! -i? ? —, (-.-,.«. Г»:С)(. >< (1> ПОЛИ
-«о:(-к = -. -. го с!(((«того(гемсглоби
Ь(.;О ПРО . ; —.HO «a I Пе .-." =....- с н=-. этим кроликах :с =нав;ива:-: время. Действия кро !! - ":: — Г в((с . - -.. («!I а НОРМЗ JI(«?IO ?C И ,.—,,:ют пр-т;ол.-.."..:=.J!h o" ть действия н е е! ове::Poi =.å=:.::,:-(и сщ(<в авгия участ=;; д -:: —.—:.: . / Лнз иль нь(х амт«нп>б(» ? O (H(" II »3 Е .О.; ?(л . . ь -ногo .. э " ..::"(э» лоби;! а ) а 1 > p L> —; > <7 сгб а в >» я— i> д(..е:. т .-l. т::,ла" !!— (прел 1 — 7 добав.ii гть .. i t«?. (.>1« . ()1) (гэ а >т (иo* «>(/ о ".- .. Ii ент" I t Ii, 1.. ti(tF)?j г,. )(;! (It i г, ., ПO! Ii Ср (а— Г> П ii)1:;«:Е=, - - . ",. П<)>1?-,— 1(10» -! 1 ((н = (> ?«(»о(4 -. Ii lio"! ь зу я д;:ме". И.нового < !.à "(.й "i< I(:ЛОТИ(I r« :а< э(;,)а „ е-св r! r« i(— (1<.11<>..IЬ»- Я i i. " (> !«> «(о " - е 10(r;i 1 (-н()го (:-.. 0:!Р: .I F С: ТЕ-! (,". С:. ii? .Кi«r ()(11 .- »., Л»I(? i1(, Г > > а м,; . т е-м ;>ОDМ (Ла И «;)6PP-. ЕНИ с остави-.е> ь С Малю ина 7ехp(г. М L,(7p ° ова К0р >е; 1 ор Н, 1 у-пнц (Редактор А.Бер Заказ 590 3,/1 3.ираж —,п 3 .1Одписное LIHHHI;H Государственного комитета (овета Мини"тров (.:(1Р пс делам изобретений и открытий 113035, Москва, >", — 35(Рауш(-.кая наб.(д. Филиал ППП Патент г. Ужгород,. yJ . HI„ue (на я, створ гемоглобина и добавляют отде>.ь-ными порциями; получают продукт, 8590% которого имеет мол,в, 68000. Получают внутримолекулярно .щит: (й тетрамер гемоглобина, который:.е должен диссоциировать на фрагм=-нты более низкого молекулярного веса. Была измерена степень возможной диев сОциа11ии . 1ут ем в заимОдейст ви я х аждО ГО МОдифицирОваннОГО ГемОГлОби:.а с додецилсульфатом натрия при злектрофорезе на геле .— олиакриламида. После окрашивания каждой белковой зоны и обесцвечнвания определяют от— носительное распределение диссо.,НН руемых единиц с помощью сканиру((>((1егс денситометра и проводят сравне-:.:е с белками с известными молекулярными весами фрагментов. peJ1J>a1 аемый способ позволяет получить глаэмозаменитель рас вора гемоглобина(кот..7рый ((оддерживает уровень кровяного павле:. ия до =.аранее О и L> (.я!ел е и H О (7 «н а ч р н и я и и p p. и я т с т В у— ет возникновени= отека, "пособ полу- .ения плазмо:-амени-е— -я †. ра"тво-.а гемоглоби..а, (> т л и а > I 1 и и (Fт:ем(4тО ра(тво ((> 1(ем(71 л(7бин а ..7б раб а 1 „:в а! >7 пр(, (>)1 «я. ?,. .4 до 8. -.. ((иваюш .м агентом группы диалкиловых зфиров Лниминокарбоновых кислот с чиcJ>oì метиленовых групп от 1 до 12,. Например, дизтилдиим.::омалонатом и образоваввий;-.я )(еловой продукт " мол.в. от 68000 J1o . 00000 от..еляют от низкомолекуляр— х .родуктоа преципн-ацией, 
